本发明属于中药药材质量控制领域，特别涉及牡丹果荚药材质量检测方法。
背景技术：
1、牡丹(paeonia ostii t.hong﹠j.x.zhang)为芍药科芍药属植物，其种类繁多，花色各异，集观赏、药用和食用价值于一体的落叶灌木，其果实为星形，一般有4～7个豆荚组成，除去豆荚里面种籽后即为果荚或种荚。研究报道从牡丹果荚含有黄酮、多糖、木纤维等类物质，从中分离到没食子酸、芍药苷、芹菜素-7-葡萄糖苷等。芍药苷具有抗肿瘤、抗氧化、抗抑郁等作用；前期研究中检出鞣花酸，其有抗疟、抗癌、抗癌茨海默等作用；没食子酸及其衍生物有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗炎等作用。我国牡丹种植基地众多如陕西合阳、蒲城、旬阳、安徽亳州、河南洛阳、云南等地，资源极为丰富，但作为油用牡丹的副产物被大量丢弃影响生态环境。尽管牡丹果荚含有有丰富的活性成分，但作为药材用途缺乏科学的评判标准；因此，迫切需要建立一种全面科学的牡丹果荚药材标准来评价其质量，充分利用使其变废为宝。
技术实现思路
1、本发明提供了一种牡丹果荚药材质量检测方法，建立了操作简便、专属性强、重复性好的没食子酸tlc鉴别方法，与具有良好重复性与稳定性的12种成分含量测定方法，为该药材质量标准的制定及牡丹果荚资源的开发利用提供科学依据。
2、为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
3、本发明提供了一种牡丹果荚药材质量检测方法，所述质量检测方法包括采用高效液相色谱法测定牡丹果荚药材中没食子酸、没食子酸甲酯、羟基芍药苷、秦皮乙素、咖啡酸、芍药内酯苷、原花青素b2、芍药苷、对香豆酸、苯甲酸、鞣花酸、1,2,3,6-四-o-没食子酰-β-d-葡萄糖的含量；
4、高效液相色谱法的色谱柱为shimpack scepter c18，流动相以乙腈为流动相a，以0.1％磷酸水溶液为流动相b，梯度洗脱程序见下表：
5、
6、
7、检测波长见下表：
8、 时间(min) 检测波长(nm) 0～25 320 25～81 260 81～87 240 87～104 280 104～130 254
9、柱温为25℃，流速为1.0ml/min，进样量为10μl，理论塔板数按鞣花酸峰计算不低于5000。
10、在以上技术方案中，所述检测方法还包括采用薄层色谱法鉴别牡丹果荚药材中没食子酸，具体为：取供试品2g，加无水乙醇100ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，滤过，滤液用60～90℃石油醚振摇提取2次，每次30ml，弃去石油醚液，水液再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；同法制备阴性对照样品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以体积百分比比例10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，供试品即为合格品。
11、在以上技术方案中，采用高效液相色谱法测定牡丹果荚药材中没食子酸、没食子酸甲酯、羟基芍药苷、秦皮乙素、咖啡酸、芍药内酯苷、原花青素b2、芍药苷、对香豆酸、苯甲酸、鞣花酸、1,2,3,6-四-o-没食子酰-β-d-葡萄糖的含量的具体方法为：
12、(1)混合对照品溶液的制备：分别称没食子酸、没食子酸甲酯、羟基芍药苷、秦皮乙素、咖啡酸、芍药内酯苷、原花青素b2、芍药苷、对香豆酸、苯甲酸、鞣花酸、1,2,3,6-四-o-没食子酰-β-d-葡萄糖对照品适量，加甲醇制成每1ml含没食子酸259.70μg、没食子酸甲酯78.40μg、羟基芍药苷98.00μg、秦皮乙素237.55μg、咖啡酸98.00μg、芍药内酯苷220.50μg、原花青素b2196.00μg、芍药苷176.40μg、对香豆酸107.80μg、苯甲酸74.40μg、鞣花酸281.75μg、1,2,3,6-四-o-没食子酰-β-d-葡萄糖107.80μg的混合对照品溶液；
13、(2)供试品溶液的制备：取供试品粉碎，称取1g，精密称定，置50ml具塞锥形瓶中，加入70％乙醇50ml，密塞，称定重量，功率300w、频率50khz超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
14、(3)分别吸取混合对照品溶液和供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，即得。
15、在以上技术方案中，所述检测方法还包括采用生物显微镜观察法对果荚药材粉末进行鉴别，具体为：取供试品粉碎，取少许粉末置载玻片上，滴加水合氯醛1-2滴，盖上盖玻片；在酒精灯上加热使之透化，在显微镜下进行观察，观测到簇晶、导管、导管和非腺毛，供试品即为合格品。
