发明领域本发明涉及用于在哺乳动物宿主细胞中产生抗α4β7抗体的方法和组合物。
背景技术：
1、哺乳动物细胞培养技术常用于生产治疗性生物制剂，包括治疗性单克隆抗体。在制药工业中，哺乳动物细胞通常比其他形式的真核细胞(诸如酵母)或原核细胞(诸如细菌)更优选用于蛋白质生产，因为哺乳动物细胞中产生的蛋白质的翻译后修饰与人体产生的蛋白质更类似。然而，哺乳动物细胞培养可能很困难，因为这些细胞存在许多挑战，特别是在以商业规模制造用于人类的治疗性抗体的情形下。生产方法必须使细胞的抗体产量最大化，同时保持蛋白质产品的安全性以及效率和成本效益。因此，生产需求很重要，因为需要保持所期望的产品质量属性诸如糖基化特征、聚集体水平、电荷异质性和氨基酸序列完整性(li等人,2010,mabs,2(5):466-477)。
2、鉴于细胞培养过程的复杂性，可能难以确定可解决与产生治疗性抗体相关联的挑战的细胞培养参数，包括保持高质量的药物产品，同时产生足够的蛋白质产品以满足制造需求和治疗要求。
技术实现思路
1、尽管哺乳动物细胞培养过程在过去几十年中一直是研究的主题，但仍然需要改进重组抗体的大规模商业生产。哺乳动物宿主细胞培养的细胞活力、寿命和比生产力的增加，以及所产生的重组蛋白滴度的提高对所产生的重组蛋白的价格有真正的影响，并且在治疗性蛋白的情况下，对药物产品的价格和供应有影响。此外，鉴于需要保持所产生的治疗性抗体质量的一致性，此类增加可能尤其具有挑战性。
2、本文提供的发明尤其公开了用于在哺乳动物宿主细胞中产生抗α4β7抗体(诸如维多珠单抗(vedolizumab))的细胞培养方法和组合物。本文还提供了包含使用所述方法获得的抗α4β7抗体(诸如维多珠单抗)的组合物。
3、在一个方面，本发明提供了产生包含人源化抗α4β7抗体的组合物的方法，所述方法包括在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及将包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂添加到生产培养基中，从而产生包含人源化抗α4β7抗体的组合物，其中哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，所述抗体是igg1抗体，包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq idno:8所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
4、在上述方面的一些实施方案中，所述方法是产生人源化抗α4β7抗体的碱性同工型(如通过阳离子交换色谱法(cex)所测定)的量减少的组合物的方法，所述方法包括所述在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及所述将包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂添加到生产培养基中，从而产生与在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，人源化抗α4β7抗体的碱性同工型的量减少的组合物。
5、在上述方面的一些实施方案中，本发明的特征在于一种产生具有约16％或更少的人源化抗α4β7抗体的碱性同工型(如通过cex所测定)的组合物的方法，所述方法包括所述在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及所述将包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂添加到生产培养基中，从而产生具有约16％或更少的人源化抗α4β7抗体的碱性同工型的组合物。
6、在一个实施方案中，组合物包含约14％或更少的人源化抗α4β7抗体的碱性同工型。
7、在另一个实施方案中，组合物包含约13％或更少的人源化抗α4β7抗体的碱性同工型。
8、在一个实施方案中，将补充剂添加到生产培养基中或添加到补料培养基中，补料培养基随后被添加到生产培养基中。
9、在一个实施方案中，在补充与收获之间在生产培养基中添加的尿苷的累积浓度为约1至约7mm；其中在补充与收获之间在生产培养基中添加的锰的累积浓度为约0.002至约0.015mm；且/或其中在补充与收获之间在生产培养基中添加的半乳糖的累积浓度为约3至约20mm。在某些实施方案中，补料培养基还包含锌。在一种实施方案中，在补充与收获之间在生产培养基中添加的锌的累积浓度为约0.05mm至约0.045mm。
10、在一个实施方案中，锰作为补充剂多次添加到生产培养基中，每次添加约0.1至10μm、约0.2至1.5μm、约0.2至5μm、约0.25至2μm、约0.3至1.2μm或约0.3至0.8μm。在某些实施方案中，锰作为补充剂多次添加到生产培养基中，每次添加约0.2至1.5μm。
11、在一个实施方案中，尿苷作为补充剂多次添加到生产培养基中，每次添加约25至1000μm、约75至750μm、约55至620μm、约100至600μm、约150至450μm、约100至700μm、约100至600μm或约170至630μm。在某些实施方案中，尿苷作为补充剂多次添加到生产培养基中，添加量为约100至700μm。
12、在一个实施方案中，半乳糖作为补充剂添加多次添加到生产培养基中，每次添加约0.1至10mm、0.2至7.5mm、0.5至5mm、0.4至2.8mm、0.5至3.5mm、0.7至2.9mm、0.75至2.5mm或约1.2mm或1.4mm。在某些实施方案中，半乳糖作为补充剂以约0.5至3.5mm多次添加到生产培养基中。
13、在一个实施方案中，补充剂每天或每两天添加一次。在某些实施方案中，补充剂从生产阶段培养的第4天开始添加。
14、在一个实施方案中，尿苷添加到补料培养基中至最终浓度为约15至120mm。在一个实施方案中，尿苷添加到补料培养基中至最终浓度为约20至70mm尿苷。在一个实施方案中，尿苷添加到补料培养基中至最终浓度为约1至40mm尿苷。
15、在一个实施方案中，锰添加到补料培养基中至最终浓度为约0.02至0.3mm。在一个实施方案中，锰添加到补料培养基中至最终浓度为约0.04至0.15mm。在一个实施方案中，锰添加到补料培养基中至最终浓度为约0.0001至0.1mm。
16、在另一实施方案中，半乳糖添加到补料培养基中至最终浓度为约85mm至600mm。在一个实施方案中，半乳糖添加到补料培养基中至最终浓度为约160至340mm。在一个实施方案中，半乳糖添加到补料培养基中至最终浓度为约50至150mm。
17、在另一个实施方案中，补料培养基还包含锌。在一个实施方案中，补料培养基中锌的浓度为约90μm至120μm。在一个实施方案中，补料培养基中锌的浓度为约50μm至150μm。
18、在一个实施方案中，相对于在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞中产生的酸性种类的百分比，所述方法还减少了人源化抗α4β7抗体的酸性种类的百分比
19、在一个实施方案中，相对于在缺少添加到生产培养基中的包含尿苷、锰和半乳糖的补料培养基的情况下产生的主要同工型种类的百分比，所述方法还增加了人源化抗α4β7抗体的主要同工型种类的百分比。
20、在一个实施方案中，所述方法是补料分批方法。
21、在一个实施方案中，从生产阶段的约第四天开始将补料培养基添加到生产培养基中。
