本发明公开涉及新型前列腺特异性膜抗原(抗psma)抗体和抗体药物缀合物。更特别地，本发明公开涉及用于使用抗psma抗体药物缀合物抑制、预防或治疗psma相关疾病或癌症的方法和组合物。
背景技术：
0、发明背景
1、前列腺癌是在发达国家男性中最常诊断的非皮肤相关恶性肿瘤。据估计1/6男性将被诊断有前列腺癌。在使用基于血清的标志物诸如前列腺特异性抗原(psa)之后，对前列腺癌的诊断已改进。此外，前列腺肿瘤相关抗原为肿瘤成像、诊断和靶向疗法提供了靶标。前列腺特异性膜抗原(psma)作为一种前列腺肿瘤相关标志物是这种靶标。psma在雄激素非依赖性前列腺癌中显著过度表达。psma的过度表达与高肿瘤等级；疾病进展和复发的高风险相关联(perner等,human pathology,2007)。psma的高表达已与负性临床预后和显著更短存活期相关联。在原发性疾病部位中以及在转移性部位诸如骨和淋巴结中均观察到psma表达(olson和israel,frontiers in bioscience,2014)。
2、尽管多年来已探求若干靶向疗法，但涉及放射疗法的那些疗法已朝向临床开发进展最多，因为它们显示功效与可接受的可耐受性两者。对涉及靶向递送非放射性细胞毒性剂的模态的其他临床开发已取得有限的成功。
3、鉴于psma的物理性质以及它的表达样式与前列腺癌进展相关，psma是抗体-药物缀合物的开发中的一种卓越靶标。抗体-药物缀合物(adc)是一类允许向靶标细胞诸如癌细胞靶向递送细胞毒性剂的强力治疗性构建体。由于具有靶向功能，所以相较于相同全身性递送的药剂，这些化合物显示高得多的治疗指数。adc已以完整抗体或抗体片段诸如scfv形式加以开发。通过在生理条件下稳定，但一旦在靶标细胞内部即可被裂解的接头使抗体或片段连接于一个或多个拷贝的药物。仅迄今为止，仅有几种adc已被核准供治疗性使用，包括用于aml的吉妥单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)(后来从市场退出)、用于alcl和霍奇金淋巴瘤(hodgkin lymphoma)的布妥昔单抗维多汀(brentuximab vedotin)、以及用于her2阳性转移性乳腺癌的曲妥珠单抗埃姆坦辛(trastuzumab emtansine)(verma等,nengl j med 367:1783-91,2012；bross等,clin cancer res 7:1490-96,2001；francisco等,blood 102:1458-65,2003)。靶向各种因素的许多adc正处于临床试验中。然而，靶向psma的adc由于缺乏治疗指数和毒性而面临挑战。
4、因此，存在对靶向psma抗原和相关癌症的更好或改进治疗剂的需要。为克服本领域中的这个缺陷，本发明公开在本文中提供了新型抗psma抗体、变体和抗体药物缀合物组合物。
技术实现思路
1、本发明公开提供了抗psma抗体、抗体变体和抗体药物缀合物组合物。在其他实施方案中，本发明公开提供了包含所述抗psma抗体的抗体药物缀合物(adc)。
2、本发明公开提供了包含seq id no:1至17的抗psma抗体、抗体变体和抗体组合物。在一些实施方案中，本发明公开提供了包含seq id no:1至17的抗体药物缀合物(adc)。
3、本发明公开提供了由seq id no:1至17组成的抗psma抗体、抗体变体和抗体组合物。在一些实施方案中，本发明公开提供了由seq id no:1至17组成的抗体药物缀合物(adc)。
4、本发明提供了一种包含重链和轻链的抗前列腺特异性膜抗原抗体(抗psma)变体，其中重链序列选自seq id no:8、10、12、14或16的组，并且轻链序列选自seq id no:9、11、13、15或17的组。在一些实施方案中，本发明提供了一种包含seq id no:8、10、12、14或16的重链序列的抗前列腺特异性膜抗原抗体(抗psma)变体。在一些实施方案中，本发明提供了一种包含seq id no:9、11、13、15或17的轻链序列的抗前列腺特异性膜抗原抗体(抗psma)变体。
