本发明属于药物合成领域，具体涉及一种卡非佐米中间体的制备方法。
背景技术：
1、卡非佐米(carfilzomib)是一种环氧酮蛋白酶体抑制剂，可选择性、不可逆性的与结构性蛋白酶体及免疫蛋白酶体结合，其结构式如式(x)所示。
2、
3、式(v)所示化合物：(2s)-2-氨基-4-甲基-1-[(2r)-2-甲基环氧乙烷基]-1-戊酮三氟乙酸盐是合成卡非佐米的关键中间体，其可通过式(iv)所示化合物与三氟乙酸反应得到。
4、目前关于式(iv)所示化合物的制备方法报道如下：
5、
6、其中，专利cn104411682a记载卡非佐米中间体(ii)采用化学法(胺硼烷络合物)制备，该步骤光学选择性差，中间体(ii)与其差向异构体的比例最高32.5∶1，因此后续制备中间体(iii)后需采用柱色谱分离提纯，不适合大规模生产。
7、专利cn101883779a一方面记载卡非佐米中间体(ii)采用化学法(硼氢化钠/cecl3-7h2o)制备，该步骤手性选择性差，中间体(ii)与其差向异构体的比例为4.5∶1，后续制备至中间体(iv)。另一方面还记载了从式(i)所示化合物直接立体选择性环氧化得到从中间体(iv)的方法，该方法中间体(iv)与其差向异构体的比例为2.5∶1。上述两种方法制得的中间体(iv)均需经过色谱拆分提纯，因此整体收率较低，不适合大规模生产。
8、专利cn105017181b记载卡非佐米中间体(ii)采用化学法(异丙醇铝)制备，该文献未对产品纯度进行分析，且未有手性纯度说明。
技术实现思路
1、本发明要解决的技术问题是现有式(i)所示化合物制备卡非佐米中间体(ii)的过程中产物手性纯度低、收率低、成本高、后处理操作复杂、不利于产业化生产放大等的问题。
2、为解决上述技术问题，本发明一方面提供一种卡非佐米中间体(ii)的制备方法：
3、
4、式(i)所示化合物在磷酸盐缓冲溶液中，在酶和辅酶的作用下，发生选择性还原反应得到卡非佐米中间体(ii)；其中，
5、所述酶的蛋白序列来源于leifsonia xyli，使用大肠杆菌bl21(de3)表达；
6、所述辅酶选自烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或者烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。
7、所述磷酸盐缓冲溶液选自磷酸钾缓冲溶液或者磷酸钠缓冲溶液。
8、进一步地，所述选择性还原反应还包含使用供氢体；所述供氢体选自葡萄糖或者异丙醇。
9、进一步地，当所述供氢体选自葡萄糖时，还包含使用葡萄糖脱氢酶。
10、本发明所述的卡非佐米中间体(ii)的制备方法，所述选择性还原反应的温度优选为20～40℃；ph优选为7～8。式(i)所示化合物与酶的质量比为1∶0.02～0.1。
11、本发明另一方面提供一种卡非佐米中间体(v)的制备方法，
12、
13、其包含式(i)所示化合物在磷酸盐缓冲溶液中，在酶和辅酶的作用下，发生选择性还原反应得到卡非佐米中间体(ii)的步骤；
14、
15、其中，
16、所述酶的蛋白序列来源于leifsonia xyli，使用大肠杆菌bl21(de3)表达；
17、所述辅酶选自烟酰胺腺嘌呤二核苷酸或者烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。
18、所述磷酸盐缓冲溶液选自磷酸钾缓冲溶液或者磷酸钠缓冲溶液。
19、进一步地，所述选择性还原反应还包含使用供氢体；所述供氢体选自葡萄糖或者异丙醇。
20、进一步地，当所述供氢体选自葡萄糖时，还包含使用葡萄糖脱氢酶。
21、所述选择性还原反应的温度优选为20～40℃；ph优选为7～8；式(i)所示化合物与酶的质量比为1∶0.02～0.1。
22、所述卡非佐米中间体(v)的制备方法还包括以下步骤：
23、卡非佐米中间体(ii)在乙酰丙酮氧钒的存在下与叔丁基过氧化氢反应，得到式(iii)所示化合物；
24、
25、式(iii)所示化合物经过氧化反应得到式(iv)所示化合物；
26、
27、式(iv)所示化合物与三氟乙酸反应得到卡非佐米中间体(v)。反应路线如下：
28、
29、有益效果：本发明的卡非佐米中间体(ii)的制备方法与现有技术相比，不需要柱层析分离，得到的卡非佐米中间体(ii)手性纯度高，收率高，成本低，具有明显的产业化优势。另一方面，本发明的卡非佐米中间体(ii)的制备方法克服了式(i)所示化合物的酮羰基受到β位烯键和异丙基空间位阻的因素而无法酶法催化反应的问题。
1.一种卡非佐米中间体(ii)的制备方法，
2.根据权利要求1所述的卡非佐米中间体(ii)的制备方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲溶液选自磷酸钾缓冲溶液或者磷酸钠缓冲溶液。
3.根据权利要求1或2所述的卡非佐米中间体(ii)的制备方法，其特征在于：所述选择性还原反应还包含使用供氢体；所述供氢体选自葡萄糖或者异丙醇。
4.根据权利要求3所述的卡非佐米中间体(ii)的制备方法，其特征在于：当所述供氢体选自葡萄糖时，还包含使用葡萄糖脱氢酶。
5.根据权利要求1或2所述的卡非佐米中间体(ii)的制备方法，其特征在于：所述选择性还原反应的温度为20～40℃；ph为7～8。
6.根据权利要求5所述的卡非佐米中间体(ii)的制备方法，其特征在于：式(i)所示化合物与酶的质量比为1∶0.02～0.1。
7.一种卡非佐米中间体(v)的制备方法，
8.根据权利要求7所述的卡非佐米中间体(v)的制备方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲溶液选自磷酸钾缓冲溶液或者磷酸钠缓冲溶液。
9.根据权利要求7或8所述的卡非佐米中间体(v)的制备方法，其特征在于：所述选择性还原反应还包含使用供氢体；所述供氢体选自葡萄糖或者异丙醇；当所述供氢体选自葡萄糖时，还包含使用葡萄糖脱氢酶。
10.根据权利要求9所述的卡非佐米中间体(v)的制备方法，其特征在于：所述卡非佐米中间体(ii)在乙酰丙酮氧钒的存在下与叔丁基过氧化氢反应，得到式(iii)所示化合物；
