本发明涉及用于免疫增强的鸭白细胞介素-2及其作为免疫增强剂的应用。
背景技术:
1、白细胞介素-2(interleukine-2,il-2)是非常重要的具有广泛生物学活性的免疫调节因子之一,1976年morgan等首先在pha刺激的鼠脾淋巴细胞培养上清中发现了鼠的il-2,因其可促进和维持t细胞的生长,因而被称为t细胞生长因子(t cell growth factor,tcgf)。1979年5月于瑞士召开的第二届国际淋巴因子工作会议中正式命名为白细胞介素-2。其由特异性抗原或致丝裂素激活的t-淋巴细胞或t淋巴细胞系分泌产生的th1型淋巴细胞因子。能激活t细胞和促进b细胞分化和分泌抗体,诱导产生干扰素(interferon,ifn)、肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor,tnf),增强单核细胞以及自然杀伤细胞(nk)的杀伤活性,可以提高动物机体细胞免疫和体液免疫能力,在机体的免疫反应中具有重要的调节作用。
2、目前禽类疫病复杂多样,疫苗为防控禽类疾病的首要手段,现阶段的禽用疫苗中常用的灭活疫苗和亚单位疫苗注射入机体后都需要较长时间才激发机体产生免疫反应,直至抗体效价达到一定水平至少需要3-4周时间,而且疫苗抗体效价低或难以长时间维持较高水平,因此亟待开发高效的免疫佐剂,提高疫苗的抗体效价和免疫持续期。
技术实现思路
1、为此,本发明提供一种用于免疫增强的鸭白细胞介素-2及其作为免疫增强剂的应用。
2、为了实现上述目的,本发明提供如下技术方案:
3、本发明提供重组大肠埃希氏菌bysw007,其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,其保藏号为cgmcc no.22853。
4、本发明的重组大肠埃希氏菌bysw007,其用于制备免疫增强的鸭白细胞介素-2蛋白。
5、本发明的一个实施例中,所述鸭白细胞介素-2蛋白为如下(a1)或(a2):
6、(a1)由序列表中序列1所示的氨基酸残基组成的蛋白质;
7、(a2)将(a1)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失/或添加且具有免疫增强的鸭白细胞介素功能的由(a1)衍生的蛋白质。
8、本发明的一个实施例中,编码所述鸭白细胞介素-2蛋白的核酸分子为如下(b1)-(b3)任一所示的dna分子:
9、(b1)核苷酸序列是序列表中序列2的dna分子;
10、(b2)与(b1)限定的核苷酸序列具有75%或75%以上同一性,且编码权利要求1所述蛋白质的dna分子;
11、(b3)严格条件下与(b1)限定的核苷酸序列杂交,且编码权利要求1所述蛋白质的分子。
12、本发明的一个实施例中,所述鸭白细胞介素-2蛋白,其应用为如下(c1)-(c8)中的至少一种:
13、(c1)作为免疫增强剂;
14、(c2)制备免疫增强剂;
15、(c3)作为疫苗的免疫增强剂;
16、(c4)作为鸭坦布苏病毒疫苗的免疫增强剂;
17、(c5)制备疫苗;
18、(c6)制备鸭坦布苏病毒疫苗;
19、(c7)作为抗病毒制剂;
20、(c8)制备抗病毒制剂。
21、本发明的一个实施例中,所述免疫增强剂包括以下组分:每毫升中含鸭白细胞白介素-2蛋白为10000iu、牛膝多糖1~5mg,维生素c 50~200μg;左旋咪唑5ng~10ng,余量为磷酸盐缓冲液。
22、本发明的一个实施例中,所述重组大肠埃希氏菌bysw007是将核酸分子导入大肠杆菌菌株bl21(de3)得到。
23、本发明另一方面还提供一种制备用于免疫增强的鸭白细胞介素-2蛋白的方法,其包括如下步骤:培养所述的重组大肠埃希氏菌bysw007,表达、纯化得到所述鸭白细胞介素-2蛋白。
24、本发明另一方面还提供一种免疫增强剂,其包含培养所述的重组大肠埃希氏菌bysw007获得的鸭白细胞白介素-2蛋白、牛膝多糖、维生素c、左旋咪唑以及磷酸盐缓冲液。
25、本发明另一方面还提供一种抗体,其利用所述的免疫增强剂制得。
26、本发明的重组大肠埃希氏菌bysw007,保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,其保藏号为cgmcc no.22853。
27、本发明具有如下优点:
28、本发明提供的重组白细胞介素-2制品是一种高效免疫增强剂,制备方法简单,可以应用于禽用灭活疫苗、亚单位疫苗和活疫苗中,在提高机体抗体效价的同时延长机体免疫持续期。
1.重组大肠埃希氏菌bysw007,其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,其保藏号为cgmcc no.22853。
2.如权利要求1所述的重组大肠埃希氏菌bysw007,其用于制备免疫增强的鸭白细胞介素-2蛋白。
3.如权利要求2所述的重组大肠埃希氏菌bysw007,其特征在于,
4.如权利要求3所述的重组大肠埃希氏菌bysw007,其特征在于,
5.如权利要求3所述的重组大肠埃希氏菌bysw007,其特征在于,
6.如权利要求5所述的重组大肠埃希氏菌bysw007,其特征在于,
7.一种制备用于免疫增强的鸭白细胞介素-2蛋白的方法,其包括如下步骤:培养权利要求1所述的重组大肠埃希氏菌bysw007,表达、纯化得到所述鸭白细胞介素-2蛋白。
8.一种免疫增强剂,其包含培养权利要求1重组大肠埃希氏菌bysw007获得的鸭白细胞白介素-2蛋白、牛膝多糖、维生素c、左旋咪唑以及磷酸盐缓冲液。
9.一种抗体,其利用权利要求8所述的免疫增强剂制得。
