本发明属于生物医药，具体涉及空白脂质纳米颗粒在制备体内递送产品中的应用。
背景技术：
1、基因编辑疗法具有治愈遗传疾病的潜力，但需要能够安全有效地将基因编辑药物递送至体内相应的靶器官和组织。基因编辑药物可通过dna、mrna、蛋白质或者核糖核蛋白(rnp)的形式存在。将这类大分子药物成功地递送到细胞内需要突破多个生理屏障：1)在药物进入细胞之前，需避免药物与载体解离或药物降解；2)靶向特定细胞；3)穿过细胞膜进入细胞内部：4)在特定的细胞器中释放药物。也因此，如何将基因编辑药物有效安全的导入至体内相应靶细胞是一个很大的难题。
2、现有的基因编辑药物的体内导入技术，仍存在很多缺陷。如最为普遍的利用病毒载体进行介导的导入技术，其通常采用腺相关病毒递送载体或慢病毒载体递送药物。腺相关病毒递送载体具有良好的安全性与生物相容性；可将药物递送至眼、肝脏、脑部、心肌、骨骼肌等组织，自然产生与实验室合成的不同类型aav衣壳血清型可实现不同的组织靶向性，但其装载能力有限(仅为5kb的dna)，并且具有潜在的安全风险。慢病毒载体可容纳高达10kb的dna药物，足以将已知的基因编辑药物装入单个载体中，但存在潜在的基因组整合风险。总体来说，病毒载体面临着载体的免疫原性、基因编辑药物的长期表达、非靶标基因编辑、基因组整合的可能、制造成本和剂量限制性毒性，存在整合复性以及使宿主细胞产生免疫反应等潜在的不安全性等问题，限制了其应用。
3、而阳离子多聚物如聚乙烯亚胺等介导的导入技术，也存在转染效率低，毒性大等问题。目前基因编辑药物的体内导入方法虽然有很多，但大多价格昂贵、存在安全风险、毒性或转染效率不高，因此目前低效的核酸体内递送是制约基因治疗和基因免疫治疗技术进一步发展的瓶颈之一。因此迫切需要一种转染效率高、毒性低的体内转染试剂以满足当前需求。
4、脂质纳米颗粒(lnp)递送在递送基因编辑药物领域具有以下优势：1)lnp递送基因编辑药物可实现瞬时表达，相对于病毒载体带来的基因编辑药物长时间表达，lnp可以最大程度地减小脱靶效应的可能；2)lnp的免疫原性远低于病毒载体，某些情况下可以重复给药，具有良好的安全性和生物相容性，可以递送满足有效基因编辑水平的药物剂量；3)目前lnp的大规模生产工艺已经成熟，这为使用lnp递送体内基因编辑药物的临床试验提供了基础。专利cn116832051a、cn116969850a进行了此方面的研究。但现有技术中，采用脂质纳米颗粒(lnp)递送基因编辑药物，通常需要特殊的混合工艺，否则无法实现良好的递送效果。
5、基于此，本发明提供空白脂质纳米颗粒在制备体内递送产品中的应用，将生物学活性物质与空白脂质纳米颗粒在溶液状态下简单混合，即可实现对生物学活性物质的安全、有效递送。
技术实现思路
1、本发明针对现有技术存在的问题，提供空白脂质纳米颗粒在制备体内递送产品中的应用。所述空白脂质纳米颗粒在制备体内递送产品中的应用，包括将空白脂质纳米颗粒与生物学活性物质在溶剂中混合，得到基于空白脂质纳米颗粒的组合物的步骤；所述空白脂质纳米颗粒组成包括：可电离脂质、磷脂、胆固醇以及聚乙二醇缀合脂质。本发明采用所述空白脂质纳米颗粒，可根据使用者需求灵活调整生物学活性物质的剂量，并且可以通过多种途径给药，均可获得理想的递送效果。
2、为实现上述目的，第一方面，本发明提供了空白脂质纳米颗粒在制备体内递送产品中的应用，包括将空白脂质纳米颗粒与生物学活性物质在溶剂中混合，得到基于空白脂质纳米颗粒的组合物的步骤；所述空白脂质纳米颗粒组成包括：5-70mol％第一可电离脂质、0-30mol％第二可电离脂质、5-50mol％磷脂、10-70mol％胆固醇以及0-15mol％聚乙二醇缀合脂质。
3、在一项优选的实施方案中，所述空白脂质纳米颗粒组成包括：10-60mol％第一可电离脂质、0-30mol％第二可电离脂质、5-30mol％磷脂、15-70mol％胆固醇以及0-10mol％聚乙二醇缀合脂质。
4、在一项优选的实施方案中，所述产品为递送系统或药物。
5、在一项优选的实施方案中，所述应用还包括将基于空白脂质纳米颗粒的组合物引入动物体内的步骤。
6、在一项优选的实施方案中，将基于空白脂质纳米颗粒的组合物引入动物体内的途径包括口服给药、鼻内给药、静脉内给药、腹膜内给药、肌肉内给药、关节内给药、病灶内给药、气管内给药、皮下给药或皮内给药。
7、在一项优选的实施方案中，所述动物为哺乳动物和非哺乳动物。
8、在一项优选的实施方案中，所述生物学活性物质包括核酸、蛋白质、多肽、小分子活性物质；所述核酸为dna和/或rna。
9、在一项优选的实施方案中，所述核酸包括sirna、mirna、sarna、sgrna、dsrna、shrna、smrna、ssrna、mrna、circrna、snrna、crrna、incrna、snorna、pirna、pdna、ssdna、环状或线状dna、dna微环、msdna中的至少一种。
10、在一项优选的实施方案中，所述核酸的用量为空白脂质纳米颗粒和核酸的总量的0.1％-50％；所述基于空白脂质纳米颗粒的组合物中，所述的生物学活性物质的浓度为50-5000ng/μl。
11、在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质选自含有通式(1)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体；
12、