5、在其他实施方案中，本发明提供了一种由seq id no:8、10、12、14或16的重链序列组成的抗前列腺特异性膜抗原抗体(抗psma)变体。在其他实施方案中，本发明提供了一种由seq id no:9、11、13、15或17的轻链序列组成的抗前列腺特异性膜抗原抗体(抗psma)变体。
6、在另一实施方案中，抗psma抗体变体包含含有选自seq id no:1或6的组的可变序列区的重链。在另一实施方案中，抗psma抗体变体包含含有选自seq id no:2-5或7的组的可变区的轻链序列。在另一实施方案中，抗psma抗体重链变体由seq id no:1或6的可变区序列组成。在另一实施方案中，抗psma抗体轻链变体由选自seq id no:2-5或7的组的可变区组成。
7、在另一实施方案中，抗psma抗体变体包含并入抗体的重链或轻链序列中的非天然氨基酸。在本发明的另一实施方案中，抗体包括具有一个或多个在抗体重链或轻链中的一个或多个位置处进行取代的非天然编码氨基酸的抗psma抗体变体。在一些实施方案中，psma抗体变体中的重链或轻链包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非天然编码氨基酸。在其他实施方案中，psma抗体变体中的重链或轻链序列在抗体重链或轻链中的一个或多个位置处包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个非天然编码氨基酸。在一个实施方案中，抗psma抗体重链序列包含非天然编码氨基酸。在本发明的另一实施方案中，抗psma抗体变体包含如表4中呈现的重链或轻链序列。
8、在本发明的其他实施方案中，抗体是包含来自seq id no:9、11、13、15或17的轻链序列的抗psma抗体变体，其中非天然编码氨基酸在具有高表面可及性的位置和/或对于抗体来说将是电荷中性的位点处进行取代。在本发明的其他实施方案中，抗体是包含来自seqid no:8、10、12、14或16的重链序列的抗psma抗体变体，其中非天然编码氨基酸在具有高表面可及性的位置和/或对于抗体来说将是电荷中性的位点处进行取代。
9、在一个实施方案中，本发明提供了一种抗psma抗体药物缀合物(adc或抗psmaadc)，其中所述抗体是包含轻链和重链序列的抗psma抗体。在本发明的其他实施方案中，抗psma adc包含来自seq id no:9、11、13、15或17的轻链和来自seq id no:8、10、12、14或16的重链。在本发明的一个实施方案中，抗psma adc包含一个或多个在抗体重链或轻链中的一个或多个位置处进行取代的非天然编码氨基酸。
10、在另一实施方案中，本发明提供了一种包含重链seq.id.no:8和轻链seq.id.no:9的抗psma adc。在另一实施方案中，本发明提供了一种包含seq id no:12和seq id no:13的抗psma adc。在另一实施方案中，本发明提供了一种包含seq id no:14和seq id no:15的抗psma adc。在另一实施方案中，本发明提供了一种包含seq id no:16和seq id no:17的抗psma adc。
11、在一些实施方案中，本公开的抗体、变体或组合物可为结合psma受体的抗体、变体或组合物。在本发明的其他实施方案中，抗体、变体或组合物可为结合psma受体的细胞外表面的抗体、变体或组合物。在本发明的另一实施方案中，公开的抗体、变体或组合物可为结合psma二聚体的抗体、变体或组合物。在一些实施方案中，本公开的抗体、变体或组合物可为具有来自j591的cdr的抗体、变体或组合物，所述cdr移植于可变区的框架区上。在其他实施方案中，本发明公开的抗体、变体或组合物可为具有非天然编码氨基酸的抗体、变体或组合物。在一些实施方案中，抗体、变体或组合物可为由本发明公开中其他地方的实施方案中的超过一者描述的抗体、变体或组合物。在一些实施方案中，本文公开的一种或多种抗体、抗体变体或抗体组合物可为完全人源化的。在其他实施方案中，本文公开的一种或多种抗体、抗体变体或抗体组合物可为嵌合的。在本发明的一些实施方案中，抗体可为是全长抗体(可变区+fc区)、fab、双特异性抗体、fab二聚体、双特异性fab、三特异性fab、双特异性t细胞衔接物、双亲和力重靶向抗体、igg1/igg3双特异性抗体、微型双功能抗体、双特异性微型双功能抗体、scfv-fc、微型抗体的抗体。
