本发明属于纳米药物，具体涉及一种ph响应型纳米载药胶束及其制备方法和应用。
背景技术：
1、脑卒中(stroke)俗称中风，包括缺血性脑卒中(又称脑梗死)和出血性脑卒中两种，指多种原因导致脑血管受损，局灶性(或整体)脑组织损害，引起临床症状超过24小时或致死的一种疾病，具有发病率、致残率、复发率和死亡率高的特点。缺血性脑中风包括缺血性脑中风、脑血栓、脑栓塞、脑隙性缺血性中风、多发性缺血性脑中风和小中风。脑卒中是中国居民第一位死亡原因，其中缺血性脑卒中占所有卒中的75％-90％。引起缺血性脑卒中症状源自：颅内外动脉的狭窄和闭塞、脑动脉栓塞、血流动力学因素、血流学因素等。缺血性中风患者治疗的最大问题是如何增加血脑屏障通透性，加强药物的治疗效果。
2、正常脑组织得ph值维持在7.2左右，该参数受到主动运输(离子泵运输)和被动运输(离子通道运输、细胞内缓冲溶液)两方面影响。在缺血性中风期间，细胞内co2的排除受到灌注不足的限制，co2在细胞内积累导致ph值下降。另一方面，缺血组织葡萄糖和氧气供应不足导致糖原和磷酸肌酸的消耗，增加h+的产生，使得乳酸堆积。根据目前对缺血性脑卒中的研究可知，在全缺血条件下，低血糖、正常血糖、高血糖的ph值分别是6.6、6.4、6.2。对于80％的局部缺血下，ph值下降到6.8-6.9。当ph值下降到6.5以下时，会造成缺血区域细胞的大量凋亡。
3、血脑屏障指脑毛细血管壁与神经胶质细胞形成的血浆与脑细胞之间的屏障和由脉络丛形成的血浆和脑脊液之间的屏障，这些屏障能够阻止某些物质(多半是有害的)由血液进入脑组织。但是在缺血性中风治疗中，需要让更多的药物透过血脑屏障，起到治疗患者的目的。目前靶向血脑屏障的纳米载药体系的特异性表达较低、靶向效率低、生物降解速率慢、无法控制药物释放等缺点，限制了其发展。
4、人们研究了许多具有非凡的ph响应性的药物输送系统，例如脂质体，胶束，纳米颗粒，纳米凝胶，树突状的核心-多壳纳米载体等，但是上述载药胶束在使用时，使得纳米药物在脑部的富集程度不足，无法让更多的药物通过血脑屏障，进而导致治疗效果变差。
技术实现思路
1、针对现有技术中的上述不足，本发明提供了一种ph响应型纳米载药胶束及其制备方法和应用，该载药胶束可有效解决现有的载药材料存在的药物富集能力差，用药剂量大的问题。
2、为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
3、(1)制备mal-peg-pcl聚合物：将马来酰亚胺聚乙二醇羟基、ε-己内酯和催化剂于真空加热条件下进行接枝反应，然后进行纯化、干燥，制得mal-peg-pcl聚合物；
4、(2)制备mal-peg-pcl-peda聚合物：对mal-peg-pcl聚合物进行卤化，将卤化的mal-peg-pcl聚合物中的卤素替换为n，n-二乙基氨基乙基甲基丙烯酸酯，制得mal-peg-pcl-peda聚合物；
5、(3)制备h2n-t-peg-pcl-peda聚合物：将mal-peg-pcl-peda聚合物和nh2-lgrmglpgk-c-sh溶解于溶剂中并反应，干燥，制得h2n-t-peg-pcl-peda聚合物；
6、(4)制备药物载体：将腺体受体激活剂和n，n'-羰基二咪唑溶解于溶剂中，在氮气条件下反应完全，除去多余n，n'-羰基二咪唑后进行干燥，制得bbb-cdi；
7、(5)制备纳米载药胶束：将h2n-t-peg-pcl-peda聚合物和bbb-cdi溶解于溶剂中室温反应完全，制得含有bbb-t-peg-pcl-peda的混合液，将该溶液进行纯化并干燥，制得bbb-t-peg-pcl-peda胶束；将bbb-t-peg-pcl-peda胶束和治疗药物与溶剂中混匀，制得混合溶液，将混合溶液滴加至水中，搅拌反应完全，透析，制得纳米载药胶束。