13、其中，r1、r2、r3彼此独立地是h、c5-40直链或支链的烷基、c5-40直链或支链的烯基、c5-40直链或支链的炔基、含有1-3个侧链的3-6元饱和或部分不饱和环烃基、或者含有1-3个侧链的6-10元芳族基团；所述侧链独立地选自c10-30直链或支链烷基、c10-30直链或支链烯基、c10-30直链或支链炔基；条件是r1、r2、r3至多1个是h；
14、m选自-nr4r5、含有至少一个氮原子的饱和或部分不饱和3-6元杂环基、含有至少一个氮原子的6-10元杂芳基，所述的杂环基、杂芳基未被取代或被一个或多个-oh、羧基、氨基、氧代基或卤素取代；
15、r4、r5彼此独立地是h、c1-6直链或支链烷基、c2-6直链或支链烯基或者c2-6直链或支链炔基，所述的c1-6直链或支链烷基、c2-6直链或支链烯基或c2-6直链或支链炔基未被取代或被一个或多个-oh、羧基、氨基酰胺基、脒基、胍基或卤素取代；
16、g1、g2、g3彼此独立地是-o-、-s-、-nr6-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝s)-、-c(＝o)o-、-ch(oh)-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr6-、-nr6c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr6c(＝o)o-、-oc(＝o)nr6-、-nr6c(＝o)nr13-、-c(＝o)s-、-c(＝s)s-、-sc(＝s)-、-sc(＝o)-、-oc(＝o)s-、-sc(＝o)o-、-sc(＝o)s-、-os(＝o)2o-、-s(＝o)2o-、-os(＝o)2-、-s(＝o)2-、-s(＝o)2-nr6-、-nr6-s(＝o)2-、-p(＝o)(or6)o-、-op(＝o)(or6)-或-op(＝o)(or6)o-；其中各r6、r13彼此独立地选自h、羟基、c1-30直链或支链的烷基或环烷基、c2-30直链或支链的烯基；
17、l1选自-x1-或-(cr7r8)m-x1-，其中各x1独立地选自-o-、-s-、-nr14-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝s)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr14-、-nr14c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr14c(＝o)o-、-oc(＝o)nr14-、-nr14c(＝o)nr15-、-c(＝o)s-、-c(＝s)s-、-sc(＝s)-、-sc(＝o)-、-oc(＝o)s-、-sc(＝o)o-、-sc(＝o)s-、-os(＝o)2o-、-s(＝o)2o-、-os(＝o)2-、-s(＝o)2-、-s(＝o)2-nr14-、-nr14-s(＝o)2-、-p(＝o)(or14)o-、-op(＝o)(or14)-或-op(＝o)(or14)o-；其中，m是2-6的整数，r7、r8彼此独立地是h、羟基、卤素、c1-6的直链或支链烷基或环烷基、c2-6的直链或支链的烯基，各r14、r15彼此独立地选自h、c1-30直链或支链的烷基或环烷基、c2-30直链或支链的烯基；
18、l2是-(cr9r10)n-或者-(cr9r10)n-x2-(cr11r12)k-，其中x2选自-o-、-s-、-nr16-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝s)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr16-、-nr16c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr16c(＝o)o-、-oc(＝o)nr16-、-nr16c(＝o)nr17-、-c(＝o)s-、-c(＝s)s-、-sc(＝s)-、-sc(＝o)-、-oc(＝o)s-、-sc(＝o)o-、-sc(＝o)s-、-os(＝o)2o-、-s(＝o)2o-、-os(＝o)2-、-s(＝o)2-、-s(＝o)2-nr16-、nr16-s(＝o)2-、-p(＝o)(or16)o-、-op(＝o)(or16)-或-op(＝o)(or16)o-；n是1-6的整数；k是1-6的整数；r9、r10、r11、r12彼此独立地是h、羟基、卤素、c1-6的直链或支链烷基或环烷基、c2-6的直链或支链的烯基，各r16、r17彼此独立地选自h、c1-30直链或支链的烷基或环烷基、c2-30直链或支链的烯基；
19、其中r4至r17中所述的烷基、环烷基、烯基未被取代或被一个或多个选自羟基、巯基、氨基、取代氨基、卤素的基团取代；
20、所述盐不包括季铵盐。
21、在一项优选的实施方案中，所述r1、r2、r3彼此独立地是如下基团：
22、
23、其中，y不存在，或者是c1-30直链或支链烷基或环烷基、c2-20直链或支链烯基、c2-20直链或支链炔基；r1’、r2’彼此独立地是h、c1-30直链或支链烷基、c2-30直链或支链烯基、c2-30直链或支链炔基，且y、r1’和r2’的碳链总长度为8-40。
24、在一项优选的实施方案中，所述r1、r2、r3彼此独立地选自以下基团：
25、
26、其中，r1’、r2’彼此独立地是h、c1-30直链或支链烷基、c2-30直链或支链烯基、c2-30直链或支链炔基，且r1’和r2’的碳链总长度为8-30。
27、在一项优选的实施方案中，所述r1、r2、r3彼此独立地选自以下基团中的任意一种：
28、