12、在其他实施方案中，抗psma抗体、抗体变体或抗体组合物并有包含羰基、氨基氧基、肼基团、酰肼基团、氨基脲基团、叠氮基团或炔基团的非天然编码氨基酸。在本发明的一个实施方案中，非天然编码氨基酸包含氨基氧基。在其他实施方案中，非天然编码氨基酸是对乙酰基苯丙氨酸、对硝基苯丙氨酸、对磺基酪氨酸、对羧基苯丙氨酸、邻硝基苯丙氨酸、间硝基苯丙氨酸、对硼羰基苯丙氨酸、邻硼羰基苯丙氨酸、间硼羰基苯丙氨酸、对氨基苯丙氨酸、邻氨基苯丙氨酸、间氨基苯丙氨酸、对酰基苯丙氨酸、邻酰基苯丙氨酸、间酰基苯丙氨酸、p-ome苯丙氨酸、o-ome苯丙氨酸、m-ome苯丙氨酸、对磺基苯丙氨酸、邻磺基苯丙氨酸、间磺基苯丙氨酸、5-硝基his、3-硝基tyr、2-硝基tyr、硝基取代的leu、硝基取代的his、硝基取代的de、硝基取代的trp、2-硝基trp、4-硝基trp、5-硝基trp、6-硝基trp、7-硝基trp、3-氨基酪氨酸、2-氨基酪氨酸、o-磺基酪氨酸、2-磺氧基苯丙氨酸、3-磺氧基苯丙氨酸、邻羧基苯丙氨酸、间羧基苯丙氨酸、对乙酰基-l-苯丙氨酸、对炔丙基-苯丙氨酸、o-甲基-l-酪氨酸、l-3-(2-萘基)丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、o-4-烯丙基-l-酪氨酸、4-丙基-l-酪氨酸、三-o-乙酰基-glcnacβ-丝氨酸、l-多巴(l-dopa)、氟化苯丙氨酸、异丙基-l-苯丙氨酸、对叠氮基-l-苯丙氨酸、对酰基-l-苯丙氨酸、对苯甲酰基-l-苯丙氨酸、l-磷酸丝氨酸、膦酰基丝氨酸、膦酰基酪氨酸、对碘-苯丙氨酸、对溴苯丙氨酸、对氨基-l-苯丙氨酸、异丙基-l-苯丙氨酸或对炔丙基氧基-苯丙氨酸。在本发明的另一实施方案中，非天然氨基酸是对乙酰基苯丙氨酸。
13、在本发明的其他实施方案中，抗psma抗体变体是单克隆抗体、人源化抗体或嵌合抗体。在一个实施方案中，抗psma人源化抗体变体包含选自seq idno:8、10、12或14的组的重链序列和选自seq id no:9、11、13或15的组的轻链序列。在另一实施方案中，抗psma嵌合抗体变体包含seq id no:16的重链序列和seq id no:17的轻链序列。
14、在其他实施方案中，本发明提供了包含共价缀合于毒素、有效载荷或药物-接头的抗psma抗体变体的抗体药物缀合物的一种组合物。在一个实施方案中，毒素、有效载荷或药物-接头包含细胞毒性剂。在一个实施方案中，细胞毒性剂是多拉司他汀(dolastatin)、多拉司他汀衍生物或它们的类似物。在其他实施方案中，本发明提供了包含共价缀合于药物-接头的抗psma抗体变体的抗体药物缀合物的一种组合物，其中缀合通过抗体中的非天然编码氨基酸来发生。在其他实施方案中，本发明提供了包含共价缀合于一个或多个多拉司他汀的具有seq id no:1至17中的任何一个的抗psma抗体变体的抗体药物缀合物的一种组合物，其中缀合通过抗体中的非天然编码氨基酸来发生。在本发明的另一实施方案中提供了包含共价缀合于一个或多个多拉司他汀的具有seq id no:8至17中的任何一个的抗psma抗体变体的抗体药物缀合物的一种组合物，其中缀合通过抗体中的非天然编码氨基酸来发生。在本发明的一个实施方案中提供了包含共价缀合于一个或多个多拉司他汀的seq idno:8、10、12、14或16的抗psma抗体重链序列变体的抗体药物缀合物的一种组合物，其中缀合通过抗体中的非天然编码氨基酸来发生。