用于鉴定甜瓜抗白粉病性状的InDel分子标记及其应用的制作方法

    专利2026-05-05  16


    本发明涉及蔬菜抗病分子标记开发和分子标记辅助育种,尤其涉及用于鉴定甜瓜抗白粉病性状的indel分子标记及其应用。


    背景技术:

    1、甜瓜(cocumis melo l.)是葫芦科(cucurbiaceae)甜瓜属(cucumis linn)的一种重要瓜类作物。甜瓜在我国各个地区均有种植,目前的种植面积已稳居世界第一。白粉病是一种严重危害甜瓜生产的世界性病害,在露地和保护地栽培中均有发生,发病时叶片表面形成不规则大片病斑,严重时全叶或茎蔓上遍布白粉,叶片脆硬干枯甚至丧失光合能力,造成植株早衰,从而严重影响甜瓜的品质和产量,造成很大的经济损失。甜瓜白粉病菌是专性寄生菌,只能在活的寄主体内吸收营养,主要为单囊壳白粉菌(podosphaera xanthii)和二孢白粉菌(golorino myces cichoracearum),我国甜瓜白粉病的主要病原菌是单囊壳白粉菌。目前,化学防治仍是控制甜瓜白粉病的主要措施,然而甜瓜白粉病菌生理小种多、分化迅速,化学方法很难达到理想的防治效果。因此,发掘、利用抗病资源,培育抗病新品种是最经济、最有效的措施。在抗病育种过程中用传统的田间抗性接种鉴定法筛选抗病植株程序繁琐,表型观测因人而异,误差大、选育时间长。同时,白粉病抗性遗传受环境影响较大,选择准确度很难把握,费时费力,难以适应现在育种工作需要。通过分析与目标基因紧密连锁的分子标记来判断目标基因是否存在,可以大大加速目标基因的转移和利用,从而提高育种的效率。

    2、目前,分子标记研究在甜瓜抗病方面已有报道,teixeira等(2008)筛选到与甜瓜抗白粉病-1(pm-1)基因连锁距离为4.9cm的aflp标记hindiii,毛云等(2017)通过连锁分析,将新疆甜瓜品种“phhl”白粉病抗病基因定位于7号染色体上ssr12510与ecm123两个标记之间。王贤磊等(2014)以抗病品种pmr5和感病品种伽师为亲本构建f1、bc1、bc2群体,利用bsa法(bulked segregation analysis,bsa)结合ssr分子标记技术,筛选获得与抗白粉病紧密连锁的分子标记,将pmr5中的抗白粉病基因定位于cmga36和ssr25208之间,约104113bp范围内。卢浩等(2015)选取甜瓜抗白粉病品种pmr6为供体亲本,感白粉病品hami413为受体亲本所构建的bc2分离群体为材料,利用集团分离分析法结合ssr分子标记筛选出5个多态性标记,将pmr6的抗性基因定位在ssr12407与ssr12202之间,该抗性基因与标记mu7191共分离,物理距离为226kb,预测了35个候选基因。zhang等(2013)通过抗病材料k7-19与感病材料k7-2构建的遗传群体,将pm-2定位在甜瓜的2号染色体。王强等(2009)利用ssr标记技术,在抗病材料pmr5上找到与白粉病抗病基因连锁的标记csat425。开发与甜瓜白粉病抗性基因连锁的分子标记,可以为早期抗病性选择提供依据,使选育抗病品种的过程变得更加简单、便捷。

    3、但是现有的技术方案,有的操作复杂,有的筛选准确率较低。因此,现有技术还有待改进。


    技术实现思路

    1、鉴于上述现有技术的不足,本发明提供了用于鉴定甜瓜抗白粉病性状的indel分子标记及方法,旨在解决现有分子标记方法存在的操作繁琐、需要酶切的问题。

    2、本发明的技术方案如下:

    3、本发明的第一方面,提供用于鉴定甜瓜抗白粉病性状的indel分子标记,所述indel分子标记的引物为引物mindel92,所述引物mindel92包括上游引物mindel92-f和下游引物mindel92-r,所述上游引物mindel92-f的序列如seq id no.1所示,所述下游引物mindel92-r的序列如seq id no.2所示。