29、在一项优选的实施方案中，g1、g2、g3彼此独立地是-o-、-s-、-nr6-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-ch(oh)-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr6-、-nr6c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr6c(＝o)o-、-oc(＝o)nr6-、-nr6c(＝o)nr13-、-p(＝o)(or6)o-、-op(＝o)(or6)-或-op(＝o)(or6)o-。
30、在一项优选的实施方案中，l1选自-(cr7r8)m-x1-，其中x1选自-o-、-s-、-nr14-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr14-、-nr14c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr14c(＝o)o-、-oc(＝o)nr14-、-nr14c(＝o)nr15-、-p(＝o)(or14)o-、-op(＝o)(or14)-或-op(＝o)(or14)o-。
31、在一项优选的实施方案中，l2是-(cr9r10)n-x2-(cr11r12)k-，其中x2选自-o-、-s-、-nr16-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr16-、-nr16c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr16c(＝o)o-、-oc(＝o)nr16-、-nr16c(＝o)nr17-、-p(＝o)(or16)o-、-op(＝o)(or16)-或-op(＝o)(or16)o-。
32、在一项优选的实施方案中，m选自以下结构：
33、
34、其中，m’与n’彼此独立地是0-6的整数，r1”与r2”彼此独立地是h、c1-6的烷基、c2-6的烯基、胍基、脒基、酰胺基、脂肪胺基、3-10元含氮杂环；所述含氮杂环选自吡咯、咪唑、吡啶、吡唑、三氮唑、恶唑、异恶唑、噻吩、异噻唑、哒嗪、吡嗪、哌嗪、吲哚、苯并咪唑、咔唑、喹啉、异喹啉、嘌呤和嘧啶及其互变异构形式，其未被取代或任选地被一个或多个选自羟基、巯基、氨基、取代氨基、卤素、c1-6烷基、c2-6烯基、c2-6炔基、c6-14芳基的有机基团取代。
35、在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1a)所示的化合物：
36、
37、在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1b)所示的化合物：
38、
39、在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1c)的化合物：
40、
41、在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1d)所示的化合物的化合物：
42、
43、在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1e)所示的化合物
44、
45、在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1f)所示的化合物：
46、
47、在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1g)所示的化合物：
48、
49、在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1h)所示的化合物：
50、
51、在一项优选的实施方案中，m选自以下基团中的任意一个：
52、
53、在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1i)所示的化合物：
54、
55、在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1j)所示的化合物：
56、
57、在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1k)所示的化合物：
58、
59、在一项优选的实施方案中，y不存在，所述式(1)的化合物选自式(1l)所示的化合物：
60、
61、其中r1’、r2’独立的选自h、c1-30直链或支链烷基、c2-30直链或支链烯基、c2-30直链或支链炔基，且r1’和r2’的碳链总长度为8-40。
62、在一项优选的实施方案中，所述式(1)的化合物选自式(1m)所示的化合物：
63、
64、所述式(1)的化合物选自：
65、
66、
67、
68、
69、
70、
71、
72、
73、
74、
75、
76、
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78、
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80、
81、
82、
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84、
85、
86、
87、
88、
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90、
91、
