本技术涉及一种具有优异的去乙酰氧基头孢菌素c(daoc)生产率的微生物及其用途，更具体地，涉及一种具有提高的daoc生产率的突变的微生物及其用于生产7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-adca)的用途。
背景技术：
1、头孢菌素c(以下简称“cpc”)是β-内酰胺类抗生素(beta-lactam antibiotics)家族，由例如顶头孢霉(acremonium chrysogenum)的微生物生产。cpc通过抑制细胞壁合成而表现出对革兰氏阴性菌的抗菌活性，但由于其活性很弱，主要应用于半合成头孢菌素类抗生素(以下简称“头孢菌素”)原料的制备。
2、头孢菌素的原料可以主要分为7-氨基头孢烷酸(以下简称“7-aca”)、去乙酰基7-氨基头孢烷酸(以下简称“d-7-aca”)和7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(以下简称“7-adca”)。
3、目前用于7-adca工业生产的是化学转化方法，将青霉素类分子中发现的青霉素环结构扩展为头孢烯环。然而，通过扩展为头孢烯环生产7-adca的化学转化法使用有机溶剂如甲苯，这导致大量有毒废物的产生，存在生产环境污染物和增加处理废水成本的缺点。
4、用于生产高浓度daoc的常规重组菌株的缺点在于，由于在daoc生产过程中产生的副产物去乙酰头孢菌素c(dac)，因此产品纯度降低。
5、因此需要开发可以生产高纯度目标物质daoc，同时daoc的生产率增加并且副产物的生产率降低的菌株。
6、相关技术文献
7、专利文献
8、韩国专利第10-2194740号
技术实现思路
1、本技术提供一种具有优异的去乙酰氧基头孢菌素c(daoc)生产率的微生物及其用途。
2、一个方面，提供了新型的daoc生产微生物。在一种实施方式中，daoc生产微生物可以是突变型顶头孢霉微生物，其中引入了棒状链霉菌(streptomyces clavuligerus)衍生的氨基转移酶。突变型顶头孢霉微生物可以具有daoc生产率。
3、另一方面，提供一种构建具有提高的daoc生产率的顶头孢霉微生物的方法和/或一种提高顶头孢霉微生物中的daoc生产率的方法，每种方法包括将棒状链霉菌衍生的氨基转移酶基因引入顶头孢霉微生物中的步骤。
4、又一方面，提供一种用于生产daoc的方法，所述方法包括培养突变型顶头孢霉微生物的步骤。
5、详细描述
6、本技术提供一种具有提高的去乙酰氧基头孢菌素c(daoc)生产率的突变微生物及其用途。由于daoc的高生产率和副产物(例如，去乙酰头孢菌素c(dac)等)的低产量，突变微生物被表征为生产高纯度的daoc。
7、术语定义
8、如本文所用，短语多核苷酸(可与“基因”或“核酸分子”互换使用)或多肽(可与“蛋白质”或“酶”互换使用)包含、(基本上)由以下组成或由以下表示：“特定核酸序列或特定氨基酸序列”，其可以指多核苷酸或多肽基本上包含特定核酸序列或氨基酸序列，或可被解释为包含“基本相同的序列”，所述“基本相同的序列”是由在保留多核苷酸或多肽的原始功能和/或所需功能的程度上对特定核酸或氨基酸序列添加突变(缺失、取代、改变和/或添加)而获得的。
9、在一种实施方式中，多核苷酸或多肽包含“某种核酸序列或某种氨基酸序列”，(基本上)由其组成或表示，可以指所述多核苷酸或多肽
10、(i)基本上包含特定的核酸序列或氨基酸序列，或
