本公开文本涉及含v-set和免疫球蛋白结构域蛋白3(v-set and immunoglobulindomain containing 3，vsig3)受体以及含v-set和免疫球蛋白结构域蛋白8(v-set andimmunoglobulin domain containing 8，vsig8)受体的显性负性(dn)受体突变体以及制备它们以用于在涉及调节vsig3和vsig8及其对应配体的下游信号转导效应的应用中使用的方法的领域。本公开文本进一步涉及包含所述dnvsig3和/或dnvsig8受体突变体的工程化细胞以及向有需要的受试者施用所述细胞的方法。更具体地，本公开文本涉及包含所述dnvsig3和/或dnvsig8受体突变体并且进一步包含经修饰的t细胞受体和/或经修饰的嵌合抗原受体的工程化人免疫细胞。关于序列表的声明与本技术相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并且通过引用特此并入本说明书。含有序列表的文本文件的名称是125400_1235_sequence_listing.txt。所述文本文件为约102kb，创建于2021年6月16日，并且经由efs-web以电子方式提交。
背景技术：
1、癌症免疫疗法的最新突破已经证明了利用免疫系统可以消除癌细胞的威力。这些疗法中的大多数依赖于在施用阻断多种免疫抑制信号的单克隆抗体后触发免疫应答。然而，依赖内源性应答使得难以在避免毒性自身免疫副作用的同时实现高治疗功效。对于更精确的疗法，可以用经修饰的抗原受体(如嵌合抗原受体(car))来工程化t细胞，以识别表达特定抗原的细胞并对其发挥细胞毒性作用。这些疗法成功的一个挑战是重定向t细胞在浸润到肿瘤床中后遇到的免疫抑制微环境。
2、为了在实体瘤内取得治疗成功，具有经修饰的抗原受体的t细胞需要克服免疫抑制信号。一种方法是阻断免疫抑制途径(如pd-1和/或ctla-4)与工程化t细胞疗法组合，以实现增强的反应。已知许多癌症(如前列腺癌)分泌能够产生免疫抑制环境的分子。鉴定与这些免疫抑制分子相关的途径提供了减轻最终导致这些免疫抑制作用的信号转导的机会。
3、本公开文本的目的是满足减轻免疫抑制分子对癌症免疫疗法中使用的工程化t细胞的免疫抑制作用的需要。通过使用表达含v-set和免疫球蛋白结构域蛋白3(vsig3)和/或含v-set和免疫球蛋白结构域蛋白8(vsig8)的人工产生的显性负性形式(其减轻或消除vsig3和/或vsig8的信号转导)的工程化t细胞来满足这种需要。
技术实现思路
1、本公开文本总体上涉及显性负性vsig3和vsig8受体，其中已经修饰了野生型受体，使得与野生型受体相比，所述受体中的信号转导遭破坏。本公开文本进一步涉及与本文所述的显性负性vsig3和vsig8受体相关的多核苷酸、载体、细胞和施用方法。
2、在一些方面，本公开文本广泛地涉及一种包含以下氨基酸序列的经修饰的多肽，所述氨基酸序列与seq id no:20-28中的任一个具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％序列同一性。在一些方面，所述氨基酸序列与seq id no:20具有至少约95％序列同一性。在一些方面，所述氨基酸序列与seq id no:20具有至少约99％序列同一性。在一些方面，所述氨基酸序列是seq id no:20。
3、在一些方面，本公开文本广泛地涉及一种包含以下氨基酸序列的经修饰的多肽，所述氨基酸序列与seq id no:61-70中的任一个具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％序列同一性。在一些方面，所述氨基酸序列与seq id no:61具有至少约95％序列同一性。在一些方面，所述氨基酸序列与seq id no:61具有至少约99％序列同一性。在一些方面，所述氨基酸序列是seq id no:61。
