本发明属于中药检测，具体涉及一种鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法。
背景技术：
1、鸭跖草配方颗粒原料为鸭跖草科植物鸭跖草commelina communis l.的干燥地上部分。鸭跖草性甘、淡，寒。归肺、胃、小肠经。清热泻火，解毒，利水消肿。用于感冒发热，热病烦渴，咽喉肿痛，水肿尿少，热淋涩痛，痈肿疔毒。
2、鸭跖草，主要化学成分为黄酮类、酚酸类等。鸭跖草为现行药典品种中药。文献也对鸭跖草中化学成分进行阐述，然而，一方面，通过上述单一成分的含量测定或鉴别鸭跖草及其制剂(例如配方颗粒)，不能从整体上检测和控制其质量；另一方面，通过单一成分的含量测定联合其他成分的鉴别鸭跖草及其制剂，费时、费力，难以广泛地应用于生产实践。
技术实现思路
1、因此，本发明的目的在于提供一种鸭跖草及其制剂特征图谱及其建立方法，该方法根据及其制剂的特点，建立该品种的特征图谱，实现各特征峰的有效分离，为全面建立鸭跖草及其制剂(例如配方颗粒)的质量控制标准提供科学依据。
2、具体的，本发明公开了一种鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法，包括以下步骤，
3、(1)供试品溶液的制备；
4、(2)取供试品溶液采用高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相a，以水或者含酸的水溶液为流动相b，梯度洗脱程序如下；
5、0-5min，流动相a与流动相b的体积比为5％：95％；
6、5-30min，流动相a与流动相b的体积比为5％：95％→27％：73％；
7、30-38min，流动相a与流动相b的体积比为27％：73％→30％：70％；
8、38-55min，流动相a与流动相b的体积比为30％：70％。
9、在某些优选的实施方式中，步骤(2)还满足如下1)-4)中的至少一项：
10、1)检测波长为230-360nm，流速为0.25-0.35ml/min，柱温为25-35℃；
11、2)所述含酸的水溶液中的酸选自甲酸、磷酸、乙酸中的一种或者多种；
12、3)所述含酸的水溶液中酸浓度为0.05％-0.2％；
13、4)检测过程中采用柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8 -1.9μm的色谱柱。
14、本发明中，鸭跖草及其制剂指可以是鸭跖草，也可以是由鸭跖草为原料制成的制剂，例如粉剂、颗粒剂、片剂等。
15、在某些优选的实施方式中，步骤(1)包括，称取鸭跖草供试品，加溶剂提取，得到提取液，固液分离，取液体，即为供试品溶液；
16、在某些优选的实施方式中，所述步骤(1)还满足如下a-e中的任意一项或者多项：
17、a、鸭跖草供试品的质量与溶剂的体积之比为0.1-0.3：20-40；质量与体积的关系为g/ml；
18、b、提取方式为回流提取或者超声提取；
19、c、提取时间为≥20min，优选为30-60min；
20、d、所述固液分离选自离心或者滤膜过滤；
21、e、溶剂选自体积百分数为40-80％的甲醇水溶液。
22、在某些优选的实施方式中，所述的构建方法还包括采用香草酸对照品、荭草苷对照品、异荭草苷对照品、牡荆苷对照品和芦丁对照品中的至少一种加溶剂制备对照品溶液的步骤，以及按照本发明任一所述的构建方法中的高效液相色谱法检测对照品溶液得到对照品图谱的步骤。
23、优选的，每1ml对照品溶液中含各对照品5-50μg；和/或，对照品溶液制备中所采用的溶剂选自甲醇或甲醇水溶液。
24、某些优选的实施方式中，鸭跖草和/或其制剂的特征图谱具有9个共有特征峰，其中峰7与异荭草苷对照品参照物峰保留时间相对应；与异荭草苷对照品参照物峰相对应的峰为s峰，其余各特征峰与s峰的相对保留时间在规定值的±10％的范围之内；规定值为：0.32(峰1)、0.51(峰2)、0.60(峰3)、0.67(峰4)、0.91(峰5)、0.95(峰6)、1.04(峰8)、1.23(峰9)。
25、某些优选的实施方式中，还包括鸭跖草配方颗粒的对照特征图谱的构建，对多批鸭跖草配方颗粒供试品检测得到的特征图谱，利用中药色谱特征图谱相似度评价系统生成鸭跖草配方颗粒的对照特征图谱。至少采用2批鸭跖草配方颗粒，例如采用4个批次、7个批次、8个批次、15个批次的鸭跖草配方颗粒。
26、某些优选的实施方式中，利用中药色谱特征图谱相似度评价软件生成鸭跖草配方颗粒的对照特征图谱后还包括标记共有特征峰的步骤。