11、(ii)基本上由以下核酸序列或氨基酸序列组成或包含以下核酸序列或氨基酸序列，所述核酸序列或氨基酸序列，某些核酸序列或氨基酸序列具有60％或更高、70％或更高、80％或更高、85％或更高、90％或更高、91％或更高、92％或更高、93％或更高、94％或更高、95％或更高、96％或更高、97％或更高、98％或更高、99％或更高、99.1％或更高、99.2％或更高、99.3％或更高、99.4％或更高、99.5％或更高、99.6％或更高、99.7％或更高、99.8％或更高或99.9％或更高(在某些情况下不包括100％)的序列同一性，并保留特定序列的原始功能和/或所需功能。在一种实施方式中，所需功能可包括赋予宿主细胞daoc生产率或增加宿主细胞的daoc生产率和/或减少daoc生产期间副产物的生产。
12、如本文所用，术语“序列同一性”可以指两个核酸序列之间或两个氨基酸序列之间的匹配程度并且可以表示为百分比(％)。至于与核酸序列的同一性，例如，可以使用由pearson开发的算法blast或算法fasta来进行确定。基于算法blast，已经开发了称为blastn或blastx的程序(参见：http：//www.ncbi.nlm.nih.gov)。
13、如本文所用，术语“约”旨在包含与以下数字相同的数值或处于以下数字的特定变化范围内的数值，例如，在给定值的±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％、±1％、±0.5％、±0.4％、±0.3％、±0.2％、±0.1％、±0.05％或±0.01％的变化范围内，但不限于此。
14、顶头孢霉具有头孢菌素生物合成途径，所述途径生产头孢菌素c(cpc)作为最终产物。cpc由前体l-2-氨基己二酸、l-半胱氨酸和l-缬氨酸合成。它由三种氨基酸缩合形成n-[(5s)-5-氨基-5-羧基戊酰]-l-半胱氨酰-d-缬氨酸开始。线性三肽的闭环导致双环异青霉素n的形成，然后所述异青霉素n差向异构化为青霉素n。这种抗生素通过在由cefef基因编码的扩环酶或daoc合酶的催化作用，将青霉烷环转化为头孢烯环而转化为头孢菌素前体daoc。
15、去乙酰氧基头孢菌素c(daoc)由以下化学式1表示，并且是头孢菌素中间体7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-adca；化学式2)的前体：
16、[化学式1]daoc
17、
18、[化学式2]7-adca
19、
20、如本文所用，术语“daoc”被解释为包含daoc(去乙酰氧基头孢菌素c(daoc)和/或其药学上可接受的盐。此外，术语“adca”被解释为包含7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(adca)本身和/或其药学上可接受的盐。
21、如本文所用，词语“提高的daoc生产率”是指在daoc生产期间，daoc产量增加、副产物去乙酰头孢菌素c(dac)的产量降低和/或dac/daoc比例(％)降低。
22、如本文所用，词语“微生物的培养物”可以通过在培养基中培养微生物来获得。所述培养物可以处于任何状态；例如，所述培养物可以是液体培养物和/或固体培养物，但不限于此。
23、如本文所用，词语“培养基”可以从微生物培养物获得或在培养基中培养微生物后获得。所述培养基可以包含由培养的微生物生产和/或分泌的物质。在具体的实施方式中，所述培养基可以包含无细胞培养物，其中微生物从其培养物中去除，但不限于此。
24、下文，将给出本公开的详细描述。
25、一个方面，提供了一种新型的去乙酰氧基头孢菌素c(daoc)生产微生物。
26、在一种实施方式中，daoc生产微生物可以是突变型顶头孢霉微生物，该微生物包含棒状链霉菌(streptomyces clavuligerus)衍生物转移酶或其编码基因。与未修饰的微生物相比，daoc生产微生物可以具有提高的daoc生产率。如本文所用，词语“改善或优异的daoc生产率”是指高daoc产量和/或高daoc纯度(低产量的副产物)。因此，所述daoc生产微生物被表征为，与未修饰的微生物相比，daoc的纯度高，具有更高的daoc产量和/或更低的副产物如dac产量。
