本发明属于生物，具体涉及一种抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物。
背景技术：
1、
2、新冠病毒的s蛋白为病毒表面的一类标志性跨膜蛋白，是由3个相同的亚基通过非共价键的方式结合形成的同源三聚体，其相对分子质量为141178，含有1273个氨基酸。s蛋白主要由信号肽、n端结构域、受体结合结构域(rbd)、融合肽段、七肽重复序列(heptadrepeat，hr)1、hr2、跨膜结构域、胞质结构域等构成，同时具有s1/s2与s2两个切割位点。相关研究显示，hr1和hr2会在s1的rbd与靶细胞的ace2结合后，形成融合核心(6-hb)，提高病毒融合和感染的效率。
3、新冠病毒的细胞受体血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2，ace2)是肾素-血管紧张素系统的主要活性肽。目前认为，在新冠病毒感染中，ace2为病毒进入细胞的主要受体。ace2作为含锌羧肽酶的ⅰ型跨膜蛋白，多表达于肾脏、心脏和男性生殖系统，同时也在肺、小肠和肝脏等组织中表达。刺突蛋白在病毒入侵过程中起着主要的作用，并且s蛋白为主要免疫原。该蛋白会刺激机体产生大量抗体，这些抗体会结合到s蛋白表面，阻断病毒与宿主识别，抑制病毒蛋白剪切变构，从而抑制病毒入侵。s蛋白在病毒表面常以三聚体形式聚集。s蛋白为同源三聚体，c端锚定于病毒膜上，s蛋白是冠状病毒进入细胞的关键，所以它是一个有吸引力的抗病毒靶点。抗rbd的抗体可以阻碍s蛋白三聚体形成和/或阻碍s蛋白与宿主ace2结合，从而抑制病毒入侵。
4、
技术实现思路
1、本发明提供了一种抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物。具体而言，本发明提供了一种抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，所述可吸入组合物包含：(a)抗rbd抗体或其抗原结合片段；(b)盐酸组氨酸缓冲液；(c)聚山梨酯80。
2、在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的含量为10～50g/l。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的含量为30g/l。
3、在一些实施方案中，所述盐酸组氨酸缓冲液的浓度为10～30mm，ph为5.5～6.5。在一些实施方案中，所述盐酸组氨酸缓冲液的浓度为20mm，ph为6.0。
4、在一些实施方案中，所述聚山梨酯80的含量为0.1～0.5g/l。在一些实施方案中，所述聚山梨酯80的含量为0.2g/l。在一些实施方案中，所述可吸入组合物还包含糖类，所述糖类为蔗糖、海藻糖。在一些实施方案中，所述糖类为海藻糖时，海藻糖的含量为40～60g/l，在一些实施方案中，所述海藻糖含量为50～55g/l。在一些实施方案中，所述海藻糖含量为51～52g/l。
5、在一些实施方案中，所述可吸入组合物包含：(a)10～50g/l的抗rbd抗体或其抗原结合片段，(b)10～30mm的组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂，ph为5.5～6.5，(c)0.1～0.5g/l的聚山梨酯80，(d)40～60g/l的海藻糖。
6、在一些实施方案中，所述可吸入组合物包含：(a)30g/l的抗rbd抗体或其抗原结合片段，(b)20mm的组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂，ph为6.0，(c)0.2g/l的聚山梨酯80，(d)51.35g/l的海藻糖。
7、在一些实施方案中，所述可吸入组合物为滴鼻剂、气雾剂或喷雾剂。
8、在一些实施方案中，所述可吸入组合物将本发明的抗rbd抗体或其抗原结合片段递送到受试者的气道。在一些实施方案中，所述可吸入组合物将本发明的抗rbd抗体或其抗原结合片段递送到上呼吸道，例如鼻和鼻道、鼻旁窦、咽、声带上方的喉部分中的一个或多个。在一些实施方案中，所述可吸入组合物将本发明的抗rbd抗体或其抗原结合片段递送到下呼吸道，例如气管、肺、支气管、细支气管、肺泡管或肺泡中的一个或多个。
9、在一些实施方案中，所述可吸入组合物中的本发明的抗rbd抗体或其抗原结合片段主要分布在鼻腔。在一些实施方案中，所述可吸入组合物中的本发明的抗rbd抗体或其抗原结合片段主要分布在肺部。在一些实施方案中，所述可吸入组合物中的本发明的抗rbd抗体或其抗原结合片段主要分布在鼻腔和肺部。在一些实施方案中，所述可吸入组合物中的本发明的抗rbd抗体或其抗原结合片段基本不进入血液循环。
10、在一些实施方案中，其中所述抗rbd抗体或其抗原结合片段包含第一抗体或其抗原结合部分和第二抗体或其抗原结合部分，其中所述第一抗体或其抗原结合部分与所述第二抗体或其抗原结合部分能够结合冠状病毒刺突蛋白的不同表位。
