本发明属于动物胎盘提取，具体涉及从羊胎盘中提取生物活性物质的方法。
背景技术：
1、随着人类社会的物质文明不断发展，科技水平不断提高，激发了人们享受生活，探索生命奇迹的欲望。随之增强体质、美容养颜的功能性食品应运而生，并且具有非常可观的经济价值。
2、每年都有大量羊胎盘产生，然而大部分羊胎盘没有得以充分的开发利用，造成了极大的资源浪费。从一只羊胎盘中提取出的生物活性物质的价值远远大于食用价值，如对羊胎盘进行综合开发利用，这将会产生巨大的经济效益和社会效益。
3、研究发现，羊胎盘的细胞组织结构与人胎盘最为相似，并具有调节机体免疫力，改善微循环、降低血液中的胆固醇，调节人体荷尔蒙和机体内分泌，有效抑制分解黑色素形成等功效。羊胎盘所含有的al、ba、p、si等微量元素与动物的生命活动密切相关，是动物生理代谢所必需的微量元素。羊胎盘中富含超氧化物歧化酶（sod），sod作为机体内过剩自由基的天然消除剂，对机体细胞起保护作用，在防御自由基的毒性、抗衰老以及预防肿瘤和抗炎等方面起着重要的作用。羊胎盘的功能特性日益为人们所认识，客观上也提出了羊胎盘深加工的要求。
4、目前，国内外对羊胎盘食品的开发，着重于对活性物质的提取、应用，如羊胎盘全粉、活性羊胎素等。羊胎盘除自身具有生物活性外，其蛋白质含量高达80％以上，因此，应该充分利用羊胎盘资源，采用现代生物酶解技术将羊胎盘中的大量蛋白质转变为羊胎盘生物活性肽。生物活性肽具有独特的理化性质与生物活性，分子量相对较低，可以避免像蛋白质或高分子肽对人体造成的过敏反应，更易于被人体消化吸收。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供从羊胎盘中提取生物活性物质的方法，该方法提纯获得的生物活性物质具有较高的得率。
2、本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
3、一种固定化脂肪酶：
4、上述固定化脂肪酶是采用载体固定的脂肪酶；
5、上述载体包含壳聚糖微球；
6、上述壳聚糖微球由噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物制备获得。
7、一种固定化脂肪酶的制备方法，包括：
8、在脂肪酶酶粉中加入磷酸缓冲液（两者质量体积比为：1g:0.1-0.2ml），搅拌研磨，减压抽滤，滤液中继续加入磷酸缓冲液，获得浓度为0.25-0.5g/l的酶液；然后在酶液中加入壳聚糖微球，在28-32℃振荡处理1-2h，超纯水洗涤，抽滤，干燥，获得固定化脂肪酶。
9、对本发明而言，上述磷酸缓冲液ph为中性。
10、对本发明而言，上述壳聚糖微球在酶液中的浓度为0.2-0.3wt%。
11、一种壳聚糖微球的制备方法，包括：在噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物中加入乙酸溶液，然后加入液体石蜡和油酸山梨坦，搅拌混合，再加入戊二醛溶液，搅拌反应，冷却，洗涤，干燥，获得壳聚糖微球。
12、具体地，上述壳聚糖微球的制备方法，包括以下步骤：
13、在噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物中加入乙酸溶液，室温搅拌10-15h后，加入液体石蜡和油酸山梨坦，室温搅拌混合1.5-3h，然后加入浓度为0.2-0.3wt%的戊二醛溶液，在40-50℃搅拌反应1-2.5h，冷却至室温，丙酮洗涤3-5次，抽滤，干燥，获得壳聚糖微球。
14、对本发明而言，上述噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物与乙酸溶液的质量体积比为：1g:3.5-5ml。
15、对本发明而言，上述乙酸溶液的浓度为1.8-2.5wt%。
16、对本发明而言，上述噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物与液体石蜡的质量体积比为：1g:12-18ml。
17、对本发明而言，上述液体石蜡与油酸山梨坦的体积比为：1:0.027-0.035。
18、对本发明而言，上述噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物与戊二醛溶液的质量体积比为：1g:1.5-2ml。
19、本发明还公开了一种噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物的制备方法，包括：采用2,4-二甲基-1,3-噻唑-5-羧酸与壳聚糖发生缩合反应，制得噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物。
20、本发明提供了一种噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物的制备方法，以2,4-二甲基-1,3-噻唑-5-羧酸为改性剂，并将改性获得的噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物用于固定化脂肪酶的制备，然后将固定化脂肪酶的制备用于提取生物活性物质的酶解过程中，使得活性肽具有较高的得率；且采用噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物制得的固定化脂肪酶具有良好的应用稳定性。
21、具体地，上述噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物的制备方法，包括以下步骤：