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93、
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97、
98、
99、
100、
101、
102、
103、
104、
105、
106、
107、
108、
109、
110、
111、
112、
113、
114、
115、
116、
117、
118、
119、
120、
121、
122、
123、
124、
125、
126、
127、
128、
129、
130、
131、
132、
133、
134、
135、
136、
137、
138、
139、
140、
141、
142、在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(ii)与式(iii)化合物反应的步骤：
143、
144、其中，xa和xb为含有离去基团或亲核基团的基团，且xa和xb通过亲核反应或缩合反应形成l1。
145、在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(iv)与式(v)化合物反应的步骤：
146、
147、其中xc、xd为含有离去基团或亲核基团的基团，且xc和xd通过亲核反应或缩合反应形成l2。
148、在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(vi)化合物反应的步骤：
149、
150、其中xe为含有离去基团或亲核基团的基团，xf为含有离去基团或亲核基团的化合物，且xe和xf通过亲核反应或缩合反应形成m。
151、在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(vii)化合物依次与式(viii)化合物、式(ix)化合物、式(x)化合物反应的步骤：
152、
153、其中xg、xh、xi、xj、xk、xl为含有离去基团或亲核基团的基团，且xg和xj通过亲核反应或缩合反应形成g1，xh和xk通过亲核反应或缩合反应形成g2，xi和xl通过亲核反应或缩合反应形成g3。
154、在一项优选的实施方案中，所述第一可电离脂质的制备方法包括使式(xi)与式(xii)化合物反应的步骤：
155、
156、式(xiii)与式(xii)化合物反应的步骤：
157、
158、其中xm为含有亲核基团的基团，且xm与式(xii)化合物的c＝c-l2a通过加成反应形成x1-l2。
159、在一项优选的实施方案中，r1、r2、r3彼此独立地是如下基团：
160、
161、其中y、r1’、r2’的含义同前；
162、其中还包括形成尾链r1、r2、r3的步骤：
163、
164、其中x为离去基团。
165、在一项优选的实施方案中，所述第二可电离脂质为式(2)的化合物，或其盐、立体异构体、互变异构体：
166、
167、其中n1为nh或o；
168、ra选自c6-c24烷基、c6-c24烯基、c6-c24的环烷基、c6-c24醇、c6-c24短链聚氧乙烯；所述c6-c24烷基、c6-c24烯基、c6-c24的环烷基、c6-c24醇、c6-c24短链聚氧乙烯为直链或支链结构；rb和rc各自独立地选自c1-c12烷基、c2-c12烯基、c1-c12炔基、c3-c12环烷烃基、c6-c12的芳烃基、c1-c12烷基醇、c1-c12的杂环基、烷基胺；
169、所述烷基胺为其中，ra’为c1-c12烷基，所述rb’和rb”各自独立的选自h、c1-c6烷基胺、rc”选自被未取代或被氨基取代的c1-c6烷基，rc”’为h、或-rc’-a1’-rc”-nh2；
170、条件是，当a1’为-co-nh-、-nh-co-或-co-o-时，rc’为c1-c6烷基；当a1’为-co-时，rc’不存在。
171、在一项优选的实施方案中，rb和rc各自独立地选自c1-c12烷基醇、烷基胺。
172、在一项优选的实施方案中，条件是：当ra为c6-c24烯基时，a1为nh，rb和rc各自独立地选自c1-c12烷基醇；
173、当ra为支链的c6-c24烷基时，a1为nh，rb和rc各自独立地选自c1-c12烷基醇、烷基胺；
174、ra为直链的c6-c24烷基时，a1为nh或o，rb和rc各自独立地选自烷基胺；
175、当ra为直链的c6-c24烷基时，a1为o，rb和rc各自独立地选自c1-c12烷基醇；
176、当ra为c6-c24短链聚氧乙烯时，a1为nh或o，rb和rc各自独立地选自烷基胺；
177、或当ra为c6-c24烷基醇时，a1为nh或o，rb和rc各自独立地选自烷基胺。
178、在一项优选的实施方案中，ra选自下面的化合物结构：
179、
180、在一项优选的实施方案中，rb和rc选自下面的化合物结构：
181、
182、rd选自c1-c6的烷烃或环烷烃。
183、在一项优选的实施方案中，所述式(2)的化合物选自下列化合物中的至少一种：
184、
185、
186、
187、在一项优选的实施方案中，第二可电离脂质的制备方法包括如下反应步骤：
188、ra”-nh2①与α,β-不饱和羰基化合物②反应生成可电离脂质化合物③：
189、
190、其中，ra”-nh2为ra-nh2或
191、rb’和rb”同时为h，或者rb’和rb”同时为c1-c6胺，或者rb’和rb”同时为-rc’-a1’-rc：-nh2。
192、在一项优选的实施方案中，第二可电离脂质的制备方法包括：
193、1)ra”-nh2①与α,β-不饱和羰基化合物④反应生成化合物⑤；