    4、本发明的第二方面,提供上述的用于鉴定甜瓜抗白粉病性状的indel分子标记在检测甜瓜白粉病抗性基因中的应用。

    5、本发明的第三方面,提供上述的用于鉴定甜瓜抗白粉病性状的indel分子标记在辅助选育抗白粉病甜瓜中的应用。

    6、本发明的第四方面,提供一种鉴定甜瓜品种是否抗白粉病的方法,所述方法包括以下步骤:

    7、提取待测甜瓜的基因组dna;

    8、采用上述的indel分子标记的引物对所述待测甜瓜的基因组dna进行pcr扩增,得到pcr扩增产物并进行检测;

    9、若扩增产物为303bp的如seq id no.3所示的核苷酸序列,则判定甜瓜为抗白粉病,若扩增产物为266bp的如seq id no.4所示的核苷酸序列,则判定甜瓜为感白粉病。

    10、优选的,所述pcr扩增的反应体系为:2×taq mastermix 7.5μl,dna提取物1μl,10μm上游引物1μl,10μm下游引物1μl,ddh2o 4.5μl。

    11、优选的,所述pcr扩增的反应程序为:94℃预变性2min,94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸45s,35个循环,72℃延伸2min,16℃保存。

    12、有益效果:

    13、本发明公开了用于鉴定甜瓜抗白粉病性状的indel分子标记及其应用,本发明提供了多态性高、稳定的甜瓜白粉病抗性位点lvpm12.1连锁标记mindel92,可将其用于甜瓜白粉病抗性育种。与同类分子标记技术相比,本发明具有操作简单,不需要酶切等优点。



    技术特征:

    1.用于鉴定甜瓜抗白粉病性状的indel分子标记,其特征在于,所述indel分子标记的引物为引物mindel92,所述引物mindel92包括上游引物mindel92-f和下游引物mindel92-r,所述上游引物mindel92-f的序列如seq id no.1所示,所述下游引物mindel92-r的序列如seq id no.2所示。

    2.权利要求1所述的用于鉴定甜瓜抗白粉病性状的indel分子标记在检测甜瓜白粉病抗性基因中的应用。

    3.权利要求1所述的用于鉴定甜瓜抗白粉病性状的indel分子标记在辅助选育抗白粉病甜瓜中的应用。

    4.一种鉴定甜瓜品种是否抗白粉病的方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

    5.根据权利要求4所述的用于鉴定抗白粉病甜瓜品种的方法,其特征在于,所述pcr扩增的反应体系为:2×taq mastermix 7.5μl,dna提取物1μl,10μm上游引物1μl,10μm下游引物1μl,ddh2o 4.5μl。

    6.根据权利要求4所述的用于鉴定抗白粉病甜瓜品种的方法,其特征在于,所述pcr扩增的反应程序为:94℃预变性2min,94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸45s,35个循环,72℃延伸2min,16℃保存。


    技术总结
    本发明公开了用于鉴定甜瓜抗白粉病性状的InDel分子标记及其应用,所述InDel分子标记的引物为引物MInDel92,所述引物MInDel92包括上游引物MInDel92‑F和下游引物MInDel92‑R,所述上游引物MInDel92‑F的序列如SEQ ID NO.1所示,所述下游引物MInDel92‑R的序列如SEQ ID NO.2所示。本发明提供了一个与甜瓜抗白粉病抗性位点LVpm12.1紧密连锁的InDel标记MInDel92,位于甜瓜第12号染色体上,本发明获得的分子标记可用于辅助育种,鉴定甜瓜材料是否抗白粉病,从而减少田间筛选工作量,降低育种成本,加快育种进程,具有很高的实际应用价值。与同类分子标记技术相比,本发明具有操作简单,不需要酶切等优点。

    技术研发人员:卢霞,樊文义,张文婷,阿门,刘圆芝,邓志军,许光利,李文虎
    受保护的技术使用者:宿迁市绿港现代农业研究院有限公司
    技术研发日:
    技术公布日:2024/4/29
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