本发明属于植物组织培养，具体涉及一种猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法和应用。
背景技术：
1、猴耳环(archidendron clypearia(jack)benth)，为豆科含羞草亚科猴耳环属常绿乔木，生长于阳光充足、气候湿润的生长环境。作为药材树种，猴耳环药用价值极高，具有消炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多重功效，目前，猴耳环深加工产品已广泛应用于医学、食品保健、日化产品、畜牧养殖等多个方面。
2、随着猴耳环市场需求量的增加，其野生资源日益减少，而猴耳环主要采用传统的种苗繁育技术，很难满足其规模化种植和遗传改良的需要；并且，目前国内外工作者对猴耳环的快繁技术研究较少，尤其是通过愈伤组织诱导猴耳环植株再生的方式。
技术实现思路
1、本发明所解决的技术问题是提供一种猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法和应用。以猴耳环种子无菌苗根作为外植体，诱导愈伤组织并进行增殖，能够有效提高猴耳环根愈伤组织的诱导率，为猴耳环优良品种的高效繁育提供了技术支持，同时为后期猴耳环的品种改良和再生机理研究奠定基础。
2、本发明将通过以下技术方案解决上述问题：
3、本发明提供一种猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法，包括以下步骤：取猴耳环无菌苗的根系作为外植体，将其接种于诱导培养基中培养；所述诱导培养基为含有蔗糖和琼脂的ms培养基，其中添加6-苄氨基嘌呤0.4～0.6mg/l、萘乙酸0.1～0.5mg/l和赤霉素0～0.3mg/l，且ph为5.8～5.9。
4、进一步的，诱导培养条件包括：培养温度24～26℃、湿度60～80％rh、光照强度2000～3000lx以及光照周期10～12h/d。
5、进一步的，所述猴耳环无菌苗的获取方法包括：将预处理后的猴耳环种子进行消毒后，于空白培养基中培养50-60d，获得猴耳环无菌苗；优选的，无菌苗培育的培养条件包括：培养温度24～26℃、湿度60～80％rh、光照强度2000～3000lx以及光照周期10～12h/d。
6、进一步的，所述预处理步骤包括：剥去猴耳环种子的种皮，获得去皮种胚，并用清水清洗。
7、进一步的，所述消毒步骤包括：依次采用75％的酒精处理30s，0.1％的氯化汞溶液处理10～12min，0.5％的次氯酸钠处理20min。
8、进一步的，所述空白培养基为ms、1/2ms或wpm培养基中的一种。
9、进一步的，所述空白培养基为不含蔗糖和琼脂的wpm培养基，其中添加活性炭0～1.0g/l，蔗糖30g/l，琼脂5g/l。
10、进一步的，所述的猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法还包括将诱导培养基中培养出的愈伤组织转接至增殖培养基中继代增殖的步骤。
11、进一步的，所述增殖培养基为含有蔗糖和琼脂的ms培养基，其中添加6-苄氨基嘌呤1.0mg/l和萘乙酸2.0mg/l，且ph为5.8～5.9。
12、根据本发明的另一方面，本发明还提供猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法在培育猴耳环中的应用，通过利用上述方法诱导猴耳环无菌苗根愈伤组织建立快速繁殖技术体系，可培育出性状优良的高品质植株。
13、本发明的有益效果在于：本发明培育的猴耳环无菌苗枝叶茂盛，根生长旺盛，采用猴耳环无菌苗根诱导愈伤组织效率高，其诱导率高达100％，为今后诱导完整植株、实现猴耳环规模化量产奠定基础，也为猴耳环优良品种的快繁提供了技术支持。
1.一种猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：取猴耳环无菌苗的根系为外植体，将其接种于诱导培养基中培养；所述诱导培养基为含有蔗糖和琼脂的ms培养基，其中添加6-苄氨基嘌呤0.4～0.6mg/l、萘乙酸0.1～0.5mg/l和赤霉素0～0.3mg/l，且ph为5.8～5.9。
2.根据权利要求1所述的猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法，其特征在于，诱导培养条件包括：培养温度24～26℃、湿度60～80％rh、光照强度2000～3000lx以及光照周期10～12h/d。
3.根据权利要求1所述的猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述猴耳环无菌苗的获取方法包括：将预处理后的猴耳环种子进行消毒后，于空白培养基中培养50-60d，获得猴耳环无菌苗。
4.根据权利要求3所述的猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述预处理步骤包括：剥去猴耳环种子的种皮，获得去皮种胚，并用清水清洗。
5.根据权利要求3所述的猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述消毒步骤包括：依次采用75％的酒精处理30s，0.1％的氯化汞溶液处理10～12min，0.5％的次氯酸钠处理20min。
6.根据权利要求3所述的猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述空白培养基为ms、1/2ms或wpm培养基中的一种。
7.根据权利要求6所述的猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述空白培养基为不含蔗糖和琼脂的wpm培养基，其中添加活性炭0～1.0g/l，蔗糖30g/l，琼脂5g/l。
8.根据权利要求1所述的猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法，其特征在于，包括将诱导培养基中培养出的愈伤组织转接至增殖培养基中继代增殖的步骤。
9.根据权利要求8所述的猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述增殖培养基为含蔗糖和琼脂的ms培养基，其中添加6-苄氨基嘌呤1.0mg/l和萘乙酸2.0mg/l，且ph为5.8～5.9。
10.一种如权利要求1～9任一项所述猴耳环无菌苗根愈伤组织的诱导方法在培育猴耳环中的应用。