27、在一种实施方式中，棒状链霉菌衍生的氨基转移酶可以是氨基转移酶类别v-折叠plp-依赖性酶(cefd；genbank登记号wp_003952494.1；398aa；seq id no：1)，但不限于此。
28、在其他实施方式中，棒状链霉菌衍生的氨基转移酶可以包含负责在顶头孢霉宿主细胞中将异青霉素n转化为青霉素n的酶的c-末端片段，例如，异青霉素n-coa-合成酶的c-末端片段(cefd1；genbank登记号cad45625.1；609aa)。c-末端片段可以包含3至30、3至20、3至15、3至12、3至10、5至30、5至20、5至15、5至12、5至10、8至30、8至20、8至15、8至12或8至10个连续的顶头孢霉的异青霉素n-coa合成酶的c-末端氨基酸残基。连续的氨基酸残基可以含有负责过氧化物酶体导向信号1(pts1)的c-末端三肽(prl)。在实施方式中，含有pts1的c-末端片段可以包含seq id no：2(sgqsaarprl)的氨基酸序列，但不限于此。含有pts1的c-末端片段可以连接到棒状链霉菌衍生的氨基转移酶的c-末端。覆盖包含棒状链霉菌衍生的氨基转移酶和pts1的c-末端片段的多肽可以由seq id no：3表示，但不限于此。
29、在实施方式中，突变型顶头孢霉微生物可以是通过将多核苷酸或携带所述多核苷酸的重组载体引入顶头孢霉宿主细胞而构建的转化体，所述多核苷酸包含编码多肽(例如，s eq id no：3的氨基酸序列)的核酸序列，所述多肽包含棒状链霉菌衍生的氨基转移酶和含有pts1的c-末端片段。对于转化体，引入其中的多核苷酸可以以任何形式存在，而没有特别限制。例如，多核苷酸可以整合到宿主细胞的基因组或染色体中，或者可以在染色体外自行复制和/或表达。核酸序列可以包含对顶头孢霉优化的密码子。在实施方式中，核酸序列可以由seq id no：4表示，但不限于此。重组载体可以是能够在顶头孢霉中表达的表达载体。
30、作为宿主细胞，顶头孢霉是具有生产去乙酰氧基头孢菌素c(daoc)能力的微生物并且可以是野生型或突变型微生物，所述去乙酰氧基头孢菌素c是头孢菌素的原料之一。作为宿主细胞的突变型微生物可以是顶头孢霉微生物，旨在增加daoc生产率的突变已经被引入该顶头孢霉微生物中。
31、在实施方式中，旨在增加daoc生产率的突变可以是选自以下突变中的至少一种，但不限于此：
32、宿主细胞的cefef和/或cefg基因的缺失；以及
33、外源cefe基因的引入。
34、如本文所用，术语“外源cefe基因”是指来源于除了顶头孢霉之外的各种微生物中的至少一种的cefe基因，例如，选自由内酰胺拟无枝菌酸菌(amycolatopsislactamdurans)、暗红戈登氏菌(gordonia rubripertincta)、脓肿分枝杆菌(mycobacterium abscessus)、碳酸氢盐微杆菌(microbacterium hydrobolicoxydans)、侵蚀侏儒囊菌(nannocystis exedens)、丁香假单胞菌(pseudomonas syringae)、棒状链霉菌(streptomyces clavuligerus)和独岛鞘氨醇单胞菌(sphingomonas dokdonensis)所组成的组中的至少一种(例如，1、2、3、4、5、6、7或8)，但不限于此。
35、在实施方式中，外源cefe基因可以包含源自内酰胺拟无枝菌酸菌的genbank登记号nid z13974.1的核酸序列，源自暗红戈登氏菌的genbank登记号nid cp022580.1的核酸序列，源自脓肿分枝杆菌的genbank登记号nid fvpm01000026.1的核酸序列，源自碳酸氢盐微杆菌的genbank登记号nid jyjb01000010.1的核酸序列，源自侵蚀侏儒囊菌的genbank登记号nid fomx01000018.1的核酸序列，源自丁香假单胞菌的genbank登记号nidaojt01001469.1的核酸序列，源自棒状链霉菌的genbank登记号nid ds570624.1的核酸序列，源自独岛鞘氨醇单胞菌的genbank登记号nid nbbi01000005.1的核酸序列，但不限于此。