16、在以上技术方案中，所述检测方法还包括依据《中国药典》法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物的含量。
17、在以上技术方案中，供试品中没食子酸、没食子酸甲酯、羟基芍药苷、秦皮乙素、咖啡酸、芍药内酯苷、原花青素b2、芍药苷、对香豆酸、苯甲酸、鞣花酸、1,2,3,6-四-o-没食子酰-β-d-葡萄糖的含量符合下表：
18、 成分 含量(≥，mg/g) 没食子酸 4.0 没食子酸甲酯 0.1 羟基芍药苷 0.1 秦皮乙素 0.5 咖啡酸 0.6 芍药内酯苷 0.50 原花青素b2 0.25 芍药苷 1.0 对香豆酸 0.04 苯甲酸 0.85 鞣花酸 6.0 1,2,3,6-四-o-没食子酰-β-d-葡萄糖 0.1
19、供试品即为合格品。
20、在以上技术方案中，水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物的质量占比符合下表：
21、 水分/％ 浸出物/％ 总灰分/％ 酸不溶性灰分/％ ≤13 ≥20 ≤15 ≤1.0
22、供试品即为合格品。
23、本发明的有益效果在于：本发明采用高效液相色谱法(hplc)测定牡丹果荚药材中没食子酸、鞣花酸等12种成分的含量；采用薄层色谱法(tlc)鉴别牡丹果荚药材中没食子酸；依据2020年版《中国药典》法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物的含量；采用生物显微镜观察法对果荚药材粉末进行鉴别。本发明建立了专属性强与重复性好的药材中没食子酸的tlc鉴别方法；建立了12种成分成分含量测定方法：12种成分在相应范围内线性系数良好，平均加样回收率为95％～99％与rsd均小2.0％；12批药材中水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物的质量分数分别为9.98％～11.07％、10.35％-12.35％、0.32％-0.41％、32.27％～33.55％；果荚粉末观测到簇晶、导管和非腺毛。本发明所建立的牡丹果荚药材质量标准可用于该药材的质量控制。
1.牡丹果荚药材质量检测方法，其特征在于：所述质量检测方法包括采用高效液相色谱法测定牡丹果荚药材中没食子酸、没食子酸甲酯、羟基芍药苷、秦皮乙素、咖啡酸、芍药内酯苷、原花青素b2、芍药苷、对香豆酸、苯甲酸、鞣花酸、1,2,3,6-四-o-没食子酰-β-d-葡萄糖的含量；
2.根据权利要求1所述质量检测方法，其特征在于：所述检测方法还包括采用薄层色谱法鉴别牡丹果荚药材中没食子酸，具体为：取供试品2g，加无水乙醇100ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，滤过，滤液用60～90℃石油醚振摇提取2次，每次30ml，弃去石油醚液，水液再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；同法制备阴性对照样品溶液；另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以体积百分比比例10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，供试品即为合格品。
3.根据权利要求1所述质量检测方法，其特征在于：采用高效液相色谱法测定牡丹果荚药材中没食子酸、没食子酸甲酯、羟基芍药苷、秦皮乙素、咖啡酸、芍药内酯苷、原花青素b2、芍药苷、对香豆酸、苯甲酸、鞣花酸、1,2,3,6-四-o-没食子酰-β-d-葡萄糖的含量的具体方法为：
4.根据权利要求1所述质量检测方法，其特征在于：所述检测方法还包括采用生物显微镜观察法对果荚药材粉末进行鉴别，具体为：取供试品粉碎，取少许粉末置载玻片上，滴加水合氯醛1-2滴，盖上盖玻片；在酒精灯上加热使之透化，在显微镜下进行观察，观测到簇晶、导管、导管和非腺毛，供试品即为合格品。
5.根据权利要求1所述质量检测方法，其特征在于：所述检测方法还包括依据《中国药典》法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物的含量。
6.根据权利要求1所述质量检测方法，其特征在于：供试品中没食子酸、没食子酸甲酯、羟基芍药苷、秦皮乙素、咖啡酸、芍药内酯苷、原花青素b2、芍药苷、对香豆酸、苯甲酸、鞣花酸、1,2,3,6-四-o-没食子酰-β-d-葡萄糖的含量符合下表：
7.根据权利要求5所述质量检测方法，其特征在于：水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物的质量占比符合下表：