22、在壳聚糖中加入浓度为0.08-0.1g/ml的盐酸溶液，搅拌至完全溶解，获得壳聚糖溶液；然后将2,4-二甲基-1,3-噻唑-5-羧酸加入到dmf（两者质量体积比为：1g:42-50ml）中，再加入n-羟基琥珀酰亚胺和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，搅拌混合均匀后加入到壳聚糖溶液中，调节ph至5.3-5.8，室温条件下，搅拌反应20-30h，超纯水透析，冷冻干燥，获得噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物。
23、对本发明而言，上述壳聚糖与盐酸溶液的质量体积比为：1g:42-50ml。
24、对本发明而言，上述壳聚糖与2,4-二甲基-1,3-噻唑-5-羧酸的质量比为：1:1.5-2.3。
25、对本发明而言，上述n-羟基琥珀酰亚胺与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺的摩尔比为：1:0.8-1.3。
26、对本发明而言，上述壳聚糖与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺的质量比为：1:1-1.2。
27、本发明还公开了上述噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物在提取生物活性物质方面的用途。
28、本发明还公开了一种从羊胎盘中提取生物活性物质的方法，包括：将新鲜羊胎盘粉碎，加入超纯水；然后加入上述的固定化脂肪酶进行酶解处理，再加入蛋白酶继续酶解，对酶灭活，过滤，离心，纳滤，纯化，干燥，获得生物活性物质。
29、具体地，上述从羊胎盘中提取生物活性物质的方法，包括以下步骤：
30、将新鲜羊胎盘粉碎，加入超纯水；然后加入固定化脂肪酶，在45-60℃酶解处理30-50min，再加入蛋白酶，恒温继续酶解3-4.5h，然后在100-110℃对酶灭活10-20min，过滤，离心，酶解液采用纳滤膜进行纳滤处理，并采用离子过滤器纯化，浓缩，在-40℃至-48℃预冷1-1.5h，然后在真空度0.13-0.17mbar，温度-30℃至-18℃条件下干燥处理8-9h，在真空度0.18-0.23mbar，温度-15℃至-25℃条件下干燥处理2-3h，获得生物活性物质。
31、对本发明而言，上述新鲜羊胎盘与超纯水的质量体积比为：1g:4-8ml；
32、对本发明而言，上述新鲜羊胎盘与固定化脂肪酶的质量比为：1:0.01-0.02。
33、对本发明而言，上述蛋白酶包含木瓜蛋白酶。
34、对本发明而言，上述新鲜羊胎盘与蛋白酶的质量比为：1:0.015-0.025。
35、对本发明而言，上述生物活性物质包含活性肽。
36、本发明还公开了上述方法制备的生物活性物质在制备化妆品方面的用途。
37、本发明还公开一种纳滤膜的制备方法，包括：采用s-苄基-l-半胱氨酸甲酯盐酸盐与聚酰胺纳滤膜发生取代反应，获得纳滤膜。
38、本发明提供了一种纳滤膜的制备方法，采用s-苄基-l-半胱氨酸甲酯盐酸盐作为改性剂，制得的纳滤膜用于从羊胎盘中提取生物活性物质的纯化过程中，对酶解液进行纳滤处理具有良好的脱色效果。
39、具体地，上述纳滤膜的制备方法，包括以下步骤：
40、将聚酰胺纳滤膜干燥处理，然后采用正己烷洗涤聚酰胺纳滤膜，再次干燥处理，然后将s-苄基-l-半胱氨酸甲酯盐酸盐的丙酮溶液倒在聚酰胺纳滤膜表面，4-8min后，将膜在55-65℃干燥4-8min，然后将膜放入ro水中浸泡待用，获得纳滤膜。
41、对本发明而言，上述s-苄基-l-半胱氨酸甲酯盐酸盐的丙酮溶液的浓度为1.5-3wt%。
42、对本发明而言，上述聚酰胺纳滤膜表面每平方厘米倒有s-苄基-l-半胱氨酸甲酯盐酸盐的丙酮溶液0.1-0.3ml。
43、本发明还公开了上述纳滤膜在提取生物活性物质方面的用途。
44、本发明的有益效果包括：
45、本发明获得了从羊胎盘中提取生物活性物质的方法，该方法采用固定化脂肪酶对粉碎后的新鲜羊胎盘进行酶解处理，再加入蛋白酶继续酶解，对酶灭活后，提纯获得的生物活性物质具有较高的得率；且采用噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物制得的固定化脂肪酶具有良好的应用稳定性；另外本发明还采用s-苄基-l-半胱氨酸甲酯盐酸盐与聚酰胺纳滤膜发生取代反应，制得的纳滤膜用于生物活性物质的纯化过程中，具有良好的脱色效果。
46、因此，本发明提供了从羊胎盘中提取生物活性物质的方法，该方法提纯获得的生物活性物质具有较高的得率。
1.一种固定化脂肪酶，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种固定化脂肪酶，其特征在于：所述壳聚糖微球的制备方法，包括：在噻唑基团修饰的壳聚糖衍生物中加入乙酸溶液，然后加入液体石蜡和油酸山梨坦，搅拌混合，再加入戊二醛溶液，搅拌反应，冷却，洗涤，干燥，获得壳聚糖微球。
3.一种从羊胎盘中提取生物活性物质的方法，包括：将新鲜羊胎盘粉碎，加入超纯水；然后加入权利要求1-2任一项所述的固定化脂肪酶进行酶解处理，再加入蛋白酶继续酶解，对酶灭活，过滤，离心，纳滤，纯化，干燥，获得生物活性物质。
4.根据权利要求3所述的从羊胎盘中提取生物活性物质的方法，其特征在于：所述新鲜羊胎盘与固定化脂肪酶的质量比为：1:0.01-0.02。
5.根据权利要求3所述的从羊胎盘中提取生物活性物质的方法，其特征在于：所述固定化脂肪酶进行酶解处理条件为：温度45-60℃，时间30-50min。
6.根据权利要求3所述的从羊胎盘中提取生物活性物质的方法，其特征在于：所述蛋白酶包含木瓜蛋白酶。
7.根据权利要求3所述的从羊胎盘中提取生物活性物质的方法，其特征在于：所述新鲜羊胎盘与蛋白酶的质量比为：1:0.015-0.025。
8.权利要求3所述方法制备的生物活性物质在制备化妆品方面的用途。