11、在一些实施方案中，所述的抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，其中所述第一抗体或其抗原结合片段的重链氨基酸序列如seq id no:1所示，轻链氨基酸序列如seq id no:2所示。
12、在一些实施方案中，所述的抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，其中所述第二抗体或其抗原结合片段为scfv片段，所述scfv片段连接在第一抗体或其抗原结合片段的轻链n端，所述scfv片段的氨基酸序列如seq id no:3所示。
13、本发明还提供了所述的抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物在制备用于治疗和/或预防病毒感染的药物中的用途。
14、在一些实施方案中，所述病毒为新冠病毒。
15、定义
16、除非另有定义，本文使用的所有领域术语、符号和其它科学术语旨在具有本发明所属领域技术人员通常理解的含义。在某些情况下，为了清楚起见和/或为了便于参考，本文定义了具有通常理解的含义的术语，并且在此包含此类定义不应被解释为表示与本领域中通常理解的事情的差异。
17、术语“新冠病毒”是指严重急性呼吸综合征冠状病毒2号，属于冠状病毒科、β冠状病毒属(包括sars-cov和mers-cov)。
18、术语“刺突蛋白”是冠状病毒用来侵入宿主细胞的跨膜蛋白。新冠病毒的刺突蛋白含有与宿主细胞受体结合的第一亚基(s1亚基)和用于病毒和细胞膜融合的第二亚基(s2亚基)。s1亚基中有一个受体结合域(rbd)，其与宿主细胞受体结合。
19、术语“抗体”包含包括通过双硫键相互连接的四条多肽链，二条重(h)链和二条轻(l)链的免疫球蛋白分子以及其多聚体(例如igm)。每个l链通过一个共价二硫键连接于h链，而两个h链视h链同种型而定通过一个或多个二硫键彼此连接。每个重链在n末端具有可变区，继之以恒定区。各重链包含重链可变区(vh)和重链恒定区。这一重链恒定区包含三个区(结构域)，ch1、ch2和ch3。各轻链包含轻链可变区(vl)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个区(结构域，cl1)。vh和vl区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(cdr)，其间散布着较保守性区域，称为框架区(framework region，fr，也称骨架区、构架区)。各vh和vl是由三个cdr和四个fr所组成，以下列顺序由氨基端排列到羧基端：fr1、cdr1、fr2、cdr2、fr3、cdr3、fr4。抗体可以是不同亚类(subclass)的抗体。
20、术语“抗原结合部分”是指保留特异性结合抗原的能力的抗体的一个或多个片段(例如，新冠病毒刺突蛋白)。已经表明，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。包含在抗体的术语“抗原结合部分”内的结合片段的实例包括但不限于：(i)fab片段，由vl、vh、cl和ch1结构域组成的单价片段；(ii)fab'和f(ab')2片段，其中f(ab')2为一种二价片段，包含在铰链区通过二硫键连接的两个fab片段；(iii)由vh和ch1结构域组成的fd片段；(iv)由抗体单臂的vl和vh结构域组成的fv片段，(v)dab片段(ward等人，(1989)nature341:544-546)，其由vh结构域组成；(vi)scfv；(viii)scfv-scfv。
21、术语“scfv”指包含通过接头连接的抗体重链可变结构域(vh)和抗体轻链可变结构域(vl)的分子。此类scfv分子可具有一般结构：nh2-vl-连接子-vh-cooh或nh2-vh-连接子-vl-cooh。合适的现有技术连接子由重复的ggggs氨基酸序列或其变体组成，例如使用1-6个重复的ggggs氨基酸序列或其变体。
22、术语“补体依赖性细胞毒性”或“cdc”是指抗体介导的免疫机制，其中抗体与补体成分c1q结合并激活经典的补体级联反应，导致在细胞表面形成膜攻击复合物(mac)和随后的细胞裂解。
23、术语“抗体依赖性细胞吞噬作用”或“adcp”是指细胞介导的免疫机制，其中抗体的fc部分与吞噬细胞(即巨噬细胞、粒细胞和树突细胞)上的fc受体结合以诱导被抗体结合的细胞的吞噬作用。
24、术语“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“adcc”是指细胞介导的免疫机制，其中抗体的fc部分与免疫效应细胞(主要是自然杀伤细胞)的fc受体结合，导致免疫效应细胞释放细胞毒性颗粒，导致抗体包被细胞死亡。
25、本发明的抗体或其抗原结合部分特异性结合冠状病毒例如新冠病毒的刺突蛋白或其片段，更具体地结合刺突蛋白的受体结合结构域，并抑制结合刺突蛋白到其进入受体ace2。本发明的抗体或其抗原结合部分还可以结合于病毒感染的宿主细胞上展示的刺突蛋白或其片段，例如受体结合结构域。