8、进一步地，步骤(1)中马来酰亚胺聚乙二醇羟基、ε-己内酯和催化剂的质量比为1-2:1-2:0.001-0.005；马来酰亚胺聚乙二醇羟基的分子量为1500-3000，接枝反应温度为120-160℃，反应时间为24-30h。
9、进一步地，步骤(1)中纯化操作如下：将接枝反应后的溶液与溶剂混合并冷却至室温，然后向其中加入过冷的乙醇溶液进行沉淀，离心，收集沉淀，干燥，制得。
10、进一步地，步骤(2)中具体操作如下：在氮气保护条件下将mal-peg-pcl聚合物和三乙胺溶解于溶剂中，将混合溶液置于冷冻环境中冷却，然后，于搅拌条件下，将2-溴异丁酰溴溶液滴加至混合溶液中，充分反应后过滤去除不溶性盐并蒸发浓缩，然后向其中加入过冷的乙醚溶液进行沉淀，收集沉淀并进行纯化、干燥，制得mal-peg-pcl-br聚合物；
11、将mal-peg-pcl-br聚合物、n，n-二乙基氨基乙基甲基丙烯酸酯和2,2-二吡啶溶解于溶剂中，然后于氮气环境下向混合溶液中添加cubr，充分反应后去除溶剂，然后将固体粗产物溶解于thf中，去除多余cubr，最后进行透析，制得mal-peg-pcl-peda聚合物。
12、进一步地，mal-peg-pcl聚合物、三乙胺和2-溴异丁酰溴的质量体积比为1-2g:2.5-5ml:3-5ml；mal-peg-pcl-br聚合物、n，n-二乙基氨基乙基甲基丙烯酸酯、2,2-二吡啶和cubr的质量比为5-8:4-7:0.5-0.8:0.2-0.5。
13、进一步地，步骤(3)中mal-peg-pcl-peda聚合物和nh2-lgrmglpgk-c-sh的质量比为1-10:1-10；步骤(4)中腺体受体激活剂和n，n'-羰基二咪唑的质量比为1-10:1-10；步骤(5)中h2n-t-peg-pcl-peda聚合物和bbb-cdi的质量比为1-2:0.1-0.2；bbb-t-peg-pcl-peda胶束和治疗药物的质量比为0.5-2:0.01-0.1。
14、进一步地，步骤(4)中所述腺体受体激活剂为lexiscan，所述治疗药物为依达拉奉。
15、进一步地，纳米载药胶束的粒径为150-250nm，载药量为0.3-3％。
16、一种ph响应型纳米载药胶束，采用上述的方法制得。
17、上述的ph响应型纳米载药胶束在制备治疗缺血性中风药物中的应用。
18、本发明所产生的有益效果为：
19、本发明通过对纳米载药胶束结构进行合理设计，制得载药胶束bbb-t-peg-pcl-peda，其中，在基体材料t-peg-pcl上接枝腺体受体激活剂lexiscan(相当于载药胶束中的bbb)，利用lexiscan的作用，提高血脑屏障的通透性，提高药物在脑部的富集，进而提高药物在血脑屏障内的富集，在相同治疗效果的情况下，可减少药物的使用量；在基体材料t-peg-pcl接枝聚甲基丙烯酸二乙氨基乙脂(peda)，其是一种ph响应胶束，其pka约为6.9，当ph值低于6.9时，peda质子化并溶于水，使得药物得以释放，但在正常生理条件下，peda疏水且不溶，可以避免药物被排泄排出，当患者出现脑卒中时，缺血区域ph值降低，此时peda发生溶解，使得包裹在内部的药物被释放，同时在lexiscan的作用，快速且大量的穿过血脑屏障，发挥治疗作用。
