本发明属于医疗检测，更具体地，本发明涉及一种hpv dna的e6基因在制备浸润性宫颈癌诊断产品中的应用。
背景技术：
1、目前，细胞学/hpv检测、阴道镜检查、宫颈活组织病理检查是临床诊断宫颈癌的主要方法，其中阴道镜或直视下的宫颈组织学活检病理检查是最终确诊的金标准，但是会对患者造成一定的创伤，存在创口感染风险，易导致患者抵触心理，且目前尚缺乏统一的国际性图像诊断标准，检查过程受临床医生主观性判断和临床经验的影响。随着新技术的发展，鳞状上皮细胞癌抗原(scc-ag)、癌胚抗原(cea)、糖链抗原125(ca125)等常见的血清肿瘤标志物，以及基因或多基因组合dna甲基化检测，已被应用于宫颈癌的诊断。但单一的血清肿瘤标志物检查容易受炎症、出血等因素影响，特异性较低，容易造成假阳性结果，需要同时联合几种标志物检测；而目前基因或多基因组合dna甲基化检测，可以用于早期筛查、诊断的不多，且特异性低。
2、因此，寻求一种特异性高、灵敏度高的浸润性宫颈癌诊断的标志物非常有意义。
技术实现思路
1、基于此，本发明的目的在于提供一种hpv dna的e6基因在制备浸润性宫颈癌诊断产品中的应用，hpv dna的e6基因作为浸润性宫颈癌的诊断标志物，灵敏度高、特异性强。
2、实现上述发明目的的技术方案包括如下。
3、本发明的第一方面，提供了一种hpv dna的e6基因在制备浸润性宫颈癌诊断产品中的应用，所述hpv dna的e6基因的核苷酸序列如seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4或seq id no:5所示。
4、本发明的第二方面，提供了扩增hpv dna的e6基因的引物探针组在制备浸润性宫颈癌诊断产品中的应用，所述引物探针组包括：扩增hpv16 dna的e6基因的引物seq id no:6～seq id no:7和探针seq id no:8；扩增hpv18dna的e6基因的引物seq id no:9～seq idno:10和探针seq id no:11；扩增hpv33 dna的e6基因的引物seq id no:12～seq id no:13和探针seq id no:14；扩增hpv52 dna的e6基因的引物seq id no:15～seq id no:16和探针seq id no:17；或扩增hpv58 dna的e6基因的引物seq id no:18～seq id no:19和探针seq id no:20。
5、本发明的第三方面，提供了一种浸润性宫颈癌的诊断产品，包括扩增hpv e6基因的引物探针组，所述引物探针组包括：扩增hpv16 dna的e6基因的引物seq id no:6～seqid no:7和探针seq id no:8；扩增hpv18 dna的e6基因的引物seq id no:9～seq id no:10和探针seq id no:11；扩增hpv33dna的e6基因的引物seq id no:12～seq id no:13和探针seq id no:14；扩增hpv52 dna的e6基因的引物seq id no:15～seq id no:16和探针seqid no:17；或扩增hpv58 dna的e6基因的引物seq id no:18～seq id no:19和探针seq idno:20。
6、本发明的第四方面，提供了一种检测ctdna中hpv的方法，采用上述诊断产品进行检测，包括以下步骤：提取待测血液样本的ctdna，扩增hpv dna的e6基因，再进行ddpcr检测。
7、本发明具有以下有益效果：
8、本发明以hpv16/18/33/52/58五种高危分型病毒序列的差异序列e6区域设计特异性引物和探针，检测待测血液样本中的ctdna，发现仅在浸润性宫颈癌样本中可以检测到hpv dna的e6片段，因此，hpv dna的e6基因可以作为浸润性宫颈癌的诊断标志物，通过检测外周血循环肿瘤dna中是否存在hpv dna的e6片段，可以准确地区分浸润性宫颈癌和原位宫颈癌，相对于传统宫颈癌检测技术或其他宫颈癌标志物检测技术，操作简单，灵敏度高，能够有效降低假阳性结果，具有100％特异性。
1.hpv dna的e6基因在制备浸润性宫颈癌诊断产品中的应用，所述hpv dna的e6基因的核苷酸序列如seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4或seq id no:5所示。
2.扩增hpv dna的e6基因的引物探针组在制备浸润性宫颈癌诊断产品中的应用，所述引物探针组包括：扩增hpv16 dna的e6基因的引物seq id no:6～seq id no:7和探针seqid no:8；扩增hpv18 dna的e6基因的引物seq id no:9～seq id no:10和探针seq id no:11；扩增hpv33 dna的e6基因的引物seq id no:12～seq id no:13和探针seq id no:14；扩增hpv52dna的e6基因的引物seq id no:15～seq id no:16和探针seq id no:17；或扩增hpv58 dna的e6基因的引物seq id no:18～seq id no:19和探针seq id no:20。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述引物探针组的探针的5’端修饰有荧光基团，3’端修饰有淬灭基团；优选地，所述荧光基团为fam。
4.一种浸润性宫颈癌的诊断产品，其特征在于，包括扩增hpv dna的e6基因的引物探针组，所述引物探针组包括：扩增hpv16 dna的e6基因的引物seq id no:6～seq id no:7和探针seq id no:8；扩增hpv18 dna的e6基因的引物seq id no:9～seq id no:10和探针seqid no:11；扩增hpv33 dna的e6基因的引物seq id no:12～seq id no:13和探针seq idno:14；扩增hpv52 dna的e6基因的引物seq id no:15～seq id no:16和探针seq id no:17；或扩增hpv58 dna的e6基因的引物seq id no:18～seq id no:19和探针seq id no:20。
5.根据权利要求4所述的浸润性宫颈癌的诊断产品，其特征在于，还包括扩增内参基因fgfr1的引物seq id no.21～seq id no.22和探针seq idno.23。
6.根据权利要求5所述的浸润性宫颈癌的诊断产品，其特征在于，所述探针的5’端修饰有荧光基团hex。
7.根据权利要求4～6任一项所述的浸润性宫颈癌的诊断产品，其特征在于，所述诊断产品为试剂盒。
8.一种检测ctdna中hpv的方法，其特征在于，采用权利要求4～7任一项所述的诊断产品进行检测，包括以下步骤：提取待测血液样本的ctdna，扩增hpv dna的e6基因，再进行ddpcr检测。
9.根据权利要求8所述的检测ctdna中hpv的方法，其特征在于，所述ddpcr反应体系包括：ddpcr supermix 10μl、终浓度400nm～1400nm的引物、终浓度150nm～350nm的探针、ctdna模板2～6μl、无核酸酶水补至20μl。
10.根据权利要求8所述的检测ctdna中hpv的方法，其特征在于，所述ddpcr反应程序为：预变性5min；变性30s，退火延伸1min，循环40次。
