本发明属于生物医药，涉及一种浙贝母质量的评价方法，具体涉及基于“药效-物质基础-质量评价”三元模型，选择其中4个特征成分作为中药质量标志物，从而达到全面评价浙贝母质量目的,。
背景技术：
1、浙贝母为百合科植物浙贝母fritillaria thunbergii miq.的干燥鳞茎，主产于浙江，栽培历史悠久，产量大，质量优，为“浙八味”之一，是浙江的道地药材，具有“清热化痰止咳，解毒散结消痈”的功效，常用于肺痈、乳痈等症，在临床上广泛使用。目前市场上常见的饮片类型为石灰贝，鲜切片和硫熏片，其中鲜切片又包含烘干片，晒干片和阴干片等。中药材由于加工方法不同、产地不同而存在差异，使得其药效和化学成分组成不同，从而影响其质量。评价药材质量主要依据其药效和物质基础，目前评价浙贝母饮片质量主要以hplc-elsd技术检测贝母素甲和贝母素乙的含量为主，评价方法较单一，没有较为客观全面的方法使浙贝母得到可靠的评价。
2、中药临床功效是中药研究的关键内容，而中药的药效物质是揭示中药的作用原理。三元模型是指利用现代化检测技术得到能够定性或定量的物质基础并结合其药理实验，综合评价药物质量的一种模型，其核心技术为体现其专属性和特征性。
3、目前针对不同加工方法下的浙贝母饮片的物质基础结合药效从而评价浙贝母质量的研究较少，文献：硫熏和鲜切浙贝母的化学成分及其药理作用的比较研究(卓诗勤，浙江中医药大学)，比较了硫熏和鲜切对浙贝母的总生物碱和总皂苷含量的影响，以小鼠为动物模型考察硫熏对浙贝母药理作用的影响，该方法建立时采集的样品比较少，缺乏针对性，实际应用存在一定的局限性。
4、本发明主张的方法通过涵盖各个加工方法的浙贝母饮片，筛查出浙贝母质量标志物，并结合经典药理模型，利用质量标记物和药效相结合的模型，从而达到评价浙贝母质量的目的，具有专属性更强，不但能很好的评判加工方法对浙贝母的物质基础的影响，而且采用药效学实验，在一定程度上阐明了加工方法对药效的影响，在评价浙贝母质量上也优于其他方法。
技术实现思路
1、本发明提供一种评价浙贝母质量的方法，该方法操作简单，通过检测四种质量标志物的含量总和，即可有效评判出浙贝母药材质量，并与动物实验结果得到验证，本发明方法可以作为浙贝母药材质量的评价方法。
2、本发明的技术方案如下：
3、一种评价浙贝母质量的方法，是以浙贝宁苷、西贝素苷、贝母素甲和贝母素乙为质量标志物，检测待测浙贝母的样品中所述质量标志物含量，所有所述质量标志物含量总和应不低于所述样品质量的0.08％，为有效浙贝母。
4、上述方案中，四种所述质量标志物可以共存，也可以仅存在任意一种、两种或三种。
5、进一步地，所述定性检测化合物具体方法为：
6、(1)称取待测的浙贝母样品，精密称定，加入饮用水，在120℃煎煮2.0h，之后冷却至室温，滤过，用饮用水补足至100ml，采用水煎煮方法，得到浙贝母水煎液①；
7、采用hplc-ms测定，其中色谱条件为：采用十八烷基硅烷键合相色谱柱，柱温35℃，流速1.0ml/min；进样体积2μl；以乙腈为流动相a，10mmol/l甲酸铵·0.1％甲酸溶液为流动相b，梯度洗脱；质谱采用esi+全程检测扫描模式。
8、进一步地，所述梯度洗脱的程序为：0～26min，流动相a百分比由15％变化为36％；26～40min，流动相a百分比由36％变化为80％；40～60min，流动相a百分比由80％变化为100％；60～66min，流动相a百分比由100％变化为15％，流动相a百分比变化的同时，流动相b百分比也发生相应变化，二者之和应为100％。
9、进一步地，所述检测质量标志物含量的具体方法
10、精密称取浙贝母样品，加入浓氨水浸润1h，再加入氯仿-甲醇体积比4：1的混合溶液，称定重量，80℃回流2h，之后冷却至室温，用混合溶液补重，滤过，滤液蒸干后再用甲醇溶解，得到浙贝母回流提取液②；
11、采用hplc-elsd测定，其中色谱条件为：采用十八烷基硅烷合相色谱柱，柱温35℃；流速1.0ml/min；流动相由水相a和有机相b组成，梯度洗脱；所述水相a为0.1％三乙胺的水溶液；有机相b为乙腈；
12、进一步地，所述梯度洗脱地程序为：0～18min，流动相a百分比由80％变化为40％；18～25min，流动相百分比由40％变化为35％；25～40min，流动相a百分比由35％变化为26％；40～45min，流动相a百分比由26％变化为10％；45～45.01min，流动相a百分比由10％变化为80％。；45.01～55min，流动相a百分比由80％变化为80％，流动相a百分比变化的同时，流动相b百分比也发生相应变化，二者之和应为100％。
13、本发明的有益效果在于：
14、1、本发明在检测贝母素甲和贝母素乙的基础上，发现西贝素苷和浙贝宁苷亦是特征成分，借此可以基于浙贝母的“药效-物质基础-质量”三元模型评价浙贝母质量。
15、2、本发明通过采用四种质量标志物的含量检测，能更进一步的准确有效的评价浙贝母质量，该方法能够适用于各种浙贝母药材，且均得到止咳动物实验验证，其结果在一定程度上防范因贝母素甲和贝母素乙含量不符合标准而认为浙贝母质量不行情况存在。
1.一种评价浙贝母质量的方法，其特征在于，以浙贝宁苷、西贝素苷、贝母素甲和贝母素乙为质量标志物，检测待测浙贝母的样品中所述质量标志物含量，所有所述质量标志物含量总和应不低于所述样品质量的0.08％，为有效浙贝母。
2.根据权利要求1所述的评价浙贝母质量的方法，其特征在于，四种所述质量标志物可以共存，也可以仅存在任意一种、两种或三种。
3.根据权利要求1所述的评价浙贝母质量的方法，其特征在于，所述检测具体方法为：
4.根据权利要求3所述的评价浙贝母质量的方法，其特征在于，所述的浙贝母水煎液的制备包括：称取待测的浙贝母样品，精密称定，加入饮用水，在120℃煎煮2.0h，之后冷却至室温，滤过，用饮用水补足至100ml，得到浙贝母水煎液。
5.根据权利要求3所述的评价浙贝母质量的方法，其特征在于，所述的浙贝母回流提取液的制备包括：称取待测的浙贝母样品，加入浓氨水浸润1h，再加入体积比4：1的氯仿-甲醇混合溶液，称定重量，80℃回流2h，之后冷却至室温，用混合溶液补重，滤过，滤液蒸干后再用甲醇溶解，得到浙贝母回流提取液。
6.根据权利要求3所述的评价浙贝母质量的方法，其特征在于，所述的测定具体为：
7.根据权利要求6所述的评价浙贝母质量的方法，其特征在于，所述质谱仪梯度洗脱的程序为：0～26min，流动相a百分比由15％变化为36％；26～40min，流动相a百分比由36％变化为80％；40～60min，流动相a百分比由80％变化为100％；60～66min，流动相a百分比由100％变化为15％，流动相a百分比变化的同时，流动相b百分比也发生相应变化，二者之和应为100％；