22、在另一个方面，本发明提供了一种产生包含人源化抗α4β7抗体的组合物的方法，所述方法包括在包含锌的生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，从而产生包含人源化抗α4β7抗体的组合物，其中哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，所述抗体是igg1抗体；包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4中所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8中所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
23、在上述方面的一些实施方案中，所述方法是产生人源化抗α4β7抗体的碱性同工型(如通过阳离子交换色谱法(cex)所测定)的量减少的组合物的方法，所述方法包括所述在包含锌的生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，从而产生与在缺少锌的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，人源化抗α4β7抗体的碱性同工型的量减少的组合物。
24、在上述方面的一些实施方案中，所述方法是产生具有约16％或更少的人源化抗α4β7抗体的碱性同工型(如通过cex所测定)的组合物的方法，所述方法包括所述在包含锌的生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，从而产生具有约16％或更少的人源化抗α4β7抗体的碱性同工型的组合物。
25、在一个实施方案中，组合物包含约14％或更少的人源化抗α4β7抗体的碱性同工型。
26、在一个实施方案中，组合物包含约13％或更少的人源化抗α4β7抗体的碱性同工型。
27、在一个实施方案中，生产培养基中锌的浓度为2μm至60μm。
28、在另一实施方案中，所述方法包括通过向生产培养基中添加包含锌的补料培养基来用锌补充生产培养基。在一个实施方案中，从生产阶段的约第四天开始将补料培养基添加到生产培养基中。
29、在一个实施方案中，补料培养基中锌的浓度为约90μm至120μm。
30、在一个实施方案中，生产培养基包含5.0至8.8g/l赖氨酸和3.0至12.0g/l精氨酸。在一个实施方案中，生产培养基包含4.5至5.5g/l赖氨酸。在一个实施方案中，生产培养基包含5.5至8.8g/l赖氨酸。在一个实施方案中，生产培养基包含5.4至7.4g/l精氨酸。在一个实施方案中，生产培养基包含7.4至12g/l精氨酸。
31、在另一个方面，本发明的特征在于一种产生包含人源化抗α4β7抗体的组合物的方法，所述方法包括在生产阶段在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，使得产生包含人源化抗α4β7抗体的组合物，其中生产培养基具有约37摄氏度的平均温度，其中宿主细胞被基因工程改造以表达人源化igg1抗α4β7抗体，其中人源化抗α4β7包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq idno:8中所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
32、在上述方面的一些实施方案中，所述方法是产生包含2.5％或更少的人源化抗α4β7抗体的hmw种类(如通过sec测定)的组合物的方法，所述方法包括所述在生产阶段在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，使得产生包含2.5％或更少的人源化抗α4β7抗体的hmw种类(如通过sec测定)的组合物。
33、在再一方面，本发明提供了一种产生包含人源化抗α4β7抗体的组合物的方法，所述方法包括在扩增阶段在生长培养基中培养哺乳动物宿主细胞，其中哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，以及在生产阶段在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，使得产生包含人源化抗α4β7抗体的组合物，其中哺乳动物宿主细胞在扩增阶段和生产阶段在大约相同的温度下培养，并且其中人源化抗α4β7抗体是igg1抗体；包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4中所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8中所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
34、在上述方面的一些实施方案中，所述方法是产生包含高水平的人源化抗α4β7抗体的单体(如通过sec所测定)的组合物的方法，所述方法包括所述在扩增阶段在生长培养基中培养哺乳动物宿主细胞，其中哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，以及所述在生产阶段在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，适当产生包含高水平的人源化抗α4β7抗体的单体(如通过sec所测定)的组合物。
35、在一个实施方案中，温度为36至38摄氏度。在另一个实施方案中，平均温度为36.5至37.5摄氏度。在再一实施方案中，温度为约37摄氏度的平均温度。
36、在一个实施方案中，本文所公开的方法的生产培养基的温度范围为36至38摄氏度。在一个实施方案中，温度范围为36.5至37.5摄氏度。在一个实施方案中，温度为约37摄氏度的平均温度。在一个实施方案中，生产培养基的ph范围为6.5至7。
37、在一个实施方案中，本文所公开的方法的生产培养基的ph范围为6.8至7.0。
38、在一个实施方案中，本文所公开的方法的生产培养基的葡萄糖水平在生产阶段期间保持在约7g/l或更低。
39、在一个实施方案中，生产阶段为14天或更短。在另一个实施方案中，生产阶段的范围为10天至17天。
40、在上述方面的一些实施方案中，所述方法在大规模生物反应器中进行。在某些实施方案中，大规模生物反应器选自由200升(l)生物反应器、2000l生物反应器、3000l和6000l生物反应器组成的组。
41、在一些实施方案中，生产阶段使得人源化抗α4β7抗体的滴度大于3g/l。在某些实施方案中，人源化抗α4β7抗体的滴度为约3至约8g/l。在其他实施方案中，人源化抗α4β7抗体的滴度为约5至约7g/l。
42、在上述方面的一些实施方案中，哺乳动物宿主细胞是中国仓鼠卵巢(chinesehamster ovary)(cho)细胞。在某些实施方案中，cho细胞是gs-cho细胞。
43、在上述方面的一些实施方案中，人源化抗α4β7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含如seq id no:1所列示的氨基酸序列，并且包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含如seq id no:5所列示的氨基酸序列。
44、在上述方面的一些实施方案中，人源化抗α4β7抗体是维多珠单抗。
45、在上述方面的一些实施方案中，所述方法包括抗体的收获和纯化。在一些此类实施方案中，纯化包括(i)去除任何细胞碎片、不需要的蛋白质、盐、矿物质或其他不合需要的元素的纯化步骤，和(ii)从污染物可溶性蛋白质和多肽中纯化抗体。在某些实施方案中，所述方法还包括制备适用于人类治疗用途的纯化抗体的药物制剂。