36、在实施方式中，外源cefe基因可以是脓肿分枝杆菌的cefe基因(seq id no：5)、独岛鞘氨醇单胞菌的cefe基因(seq id no：6)或其组合，但不限于此。
37、在一些实施方式中，除了归因于引入包含编码seq id no：3的氨基酸序列的核酸序列的多核苷酸，和携带如上所述的多核苷酸的重组载体的突变外，本文提供的突变型顶头孢霉微生物可以进一步包含选自以下中的至少一种突变：
38、其cefef和/或cefg基因的缺失；以及
39、外源cefe基因的引入。
40、外源cefe基因如上所定义。
41、如本文所用，词语“基因的缺失”是指从微生物染色体序列中鉴定的每个cefef和/或cefg中去除部分或全部(即，从起始密码子到终止密码子)的核苷酸序列，但不限于此。
42、在实施方式中，突变型顶头孢霉微生物可以是以保藏号kctc 14989bp保藏的菌株，但不限于此。
43、本文提供的突变型顶头孢霉微生物可以具有daoc生产率。与未修饰的微生物相比，突变型顶头孢霉微生物可以具有提高的daoc生产率(增加的daoc产量和/或增加的daoc纯度(例如，减少的dac产量)，即降低的dac/daoc比例(％))和/或增加的7-adca生产率。术语“未修饰的微生物”是指野生型顶头孢霉微生物或未发生上述突变型顶头孢霉微生物，即，所述突变归因于引入包含编码seq id no：3的氨基酸序列的核苷酸序列的多核苷酸或携带该多核苷酸的重组载体。
44、另一方面，提供一种用于生产daoc和/或7-adca的组合物，所述组合物包含突变型顶头孢霉微生物和/或所述微生物的培养物或所述培养物的培养基。
45、又一方面，提供一种在顶头孢霉微生物中构建具有提高的daoc生产率和/或提高daoc生产率的顶头孢霉的方法，所述方法包括将多核苷酸引入顶头孢霉微生物的步骤，所述多核苷酸包含编码具有棒状链霉菌衍生的氨基转移酶和含有pts1的c-末端片段的多肽(例如，seq id no：3的氨基酸序列)的核酸序列。与未向其中引入多核苷酸的顶头孢霉微生物相比，由此构建的顶头孢霉表现出提高的daoc生产率，所述多核苷酸包含编码具有棒状链霉菌衍生的氨基转移酶和含有pts1的c-末端片段的多肽(例如，seq id no：3的氨基酸序列)的核酸序列。
46、所述方法在引入多核苷酸的步骤之前、之后或同时，还可以包括至少一个选自以下的步骤：
47、宿主细胞的cefef和/或cefg基因的缺失；以及
48、外源cefe基因的引入。
49、外源cefe基因如上所定义。
50、又一方面，提供一种生产去乙酰氧基头孢菌素c(daoc)的方法，所述方法包括培养突变型顶头孢霉微生物的步骤。所述培养步骤可以在允许生产daoc的培养基和/或条件下进行。所述方法还可以包括从培养物或培养物的培养基中回收(或分离)daoc的步骤。
51、本文提供的突变型顶头孢霉微生物具有提高的daoc生产率。在实施方式中，与未修饰的微生物相比，突变型顶头孢霉微生物可以使daoc生产率增加3％或更多、5％或更多、7％或更多、10％或更多、12％或更多、或15％或更多。
52、在其他实施方式中，突变型顶头孢霉微生物可以具有10％或更少、9.5％或更少、9％或更少、8.5％或更少、8％或更少、7.5％或更少、7％或更少、6.5％或更少、6％或更少、5.5％或更少、5％或更少、4.5％或更少、4％或更少、3.9％或更少、3.8％或更少、3.7％或更少、3.6％或更少、或3.5％或更少的dac/daoc(％)，和/或基于未修饰微生物的dac/daoc(％)(100％)，可以具有90％或更少、85％或更少、80％或更少、75％或更少、70％或更少、65％或更少、60％或更少、55％或更少、50％或更少、45％或更少、40％或更少、39％或更少、38％或更少、37％或更少、36％或更少或35％或更少的dac/daoc(％)，但不限于此。
