本发明涉及柑橘黄酮糖苷的制备，尤其涉及一种高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法。
背景技术：
1、柑橘黄酮如橙皮苷和柚皮苷，具有抗氧化、强化毛细血管、改善血管通透性、调节胆固醇等功效，但较差的水溶性和生物活性限制了柑橘黄酮的应用范围和功效。而对柑橘黄酮进行糖基化修饰，能够有效提升其水溶性和生物活性，在食品、药品和日化品领域有着广阔的应用前景。如橙皮苷的糖基化修饰产物葡萄糖基橙皮苷、柚皮苷的糖基化修饰产物葡萄糖基柚皮苷，可以作为高端化妆品原料应用于面霜、眼霜、爽肤水等护肤产品中，具有较高的经济价值。
2、目前，可通过环糊精糖基转移酶催化糊精和柑橘黄酮分子之间的糖基转移反应，制备葡萄糖基橙皮苷和葡萄糖基柚皮苷。但是，如图1所示，环糊精糖基转移酶的催化过程具有可逆性和产物多样性的特征，导致催化产物中除葡萄糖基柑橘黄酮以外还存在未被糖基化修饰的柑橘黄酮底物和连接了多个葡萄糖基的多糖基柑橘黄酮。此外，底物柑橘黄酮水溶性和生物活性均较差，在催化过程中易与葡萄糖基柑橘黄酮形成包含物，对产品的稳定性和生物活性造成影响。而且多糖基柑橘黄酮虽然具备较好的水溶性，但多余的葡萄糖基不具备生物活性，会导致单位重量产品的生物活性下降。因此制备高纯度的柑橘黄酮糖苷，对提升柑橘黄酮类产品的稳定性和生物活性具有重要意义。
技术实现思路
1、为解决上述问题，本发明提供了一种高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法，通过该方法制备得到的柑橘黄酮如葡萄糖基橙皮苷和葡萄糖基柚皮苷，具有较高的纯度。
2、本发明解决上述问题的技术方案如下：
3、一种高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法，包括以下步骤：
4、s1、以柑橘黄酮和糊精为底物，以环糊精糖基转移酶作为催化剂，获得含柑橘黄酮、单糖基柑橘黄酮、多糖基柑橘黄酮的催化液；
5、s2、向步骤s1的催化液中加入糖化酶，得到含柑橘黄酮、单糖基柑橘黄酮的催化液；
6、s3、向步骤s2的催化液中加入β-糖苷酶，得到处理后催化液；
7、s4、将步骤s3的处理后催化液用大孔吸附树脂分离，得到高纯度柑橘黄酮糖苷。
8、作为优选，所述柑橘黄酮为橙皮苷/柚皮苷，所述糊精为麦芽糊精，所述高纯度柑橘黄酮糖苷为高纯度葡萄糖基橙皮苷/葡萄糖基柚皮苷。
9、作为优选，所述环糊精糖基转移酶来源于嗜碱芽孢杆菌(bacillus sp.)，所述环糊精糖基转移酶的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述环糊精糖基转移酶的氨基酸序列如seq id no.2所示。
10、作为优选，所述糖化酶来源于米曲霉(aspergillus oryzae)。
11、作为优选，所述β-糖苷酶来源于焦热球菌(pyrococcus furiosus)，所述β-糖苷酶的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述β-糖苷酶的氨基酸序列如seq id no.4所示。
12、作为优选，所述大孔吸附树脂选自型号为xr919c、xad-4、xad-16、hp20中的一种或多种。
13、作为优选，步骤s1中温度为30～50℃，ph为8.5～11.5，柑橘黄酮质量浓度为3～7％，糊精质量浓度为6～14％，含所述环糊精糖基转移酶的湿菌体质量浓度为0.5～1.5％。
14、作为优选，步骤s2中温度为35～55℃，ph为2～6，含所述糖化酶的发酵产物的质量浓度为1％。
15、作为优选，步骤s3中温度为70～110℃，ph为5.5～8.5，含所述β-糖苷酶的湿菌体的质量浓度为1～3％。
16、本发明的另一目的，是提供通过上述高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法制备得到的高纯度柑橘黄酮糖苷。
17、本发明具有以下有益效果：
18、本发明采用环糊精糖基转移酶催化柑橘黄酮与糊精之间的糖基转移过程，之后采用糖化酶选择性降解多糖基柑橘黄酮至单糖基柑橘黄酮，随后采用β-糖苷酶选择性降解反应液中未转化的柑橘黄酮原料，最后通过大孔吸附树脂分离溶液中的单糖基柑橘黄酮。通过该方法制备得到的柑橘黄酮糖苷如葡萄糖基橙皮苷和葡萄糖基柚皮苷，具有较高的纯度，纯度可以达到95％以上。
1.一种高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法，其特征在于，所述柑橘黄酮为橙皮苷/柚皮苷，所述糊精为麦芽糊精，所述高纯度柑橘黄酮糖苷为高纯度葡萄糖基橙皮苷/葡萄糖基柚皮苷。
3.根据权利要求1所述的一种高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法，其特征在于，所述环糊精糖基转移酶来源于嗜碱芽孢杆菌(bacillus sp.)，所述环糊精糖基转移酶的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述环糊精糖基转移酶的氨基酸序列如seq id no.2所示。
4.根据权利要求1所述的一种高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法，其特征在于，所述糖化酶来源于米曲霉(aspergillus oryzae)。
5.根据权利要求1所述的一种高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法，其特征在于，所述β-糖苷酶来源于焦热球菌(pyrococcusfuriosus)，所述β-糖苷酶的核苷酸序列如seq id no.3所示，所述β-糖苷酶的氨基酸序列如seq id no.4所示。
6.根据权利要求1所述的一种高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂选自型号为xr919c、xad-4、xad-16、hp20中的一种或多种。
7.根据权利要求1所述的一种高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法，其特征在于，步骤s1中温度为30～50℃，ph为8.5～11.5，柑橘黄酮质量浓度为3～7％，糊精质量浓度为6～14％，含所述环糊精糖基转移酶的湿菌体质量浓度为0.5～1.5％。
8.根据权利要求1所述的一种高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法，其特征在于，步骤s2中温度为35～55℃，ph为2～6，含所述糖化酶的发酵产物的质量浓度为1％。
9.根据权利要求5所述的一种高纯度柑橘黄酮糖苷的制备方法，其特征在于，步骤s3中温度为70～110℃，ph为5.5～8.5，含所述β-糖苷酶的湿菌体质量浓度为1～3％。
10.权利要求1～9任一项所述的方法制备得到的高纯度柑橘黄酮糖苷。