46、在特定实施方案中，药物制剂是液体药物制剂。在一些此类实施方案中，液体药物制剂通过超滤/渗滤制备。
47、在其他实施方案中，药物制剂是冻干的干抗体制剂。在一些此类实施方案中，抗体的药物制剂是从纯化后通过超滤/渗滤制备的液体药物抗体制剂冻干而来的干抗体制剂。
48、在一些实施方案中，本发明提供了一种产生人源化抗α4β7抗体的g0f糖型(如通过亲水相互作用色谱法(hilic)所测定)的量减少的组合物的方法，所述方法包括所述在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及所述将包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂添加到生产培养基中，从而产生与在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，人源化抗α4β7抗体的g0f糖型的量减少的组合物。
49、在一个实施方案中，与在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含至少约15％减少水平的人源化抗α4β7抗体的g0f糖型。
50、在一个实施方案中，与在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含至少约20％减少的人源化抗α4β7抗体的g0f糖型。
51、在一些实施方案中，本发明提供了一种产生具有约65％或更少的人源化抗α4β7抗体的g0f糖型(如通过hilic所测定)的组合物的方法，所述方法包括所述在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及所述将包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂添加到生产培养基中，从而产生具有约65％或更少的人源化抗α4β7抗体的g0f糖型的组合物。
52、在一个实施方案中，组合物包含约60％或更少的人源化抗α4β7抗体的g0f糖型。
53、在一个实施方案中，组合物包含约55％或更少的人源化抗α4β7抗体的g0f糖型。
54、在一些实施方案中，本发明提供了一种产生人源化抗α4β7抗体的g1f糖型(如通过亲水相互作用色谱法(hilic)所测定)的量增加的组合物的方法，所述方法包括所述在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及所述将包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂添加到生产培养基中，从而产生与在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，人源化抗α4β7抗体的g1f糖型的量增加的组合物。
55、在一个实施方案中，与在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含至少约2倍增加的人源化抗α4β7抗体的g1f糖型。
56、在一个实施方案中，与在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含至少约3倍增加的人源化抗α4β7抗体的g1f糖型。
57、在一些其他实施方案中，本发明提供了一种产生具有约25％或更多的人源化抗α4β7抗体的g1f糖型(如通过hilic所测定)的组合物的方法，所述方法包括所述在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及所述将包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂添加到生产培养基中，从而产生具有约25％或更多的人源化抗α4β7抗体的g1f糖型的组合物。
58、在一个实施方案中，组合物包含约30％或更多的人源化抗α4β7抗体的g1f糖型。
59、在一些实施方案中，本发明提供了一种产生人源化抗α4β7抗体的g2f糖型(如通过亲水相互作用色谱法(hilic)所测定)的量增加的组合物的方法，所述方法包括所述在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及所述将包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂添加到生产培养基中，从而产生与在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，人源化抗α4β7抗体的g2f糖型的量增加的组合物。
60、在一个实施方案中，与在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含至少约3倍增加的人源化抗α4β7抗体的g2f糖型。
61、在一个实施方案中，与在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含至少约4倍增加的人源化抗α4β7抗体的g2f糖型。
62、在一些实施方案中，本发明提供了一种产生具有约3％或更多的人源化抗α4β7抗体的g2f糖型(如通过hilic所测定)的组合物的方法，所述方法包括所述在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及所述将包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂添加到生产培养基中，从而产生具有约3％或更多的人源化抗α4β7抗体6的g2f糖型的组合物。
63、在一个实施方案中，组合物包含约4％或更多的人源化抗α4β7抗体的g2f糖型。
64、在一个实施方案中，将补充剂添加到生产培养基中或添加到补料培养基中，补料培养基随后被添加到生产培养基中。
65、在一个实施方案中，补料培养基包含约15至100mm尿苷。在一个实施方案中，补料培养基包含约20至50mm尿苷。在一个实施方案中，补料培养基包含约1至40mm尿苷。
66、在一个实施方案中，补料培养基包含约0.02至0.3mm锰。在一个实施方案中，补料培养基包含约0.02至0.1mm锰。在一个实施方案中，补料培养基包含约0.001至0.1mm锰。
67、在一个实施方案中，补料培养基包含85mm至600mm半乳糖。在一个实施方案中，补料培养基包含85mm至100mm半乳糖。在一个实施方案中，补料培养基包含50mm至150mm半乳糖。
68、在又一实施方案中，生产培养基还包含锌。在一个实施方案中，补料培养基中锌的浓度为约50μm至150μm。
69、在一个实施方案中，相对于在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞中产生的酸性种类的百分比，所述方法还减少了人源化抗α4β7抗体的酸性种类的百分比。
70、在一个实施方案中，相对于在缺少添加到生产培养基中的包含尿苷、锰和半乳糖的补料培养基的情况下产生的主要同工型种类的百分比，所述方法还增加了人源化抗α4β7抗体的主要同工型种类的百分比。
71、在一个实施方案中，所述方法是补料分批方法。
72、在一个实施方案中，从生产阶段的约第四天开始将补料培养基添加到生产培养基中。在一个实施方案中，从生产阶段的约第4天开始，每天将补料培养基添加到生产培养基中。
73、在一个实施方案中，本文所公开的方法在大规模生物反应器中进行。在一个实施方案中，大规模生物反应器选自由200升(l)生物反应器、2000l生物反应器、3000l和6000l生物反应器组成的组。