194、2)化合物⑤与亲核试剂⑥反应生成可电离脂质化合物③；
195、
196、其中，亲核试剂⑥为rb-nh2或rb-oh；ra”-nh2选自ra-nh2或
197、
198、rb’和rb”同时为h，或者rb’和rb”同时为c1-c6胺，或者rb’和rb”同时为-rc’-a1’-rc”-nh2；z2为离去基团，z2与nh2反应得到a1。
199、在一项优选的实施方案中，第二可电离脂质的制备方法包括：
200、1)ra”-nh2①与α,β-不饱和羰基化合物②反应生成化合物⑦；
201、2)化合物⑦与α,β-不饱和羰基化合物⑧反应生成化合物⑨；
202、3)化合物⑨与亲核试剂⑩反应生成可电离脂质化合物
203、
204、其中，ra”-nh2为ra-nh2，z3为离去基团，a3与z3反应得到a1。
205、在一项优选的实施方案中，式2a-式2c中，至少一种亲核试剂与至少一种α,β-不饱和羰基化合物的β位碳原子发生麦克加成反应，生成含碳碳键、碳氧键、碳氮键、碳硫键或碳硒键的带有两分叉的所述可电离脂质化合物。
206、在一项优选的实施方案中，式2a-式2b还包括以通过式2a-式2b反应得到的带有端氨基的式(2)的化合物作为原料，按照式2a中步骤1或式2b中步骤1-2进行迭代反应的步骤；
207、所述带有端氨基的式(2)的化合物为
208、其中，rb’和rb”同时为h，或者rb’和rb”同时为c1-c6胺，或者rb’和rb”同时为-rc’-a1’-rc”-nh2。
209、在一项优选的实施方案中，式2a-式2c反应式还包括以通过式2a-式2c反应式得到带有端氨基的式(2)的化合物作为原料，与反应的步骤；
210、所述带有端氨基的式(2)的化合物为
211、其中，rb’和rb”同时为h，或者rb’和rb”同时为c1-c6胺，或者rb’和rb”同时为-rc’-a1’-rc”-nh2。
212、上文所述的离去基团是指在亲核反应或缩合反应中离去部分，包括但不限于：h、
213、oh、h2o、卤素(例如f,cl，br和i)、氰酸负离子、无机酸(例如硝酸、硫酸、磷酸)、羧酸(例如乙酸、三氟乙酸和苯甲酸等)、磺酸(例如甲磺酸、三氟甲磺酸、苯磺酸、对甲基苯磺酸和对硝基苯磺酸等)、二氧化碳(co2)、氮气(n2)、咪唑、烷氧基(r-o-)、氨基(-nhr，其中r为h去掉的烷基或芳基)、苯氧基、叔碳正离子(例如叔丁基正离子)、被不饱和系统或杂原子稳定的碳正离子或上文所述的各种保护基。
214、上文所述的亲核基团是指在化学反应中能够提供电子对以形成新的化学键的分子或离子，常见亲核基团包括：氢氧根(ho-)、氨(nh3)、羟胺(nh2oh)、肼(nh2-nh2)、取代肼、具有亲核性的卤素(如cl-、br-或i-)、氢负离子(h-)、叠氮负离子(n3-)、氰酸根负离子(cn-)、醇或烷氧基负离子(例如脱除羟基氢的醇)、胺基(包括伯胺、仲胺和叔胺)或胺负离子、碳负离子(例如格氏试剂、有机锂试剂、吉尔曼试剂等有机金属试剂中的碳负离子)、巯基或巯基负离子、硫醚、烯醇或烯醇负离子、烯基醚、烯胺、羧酸或羧酸负离子、烷基或芳基膦(例如三苯基膦)、有孤对电子的芳杂环(例如吡啶)等。
215、在一项优选的实施方案中，反应过程中所用原料还含有保护基团，反应步骤中包括保护和/或脱保护的步骤。
216、在一项优选的实施方案中，所述基于空白脂质体的体内递送方法还包括0-60mol％的其他可电离脂质，所述其他可电离脂质选自下列化合物中的至少一种：
217、
218、
219、
220、
221、
222、在一项优选的实施方案中，所述磷脂包括1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dlpc)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(dmpc)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dopc)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dppc)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(dspc)、1,2-双十一烷酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(dupc)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(popc)、1,2-二-0-十八碳烯基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:0diether pc)、1-油酰基-2-胆固醇基半琥珀酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(ochemspc)、1-十六烷基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(c16 lyso pc)、1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(dope)、1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(me 