在本发明的一个其他实施方案中提供了包含共价缀合于一个或多个多拉司他汀的seq id no:9、11、13、15或17的抗psma抗体轻链变体的抗体药物缀合物的一种组合物，其中缀合通过抗体中的非天然编码氨基酸来发生。在另一实施方案中，抗体共价缀合于至少2个多拉司他汀。在一个实施方案中，组合物包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种多拉司他汀衍生物或类似物。在一个实施方案中，组合物包含多拉司他汀衍生物或是多拉司他汀类似物。在另一实施方案中，多拉司他汀衍生物或类似物是单甲基澳瑞他汀(monomethyl auristatin)，所述单甲基澳瑞他汀是单甲基澳瑞他汀f(mmaf)或单甲基澳瑞他汀e(mmae)。在其他实施方案中，一个或多个多拉司他汀是非可裂解mmaf、非可裂解mmae、可裂解mmaf、可裂解mmae、短的可裂解mmaf或短的可裂解mmae。在本发明的另一实施方案中，抗体连接于接头、聚合物或生物活性分子。在一些实施方案中，接头是聚乙二醇(peg)。在其他实施方案中，接头是分支或线性聚乙二醇。在本发明的其他实施方案中，抗psma变体可为peg化的。在本发明的其他实施方案中，抗psma变体可在非天然编码氨基酸上peg化。本发明的抗psma抗体可用约5kda peg、约10kda peg、约20kda peg、约30kda peg、约40kda peg或更大分子量的peg加以peg化。聚(乙二醇)分子可具有在约0.1kda与约100kda之间的分子量。聚(乙二醇)分子可具有在0.1kda与50kda，20kda与40kda之间，以及是25kda与35kda之间的任何整数值的分子量。聚(乙二醇)分子可具有约30kda的分子量。聚(乙二醇)分子可为具有在0.1kda与50kda，20kda与40kda之间，以及是25kda与35kda之间的任何整数值的分子量的线性分子。聚(乙二醇)分子可为具有30kda的分子量的线性分子。聚(乙二醇)分子可具有能够与合成氨基酸上的乙酰基反应的氨基氧基。聚(乙二醇)分子可为能够与非天然编码氨基酸诸如但不限于对乙酰基苯丙氨酸的乙酰基侧链形成肟键的30kda经氨基氧基活化线性peg。
15、在一个实施方案中，本发明提供了抗体药物缀合物，所述抗体药物缀合物包含缀合于至少一个选自表1-表3的药物-接头的包含选自seq id no:8、10、12、14或16的重链序列和选自seq id no:9、11、13、15的轻链序列的人源化抗psma抗体，其中缀合通过并入所述重链序列中的非天然编码氨基酸来发生。在一些实施方案中，药物-接头包含细胞毒性剂。细胞毒性剂是多拉司他汀、多拉司他汀衍生物或它们的类似物。在一个实施方案中，多拉司他汀、多拉司他汀衍生物或类似物是选自单甲基澳瑞他汀f(mmaf)或单甲基澳瑞他汀e(mmae)的单甲基澳瑞他汀。在另一实施方案中，单甲基澳瑞他汀是可裂解mmae或mmaf、非可裂解mmae或mmaf、短的可裂解mmae或mmaf。
16、在一个实施方案中，本发明提供了一种用于降低或抑制psma表达性癌或癌细胞的肿瘤生长或进展的方法，所述方法包括使所述psma表达性癌或癌细胞与有效量的抗体-药物缀合物接触。抗体药物缀合物包含缀合于至少一个选自表1-表3的药物-接头的包含选自seq id no:8、10、12、14或16的重链序列和选自seq id no:9、11、13、15的轻链序列的人源化抗psma抗体，其中缀合通过并入所述重链序列中的非天然编码氨基酸来发生。在另一实施方案中，本发明提供了一种还包括使psma表达性癌或癌细胞与有效量的治疗剂接触的方法。在另一实施方案中，治疗剂是化学治疗剂、激素剂、抗肿瘤剂、免疫刺激剂、免疫调节剂、皮质类固醇(corticosteroid)或它们的组合。在一个实施方案中，激素剂是恩杂鲁胺(enzalutamide)。