74、在一个实施方案中，生产阶段使得人源化抗α4β7抗体的滴度大于3g/l。在一个实施方案中，人源化抗α4β7抗体的滴度为约3至约8g/l。在一个实施方案中，人源化抗α4β7抗体的滴度为约5至约7g/l。
75、在一个实施方案中，哺乳动物宿主细胞是中国仓鼠卵巢(cho)细胞。在一个实施方案中，cho细胞是gs-cho细胞。
76、在一个实施方案中，生产培养基的ph为约6.8至约7.1。
77、在一个实施方案中，人源化抗α4β7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含如seq id no:1所列示的氨基酸序列，并且包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含如seq id no:5所列示的氨基酸序列。
78、在一个实施方案中，抗α4β7抗体是维多珠单抗。
79、在一些实施方案中，所述方法包括抗体的收获和纯化。在一些此类实施方案中，纯化包括(i)去除任何细胞碎片、不需要的蛋白质、盐、矿物质或其他不合需要的元素的纯化步骤，和(ii)从污染物可溶性蛋白质和多肽中纯化抗体。在某些实施方案中，所述方法还包括制备适用于人类治疗用途的纯化抗体的药物制剂。
80、在特定实施方案中，药物制剂是液体药物制剂。在一些此类实施方案中，液体药物制剂通过超滤/渗滤制备。
81、在其他实施方案中，药物制剂是冻干的干抗体制剂。在一些此类实施方案中，抗体的药物制剂是从纯化后通过超滤/渗滤制备的液体药物抗体制剂冻干而来的干抗体制剂。
82、在另一个方面，本文提供了一种细胞培养物，其包含被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体的宿主细胞，以及补充有尿苷、锰和半乳糖(umg)的生产培养基，其中所述人源化抗α4β7抗体是igg1抗体并且包含含有seq id no:1中所列示的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:5中所列示的氨基酸序列的轻链可变区。
83、在上述方面的一些实施方案中，生产培养基包含浓度为约15-100mm的尿苷、浓度为约20-200nm的锰和浓度为约85-500mm的半乳糖。
84、在上述方面的一些实施方案中，生产培养基包含在收获当天浓度为约1-7mm的补充尿苷、浓度为约2-15μm的补充锰和浓度为约3-20mm的补充半乳糖。在一些实施方案中，生产培养基还包含在收获当天浓度为约5-45μm的补充锌。
85、在上述方面的一些实施方案中，在收获当天，生产培养基包含浓度为约1-7mm的尿苷、浓度为约2-15μm的锰和浓度为约3-20mm的半乳糖。在一些实施方案中，在收获当天，生产培养基还包含浓度为约5-45μm的锌。
86、在某些实施方案中，所表达的人源化抗α4β7抗体的同工型分布包括(a)16％或更少、15％或更少、14％或更少、13％或更少、或12％或更少的碱性同工型；和/或(b)至少65％、至少68％、至少70％、至少72％或至少75％的主要同工型。
87、在其他实施方案中，所表达的人源化抗α4β7抗体的岩藻糖基化n-聚糖含量包括(a)65％或更少、60％或更少、或55％或更少的g0f；(b)25％或更多、27％或更多、或30％或更多的g1f；和/或(c)2.5％或更多、3％或更多、3.5％或更多、4％或更多、或4.5％或更多的g2f。
88、在上述方面的一些实施方案中，所表达的人源化抗α4β7抗体的总岩藻糖基化n-聚糖含量(g0f+g1f+g2f)为至少92％、至少93％、至少94％或至少95％。
89、在其他实施方案中，所表达的人源化抗α4β7抗体的总岩藻糖基化n-聚糖含量(g0f+g1f+g2f)为92％-95％。
90、在替代实施方案中，所表达的人源化抗α4β7抗体的总岩藻糖基化n-聚糖含量(g0f+g1f+g2f)为91％-92％、91％-92.5％或91％-93％。
91、在上述方面的一些实施方案中，细胞培养物还包含锌。在其他实施方案中，细胞培养物还包含精氨酸和/或赖氨酸。
92、在上述方面的一些实施方案中，宿主细胞是cho细胞。在某些实施方案中，cho细胞的编码谷氨酰胺合成酶(gs)的基因有缺陷。
93、在另一个方面，本公开提供了由上文所述的细胞培养物产生的人源化抗α4β7抗体。
94、在又一方面，本公开提供了包含人源化抗α4β7抗体的组合物，所述方法包括在具有第一ph的第一生产培养基中培养被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体的哺乳动物宿主细胞；以及在具有第二ph的第二生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞；其中第二ph低于第一ph，并且其中人源化抗α4β7抗体是igg1抗体；包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8中所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
95、在上述方面的一些实施方案中，第二ph比第一ph低0.1至0.5个ph单位。在某些实施方案中，第一ph在ph 6.8-7.2的范围内，并且第二ph在ph 6.7-6.95的范围内。
96、在一些实施方案中，哺乳动物宿主细胞在第一ph下培养120小时或更短时间。在某些实施方案中，哺乳动物宿主细胞在第一ph下培养85-110小时。在其他实施方案中，哺乳动物宿主细胞在第一ph下培养90-100小时。
97、在一些实施方案中，所述方法还包括从第二生产培养基中收获抗α4β7抗体。在某些实施方案中，将哺乳动物宿主细胞在第一生产培养基和第二生产培养基中培养13-15天的时间段后收获抗α4β7抗体。
98、在一些实施方案中，相对于其中哺乳动物宿主细胞在第一ph下培养且没有ph变化的对照组合物，所述组合物具有增加水平的抗α4β7抗体的主要同工型。
99、在另一方面，本发明包括一种组合物，其包含使用本文所公开方法中的任一种产生的人源化抗α4β7抗体。在一个实施方案中，本文公开的方法提供了人源化抗α4β7抗体的群体，其具有92％或更多的总去唾液酸、无半乳糖、核心岩藻糖基化双触角聚糖(g0f)，去唾液酸、单半乳糖、核心岩藻糖基化双触角聚糖(g1f)，和/或去唾液酸、二半乳糖、核心岩藻糖基化双触角聚糖(g2f)糖基化变体。
100、另外，本发明还包括以下实施方案：
101、1.一种产生人源化抗α4β7抗体的碱性同工型(如通过阳离子交换色谱法(cex)所测定)的量减少的组合物的方法，所述方法包括
102、在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及
103、向生产培养基中添加包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂，从而产生与在缺少补充剂的情况下培养的表达人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，人源化抗α4β7抗体的碱性同工型的量减少的组合物，
104、其中所述哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，所述抗体是igg1抗体；包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
