本发明涉及干细胞培养，尤其涉及一种用于间充质干细胞快速培养的无血清、无异源成分的培养基制备方法。
背景技术：
1、间充质干细胞（mesenchymalsterncell，msc）是中胚层来源的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，广泛存在于全身多种组织中，可在体外培养扩增，并能在特定条件下分化为神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞、脂肪细胞等。msc是多能干细胞，具有“横向分化”或“跨系分化”的能力，不仅支持造血干细胞（hematopoieticstemcell，hsc）的生长，还可以在地塞米松、抗坏血酸、胰岛素、异丁基甲基黄嘌呤等不同诱导条件下，在体外分化为多种组织细胞如神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞等。msc具有广阔的临床应用前景，是细胞替代治疗和组织工程的首选种子细胞，是移植和自身免疫系统疾病治疗领域的研究热点。
2、随着间充质干细胞作为重要种子细胞在基础医学、再生医学、临床医学、组织工程等领域的广泛应用，符合产业转化和临床应用要求、能较好维持间充质干细胞免疫调节功能和多向分化潜能的高效体外扩增体系是支持间充质干细胞产业转化、推进间充质干细胞新药研发的关键因素。目前，常用的间充质干细胞培养基都含一定浓度的胎牛血清/动物蛋白。胎牛血清/动物蛋白属异种蛋白，在培养过程中可被间充质干细胞吞噬，间充质干细胞移植后在受者体内释放，极易引起免疫反应。其次，胎牛血清成分比较复杂，易受病毒、支原体和其他病原体的污染，在临床应用上存在潜在风险。研发无血清，无异源成分的间充质干细胞培养基是产业发展的必然趋势。但是，已开发的无血清间充质干细胞培养基都存在以下几个不足:1）成分复杂。成分种类多达十种甚至更多，导致培养基批次间稳定性差、质控困难；2）不能较好维持间充质干细胞多向分化潜能。培养的间充质干细胞定向分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞的效率低。这些问题很大程度上限制了间充质干细胞的产业转化和临床应用。
3、因此，亟待提供一种无血清、无异源成分的间充质干细胞培养基，能解决上述问题中至少一个问题。
技术实现思路
1、本发明的一个目的在于提供一种用于间充质干细胞培养基，该培养基无血清和无异源成分，可显著提高间充质干细胞增殖能力的同时，也能很好地维持间充质干细胞的免疫调节功能和多向分化潜能。
2、为达到上述目的，本发明提供了一种无血清、无异源成分的间充质干细胞培养基。
3、本发明所述间充质干细胞培养基包括基础培养基和添加物，所述基础培养基为dmem/f12培养基，所述添加物为碱性成纤维生长因子(bfgf)、表皮生长因子(egf)、β-巯基乙醇、site(亚硒酸钠、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺)、氢化可的松、杜仲叶水提物。
4、本发明所述间充质干细胞培养基可以只由基础培养基和添加物组成，也可以包含其他组分；其中，所述添加物可以只由碱性成纤维生长因子(bfgf)、表皮生长因子(egf)、还原型谷胱甘肽、β-巯基乙醇、site(亚硒酸钠、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺)、氢化可的松、杜仲叶水提物组成，也可以包含其他组分。
5、进一步，所述碱性成纤维生长因子(bfgf)在所述间充质干细胞培养基的含量为5-20mg/l；
6、进一步，所述表皮生长因子(egf)在所述间充质干细胞培养基的含量为5-20mg/l；
7、进一步，所述β-巯基乙醇在所述间充质干细胞培养基的含量为0.05-0.3mmol/l；
8、进一步，所述site(亚硒酸钠、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺)在所述间充质干细胞培养基的体积含量为0.5％-3%；
9、进一步，所述氢化可的松在所述间充质干细胞培养基的含量为5-20mg/l；
10、进一步，所述杜仲叶水提物在所述间充质干细胞培养基的体积含量为1％-3%。
11、在本发明优选的实施方式中，所述碱性成纤维生长因子(bfgf)在所述间充质干细胞培养基的含量为8-15mg/l；所述表皮生长因子(egf)在所述间充质干细胞培养基的含量为8-15mg/l；所述β-巯基乙醇在所述间充质干细胞培养基的含量为0.05-0.2mmol/l；所述site(亚硒酸钠、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺)在所述间充质干细胞培养基的体积含量为0.5％-2%；所述氢化可的松在所述间充质干细胞培养基的含量为5-15mg/l；所述杜仲叶水提物在所述间充质干细胞培养基的体积含量为1％-2%。
12、进一步，所述间充质干细胞培养基的ph值为7.3-7.5，渗透压为300-350mosm/kg。
13、本发明中，所述间充质干细胞为人间充质干细胞，可以为人脐带、人骨髓、人脂肪来源的间充质干细胞，即人脐带间充质干细胞、人骨髓间充质干细胞和/或人脂肪间充质干细胞。
14、本发明中，所述产品可以为试剂或试剂盒。
15、本发明的有益效果如下：
16、1、本发明无血清和无异源成分的间充质干细胞培养基中，配方简单、批次稳定、成本低廉，可大幅提高间充质干细胞的体外增殖能力，符合产业转化要求。
17、2、本发明无血清和无异源成分的间充质干细胞培养基不含异源物质，不存在引入动物源性病原微生物的风险，符合临床应用的安全性要求。
18、3、本发明无血清和无异源成分的间充质干细胞培养基能增强间充质干细胞的生物学效应，包括提高与适应症匹配的免疫调节能力和多向分化功能，符合临床应用的有效性要求。
1.一种用于间充质干细胞快速培养的无血清、无异源成分的培养基制备方法，其特征在于：间充质干细胞培养基包括基础培养基和添加物；基础培养基为dmem/f12培养基；添加物为碱性成纤维生长因子(bfgf)、表皮生长因子(egf)、β-巯基乙醇、site(亚硒酸钠、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺)、氢化可的松、杜仲叶水提物。
2.根据权利要求1所述的一种用于间充质干细胞快速培养的无血清、无异源成分的培养基制备方法，其特征在于：所述碱性成纤维生长因子(bfgf)在所述间充质干细胞培养基的含量为5-20mg/l；所述表皮生长因子(egf)在所述间充质干细胞培养基的含量为5-20mg/l；所述β-巯基乙醇在所述间充质干细胞培养基的含量为0.05-0.3mmol/l；所述site(亚硒酸钠、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺)在所述间充质干细胞培养基的体积含量为0.5％-3%；所述site(亚硒酸钠、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺)在所述间充质干细胞培养基的体积含量为0.5％-3%；所述氢化可的松在所述间充质干细胞培养基的含量为5-20mg/l；所述杜仲叶水提物在所述间充质干细胞培养基的体积含量为1％-3%。
3.据权利要求1所述的一种用于间充质干细胞快速培养的无血清、无异源成分的培养基制备方法，其特征在于：所述间充质干细胞培养基的ph值为7.3-7.5，渗透压为300-350mosm/kg。