26、本发明的抗体或其抗原结合部分可以诱导(i)补体介导的冠状病毒例如新冠病毒的失活，(ii)针对冠状病毒的吞噬作用，(iii)针对冠状病毒感染的宿主细胞的补体依赖性细胞毒性(cdc)，(iv)针对感染的宿主细胞的抗体依赖性细胞吞噬作用(adcp)，(v)针对冠状病毒感染的宿主细胞的抗体依赖性细胞介导的病毒抑制作用(adcvi)，(vi)针对冠状病毒感染的宿主细胞的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)，和/或(vii)体液和细胞抗病毒免疫反应。
27、重链可变区cdr和轻链可变区cdr已由kabat编号系统定义。然而，如本领域公知的，cdr区也可以基于重链/轻链可变区序列通过其他系统例如chothia、abm或contact编号系统/方法来确定。
28、发明效果
29、将本发明的抗rbd抗体或其抗原结合片段施用于鼻腔，遇到进入呼吸道的新冠病毒后，被施用于鼻腔的本发明的抗rbd抗体或其抗原结合片段立即与新冠病毒s蛋白表位结合，使得新冠病毒失去感染能力并阻止感染。本发明的可吸入组合物与疫苗不同，可以快速、直接提供保护性抗体，而接种疫苗后会激活人体免疫细胞，需等待一段时间才能产生保护性抗体。本发明的可吸入组合物可以降低暴露后感染几率，并且一次给药具有良好的持久性，可以作为密接者的辅助用药，降低密接转阳率。此外，相对于可以提供持久保护的新冠疫苗，本发明的可吸入组合物适用于紧急情况使用，为普通人群、特殊场景、高风险暴露人群均能够提供特异性预防措施。本发明也发现，在动物鼻腔中使用本发明的可吸入组合物后，抗体主要分布在肺部和鼻腔，入血的抗体浓度很低，安全性良好。综上，本发明的可吸入组合物有效性和安全性高，无需注射，方便携带，可以快速、直接提供保护性抗体，适用于紧急情况使用，为普通人群、特殊场景、高风险暴露人群均能够提供特异性预防措施。
1.一种抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，其特征在于，所述可吸入组合物包含：(a)抗rbd抗体或其抗原结合片段；(b)组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂；(c)聚山梨酯80。
2.如权利要求1所述的抗rbd抗体或其抗原结合片段抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，其特征在于，所述抗体或其抗原结合片段抗体或其抗原结合片段含量为10～50g/l，优选为30g/l。
3.如权利要求1-2任一项所述的抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，其特征在于，所述组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂的浓度为10～30mm，优选为20mm，ph为5.5～6.5，优选为6.0。
4.如权利要求1-3任一项所述的抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，其特征在于，所述聚山梨酯80的含量为0.1～0.5g/l，优选为0.2g/l。
5.如权利要求1-4任一项所述的抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，其特征在于，所述可吸入组合物还包含糖类，优选地所述糖类为蔗糖、海藻糖。
6.如权利要求5所述的所述的抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，所述糖类为海藻糖时，海藻糖的含量为40～60g/l，优选为50～55g/l，更优选为51～52g/l。
7.如权利要求1-6任一项所述的抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，其特征在于，所述可吸入组合物包含：(a)10～50g/l的抗rbd抗体或其抗原结合片段，(b)10～30mm的组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂，ph为5.5～6.5，(c)0.1～0.5g/l的聚山梨酯80，(d)40～60g/l的海藻糖。
8.如权利要求7所述的抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，其特征在于，所述可吸入组合物包含：(a)30g/l的抗rbd抗体或其抗原结合片段，(b)20mm的组氨酸/盐酸组氨酸缓冲剂，ph为6.0，(c)0.2g/l的聚山梨酯80，(d)51.35g/l的海藻糖。
9.如权利要求1-8中任一项所述的抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，其特征在于，所述抗rbd抗体或其抗原结合片段包含第一抗体或其抗原结合部分和第二抗体或其抗原结合部分，其中所述第一抗体或其抗原结合部分与所述第二抗体或其抗原结合部分能够结合冠状病毒刺突蛋白的不同表位。
10.如权利要求9所述的抗rbd抗体或其抗原结合片段的可吸入组合物，其特征在于，所述第一抗体或其抗原结合片段的重链氨基酸序列如seq id no:1所示，轻链氨基酸序列如seq id no:2所示。