105、2.一种产生具有约16％或更少的人源化抗α4β7抗体的碱性同工型(如通过cex所测定)的组合物的方法，所述方法包括
106、在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及
107、向生产培养基中添加包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂，从而产生具有约16％或更少的人源化抗α4β7抗体的碱性同工型的组合物，
108、其中所述哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，所述抗体是igg1抗体，包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8中所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
109、3.如项目2所述的方法，其中所述组合物包含约14％或更少的所述人源化抗α4β7抗体的碱性同工型。
110、4.如项目2所述的方法，其中所述组合物包含约13％或更少的所述人源化抗α4β7抗体的碱性同工型。
111、5.如项目1至4中任一项所述的方法，其中将所述补充剂添加到所述生产培养基中或添加到补料培养基中，所述补料培养基随后被添加到所述生产培养基中。
112、6.如项目5的所述方法，其中尿苷添加到所述补料培养基中至最终浓度为约15至120mm。
113、7.如项目6所述的方法，其中所述尿苷添加到所述补料培养基中至最终浓度为约20至70mm尿苷。
114、8.如项目5的所述方法，其中锰添加到所述补料培养基中至最终浓度为约0.02至0.3mm。
115、9.如项目8的所述方法，其中锰添加到所述补料培养基中至最终浓度为约0.04至0.15mm。
116、10.如项目5的所述方法，其中半乳糖添加到所述补料培养基中至最终浓度为约85mm至600mm。
117、11.如项目10的所述方法，其中半乳糖添加到所述补料培养基中至最终浓度为约160mm至340mm。
118、12.如项目1-11中任一项所述的方法，其中所述补料培养基还包含锌。
119、13.如项目12所述的方法，其中所述补料培养基中锌的浓度为约90μm至120μm。
120、14.如项目1-13中任一项所述的方法，其中相对于在缺少所述补充剂的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞中产生的酸性种类的百分比，所述方法还减少了所述人源化抗α4β7抗体的酸性种类的百分比
121、15.如项目1-14中任一项所述的方法，其中相对于在缺少添加到所述生产培养基中的包含尿苷、锰和半乳糖的补料培养基的情况下产生的主要同工型种类的百分比，所述方法还增加了所述人源化抗α4β7抗体的主要同工型种类的百分比。
122、16.如项目1-15中任一项所述的方法，其中所述方法是补料分批方法。
123、17.如项目16所述的方法，其中从生产阶段的约第四天开始将所述补料培养基添加到所述生产培养基中。
124、18.一种产生人源化抗α4β7抗体的碱性同工型(如通过阳离子交换色谱法(cex)所测定)的量减少的组合物的方法，所述方法包括在包含锌的生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，从而产生与在缺少锌的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述人源化抗α4β7抗体的碱性同工型的量减少的组合物，
125、其中所述哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，所述抗体是igg1抗体；包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
126、19.一种产生具有约16％或更少的人源化抗α4β7抗体的碱性同工型(如通过cex所测定)的组合物的方法，所述方法包括在包含锌的生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，从而产生具有约16％或更少的所述人源化抗α4β7抗体的碱性同工型的组合物，
127、其中所述哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，所述抗体是igg1抗体，包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8中所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
128、20.如项目19所述的方法，其中所述组合物包含约14％或更少的所述人源化抗α4β7抗体的碱性同工型。
129、21.如项目19所述的方法，其中所述组合物包含约13％或更少的所述人源化抗α4β7抗体的碱性同工型。
130、22.如项目18至21中任一项所述的方法，其中所述生产培养基中锌的浓度为2μm至60μm。
131、23.如项目18至22中任一项所述的方法，其中所述方法包括通过向所述生产培养基中添加包含锌的补料培养基来用锌补充所述生产培养基。
132、24.如项目23所述的方法，其中从生产阶段的约第四天开始将所述补料培养基添加到所述生产培养基中。
133、25.如项目24所述的方法，其中所述补料培养基中锌的浓度为约90μm至120μm。
134、26.如项目1-25中任一项所述的方法，其中所述生产培养基包含5.0至8.8g/l赖氨酸和3.0至12.0g/l精氨酸。
135、27.如项目26所述的方法，其中所述生产培养基包含4.5至5.5g/l赖氨酸。
136、28.如项目26所述的方法，其中所述生产培养基包含5.5至8.8g/l赖氨酸。
137、29.如项目26所述的方法，其中所述生产培养基包含5.4至7.4g/l精氨酸。
138、30.如项目26所述的方法，其中所述生产培养基包含7.4至12g/l精氨酸。
139、31.一种产生包含2.5％或更少的人源化抗α4β7抗体的hmw种类(如通过sec所测定)的组合物的方法，所述方法包括
140、在生产阶段在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，使得产生包含2.5％或更少的人源化抗α4β7抗体的hmw种类(如通过sec所测定)的组合物，
141、其中所述生产培养基具有约37摄氏度的平均温度，其中所述宿主细胞被基因工程改造以表达人源化igg1抗α4β7
142、抗体，其中所述人源化抗α4β7包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq idno:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8中所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
143、32.一种产生包含高水平的人源化抗α4β7抗体的单体(如通过sec所测定)的组合物的方法，所述方法包括
144、在扩增阶段在生长培养基中培养哺乳动物宿主细胞，其中所述哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，以及
145、在生产阶段在生产培养基中培养所述哺乳动物宿主细胞，使得产生包含高水平的所述人源化抗α4β7抗体的单体(如通过sec所测定)的组合物。
146、其中所述哺乳动物宿主细胞在所述扩增阶段和所述生产阶段在大约相同的温度下培养，并且