17、在其他实施方案中，本发明的抗psma adc可与一种或多种免疫刺激剂一起施用以诱导或增强免疫应答。所述免疫刺激剂包括但不限于il-2、免疫刺激性寡核苷酸(例如cpg基序)、干扰素、肿瘤坏死因子α。在其他实施方案中，本发明的抗psma adc可与一种或多种免疫调节剂一起施用，所述免疫调节剂包括但不限于细胞因子、趋化因子、佐剂或它们的组合。
18、在其他实施方案中，本发明提供了一种抑制受试者中的肿瘤生长或进展的方法，所述方法包括向所述受试者提供治疗有效量的本发明的psma抗体药物缀合物。在另一实施方案中，本发明提供了一种治疗患有前列腺癌的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者提供治疗有效量的本公开组合物。
19、在一个实施方案中，本发明提供了一种治疗具有psma表达性癌细胞或癌的受试者的方法，所述方法包括：向所述受试者施用有效量的抗体-药物缀合物以治疗所述psma表达性癌或癌细胞，其中所述抗体-药物缀合物包含缀合于药物-接头的包含本文公开的重链序列和轻链序列的psma抗体，所述缀合通过并入所述抗体中的非天然编码氨基酸来发生；并且其中所述药物-接头选自表1-表3。在另一实施方案中，一种治疗患有psma相关疾病或癌症的受试者的方法包括向所述受试者提供治疗有效量的抗psma抗体药物缀合物和治疗剂。治疗剂是化学治疗剂、激素剂、抗肿瘤剂、免疫刺激剂、免疫调节剂、皮质类固醇或它们的组合。治疗剂可在本发明的抗psma adc之前、之后、或联合加以提供。
20、在另一实施方案中，本发明公开提供了一种包含抗psma抗体变体和至少一种药学上可接受的佐剂、粘合剂、缓冲剂、载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。一种药物组合物包含本发明的抗体药物缀合物和至少一种药学上可接受的佐剂、粘合剂、缓冲剂、载体、稀释剂或赋形剂。药物组合物还包含治疗剂。在一个实施方案中，本发明提供了一种用于制造以及用于治疗有需要的受试者的癌症的药剂。
21、在另一实施方案中，本发明提供了一种编码seq id no:1-17中的任何一个的核酸。在一个实施方案中，本发明提供了一种包含seq id no:1-17的核酸的载体。
22、应了解本文所述的方法和组合物不限于本文所述的特定方法、方案、细胞系、构建体和试剂，因此可变化。还应了解本文所用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并且不意图限制本文所述的方法和组合物的将仅由随附权利要求限制的范围。
23、除非上下文另外明确指示，否则如本文以及随附权利要求中所用，单数形式“一个(种)(a/an)”和“这个(种)(the)”包括复数个(种)指示物。
24、除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与为本文所述的本发明所属领域中的普通技术人员通常理解相同的含义。与本文所述的方法、材料等类似或等同的各种方法、材料等可用于实施或测试本文所述的本发明。
25、本文提及的所有出版物和专利都出于描述和公开例如描述于出版物中，可与当前描述的本发明关联使用的化学、化学合成、组合物和其他方法的目的以引用的方式整体并入本文。本文讨论的出版物仅由于它们的公开内容在本技术的提交日期之前而加以提供。
26、在本公开的实施方案中提供了新型抗psma氨基酸序列。术语“氨基酸”是指天然存在的氨基酸和非天然(non-natural/unnatural)氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然编码氨基酸是20种常见氨基酸(丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸)以及吡咯赖氨酸和硒代半胱氨酸。氨基酸类似物是指与天然存在的氨基酸具有相同的基本化学结构的化合物，仅举例来说，α-碳结合于氢、羧基、氨基和功能性r基团。所述类似物可具有经修饰r基团(举例来说，正亮氨酸)或可具有经修饰肽骨架，但仍然保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸类似物的非限制性实例包括高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。氨基酸在本文中可通过它们的名称、它们的通常已知的三字母符号或通过由iupac-iub生物化学命名委员会推荐的单字母符号来提及。另外，核苷酸可通过它们的通常接受的单字母代码来提及。