27、所述鸭跖草配方颗粒对照特征图谱的相似度大于0.90。
28、本发明还提供了一种鸭跖草及其制剂中有效成分的含量测定方法，包括如下步骤：
29、(1)供试品溶液和对照品溶液的制备；所述对照品溶液的制备方法包括：采用香草酸对照品、荭草苷对照品、异荭草苷对照品、牡荆苷对照品和芦丁对照品中的至少一种加溶剂制备对照品溶液；
30、(2)取供试品溶液和对照品溶液采用高效液相色谱法检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相a，以水或者含酸的水溶液为流动相b，梯度洗脱程序如下；
31、0-5min，流动相a与流动相b的体积比为5％：95％；
32、5-30min，流动相a与流动相b的体积比为5％：95％→27％：73％；
33、30-38min，流动相a与流动相b的体积比为27％：73％→30％：70％；
34、38-55min，流动相a与流动相b的体积比为30％：70％；
35、(3)采用外标法计算供试品溶液中所含对照品的含量。
36、某些优选的实施方式中，步骤(2)还满足如下1)-4)中的至少一项：
37、1)检测波长为230-360nm，流速为0.25-0.35ml/min，柱温为25-35℃；
38、2)所述含酸的水溶液中的酸选自甲酸、磷酸、乙酸中的一种或者多种；
39、3)所述含酸的水溶液中酸浓度为0.05％-0.2％；
40、4)检测过程中采用柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8 -1.9μm的色谱柱。
41、某些优选的实施方式中，步骤(1)包括，称取鸭跖草供试品，加溶剂提取，得到提取液，固液分离，取液体，即为供试品溶液；优选的，所述步骤(1)还满足如下a-e中的任意一项或者多项：
42、a、鸭跖草供试品的质量与溶剂的体积之比为0.1-0.3：20-40；质量与体积的关系为g/ml；
43、b、提取方式为回流提取或者超声提取；
44、c、提取时间为≥20min，优选为30-60min；
45、d、所述固液分离选自离心或者滤膜过滤；
46、e、溶剂选自体积百分数为40-80％的甲醇水溶液
47、某些优选的实施方式中，每1ml对照品溶液中含各对照品5-50μg；和/或，对照品溶液制备中所采用的溶剂选自甲醇或甲醇水溶液。
48、本发明还提供了一种鸭跖草及其制剂的质量检测方法，包括上述任一所述的鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法和/或包括上述任一所述的鸭跖草及其制剂中有效成分的含量测定方法。
49、具体的，将待测鸭跖草产品按照上述任一所述的鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法构建得到特征图谱和/或测鸭跖草产品按照上述任一所述的鸭跖草及其制剂中有效成分的含量测定方法测定有效成分含量。
50、待测鸭跖草产品可以是鸭跖草，也可以是由鸭跖草制成的制剂，例如粉剂、颗粒剂、片剂等。
51、例如当鸭跖草产品为鸭跖草配方颗粒时；采用图谱对比评价待测鸭跖草配方颗粒产品的质量，当待测鸭跖草配方颗粒产品的特征图谱具有至少9个共有峰，其中峰7应与异荭草苷对照品参照物峰保留时间相对应；与异荭草苷参照物峰相应的峰为s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内。规定值为：0.32(峰1)、0.51(峰2)、0.60(峰3)、0.67(峰4)、0.91(峰5)、0.95(峰6)、1.04(峰8)、1.23(峰9)时，则为质量合格；反之则质量不合格。
52、采用相似度评价待测鸭跖草配方颗粒产品的质量，当待测鸭跖草配方颗粒产品的特征图谱与鸭跖草配方颗粒的对照特征图谱的相似度如果不低于0.90-1.00(例如0.9)，则为质量合格；如果低于0.90-1.00(例如0.9)，则为不合格；具体地，所述相似度通过中药色谱特征图谱相似度评价软件得到。
53、本发明中，术语“鸭跖草及其制剂”或者“鸭跖草和/或其制剂”均是指鸭跖草和鸭跖草制剂中的一种或者多种。其中鸭跖草制剂是由鸭跖草为原料按照常规工艺制成的制剂，尤其是鸭跖草水提物经过常规工艺制得的粉剂、颗粒剂、片剂等。
54、本发明中，vt％表示体积百分数，vt％甲醇或％甲醇均是指甲醇水溶液中甲醇的体积百分数，vt％乙醇或者％乙醇是指乙醇水溶液中乙醇的体积百分数。％甲酸是指甲酸水溶液中甲酸的体积百分数；％乙酸是指乙酸水溶液中乙酸的体积百分数。