16.0pe)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-rac-(1-甘油)钠盐(dopg)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(dppg)、棕榈酰基油酰基磷脂酰乙醇胺(pope)、二硬脂酰基-磷脂酰-乙醇胺(dspe)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(dppe)、二肉豆蔻酰基磷酸乙醇胺(dmpe)、1-硬脂酰基-2-油酰基-硬脂酰乙醇胺(sope)、1-硬脂酰基-2-油酰基-磷脂酰胆碱(sopc)、鞘磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、棕榈酰基油酰基磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺(lpe)中的至少一种。
223、在一项优选的实施方案中，所述类固醇或其衍生物包括胆固醇、胆固醇硬脂酸、粪固醇、谷固醇、麦角固醇、菜油固醇、豆固醇、菜籽固醇、盐藻甾醇、番茄碱、熊果酸、α-生育酚中的至少一种。
224、在一项优选的实施方案中，所述聚乙二醇缀合脂质包括peg改性的磷脂酰乙醇胺、peg改性的磷脂酸、peg改性的神经酰胺、peg改性的二烷基胺、peg改性的二酰基甘油、peg改性的二烷基甘油中的至少一种。
225、在一项优选的实施方案中，所述聚乙二醇缀合脂质包括peg-二硬脂基氧基丙基(peg-dsa)、peg-c-domg、peg-dppc、聚乙二醇二甲基丙烯酸(peg-dma)、1,2-二甲基苯乙烯-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇(peg-dmg)、双棕榈酸甘油酯-聚乙二醇(dpg-peg)、1,2-二硬脂酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇(dsg-peg)、2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-二十四烷基乙酰胺(alc-0159)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(dppe-peg)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(peg-dspe)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(peg-dlpe)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(peg-dmpe)脂质中的至少一种。
226、在一项优选的实施方案中，所述基于空白脂质纳米颗粒的组合物中，生物学活性物质被包裹于空白脂质纳米颗粒内部和/或吸附于空白脂质纳米颗粒表面，形成一种复合物。
227、在一项优选的实施方案中，所述溶剂为水、有机溶剂的水溶液、缓冲盐溶液中的至少一种。
228、在一项优选的实施方案中，所述缓冲盐溶液ph为1-9，所述缓冲盐浓度为0.1-200mm，所述有机溶剂的水溶液为体积浓度＜50％的醇溶液。
229、在一项优选的实施方案中，所述醇为乙醇。
230、在一项优选的实施方案中，所述缓冲盐溶液选自枸橼酸盐溶液、醋酸盐溶液、酒石酸盐溶液、磷酸盐溶液、碳酸盐溶液、tris-hcl溶液、氯化钠溶液中的至少一种。
231、在一项优选的实施方案中，所述基于空白脂质纳米颗粒的组合物中还添加糖、甘油、dmso、盐、抗生素、表面活性剂中的至少一种。
232、第二方面，本发明提供了一种体外基因递送方法，包括将空白脂质纳米颗粒与生物学活性物质在溶剂中混合，得到基于空白脂质纳米颗粒的组合物的步骤；所述空白脂质纳米颗粒组成包括：5-70mol％第一可电离脂质、0-30mol％第二可电离脂质、5-50mol％磷脂、10-70mol％胆固醇以及0-15mol％聚乙二醇缀合脂质
233、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
234、1、所述空白脂质纳米颗粒在制备体内递送产品中的应用，包括将空白脂质纳米颗粒与生物学活性物质在溶剂中混合，得到基于空白脂质纳米颗粒的组合物的步骤；所述空白脂质纳米颗粒组成包括：可电离脂质、磷脂、胆固醇以及聚乙二醇缀合脂质。
235、2、本发明采用所述空白脂质纳米颗粒，可根据使用者需求灵活调整生物学活性物质的剂量，并且可以通过多种途径给药，均可获得理想的递送效果。
236、3、本发明制备工艺简单，无需借助设备即可完成制备。
1.空白脂质纳米颗粒在制备体内递送产品中的应用，其特征在于，包括将空白脂质纳米颗粒与生物学活性物质在溶剂中混合，得到基于空白脂质纳米颗粒的组合物的步骤；所述空白脂质纳米颗粒组成包括：5-70mol％第一可电离脂质、0-30mol％第二可电离脂质、5-50mol％磷脂、10-70mol％胆固醇以及0-15mol％聚乙二醇缀合脂质。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述递送方法还包括将基于空白脂质纳米颗粒的组合物引入动物体内的步骤。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，将基于空白脂质纳米颗粒的组合物引入动物体内的途径包括口服给药、鼻内给药、静脉内给药、腹膜内给药、肌肉内给药、关节内给药、病灶内给药、气管内给药、皮下给药或皮内给药。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述动物为哺乳动物和非哺乳动物。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述生物学活性物质包括核酸、蛋白质、多肽、小分子化合物；所述核酸为dna和/或rna。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述核酸包括sirna、mirna、sarna、sgrna、dsrna、shrna、smrna、ssrna、mrna、circrna、snrna、crrna、incrna、snorna、pirna、pdna、ssdna、环状或线状dna、dna微环、msdna中的至少一种。