20、基体材料t-peg-pcl中的peg具备优异的亲水性、无毒、无抗原性和免疫原性，最终可通过肾脏排出；pcl具有良好的药物透过性、优异的生物可降解性、生物相容性，因此，上述基体材料是良好的药物输送骨架；该基体材料上含有亲水侧链和疏水侧链，制备过程中，将未载药胶束和药物依达拉奉溶解与溶剂中，由于药物依达拉奉具有疏水的特性，其被基体材料t-peg-pcl上疏水侧链包裹在内，使得胶束形成球形结构，球型结构的表面具有亲水侧链，可提高在水体中的溶解性，增加其水溶性并保护药物免于迅速从体内排除，使得纳米载药胶束能够在缺血环境中发生ph响应，使治疗药物依达拉奉得到释放，通过治疗药物捕获并减少过多的自由基，从而防止脑损伤，进而保证了缺血性中风患者的治疗效果。
1.一种ph响应型纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的ph响应型纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，步骤(1)中马来酰亚胺聚乙二醇羟基、ε-己内酯和催化剂的质量比为1-2:1-2:0.001-0.005；马来酰亚胺聚乙二醇羟基的分子量为1500-3000，接枝反应温度为120-160℃，反应时间为24-30h。
3.根据权利要求1所述的ph响应型纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，步骤(1)中纯化操作如下：将接枝反应后的溶液与溶剂混合并冷却至室温，然后向其中加入过冷的乙醇溶液进行沉淀，离心，收集沉淀，干燥，制得。
4.根据权利要求1所述的ph响应型纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，步骤(2)中具体操作如下：在氮气保护条件下将mal-peg-pcl聚合物和三乙胺溶解于溶剂中，将混合溶液置于冷冻环境中冷却，然后，于搅拌条件下，将2-溴异丁酰溴溶液滴加至混合溶液中，充分反应后过滤去除不溶性盐并蒸发浓缩，然后向其中加入过冷的乙醚溶液进行沉淀，收集沉淀并进行纯化、干燥，制得mal-peg-pcl-br聚合物；
5.根据权利要求4所述的ph响应型纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，mal-peg-pcl聚合物、三乙胺和2-溴异丁酰溴的质量体积比为1-2g:2.5-5ml:3-5ml；mal-peg-pcl-br聚合物、n，n-二乙基氨基乙基甲基丙烯酸酯、2,2-二吡啶和cubr的质量比为5-8:4-7:0.5-0.8:0.2-0.5。
6.根据权利要求1所述的ph响应型纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，步骤(3)中mal-peg-pcl-peda聚合物和nh2-lgrmglpgk-c-sh的质量比为1-10:1-10；步骤(4)中腺体受体激活剂和n，n'-羰基二咪唑的质量比为1-10:1-10；步骤(5)中h2n-t-peg-pcl-peda聚合物和bbb-cdi的质量比为1-2:0.1-0.2；bbb-t-peg-pcl-peda胶束和治疗药物的质量比为0.5-2:0.01-0.1。
7.根据权利要求1所述的ph响应型纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，步骤(4)中所述腺体受体激活剂为lexiscan，所述治疗药物为依达拉奉。
8.根据权利要求1所述的ph响应型纳米载药胶束的制备方法，其特征在于，所述纳米载药胶束的粒径为150-250nm，载药量为0.3-3％。
9.一种ph响应型纳米载药胶束，其特征在于，采用权利要求1-8中任一项所述的方法制得。
10.权利要求9中所述的ph响应型纳米载药胶束在制备治疗缺血性中风药物中的应用。