147、其中所述人源化抗α4β7抗体是igg1抗体；包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8中所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
148、33.如项目31或32所述的方法，其中所述温度为36至38摄氏度。
149、34.如项目31或32所述的方法，其中所述平均温度为36.5至37.5摄氏度。
150、35.如项目31或32所述的方法，其中所述温度为约37摄氏度的平均温度。
151、36.如项目1-35中任一项所述的方法，其中所述生产培养基的温度范围为36至38摄氏度。
152、37.如项目36所述的方法，其中所述温度范围为36.5至37.5摄氏度。
153、38.如项目36所述的方法，其中所述温度为约37摄氏度的平均温度。
154、39.如项目1-38中任一项所述的方法，其中所述生产培养基的ph范围为6.5至7。
155、40.如项目39所述的方法，其中所述生产培养基的ph范围为6.8至7.0。
156、41.如项目1-40中任一项所述的方法，其中所述生产培养基的葡萄糖水平在所述生产阶段期间保持在约7g/l或更低。
157、42.如项目1-41中任一项所述的方法，其中所述生产阶段为14天或更短。
158、43.如项目1-42中任一项所述的方法，其中所述生产阶段的范围为10天至17天。
159、44.如项目1-43中任一项所述的方法，其在大规模生物反应器中进行。
160、45.如项目44所述的方法，其中所述大规模生物反应器选自由200升(l)生物反应器、2000l生物反应器、3000l和6000l生物反应器组成的组。
161、46.如项目1-45中任一项所述的方法，其中所述生产阶段产生的所述人源化抗α4β7抗体的滴度大于3g/l。
162、47.如项目46所述的方法，其中所述人源化抗α4β7抗体的滴度为约3至约8g/l。
163、48.如项目46所述的方法，其中所述人源化抗α4β7抗体的滴度为约5至约7g/l。
164、49.如项目1-48中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物宿主细胞是中国仓鼠卵巢(cho)细胞。
165、50.如项目49所述的方法，其中所述cho细胞是gs-cho细胞。
166、51.如项目1-50中任一项所述的方法，其中所述人源化抗α4β7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含如seq id no:1所列示的氨基酸序列，并且包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含如seq id no:5所列示的氨基酸序列。
167、52.如项目1-50中任一项所述的方法，其中所述人源化抗α4β7抗体是维多珠单抗。
168、53.一种组合物，其包含使用项目1-52中任一项所述的方法产生的人源化抗α4β7抗体。
169、54.如项目53所述的组合物，其包含人源化抗α4β7抗体的群体，所述群体具有92％或更多的总去唾液酸、无半乳糖、核心岩藻糖基化双触角聚糖(g0f)，去唾液酸、单半乳糖、核心岩藻糖基化双触角聚糖(g1f)，和/或去唾液酸、二半乳糖、核心岩藻糖基化双触角聚糖(g2f)糖基化变体。
170、55.一种产生人源化抗α4β7抗体的g0f糖型(如通过亲水相互作用色谱法(hilic)所测定)的量减少的组合物的方法，所述方法包括
171、在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及
172、向所述生产培养基中添加包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂，从而产生与在缺少所述补充剂的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述人源化抗α4β7抗体的g0f糖型的量减少的组合物，
173、其中所述哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，所述抗体是igg1抗体；包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
174、56.如项目55所述的方法，其中与在缺少所述补充剂的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含至少约15％减少水平的所述人源化抗α4β7抗体的g0f糖型。
175、57.如项目55所述的方法，其中与在缺少所述补充剂的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含至少约20％减少的所述人源化抗α4β7抗体的g0f糖型。
176、58.一种产生具有约65％或更少的人源化抗α4β7抗体的g0f糖型(如通过hilic所测定)的组合物的方法，所述方法包括
177、在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及
178、向所述生产培养基中添加包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂，从而产生具有约65％或更少的所述人源化抗α4β7抗体的g0f糖型的组合物，
179、其中所述哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，所述抗体是igg1抗体，包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8中所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
180、59.如项目58所述的方法，其中所述组合物包含约60％或更少的所述人源化抗α4β7抗体的g0f糖型。
181、60.如项目58所述的方法，其中所述组合物包含约55％或更少的所述人源化抗α4β7抗体的g0f糖型。
182、61.一种产生人源化抗α4β7抗体的g1f糖型(如通过hilic所测定)的量增加的组合物的方法，所述方法包括
183、在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及
184、向所述生产培养基中添加包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂，从而产生与在缺少所述补充剂的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述人源化抗α4β7抗体的g1f糖型的量增加的组合物，
185、其中所述哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，所述抗体是igg1抗体；包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
186、62.如项目61所述的方法，其中与在缺少所述补充剂的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含至少约2倍增加的所述人源化抗α4β7抗体的g1f糖型。
187、63.如项目61所述的方法，其中与在缺少所述补充剂的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含至少约3倍增加的所述人源化抗α4β7抗体的g1f糖型。