55、本发明技术方案，具有如下优点：
56、1.本发明所述的鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相a，以水或者含酸的水溶液为流动相b，通过优选梯度洗脱程序；最终得到多个共有特征峰，并实现了多个共有特征峰的有效分离，而且得到的特征图谱特征峰峰形好、基线平稳，检测时间短，峰高或峰面积均匀，为全面建立鸭跖草配方颗粒的质量控制标准提供科学依据。而且还可以准确定位香草酸、荭草苷、异荭草苷、牡荆苷和芦丁的峰位置，充分的反映鸭跖草及其制剂(例如配方颗粒等制剂)的整体性和特征性。
57、本发明提供的检测方法分离度好，可以同时测定异荭草苷的含量，而且该检测方法的精密度较高、稳定性和重复性较好，因此，能够全面地、快速地检测鸭跖草配方颗粒中有效成分及其含量。
58、可以选择s峰异荭草苷作为特征图谱中的内参考峰，并且可以确定鸭跖草配方颗粒的9个共有特征峰，并根据s峰异荭草苷计算出各个共有特征峰的相对保留时间，有利于鸭跖草配方颗粒的全面质量检测和整体质量控制，从而有助于提高该药物使用的安全性和稳定均一性。
59、2.本发明所述的鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法，通过优化色谱条件、提取溶剂种类及用量、提取时间等提取条件进行考察，确定了最佳提取工艺和色谱条件，使得峰面积更高，分离效果更好，能够更加全面的对鸭跖草配方颗粒进行质量监控。
1.一种鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤，
2.根据权利要求1所述的鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，步骤(2)还满足如下1)-4)中的至少一项：
3.根据权利要求1或2所述的鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，步骤(1)包括，称取鸭跖草供试品，加溶剂提取，得到提取液，固液分离，取液体，即为供试品溶液。
4.根据权利要求3所述的鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)还满足如下a-e中的任意一项或者多项：
5.根据权利要求1-4中任一所述的鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，所述的构建方法还包括采用香草酸对照品、荭草苷对照品、异荭草苷对照品、牡荆苷对照品和芦丁对照品中的至少一种加溶剂制备对照品溶液的步骤，以及按照权利要求1-4中任一所述的构建方法中的高效液相色谱法检测对照品溶液得到对照品图谱的步骤；优选的，每1ml对照品溶液中含各对照品5-50μg；优选的，对照品溶液制备中所采用的溶剂选自甲醇或甲醇水溶液。
6.根据权利要求1-5中任一所述的鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法，其特征在于，鸭跖草和/或其制剂的特征图谱具有9个共有特征峰，其中峰7与异荭草苷对照品参照物峰保留时间相对应；与异荭草苷对照品参照物峰相对应的峰为s峰，其余各特征峰与s峰的相对保留时间在规定值的±10％的范围之内；规定值为：0.32(峰1)、0.51(峰2)、0.60(峰3)、0.67(峰4)、0.91(峰5)、0.95(峰6)、1.04(峰8)、1.23(峰9)。
7.一种鸭跖草及其制剂中有效成分的含量测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的鸭跖草及其制剂中有效成分的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)还满足如下1)-4)中的至少一项：
9.根据权利要求7所述的鸭跖草及其制剂中有效成分的含量测定方法，其特征在于，步骤(1)包括，称取鸭跖草供试品，加溶剂提取，得到提取液，固液分离，取液体，即为供试品溶液；优选的，所述步骤(1)还满足如下a-e中的任意一项或者多项：
10.一种鸭跖草及其制剂的质量检测方法，其特征在于，包括权利要求1-6中任一所述的鸭跖草及其制剂的特征图谱的构建方法和/或包括权利要求7-9中任一所述的鸭跖草及其制剂中有效成分的含量测定方法。