4、在一些方面，编码本文所述的多肽的多核苷酸进一步包含信号肽序列。在一些方面，本公开文本广泛地涉及一种编码任一种本文所述的多肽的多核苷酸序列。在一些方面，本公开文本广泛地涉及一种包含以下核酸序列的多核苷酸序列，所述核酸序列与seq idno:50-59中的任一个具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％序列同一性。在一些方面，所述氨基酸序列与seq id no:50具有至少约95％序列同一性。在一些方面，所述氨基酸序列与seq id no:50具有至少约99％序列同一性。在一些方面，所述核酸序列是seqid no:50。
5、在一些方面，本公开文本广泛地涉及一种包含以下核酸序列的多核苷酸序列，所述核酸序列与seq id no:72-81中的任一个具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％序列同一性。在一些方面，所述氨基酸序列与seq id no:72具有至少约95％序列同一性。在一些方面，所述氨基酸序列与seq id no:72具有至少约99％序列同一性。
6、在一些方面，所述核酸序列是seq id no:72。
7、在一些方面，本公开文本广泛地涉及一种包含任一种或多种本文所述的多肽的组合物。
8、在一些方面，本公开文本广泛地涉及一种包含任一种或多种本文所述的多核苷酸序列序列的载体，所述多核苷酸序列序列编码任一种本文所述的工程化显性负性受体。
9、在一些方面，任一种或多种本文所述的多核苷酸序列可操作地连接至一种或多种多肽。
10、在一些方面，任一种或多种本文所述的多核苷酸序列可操作地连接至一种或多种多肽。
11、在一些方面，所述载体是病毒载体。在一些方面，所述病毒载体选自慢病毒载体、γ逆转录病毒载体、泡沫病毒载体、腺相关病毒载体、腺病毒载体、痘病毒载体、疱疹病毒载体和工程化杂合病毒载体。在一些方面，所述载体是慢病毒载体。
12、在一些方面，本公开文本广泛地涉及一种包含任一种或多种本文所述的多肽的细胞。在一些方面，所述多肽是与野生型vsig3的活性相比活性遭破坏的显性负性受体。在一些方面，所述多肽是与野生型vsig8的活性相比活性遭破坏的显性负性受体。
13、在一些方面，本公开文本广泛地涉及一种包含任一种或多种本文所述的多核苷酸的细胞。在一些方面，本公开文本广泛地涉及一种包含任一种或多种本文所述的载体的细胞。在一些方面，所述细胞选自细菌细胞、真菌细胞、酵母细胞、动物细胞和人细胞。在一些方面，所述细胞是人细胞。在一些方面，所述人细胞是免疫细胞。在一些方面，所述免疫细胞是t细胞。
14、在一些方面，所述细胞(如t细胞)包含经修饰的抗原受体。在一些方面，所述经修饰的抗原受体是t细胞受体或嵌合抗原受体(car)。在一些方面，所述显性负性受体无法进行信号转导。在一些方面，所述显性负性受体的胞外结构域无法与其对应配体结合。在一些方面，所述对应配体是vista。在一些方面，野生型vsig3的表达在所述细胞中已经下调。在一些方面，野生型vsig8的表达在所述细胞中已经下调。在一些方面，在一些方面，野生型vsig3和vsig8的表达在所述细胞中已经下调。
15、在一些方面，所述经修饰的抗原受体是car，并且所述car包含选自以下的结合剂：前列腺特异性膜抗原(psma)、tn糖型的粘蛋白1(tn glycoform of mucin 1，tnmuc1)、间皮素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖2(gpc2)、成纤维细胞激活蛋白(fap)、叶酸受体α(frα)、表皮生长因子受体(egfr)、白介素-13受体亚基α2(il-13rα2)及其任何组合。在一些方面，所述经修饰的抗原受体是car，并且所述car包含选自以下的共刺激结构域：cd2、4-1bb、icos和cd27。在一些方面，所述经修饰的抗原受体是car，并且所述car包含开关(switch)受体和/或显性负性受体，其中所述受体选自pd1/cd28、pdl1/cd28、ctla4/cd28、btla/cd28、btla/icos、tim3/cd28、tigit/cd226、dntgfβ、tgfβ/il-12r、tgfβ/cd28、tgfβ/ox40、ifnγ/cd28、ifnγ/ox40和ifnγ/il-12r。在一些方面，所述结合剂包括egfr和il-13rα2的组合。在一些方面，所述经修饰的抗原受体是car，并且所述car包含cd3ζ信号传导结构域。
