本发明属于提取分离，具体涉及一种茶叶中茶没食子素的提取方法。
背景技术：
1、茶没食子素(theogallin，tg，结构式如式i所示)是茶叶中含量最高的酚酸类物质，占茶叶干重的1～2％，在其他植物中极少有发现。目前，采用制备色谱对茶叶进行提取纯化是茶没食子素的常用制备方法。例如，现有技术(卢忠尉,蒋晓岚,刘亚军等.固相萃取结合高效液相制备茶树没食子酸衍生物[j].茶叶科学,2012,32(06):494～499)公开了没食子酸衍生物(包括没食子酰奎尼酸，即茶没食子素)的提取方法，将茶树鲜叶依次进行醇提和固相萃取小柱萃取，得到的溶液经高效液相制备色谱纯化，得到没食子酸衍生物。上述制备方法得到的没食子酸衍生物的纯度虽然高达99.55％，但没食子酰奎尼酸的收率仅为0.04％，收率极低。
2、
技术实现思路
1、有鉴于此，本发明目的在于提供一种茶叶中茶没食子素的提取方法，本发明提供的提取方法提取得到的茶没食子素纯度高且收率高。
2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
3、本发明提供了一种茶叶中茶没食子素的提取方法，包括以下步骤：
4、将茶叶与乙醇水溶液混合，进行提取，得到提取液；所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为20～70％；
5、将所述提取液进行第一中压制备液相色谱分离，收集波长为260～290nm的馏分，利用第一超高效液相色谱对所述馏分进行检测，收集所述馏分中茶没食子素含量≥30～50％的馏分作为茶没食子素粗品；所述第一中压制备液相色谱分离采用的流动相体系包括流动相a和流动相b，所述第一中压制备液相色谱分离采用的流动相a为水，流动相b为第一低级醇；
6、将所述茶没食子素粗品进行第二中压制备液相色谱分离，收集波长为260～290nm的馏分，利用第二超高效液相色谱检测，收集所述馏分中茶没食子素含量≥40～70％的馏分，得到茶没食子素；所述第二中压制备液相色谱分离采用的流动相体系包括流动相a和流动相b，所述第二中压制备液相色谱分离采用的流动相a为第二低级醇-水溶液，流动相b为乙酸水溶液；所述第二低级醇-水溶液中第二低级醇的体积分数为1～5％；所述乙酸水溶液中乙酸的体积分数为1～3％。
7、优选的，所述第一低级醇和第二低级醇独立的包括甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或几种。
8、优选的，所述第一中压制备液相色谱分离采用的色谱柱填料包括反相c18硅胶填料；所述色谱柱填料的粒径为40～60μm；色谱柱压力值为2～5bar。
9、优选的，所述第一中压制备液相色谱分离的洗脱方式为等度洗脱；所述第一中压制备液相色谱分离的等度洗脱过程中流动相a和流动相b的体积比为20～50：1，流动相流速为10～30ml/min，洗脱时间为30～50min。
10、优选的，所述第二中压制备液相色谱分离采用的色谱柱填料包括反相c18硅胶填料；所述色谱柱填料的粒径为20～45μm；色谱柱压力值为3～7bar。
11、优选的，所述第二中压制备液相色谱分离的洗脱方式为等度洗脱；所述第二中压制备液相色谱分离的等度洗脱过程中流动相a和流动相b的体积比为0.5～3：1；流动相流速为5～20ml/min，洗脱时间为10～30min。
12、优选的，所述第一超高效液相色谱检测的条件包括：流动相体系包括流动相a和流动相b，所述第一超高效液相色谱检测的流动相a为乙酸水溶液，流动相b为甲醇，所述乙酸水溶液中乙酸的体积分数为1～5％；流动相流速为0.3～0.7ml/min；柱温为40～60℃；进样量为1μl；洗脱方式为梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序如下：0～7min，所述流动相a的体积分数为98％；7～7.1min，所述流动相a的体积分数由98％减少到70％；7.1～17min，所述流动相a的体积分数为70％；17～17.1min，所述流动相a的体积分数由70％减少到5％；17.1～20min，所述流动相a的体积分数为5％。
13、优选的，所述第二超高效液相色谱检测的条件包括：流动相体系包括流动相a和流动相b，所述第二超高效液相色谱检测的流动相a为乙酸水溶液，流动相b为甲醇，所述乙酸水溶液中乙酸的体积分数为1～5％；流动相流速为0.3～0.7ml/min；柱温为40～60℃；进样量为1μl；洗脱方式为梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序如下：0～7min，所述流动相a的体积分数为98％；7～7.1min，所述流动相a的体积分数由98％减少到70％；7.1～17min，所述流动相a的体积分数为70％；17～17.1min，所述流动相a的体积分数由70％减少到5％；17.1～20min，所述流动相a的体积分数为5％。