188、64.一种产生具有约25％或更多的人源化抗α4β7抗体的g1f糖型(如通过hilic所测定)的组合物的方法，所述方法包括
189、在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及
190、向所述生产培养基中添加包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂，从而产生具有约25％或更多的所述人源化抗α4β7抗体的g1f糖型的组合物，
191、其中所述哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，所述抗体是igg1抗体，包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8中所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
192、65.如项目64所述的方法，其中所述组合物包含约30％或更多的所述人源化抗α4β7抗体的g1f糖型。
193、66.一种产生人源化抗α4β7抗体的g2f糖型(如通过hilic所测定)的量增加的组合物的方法，所述方法包括
194、在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及
195、向所述生产培养基中添加包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂，从而产生与在缺少所述补充剂的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述人源化抗α4β7抗体的g2f糖型的量增加的组合物，
196、其中所述哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，所述抗体是igg1抗体；包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
197、67.如项目66所述的方法，其中与在缺少所述补充剂的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含至少约3倍增加的所述人源化抗α4β7抗体的g2f糖型。
198、68.如项目66所述的方法，其中与在缺少所述补充剂的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含至少约4倍增加的所述人源化抗α4β7抗体的g2f糖型。
199、69.一种产生具有约3％或更多的人源化抗α4β7抗体的g2f糖型(如通过hilic所测定)的组合物的方法，所述方法包括
200、在生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，以及
201、向所述生产培养基中添加包含尿苷、锰和半乳糖的补充剂，从而产生具有约3％或更多的所述人源化抗α4β7抗体的g2f糖型的组合物，
202、其中所述哺乳动物宿主细胞被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体，所述抗体是igg1抗体，包含重链可变区，所述重链可变区包含如seq id no:4所列示的cdr3结构域、如seq id no:3所列示的cdr2结构域和如seq id no:2所列示的cdr1结构域；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如seq id no:8中所列示的cdr3结构域、如seq id no:7所列示的cdr2结构域和如seq id no:6所列示的cdr1结构域。
203、70.如项目69所述的方法，其中所述组合物包含约4％或更多的所述人源化抗α4β7抗体的g2f糖型。
204、71.如项目55-70中任一项所述的方法，其中将所述补充剂添加到所述生产培养基中或添加到补料培养基中，所述补料培养基随后被添加到所述生产培养基中。
205、72.如项目71所述的方法，其中所述补料培养基包含约15至100mm尿苷。
206、73.如项目72所述的方法，其中所述补料培养基包含约20至50mm尿苷。
207、74.如项目71所述的方法，其中所述补料培养基包含约0.02至0.3mm锰。
208、75.如项目74所述的方法，其中所述补料培养基包含约0.02至0.1mm锰。
209、76.如项目71所述的方法，其中所述补料培养基包含约85mm-600mm半乳糖。
210、77.如权利要求76所述的方法，其中所述补料培养基包含约85mm-100mm半乳糖。
211、78.如项目55-77中任一项所述的方法，其中所述生产培养基还包含锌。
212、79.如项目78所述的方法，其中所述生产培养基中锌的浓度为约50μm至150μm。
213、80.如项目55-79中任一项所述的方法，其中相对于在缺少所述补充剂的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞中产生的酸性种类的百分比，所述方法还减少了所述人源化抗α4β7抗体的酸性种类的百分比
214、81.如项目55-80中任一项所述的方法，其中相对于在缺少添加到所述生产培养基中的包含尿苷、锰和半乳糖的补料培养基的情况下产生的主要同工型种类的百分比，所述方法还增加了所述人源化抗α4β7抗体的主要同工型种类的百分比。
215、82.如项目55-81中任一项所述的方法，其中所述方法是补料分批方法。
216、83.如项目82所述的方法，其中从生产阶段的约第四天开始将所述补料培养基添加到所述生产培养基中。
217、84.如项目1-83中任一项所述的方法，其中所述生产培养基具有约6.8至约7.1的ph。
1.一种产生包含人源化抗α4β7抗体的组合物的方法，所述方法包括在包含锌的生产培养基中培养哺乳动物宿主细胞，从而产生包含所述人源化抗α4β7抗体的组合物，
2.如权利要求1所述的方法，其中与在相同条件下在缺少锌的情况下培养的表达所述人源化抗α4β7抗体的对照哺乳动物宿主细胞相比，所述组合物包含减少量的所述人源化抗α4β7抗体的碱性同工型。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述组合物包含约16％或更少的所述人源化抗α4β7抗体的碱性同工型。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述组合物包含约14％或更少的所述人源化抗α4β7抗体的碱性同工型。
5.如权利要求3所述的方法，其中所述组合物包含约13％或更少的所述人源化抗α4β7抗体的碱性同工型。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述生产培养基中锌的浓度为2μm至60μm。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述方法包括通过向所述生产培养基中添加包含锌的补料培养基来用锌补充所述生产培养基。
8.如权利要求7所述的方法，其中从生产阶段的约第四天开始将所述补料培养基添加到所述生产培养基中。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述生产培养基包含5.0至8.8g/l赖氨酸和3.0至12.0g/l精氨酸。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述生产培养基包含4.5至5.5g/l赖氨酸。
