本发明涉及分子生物学领域，尤其是一种抑制转录因子tead活性的方法及应用rna。
背景技术：
1、肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,hcc)是世界性的恶性肿瘤之一，其5年生存率仅为18％。目前，针对hcc的主要治疗手段有手术治疗、射频消融、经动脉化疗栓塞(tace)等物理治疗手段。然而，流行病学调查发现每年因肝癌死亡的患者人数非常接近于新发病例数，表明肝癌的预后极差，患者从现有的治疗手段中获益不佳，主要原因是缺乏特异性的靶点蛋白，也无针对性的靶向药物。因此，寻找hcc新的治疗靶点、研发更为有效的治疗药物及手段，对于降低hcc患者的死亡率至关重要。
2、泛素是个小蛋白，仅8.56kda。它能被泛素e1-e2-e3酶级联反应共价连接到底物蛋白上，称之为泛素化。泛素化是蛋白质翻译后修饰的重要组分，能够改变底物蛋白的功能。泛素化和生命活动的许多功能均有关联，如细胞周期、器官发育、脂肪代谢、逆境响应等，而泛素化的异常调节和许多人类疾病密切相关，如癌症、自身免疫性疾病及神经退行性疾病等。泛素化是个特异性过程，其特异性主要由e3泛素连接酶所决定。
3、rnf214是一个缺乏研究的泛素连接酶，其生物学功能及作用机制均不清楚。本发明发现rnf214在肝癌细胞中特异性高表达，并且和肝癌的发生发展密切相关，因此是肝癌治疗的创新性靶点蛋白。
4、tead家族蛋白是进化上保守的转录因子，由tead1-4组成，识别特定的dna序列。它们是hippo信号通路的重要组成部分。它们和yap/taz相结合，组成了促进肿瘤发生发展的转录因子复合体。
5、tead家族基因的表达在多种癌症中上调，包括胃癌、结直肠癌、肝癌、肺癌、乳腺癌和前列腺癌等，并且和肿瘤患者的不良预后成正相关。已有的研究表明，tead家族成员具有促癌活性。因此，针对tead活性的干预措施是临床上有效控制肿瘤发生发展的策略之一。
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种抑制转录因子tead活性的方法及应用rna，rnf214通过泛素化tead,促进tead和yap/taz的相互作用，增强其转录活性，增加和肿瘤发生发展相关的促癌基因的转录表达，从而促进肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭。因此通过抑制rnf214的表达及活性，能有效抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力，同时有效压制肝癌细胞在动物体内的成瘤能力。
2、本发明提出一种抑制转录因子tead活性的方法，通过调控靶向泛素连接酶rnf214的表达抑制肿瘤细胞转录因子tead的活性，调控靶向泛素连接酶rnf214的方式包括通过rna干扰技术敲低rnf214蛋白的表达水平，或者通过crispr/cas9方法敲除rnf214蛋白表达基因。
3、并提出一种用于敲低细胞rnf214蛋白的干扰rna，包括其核苷酸序列如seq idno.1所示的小干扰rna(sirna)和/或其核苷酸序列如seq id no.2所示的反义rna(shrna)，通过基因敲低技术沉默细胞rnf214蛋白的表达。
4、进一步地，所述的小干扰rna和/或反义rna应用于抑制癌症细胞增殖、迁移及侵袭的生物制剂中。
5、进一步地，所述的生物制剂中还包括其他生物学上可接收的配体。
6、并提出一种用于敲除细胞rnf214蛋白的向导rna(sgrna)，其核苷酸序列如seq idno.3所示，或其核苷酸序列如seq id no.4所示，或其核苷酸序列如seq id no.5所示，或其核苷酸序列如seq idno.6所示；所述的向导rna通过基因敲除技术针对rnf214蛋白进行基因编辑抑制其表达。
7、进一步地，所述的向导rna应用于抑制癌症细胞增殖、迁移及侵袭的生物制剂中。
8、进一步地，所述的生物制剂中还包括其他生物学上可接收的配体。
9、本发明利用生物化学及肿瘤分子生物学手段，主要研究了泛素连接酶rnf214调控tead家族蛋白的泛素化及其转录活性、hippo信号通路的分子机制及肝癌的发生发展。通过研究肝癌细胞中rnf214是如何通过泛素化tead来影响tead和yap/taz转录复合体的形成，调控hippo信号通路下游基因的表达及其在肝癌细胞增殖、转移中的作用，从而阐明rnf214在hippo信号通路中的作用以及tead介导的基因转录及其所起的肝癌细胞功能变化来揭示肝癌发生发展的机制。
10、同时，本发明通过设计rnf214的特异性sirna及shrna，应用rna干扰技术，敲低肝癌细胞中的rnf214的表达量。以及，本发明应用crispr/cas9技术，设计了能特异性敲除rnf214的小向导rna(sgrna)。应用这两个技术，本发明有效敲除或敲低rnf214在肝癌细胞中的表达，发现能有效抑制肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力，也能有效降低肝癌细胞在动物体内的成瘤能力。
11、rnf214是本发明最新发现的肝癌靶点蛋白，目前并无任何靶向治疗策略,因此，本发明是属于开创性的发明。而rnf214通过泛素化调控增强tead的原癌活性，因此，针对rnf214的靶向策略，也可以推广到其他癌种。
1.一种抑制转录因子tead活性的方法，其特征在于，通过调控靶向泛素连接酶rnf214的表达抑制肿瘤细胞转录因子tead的活性，调控靶向泛素连接酶rnf214的方式包括通过rna干扰技术敲低rnf214蛋白的表达水平，或者通过crispr/cas9方法敲除rnf214蛋白表达基因。
2.一种用于敲低细胞rnf214蛋白的干扰rna，其特征在于，包括其核苷酸序列如seq idno.1所示的小干扰rna和/或其核苷酸序列如seq id no.2所示的反义rna，通过基因敲低技术沉默细胞rnf214蛋白的表达。
3.根据权利要求2所述的用于敲低人细胞rnf214的干扰rna，其特征在于，所述的小干扰rna和/或反义rna应用于抑制癌症细胞增殖、迁移及侵袭的生物制剂中。
4.根据权利要求3所述的用于敲低人细胞rnf214的干扰rna，其特征在于，所述的生物制剂中还包括其他生物学上可接收的配体。
5.一种用于敲除细胞rnf214蛋白的向导rna，其特征在于，其核苷酸序列如seq idno.3所示，或其核苷酸序列如seq id no.4所示，或其核苷酸序列如seq id no.5所示，或其核苷酸序列如seq idno.6所示；所述的向导rna通过基因敲除技术针对rnf214蛋白进行基因编辑抑制其表达。
6.根据权利要求5所述的用于敲除细胞rnf214蛋白的向导rna，其特征在于，所述的向导rna应用于抑制癌症细胞增殖、迁移及侵袭的生物制剂中。
7.根据权利要求6所述的用于敲除细胞rnf214蛋白的向导rna，其特征在于，所述的生物制剂中还包括其他生物学上可接收的配体。