14、优选的，所述茶叶的干重和乙醇水溶液的体积之比为1g：20～50ml；
15、优选的，所述提取的温度为60～90℃，时间为0.5～2h。
16、本发明提供了一种茶叶中茶没食子素的提取方法，本发明对茶叶进行醇提，然后进行第一中压制备液相色谱分离(采用水和第一低级醇作为流动相进行洗脱)，收集波长为260～290nm的馏分，利用第一超高效液相色谱对所述馏分进行检测，再将收集到的茶没食子素粗品进行第二中压制备液相色谱分离(采用第二低级醇-水溶液和乙酸水溶液作为流动相进行洗脱)，收集波长为260～290nm的馏分，利用第二超高效液相色谱对所述馏分进行检测，得到的茶没食子素与其他物质的分离度高，制备得到的茶没食子素的纯度≥96.2％，且收率≥0.697％，纯度高、收率高且重复性好，适用于茶没食子素的大量制备以及产业化生产；而且，本发明采用水和低级醇作为洗脱剂，成本低廉，环境污染小。
1.一种茶叶中茶没食子素的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述第一低级醇和第二低级醇独立的包括甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或几种。
3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述第一中压制备液相色谱分离采用的色谱柱填料包括反相c18硅胶填料；所述色谱柱填料的粒径为40～60μm；色谱柱压力值为2～5bar。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述第一中压制备液相色谱分离的洗脱方式为等度洗脱；所述第一中压制备液相色谱分离的等度洗脱过程中流动相a和流动相b的体积比为20～50：1，流动相流速为10～30ml/min，洗脱时间为30～50min。
5.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述第二中压制备液相色谱分离采用的色谱柱填料包括反相c18硅胶填料；所述色谱柱填料的粒径为20～45μm；色谱柱压力值为3～7bar。
6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述第二中压制备液相色谱分离的洗脱方式为等度洗脱；所述第二中压制备液相色谱分离的等度洗脱过程中流动相a和流动相b的体积比为0.5～3：1；流动相流速为5～20ml/min，洗脱时间为10～30min。
7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述第一超高效液相色谱检测的条件包括：流动相体系包括流动相a和流动相b，所述第一超高效液相色谱检测的流动相a为乙酸水溶液，流动相b为甲醇，所述乙酸水溶液中乙酸的体积分数为1～5％；流动相流速为0.3～0.7ml/min；柱温为40～60℃；进样量为1μl；洗脱方式为梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序如下：0～7min，所述流动相a的体积分数为98％；7～7.1min，所述流动相a的体积分数由98％减少到70％；7.1～17min，所述流动相a的体积分数为70％；17～17.1min，所述流动相a的体积分数由70％减少到5％；17.1～20min，所述流动相a的体积分数为5％。
8.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述第二超高效液相色谱检测的条件包括：流动相体系包括流动相a和流动相b，所述第二超高效液相色谱检测的流动相a为乙酸水溶液，流动相b为甲醇，所述乙酸水溶液中乙酸的体积分数为1～5％；流动相流速为0.3～0.7ml/min；柱温为40～60℃；进样量为1μl；洗脱方式为梯度洗脱；所述梯度洗脱的程序如下：0～7min，所述流动相a的体积分数为98％；7～7.1min，所述流动相a的体积分数由98％减少到70％；7.1～17min，所述流动相a的体积分数为70％；17～17.1min，所述流动相a的体积分数由70％减少到5％；17.1～20min，所述流动相a的体积分数为5％。
9.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述茶叶的干重和乙醇水溶液的体积之比为1g：20～50ml。
10.根据权利要求1或9所述的提取方法，其特征在于，所述提取的温度为60～90℃，时间为0.5～2h。