27、“氨基或羧基末端修饰基团”分别是指可连接于末端胺基团或末端羧基的任何分子。举例来说，所述末端胺基团或末端羧基可在聚合分子的末端，其中所述聚合分子包括但不限于多肽、多核苷酸和多糖。末端修饰基团包括但不限于各种水溶性聚合物、肽或蛋白质。仅举例来说，末端修饰基团包括聚乙二醇或血清白蛋白。末端修饰基团可用于改进聚合分子的治疗特征，包括但不限于使肽、多肽或蛋白质的血清半衰期增加。
28、在一些实施方案中，本发明公开提供了新型抗psma抗体和抗体变体。术语“抗体”在本文中是指由实质上由抗体基因的全部或一部分编码的一个或多个多肽组成的蛋白质。免疫球蛋白基因包括但不限于κ、λ、α、γ(igg1、igg2、igg3和igg4)、δ、ε和μ恒定区基因，以及数万种免疫球蛋白可变区基因。在本文中，抗体还意图包括全长抗体和抗体片段，并且包括天然地存在于任何生物体中的抗体、抗体变体、经工程改造抗体和抗体片段。在本文中，抗体还意图包括完整抗体、单克隆抗体或多克隆抗体。在本文中，抗体还涵盖多特异性抗体和/或双特异性抗体。本发明的抗体包括人抗体。人抗体通常由各自包含可变区和恒定区的两个轻链和两个重链构成。轻链可变区包含由框架区侧接的3个cdr，在本文中标识为cdrl1、cdrl2和cdrl3。重链可变区包含由框架区侧接的3个cdr，在本文中标识为cdrh1、cdrh2和cdrh3。
29、术语“抗体片段”在本文中是指抗体的除全长形式以外的任何形式。抗体片段在本文中包括是存在于全长抗体内的较小组分的抗体，以及已被工程改造的抗体，诸如抗体变体。抗体片段包括但不限于fv、fc、fab和(fab')2、单链fv(scfv)、微型双功能抗体、微型三功能抗体、微型四功能抗体、双功能性杂合抗体、cdr1、cdr2、cdr3、cdr的组合、可变区、框架区、恒定区、重链、轻链和可变区、以及替代性骨架非抗体分子、双特异性抗体等(maynard和georgiou,annu.rev.biomed.eng.2:339-76,2000；hudson,curr.opin.biotechnol.9:395-402,1998)。另一功能性子结构是单链fv(scfv)，包含免疫球蛋白重链和轻链的可变区，通过肽接头共价连接(hu等,cancer research,56,3055-3061,1996)。这些小(mr 25,000)蛋白质通常以单一多肽形式保留对抗原的特异性和亲和力，并且可为较大抗原特异性分子提供适宜构筑嵌段。除非另外明确指示，否则使用术语“抗体(antibody/antibodies)”的陈述和权利要求明确包括“抗体片段(antibody fragment/antibody fragments)”。
30、在本发明的实施方案中，公开了新型抗psma抗体药物缀合物(adc)。如本文所用的术语“抗体-药物缀合物”或“adc”是指抗体分子或其片段共价键合于一个或多个生物活性分子。生物活性分子可通过接头、聚合物或其他共价键缀合于抗体。adc是一类允许向靶标细胞诸如癌细胞靶向递送细胞毒性剂的强力治疗性构建体。由于具有靶向功能，所以相较于相同全身性递送的药剂，这些化合物显示高得多的治疗指数。adc已以完整抗体或抗体片段诸如scfv形式加以开发。通过在生理条件下稳定，但一旦在靶标细胞内部即可被裂解的接头使抗体或片段连接于一个或多个拷贝的药物。
