本发明属于微生物，尤其涉及一种用于高密度培养产气荚膜梭菌和产气荚膜梭菌噬菌体的培养基及其应用。
背景技术：
1、产气荚膜梭菌是一种厌氧的革兰氏阳性芽孢菌，可在水、土壤、饲料、灰尘和动物生产环境中广泛存在。在肠道中定植率可高达95％以上，主要引起畜禽坏死性肠炎、溃疡和出血。感染禽类主要表现在肠道充满气体、肠道壁变薄变脆，空肠和回肠出血坏死。产气荚膜梭菌可使鸡的饲养成本增加约0.4元/只，造成严重经济损失，增加养殖成本和消费者负担。
2、当前产气荚膜梭菌感染的防治主要依赖抗生素，如杆菌肽、林可霉素、泰乐辛和青霉素等，然而，随着抗生素耐药性的迅速蔓延，抗生素已被逐步禁止使用。抗生素的禁用可能会增加产气荚膜梭菌在家禽环境中的快速增殖，导致家禽饲料消化率和吸收率降低，体重增长缓慢，养殖成本增加。因此，在全球限抗、禁抗的大背景下，安全、有效、可持续的控制产气荚膜梭菌感染方案将能有效提升养禽业的经济效益。
3、研究表明，产气荚膜梭菌噬菌体可以通过特定的裂解循环杀死细菌，且具有只攻击靶宿主，而不影响肠道正常菌群的特异性。因此，产气荚膜梭菌噬菌体具有良好的安全性，也使其靶向治疗细菌感染成为可能。但是，若要实现产气荚膜梭菌噬菌体在养殖生产中的规模化应用，常规的试验室培养方法难以满足实际需求。
4、目前，厌氧型细菌噬菌体特别是产气荚膜梭菌噬菌体高密度培养技术仍然有很多亟待解决的问题，无法实现工业化、规模化生产和应用。
技术实现思路
1、本发明的目的之一在于提供一种用于高密度培养产气荚膜梭菌和产气荚膜梭菌噬菌体的培养基，所述培养基包括以下组分：胰蛋白胨10～15g/l，蛋白胨5～10g/l，酵母浸粉1～5g/l，葡萄糖18～25g/l，可溶性淀粉1～1.5g/l，氯化钠3～7g/l，柠檬酸铵1～3g/l，吐温-80 0.8～1.3g/l，磷酸氢二钾0.1～0.5g/l，磷酸二氢钾0.3～0.7g/l，醋酸钠1～5g/l，l-半胱氨酸盐酸盐0.1～0.5g/l。初始ph为7.0。
2、优选地，所述培养基包括以下组分：胰蛋白胨13g/l，蛋白胨7g/l，酵母浸粉3g/l，葡萄糖20g/l，可溶性淀粉1.2g/l，氯化钠5g/l，柠檬酸铵2g/l、吐温-80 1g/l、磷酸氢二钾0.3g/l、磷酸二氢钾0.5g/l，醋酸钠3g/l、l-半胱氨酸盐酸盐0.3g/l。
3、本发明的目的之二在于提供上述培养基在产气荚膜梭菌和产气荚膜梭菌噬菌体高密度培养中的应用。
4、优选地，所述产气荚膜梭菌为a型产气荚膜梭菌标准菌株atcc 13124。
5、更优选地，所述产气荚膜梭菌噬菌体的全长dna序列如seq id no.1-4所示。
6、更优选地，所述应用为将产气荚膜梭菌和产气荚膜梭菌噬菌体接种于上述培养基中进行培养。
7、更优选地，所述应用包括以下步骤：按照0.8-1.2％接种量接种产气荚膜梭菌，培养1-2h时，按照moi＝1：10000-30000接入噬菌体，静止0.5-1.5h，然后于36-38℃厌氧培养9～13h。
8、更优选地，所述应用包括以下步骤：按照1％接种量接种产气荚膜梭菌，培养1.5h时，按照moi＝1：20000接入噬菌体，静止1h，然后于37℃、100r/min下厌氧培养10～12h。
9、本发明的目的之三在于提供一种产气荚膜梭菌和产气荚膜梭菌噬菌体高密度培养方法，所述培养方法包括以下步骤：按照1％接种量于权利要求1或权利要求2所述培养基中接种产气荚膜梭菌，培养1.5h时，按照moi＝1：20000接入噬菌体，静止1h，然后于37℃、100r/min下厌氧培养10～12h。
10、本发明的目的之四在于提供上述高密度培养方法培养获得的产气荚膜梭菌噬菌体发酵液。
11、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
12、本发明提供的培养基能够实现对产气荚膜梭菌噬菌体的高密度、规模化培养。
1.一种用于高密度培养产气荚膜梭菌和产气荚膜梭菌噬菌体的培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分：胰蛋白胨10～15g/l，蛋白胨5～10g/l，酵母浸粉1～5g/l，葡萄糖18～25g/l，可溶性淀粉1～1.5g/l，氯化钠3～7g/l，柠檬酸铵1～3g/l，吐温-80 0.8～1.3g/l，磷酸氢二钾0.1～0.5g/l，磷酸二氢钾0.3～0.7g/l，醋酸钠1～5g/l，l-半胱氨酸盐酸盐0.1～0.5g/l。初始ph为7.0。
2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基包括以下组分：胰蛋白胨13g/l，蛋白胨7g/l，酵母浸粉3g/l，葡萄糖20g/l，可溶性淀粉1.2g/l，氯化钠5g/l，柠檬酸铵2g/l、吐温-80 1g/l、磷酸氢二钾0.3g/l、磷酸二氢钾0.5g/l，醋酸钠3g/l、l-半胱氨酸盐酸盐0.3g/l。
3.权利要求1或权利要求2所述的培养基在产气荚膜梭菌和产气荚膜梭菌噬菌体高密度培养中的应用。
4.根据权利要求3所述应用，其特征在于，所述产气荚膜梭菌为a型产气荚膜梭菌。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述产气荚膜梭菌噬菌体的全长dna序列如seq id no.1-4所示。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用为将产气荚膜梭菌和产气荚膜梭菌噬菌体接种于权利要求1或权利要求2所述的培养基中进行培养。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：按照0.8-1.2％接种量接种产气荚膜梭菌，培养1-2h时，按照moi＝1：10000-30000接入噬菌体，静止0.5-1.5h，然后于36-38℃厌氧培养9～13h。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：按照1％接种量接种产气荚膜梭菌，培养1.5h时，按照moi＝1：20000接入噬菌体，静止1h，然后于37℃、100r/min下厌氧培养10～12h。
9.一种产气荚膜梭菌和产气荚膜梭菌噬菌体高密度培养方法，其特征在于，所述培养方法包括以下步骤：按照1％接种量于权利要求1或权利要求2所述培养基中接种产气荚膜梭菌，培养1.5h时，按照moi＝1：20000接入噬菌体，静止1h，然后于37℃、100r/min下厌氧培养10～12h。
10.利用权利要求9所述高密度培养方法培养获得的产气荚膜梭菌噬菌体发酵液。