16、在一些方面，本公开文本广泛地涉及一种施用任一种或多种本文所述的工程化细胞的方法，所述工程化细胞包含与工程化显性负性vsig3和/或vsig8受体相对应的多核苷酸和/或多肽，所述方法包括向受试者施用包含所述细胞的组合物。在一些方面，所述细胞对于所述受试者是自体的。在一些方面，所述细胞对于所述受试者是同种异体的。在一些方面，本公开文本广泛地涉及一种产生经修饰的细胞的方法，所述方法包括将任一种或多种本文所述的载体引入细胞中。
17、在一些方面，所述细胞选自：细菌细胞、真菌细胞、酵母细胞、动物细胞和人细胞。在一些方面，所述细胞是人免疫细胞。在一些方面，所述免疫细胞是t细胞。在一些方面，所述t细胞包含经修饰的抗原受体。
18、在一些方面，所述经修饰的抗原受体是t细胞受体(tcr)或嵌合抗原受体(car)。在一些方面，所述经修饰的抗原受体是car，并且所述car包含选自以下的结合剂：前列腺特异性膜抗原(psma)、tn糖型的粘蛋白1(tnmuc1)、间皮素、磷脂酰肌醇蛋白聚糖2(gpc2)、成纤维细胞激活蛋白(fap)、叶酸受体α(frα)以及表皮生长因子受体(egfr)和白介素-13受体亚基α2(il-13rα2)的组合。在一些方面，所述结合剂包括egfr和il-13rα2的组合。
19、在一些方面，所述经修饰的抗原受体是car，并且所述car包含选自以下的共刺激结构域：cd2、4-1bb、icos和cd27。在一些方面，所述经修饰的抗原受体是car，并且所述car包含开关受体和/或显性负性受体，其中所述受体选自pd1/cd28、pdl1/cd28、ctla4/cd28、btla/cd28、btla/icos、tim3/cd28、tigit/cd226、dntgfβ、tgfβ/il-12r、tgfβ/cd28、tgfβ/ox40、ifnγ/cd28、ifnγ/ox40和ifnγ/il-12r。在一些方面，所述经修饰的抗原受体是car，并且所述car包含cd3ζ信号传导结构域。
20、前述
技术实现要素：
以及以下附图说明和具体实施方式两者都是示例性和说明性的。它们旨在提供本发明的进一步细节，但不应被解释为是限制性的。根据本发明的以下具体实施方式本领域技术人员将容易清楚其他目的、优点和新颖特征。
1.一种经修饰的多肽，所述经修饰的多肽包含与seq id no:20-30中的任一个具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的多肽，其中：
3.一种经修饰的多肽，所述经修饰的多肽包含与seq id no:61-70中的任一个具有至少约90％序列同一性的氨基酸序列。
4.根据权利要求3所述的多肽，其中：
5.根据权利要求1至4中任一项所述的多肽，所述多肽进一步包含信号肽序列。
6.一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列：
7.根据权利要求6所述的多核苷酸序列，其中：
8.一种组合物，所述组合物包含：
9.一种载体，所述载体：
10.一种细胞，所述细胞包含：
11.根据权利要求10所述的细胞，其中：
12.根据权利要求10或11所述的细胞，其中：
13.一种施用根据权利要求10-12中任一项所述的细胞的方法，所述方法包括向受试者施用包含所述细胞的组合物，并且任选地其中：
14.一种产生经修饰的细胞的方法，所述方法包括将根据权利要求9所述的载体引入细胞中。
15.根据权利要求14所述的方法，其中：
16.一种用于在治疗有需要的受试者中使用的组合物，其中所述组合物包含根据权利要求10-12中任一项所述的细胞，并且任选地其中：