11.如权利要求9所述的方法，其中所述生产培养基包含5.5至8.8g/l赖氨酸。
12.如权利要求9-11所述的方法，其中所述生产培养基包含5.4至7.4g/l精氨酸。
13.如权利要求9-11所述的方法，其中所述生产培养基包含7.4至12g/l精氨酸。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述生产培养基的温度范围为36至38摄氏度。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述温度范围为36.5至37.5摄氏度。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述温度为约37摄氏度的平均温度。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述生产培养基的ph范围为6.5至7。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述生产培养基的ph范围为6.8至7.0。
19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述生产培养基的葡萄糖水平在所述生产阶段期间保持在约7g/l或更低。
20.如权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述生产阶段为14天或更短。
21.如权利要求1-19中任一项所述的方法，其中所述生产阶段的范围为10天至17天。
22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，其在大规模生物反应器中进行。
23.如权利要求22所述的方法，其中所述大规模生物反应器选自由200升(l)生物反应器、2000l生物反应器、3000l和6000l生物反应器组成的组。
24.如权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述生产阶段产生的所述人源化抗α4β7抗体的滴度大于3g/l。
25.如权利要求24所述的方法，其中所述人源化抗α4β7抗体的滴度为约3至约8g/l。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述人源化抗α4β7抗体的滴度为约5至约7g/l。
27.如权利要求1-26中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物宿主细胞是中国仓鼠卵巢(cho)细胞。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述cho细胞是gs-cho细胞。
29.如权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述人源化抗α4β7抗体包含重链可变结构域，所述重链可变结构域包含如seq id no:1所列示的氨基酸序列，并且包含轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含如seq id no:5所列示的氨基酸序列。
30.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中所述人源化抗α4β7抗体是维多珠单抗。
31.如权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述方法包括所述抗体的收获和纯化。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述纯化包括(i)去除任何细胞碎片、不需要的蛋白质、盐、矿物质或其他不合需要的元素的纯化步骤，和(ii)从污染物可溶性蛋白质和多肽中纯化所述抗体。
33.如权利要求31或32所述的方法，其中所述方法还包括制备适用于人类治疗用途的所述纯化抗体的药物制剂。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述药物制剂是液体药物制剂。
35.如权利要求34所述的方法，其中所述液体药物制剂通过超滤/渗滤制备。
36.如权利要求33所述的方法，其中所述药物制剂是冻干的干抗体制剂。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述抗体的药物制剂是从所述纯化后通过超滤/渗滤制备的液体药物抗体制剂冻干而来的干抗体制剂。
38.一种组合物，其包含使用权利要求1-37中任一项所述的方法产生的人源化抗α4β7抗体。
39.一种包含人源化抗α4β7抗体的组合物，其中所述组合物可通过权利要求1-37中任一项所述的方法获得。
40.如权利要求38或39所述的组合物，其包含人源化抗α4β7抗体的群体，所述群体具有(i)90％或更多，或(ii)92％-95％的总去唾液酸、无半乳糖、核心岩藻糖基化双触角聚糖(g0f)，去唾液酸、单半乳糖、核心岩藻糖基化双触角聚糖(g1f)，和/或去唾液酸、二半乳糖、核心岩藻糖基化双触角聚糖(g2f)糖基化变体。
41.一种细胞培养物，其包含被基因工程改造以表达人源化抗α4β7抗体的宿主细胞，以及补充有锌的生产培养基，其中所述人源化抗α4β7抗体是igg1抗体并且包含含有seq idno:1中所列示的氨基酸序列的重链可变区和含有seq id no:5中所列示的氨基酸序列的轻链可变区。
42.如权利要求41所述的细胞培养物，其中所述生产培养基包含在收获当天浓度为约0.005mm至0.045mm的补充锌。
43.如权利要求41或权利要求42所述的细胞培养物，其中所述生产培养基还包含尿苷、锰和半乳糖(umg)。
44.如权利要求43所述的细胞培养物，其中所述生产培养基包含在收获当天浓度为约1至约7mm的补充尿苷、浓度为约0.002至约0.015mm的补充锰和浓度为约3至约20mm的补充半乳糖。
45.如权利要求43或权利要求44所述的细胞培养物，其中所述生产培养基包含在收获当天浓度为约2至约5mm的补充尿苷、浓度为约0.001至约0.01mm的补充锰和浓度为约10至约15mm的补充半乳糖。
46.如权利要求41-45中任一项所述的细胞培养物，其中所述表达的人源化抗α4β7抗体的同工型分布包括：
47.如权利要求41-46中任一项所述的细胞培养物，其中所述表达的人源化抗α4β7抗体的岩藻糖基化n-聚糖含量包括：
48.如权利要求41-47中任一项所述的细胞培养物，其中所述表达的人源化抗α4β7抗体的总岩藻糖基化n-聚糖含量(g0f+g1f+g2f)为至少92％、至少93％、至少94％或至少95％。
49.如权利要求41-47中任一项所述的细胞培养物，其中所述表达的人源化抗α4β7抗体的岩藻糖基化n-聚糖含量(g0f+g1f+g2f)为92％-95％。
50.如权利要求41-47中任一项所述的细胞培养物，其中所述表达的人源化抗α4β7抗体的总岩藻糖基化n-聚糖含量(g0f+g1f+g2f)为91％-92％、91％-92.5％、或91％-93％。
51.如权利要求41-50中任一项所述的细胞培养物，其中所述细胞培养物还包含精氨酸和/或赖氨酸。
52.如权利要求41-51中任一项所述的细胞培养物，其中所述宿主细胞为cho细胞。
53.如权利要求52所述的细胞培养物，其中所述cho细胞的编码谷氨酰胺合成酶(gs)的基因有缺陷。
54.一种人源化抗α4β7抗体，其由权利要求41-53中任一项所述的细胞培养物产生。