53、另一方面，提供一种用于生产7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-adca)的组合物，所述组合物包含选自由突变型顶头孢霉微生物、所述突变型微生物的培养物、所述培养物的培养基和从所述培养物和/或培养基回收(分离、纯化)的daoc所组成的组中的至少一种。
54、另一方面，提供一种用于生产7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-adca)的组合物，其中，所述组合物包含选自由突变型顶头孢霉微生物、所述突变型微生物的培养物、所述培养物的培养基和从所述培养物和/或培养基中回收(分离、纯化)的daoc所组成的组中的至少一种。
55、另一方面，提供一种用于生产7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-adca)的方法，所述方法包括用头孢菌素c(cpc)酰基转移酶处理突变型顶头孢霉微生物的培养物、所述培养物的培养基或从其中回收(分离、纯化)的daoc的步骤。
56、该方法可以进一步包括在用cpc酰基转移酶处理的步骤之前，培养突变型顶头孢霉微生物的步骤。所述培养步骤如前所述，并且所述方法可以进一步包括从微生物的培养物或培养物的培养基中回收daoc的步骤。
57、用cpc酰基转移酶处理含有daoc的突变型微生物培养物的步骤，通过cpc酰基转移酶催化的转化来制备7-adca。用cpc酰基转移酶进行的转化通常可以在有氧条件下进行，例如振荡培养或通过旋转机器的旋转。在实施方式中，转化反应在5至30℃和/或1至300分钟(例如1至120分钟)内进行，但不限于此。培养物的ph可维持在3.0至9.0的范围内，可以用无机酸或有机酸、碱性溶液、尿素、碳酸钙、氨水等适当调节。
58、用于生产7-adca的方法还可以包括在用cpc酰基转移酶处理的步骤之后，从反应混合物中回收(分离、收获、纯化或收集)7-adca的步骤。具体地，7-adca的回收可以通过诸如离心、过滤、萃取、喷雾、蒸发、沉淀、结晶、电泳、分级溶解(例如，硫酸铵沉淀)、色谱法(例如，离子交换、亲和力、疏水性和尺寸排阻)等的方法进行，但不限于此。
59、又一方面，提供一种包含棒状链霉菌衍生的氨基转移酶(例如，seq id no：1)和含有pts1的c-末端片段的多肽(例如，seq id no：3的氨基酸序列)。
60、再一方面，提供一种编码所述多肽的多核苷酸。多核苷酸可以包含seq id no：4的核苷酸序列。
61、又一方面，提供一种携带所述多核苷酸的表达载体。
62、又进一步的方面，提供选自由以下所组成的组中的至少一种用于生产daoc生产微生物和/或提高daoc生产率的用途：
63、包含棒状链霉菌衍生的氨基转移酶(例如，seq id no：1)和含有pts1的c-末端片段的多肽(例如，seq id no：3的氨基酸序列)；
64、编码多肽的多核苷酸(例如，seq id no：4)；以及
65、携带多核苷酸的重组载体(表达载体)。
66、更详细地，提供用于生产daoc生产微生物和/或提高daoc生产率的是组合物，所述组合物包含选自由以下所组成的组中的至少一种：
67、包含棒状链霉菌衍生的氨基转移酶(例如，seq id no：1)和含有pts1的c-末端片段的多肽(例如，seq id no：3的氨基酸序列)；
68、编码多肽的多核苷酸(例如，seq id no：4)；以及
69、携带多核苷酸的重组载体(表达载体)。