7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述核酸的用量为空白脂质纳米颗粒和核酸的总量的0.1％-50％(w/w)；所述基于空白脂质纳米颗粒的组合物中，所述的生物学活性物质的浓度为50-5000ng/μl。
8.如权利要求1-7任一项所述的应用，其特征在于，所述第一可电离脂质选自含有通式(1)的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、互变异构体；
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述r1、r2、r3彼此独立地是如下基团：
10.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述r1、r2、r3彼此独立地选自以下基团：
11.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述r1、r2、r3彼此独立地选自以下基团中的任意一种：
12.如权利要求8所述的应用，其特征在于，g1、g2、g3彼此独立地是-o-、-s-、-nr6-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-ch(oh)-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr6-、-nr6c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr6c(＝o)o-、-oc(＝o)nr6-、-nr6c(＝o)nr13-、-p(＝o)(or6)o-、-op(＝o)(or6)-或-op(＝o)(or6)o-。
13.如权利要求8所述的应用，其特征在于，l1选自-(cr7r8)m-x1-，其中x1选自-o-、-s-、-nr14-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr14-、-nr14c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr14c(＝o)o-、-oc(＝o)nr14-、-nr14c(＝o)nr15-、-p(＝o)(or14)o-、-op(＝o)(or14)-或-op(＝o)(or14)o-。
14.如权利要求8所述的应用，其特征在于，l2是-(cr9r10)n-x2-(cr11r12)k-，其中x2选自-o-、-s-、-nr16-、-s-s-、-c(＝o)-、-c(＝o)o-、-oc(＝o)-、-c(＝o)nr16-、-nr16c(＝o)-、-oc(＝o)o-、-nr16c(＝o)o-、-oc(＝o)nr16-、-nr16c(＝o)nr17-、-p(＝o)(or16)o-、-op(＝o)(or16)-或-op(＝o)(or16)o-。
15.如权利要求8所述的应用，其特征在于，m选自以下结构：
16.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1a)所示的化合物：
17.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1b)所示的化合物：
18.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1c)的化合物：
19.如权利要求17所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1d)所示的化合物的化合物：
20.如权利要求19所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1e)所示的化合物
21.如权利要求20所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1f)所示的化合物：
22.如权利要求21所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1g)所示的化合物：
23.如权利要求21所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1h)所示的化合物：
24.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1i)所示的化合物：
25.如权利要求17所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1j)所示的化合物：
26.如权利要求24所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1k)所示的化合物：