31、如本文所用的术语“抗原结合片段”是指抗体的一种或多种保留结合抗原的能力的片段。已显示抗体的抗原结合功能可由完整抗体的片段执行。涵盖在术语抗体的“抗原结合片段”内的结合片段的实例包括(i)fab片段，即由vl、vh、cl和ch1结构域组成的单价片段；(ii)f(ab')2片段，即包含由二硫桥在铰链区处连接的两个fab片段的二价片段；(iii)由vh和ch1结构域组成的fd片段；(iv)由抗体的单臂的vl和vh结构域组成的fv片段，(v)dab片段(ward等,nature 341:544-546,1989)，所述dab片段由vh结构域组成；(vi)包含或不包含额外序列(接头、一个或多个框架区等)的经分离互补决定区(cdr)，例如vh cdr3以及(v)两个至六个包含或不包含额外序列(接头、一个或多个框架区等)的经分离cdr的组合。此外，尽管fv片段的两个结构域vl和vh由单独基因编码，但可使用重组方法由使得它们能够被制备成其中vl区和vh区配对以形成单价分子的单一多肽链(称为单链fv(scfv)；参见例如bird等,science 242:423-426,1988；以及huston等,proc.natl.acad.sci.usa 85:5879-5883,1988)的合成接头来使它们接合。所述单链抗体也意图涵盖在术语抗体的“抗原结合片段”内。此外，抗原结合片段包括结合结构域免疫球蛋白融合蛋白，所述融合蛋白包含(i)融合于免疫球蛋白铰链区多肽的结合结构域多肽(诸如重链可变区、轻链可变区、或重链可变区通过接头肽融合于轻链可变区)，(ii)融合于所述铰链区的免疫球蛋白重链ch2恒定区，和(iii)融合于所述ch2恒定区的免疫球蛋白重链ch3恒定区。铰链区可通过用丝氨酸残基替换一个或多个半胱氨酸残基加以修饰以防止二聚化。所述结合结构域免疫球蛋白融合蛋白进一步公开于us2003/0118592和us2003/0133939中。这些抗体片段使用为本领域技术人员所知的常规技术获得，并且片段以与完整抗体相同的方式关于效用加以筛选。
32、典型抗原结合位点包含通过轻链免疫球蛋白和重链免疫球蛋白的配对来形成的可变区。抗体可变区的结构是极其一致的，并且展现极其类似的结构。这些可变区通常包含由被称为互补决定区(cdr)的三个高变区间隔的相对同源的框架区(fr)。抗原结合片段的总体结合活性经常由cdr的序列决定。fr经常在cdr的三维空间中的适当定位和对准方面起作用以达成最优抗原结合。实际上，因为cdr序列负责大多数抗体-抗原相互作用，所以有可能通过构建表达载体来表达显示特异性天然存在抗体的性质的重组抗体，所述表达载体包括来自特异性天然存在抗体的cdr序列移植于来自具有不同性质的不同抗体的框架序列上(参见例如riechmann,l.等,nature 332:323-327,1998；jones,p.等,nature 321:522-525,1986；以及queen,c.等,proc.natl.acad.usa 86:10029-10033,1989)。所述框架序列可从包括种系抗体基因序列的公共dna数据库获得。这些种系序列将不同于成熟抗体基因序列，因为它们将不包括在b细胞成熟期间通过v(d)j接合来形成的完全组装的可变基因。种系基因序列还将不同于含有遍及可变基因但通常在cdr中簇集的突变的高亲和力次级谱系抗体的序列。举例来说，体细胞突变在框架区1的氨基末端部分中以及在框架区4的羧基末端部分中相对稀少。此外，许多体细胞突变不显著改变抗体的结合性质。出于这个原因，不必获得特定抗体的整个dna序列来重新创建具有与原始抗体的结合性质类似的结合性质的完整重组抗体。跨越cdr区的部分重链和轻链序列通常足以达成这个目的。部分序列用于确定哪些种系可变和接合基因区段促成重组抗体可变基因。种系序列接着用于填充可变区的缺失部分。重链和轻链前导序列在蛋白质成熟期间被裂解，并且不有助于最终抗体的性质。为添加缺失序列，可通过连接或pcr扩增使所克隆cdna序列与合成寡核苷酸组合。或者，可合成整个可变区以创建完全合成可变区克隆。这个方法具有某些优势，诸如消除或包括特定限制位点，或使特定密码子优化。当然，本文所述的抗体的框架区的总体或部分可与cdr联合使用以使抗体的亲和力、特异性或任何其他所需性质最优化。