70、daoc生产微生物可以是顶头孢霉微生物，并且daoc生产率的提高可以是顶头孢霉中daoc生产率的提高。
71、在本发明公开的核酸序列的编码区中，考虑到其中所需的多肽要表达的生物体，例如顶头孢霉优选的密码子，由于它们的密码子简并性可以进行各种改变或修饰，例如，条件是它们不改变从编码区表达的多肽的氨基酸序列和/或功能。
72、多核苷酸或载体的引入可以使用由本领域技术人员适当选择的众所周知的转化方法进行。如本文所用，术语“转化”是指将携带编码靶蛋白(外源蛋白)的核酸的载体引入宿主细胞，使得由核酸分子编码的蛋白在宿主细胞中表达。只要转化的核酸分子在宿主细胞中表达，它就可以整合到宿主细胞的染色体中和/或可以存在于染色体外。此外，核酸分子包含编码靶蛋白的dna和/或rna。核酸分子可以以任何形式引入，只要它可以被引入宿主细胞并在其中表达。例如，可以通过表达盒的形式将核酸分子引入宿主细胞，该表达盒是包含其自主表达所需的所有元件的基因构建体。通常，表达盒包含可操作地连接到核酸分子的表达调节元件，例如启动子、转录终止信号、核糖体结合位点和/或翻译终止信号。表达盒可以是可自我复制的表达载体的形式。此外，可以将核酸分子引入宿主细胞内并可操作地连接至在宿主细胞中表达所需的序列。如本文所用，术语“可操作地连接”是指核酸分子与表达调控元件(例如，启动子)之间的功能性连接，以便表达调控元件去控制(例如，启动)编码靶蛋白(外源蛋白)的核酸分子的转录。可以使用本领域已知的基因重组技术进行可操作地连接。例如，连接可以通过典型的位点特异性dna切割和连接来实现，但不限于此。
73、只要确保将多核苷酸引入宿主细胞(微生物)，任何转化(引入)都可以用于本公开。根据宿主细胞，可采用本领域已知的转化技术进行适当选择。本领域已知的转化方法的实例包括电穿孔、磷酸钙(capo4)沉淀、氯化钙(cacl2)沉淀、显微注射、聚乙二醇(peg)-介导的摄取、deae-葡聚糖-介导的基因转移、阳离子脂质体-介导的基因转移、脂质转染、醋酸锂-dmso法、热休克、粒子枪轰击、碳化硅晶须和超声处理，但不限于此。
74、如本文所用，术语“载体”是指包含编码靶蛋白的核酸分子的核苷酸序列的dna构建体，其可操作地连接至合适的表达调控序列以在合适的宿主细胞中表达靶蛋白。调控序列可包含可以启动转录的启动子、用于调控转录的任选操纵子序列、编码合适的mrna核糖体结合位点的序列和/或调控转录和/或翻译终止的序列。在被转化到合适的宿主细胞中之后，载体可以独立于宿主基因组进行复制或发挥功能，或者可以整合到宿主细胞的基因组中。
75、可用于本发明的载体不受特别限制，只要它能够在宿主细胞中复制，并且可以使用本领域已知的任何载体。常规载体的实例可以包含天然或重组质粒、粘粒、病毒和噬菌体。例如，pwe15、m13、mbl3、mbl4、ixii、ashii、apii、t10、t11、charon4a或charon21a可以用作噬菌体载体或粘粒载体，质粒载体的实例包括pbc型(例如pbc-ks(+))、pbr型(例如pbr322、pbr325)、puc型(例如puc118和puc119)、pbluescriptii型、pgem型、ptz型、pcl型、pet型(例如，pet-22b(+))、枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)-衍生的质粒(例如pub110、ptp5)，但不限于此。
76、所述载体还可以包含用于指示插入到宿主细胞中的选择标记。选择标记适用于选择转化后的细胞，即确定多核苷酸是否被插入，并且可以选自导致可选择表型的基因，所述可选择表型例如耐药性、营养缺陷型、对细胞毒剂的抗性或表面蛋白的表达。在选择性试剂的存在下，只有表达选择性标记的细胞是活的或表现出不同的表达特征，因此可以被选择。