27.如权利要求9所述的应用，其特征在于，y不存在，所述式(1)的化合物选自式(1l)所示的化合物：
28.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自式(1m)所示的化合物：
29.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述式(1)的化合物选自：
30.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述第二可电离脂质为式(2)的化合物，或其盐、立体异构体、互变异构体：
31.如权利要求30所述的应用，其特征在于，所述式(2)的化合物选自下列化合物中的至少一种：
32.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述空白脂质纳米颗粒还包括0-60mol％其他可电离脂质，所述其他可电离脂质选自下列化合物中的至少一种：
33.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述磷脂包括1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-磷酸胆碱、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-双十一烷酰基-sn-甘油-磷酸胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二-0-十八碳烯基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1-油酰基-2-胆固醇基半琥珀酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1-十六烷基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-rac-(1-甘油)钠盐、二棕榈酰基磷脂酰甘油、棕榈酰基油酰基磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基-磷脂酰-乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷酸乙醇胺、1-硬脂酰基-2-油酰基-硬脂酰乙醇胺、1-硬脂酰基-2-油酰基-磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、棕榈酰基油酰基磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺中的至少一种。
34.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述类固醇或其衍生物包括胆固醇、胆固醇硬脂酸、粪固醇、谷固醇、麦角固醇、菜油固醇、豆固醇、菜籽固醇、盐藻甾醇、番茄碱、熊果酸、α-生育酚中的至少一种。
35.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述聚乙二醇缀合脂质包括peg改性的磷脂酰乙醇胺、peg改性的磷脂酸、peg改性的神经酰胺、peg改性的二烷基胺、peg改性的二酰基甘油、peg改性的二烷基甘油中的至少一种。
36.如权利要求35所述的应用，其特征在于，所述聚乙二醇缀合脂质包括peg-二硬脂基氧基丙基、peg-c-domg、peg-dppc、聚乙二醇二甲基丙烯酸、1,2-二甲基苯乙烯-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇、双棕榈酸甘油酯-聚乙二醇、1,2-二硬脂酰-rac-甘油-3-甲氧基聚乙二醇、2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-二十四烷基乙酰胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇脂质中的至少一种。
37.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述基于空白脂质纳米颗粒的组合物中，生物学活性物质被包裹于空白脂质纳米颗粒内部和/或吸附于空白脂质纳米颗粒表面，形成一种复合物。
38.如权利要求37所述的应用，其特征在于，所述溶剂为水、有机溶剂的水溶液、缓冲盐溶液中的至少一种。
39.如权利要求38所述的应用，其特征在于，所述缓冲盐溶液ph为1-9，所述缓冲盐浓度为0.1-200mm，所述有机溶剂的水溶液为体积浓度＜50％的醇溶液。
40.如权利要求40所述的应用，其特征在于，所述缓冲盐溶液选自枸橼酸盐溶液、醋酸盐溶液、酒石酸盐溶液、磷酸盐溶液、碳酸盐溶液、tris-hcl溶液、氯化钠溶液中的至少一种。
41.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述基于空白脂质纳米颗粒的组合物中还添加糖、甘油、dmso、盐、抗生素、表面活性剂中的至少一种。
42.一种体外基因递送方法，其特征在于，包括将空白脂质纳米颗粒与生物学活性物质在溶剂中混合，得到基于空白脂质纳米颗粒的组合物的步骤；所述空白脂质纳米颗粒组成包括：5-70mol％第一可电离脂质、0-30mol％第二可电离脂质、5-50mol％磷脂、10-70mol％胆固醇以及0-15mol％聚乙二醇缀合脂质。