77、在此，首先密码子优化的cefd1序列中的cefd1核酸序列与pts1核酸序列进行杂交，将得到的cefd-pts1融合基因引入顶头孢霉中，从而将cefd1、cefd2和硫酯酶功能的现有步骤简化为一个步骤，以建立优化的代谢途径，通过所述途径可以在daoc生产过程中，将目标产物daoc提高到显著水平，同时显著降低杂质dac的含量。
1.一种突变型顶头孢霉(acremonium chrysogenum)微生物，其包含多肽或其编码基因，所述多肽包含：
2.根据权利要求1所述的突变型顶头孢霉微生物，其中，所述cefd蛋白包含seq id no：1的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的突变型顶头孢霉微生物，其中，所述cefd1蛋白的c-末端片段包含seq id no：2的氨基酸序列。
4.根据权利要求1所述的突变型顶头孢霉微生物，其中，所述多肽由seq id no：3的氨基酸序列表示。
5.根据权利要求1所述的突变型顶头孢霉微生物，其中，编码所述多肽的基因包含seqid no：4的核苷酸序列。
6.根据权利要求1所述的突变型顶头孢霉微生物，进一步包含选自以下中的至少一种突变：
7.根据权利要求6所述的突变型顶头孢霉微生物，其中，所述外源cefe基因包含选自由衍生自脓肿分枝杆菌(mycobacterium abscessus)、独岛鞘氨醇单胞菌(sphingomonasdokdonensis)、内酰胺拟无枝菌酸菌(amycolatopsis lactamdurans)、暗红戈登氏菌(gordonia rubripertincta)、碳酸氢盐微杆菌(microbacterium hydrobolicoxydans)、侵蚀侏儒囊菌(nannocystis exedens)、丁香假单胞菌(pseudomonas syringae)和棒状链霉菌(streptomyces clavuligerus)的各个cefe基因所组成的组中的至少一种。
8.根据权利要求1所述的突变型顶头孢霉微生物，其保藏号为kctc14989bp。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的突变型顶头孢霉微生物，其特征在于，选自以下中的至少一种：
10.一种用于生产去乙酰氧基头孢菌素c(daoc)的组合物，所述组合物包含权利要求1至8中任一项所述的突变型顶头孢霉微生物。
11.一种生产去乙酰氧基头孢菌素c(daoc)的方法，所述方法包括培养权利要求1至8中任一项所述的突变型顶头孢霉微生物的步骤。
12.一种用于生产7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-adca)的组合物，所述组合物包含选自由权利要求1至8中任一项所述的突变型顶头孢霉微生物、所述突变型顶头孢霉微生物的培养物、所述培养物的培养基和从所述培养物或所述培养基中分离的daoc所组成的组中的至少一种。
13.一种用于生产7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(7-adca)的方法，所述方法包括用头孢菌素c(cpc)酰基转移酶处理权利要求1至8中任一项所述的突变型顶头孢霉微生物的培养物、所述培养物的培养基或从所述培养物或所述培养基分离的daoc的步骤。
14.一种多肽，所述多肽由seq id no：3的氨基酸序列表示。
15.一种多核苷酸，所述多核苷酸编码权利要求14所述的多肽。
16.根据权利要求15所述的多核苷酸，其由seq id no：4的核苷酸序列表示。
17.一种表达载体，所述表达载体携带编码包含seq id no：3的氨基酸序列的多肽的多核苷酸。
18.一种用于构建具有提高的daoc生产率的微生物的组合物，所述组合物包含选自由以下所组成的组中的至少一种：