33、在一些实施方案中，本发明涉及聚合物诸如双官能聚合物。“双官能聚合物”，也被称为“双官能接头”，是指包含两个能够与其他部分特异性反应以形成共价或非共价键联的官能团的聚合物。所述部分可包括但不限于天然或非天然氨基酸或含有所述天然或非天然氨基酸的肽上的侧基。可连接于双官能接头或双官能聚合物的其他部分可为相同或不同部分。仅举例来说，双官能接头可具有与第一肽上的基团具有反应性的官能团，以及与第二肽上的基团具有反应性的另一官能团，借此形成包括所述第一肽、所述双官能接头和所述第二肽的缀合物。用于使各种化合物连接于肽的许多程序和接头分子是已知的。参见例如欧洲专利申请号0188256；美国专利号4,659,839；4,414,148；4,699,784；4,680,338；和4,569,789，所述专利以引用的方式整体并入本文。“多官能聚合物”，也被称为“多官能接头”，是指包含两个或更多个能够与其他部分反应的官能团的聚合物。所述部分可包括但不限于天然或非天然氨基酸或含有所述天然或非天然氨基酸的肽上的侧基。(包括但不限于氨基酸侧基)以形成共价或非共价键联。双官能聚合物或多官能聚合物可为任何所需长度或分子量，并且可被选择以在一个或多个连接于化合物的分子与所述化合物结合的分子或所述化合物之间提供特定所需间隔或构象。
34、如本文所用的术语“生物可用度”是指物质或它的活性部分从药物剂型递送以及变得在作用部位处或在体循环中可用的速率和程度。生物可用度增加是指使物质或它的活性部分从药物剂型递送以及变得在作用部位处或在体循环中可用的速率和程度增加。举例来说，生物可用度增加可指示为当相较于其他物质或活性部分时，物质或它的活性部分在血液中的浓度增加。
35、当在本文中使用时，术语“生物活性分子”、“生物活性部分”或“生物活性剂”意指可影响与生物体相关的生物系统、路径、分子或相互作用的任何物理或生物化学性质的任何物质，所述生物体包括但不限于病毒、细菌、噬菌体、转座子、朊病毒、昆虫、真菌、植物、动物和人。特别地，如本文所用，生物活性分子包括但不限于意图用于诊断、治愈、缓解、治疗或预防人或其他动物的疾病，或另外使人或动物的身体或精神健康状态增强的任何物质。生物活性分子的实例包括但不限于肽、蛋白质、酶、小分子药物、硬药、软药、前药、碳水化合物、无机原子或分子、染料、脂质、核苷、放射性核素、寡核苷酸、毒素、细胞、病毒、脂质体、微粒和胶束。适于与本文所述的方法和组合物一起使用的生物活性剂的类别包括但不限于药物、前药、放射性核素、成像剂、聚合物、抗生素、杀真菌剂、抗病毒剂、消炎剂、抗肿瘤剂、心血管剂、抗焦虑剂、激素、生长因子、类固醇和非类固醇剂、微生物源性毒素等。
36、就“调节生物活性”来说，其意指使多肽的反应性增加或降低，改变多肽的选择性，使多肽的底物选择性增强或降低。对经改进生物活性的分析可通过将非天然多肽的生物活性与天然多肽的生物活性进行比较来进行。
37、在一些实施方案中，本公开涉及已以生物合成方式并入抗体中的氨基酸。如本文所用的术语“以生物合成方式”是指利用翻译系统(细胞性或非细胞性)的任何方法，包括使用以下组分中的至少一者：多核苷酸、密码子、trna和核糖体。举例来说，非天然氨基酸可使用本文所述以及如本领域中熟知的方法和技术“以生物合成方式并入”非天然氨基酸多肽中。参见例如wo2010/011735和wo2005/074650。
38、术语“经保守修饰变体”适用于天然和非天然氨基酸以及天然和非天然核酸序列以及它们的组合。就特定核酸序列来说，“经保守修饰变体”是指编码相同或基本上相同的天然和非天然氨基酸序列的那些天然和非天然核酸，或当天然和非天然核酸不编码天然和非天然氨基酸序列时，是指基本上相同的序列。举例来说，由于遗传密码的简并性，所以许多在功能上相同的核酸编码任何给定蛋白质。举例来说，密码子gca、gcc、gcg和gcu全都编码氨基酸丙氨酸。因此，在其中丙氨酸由某一密码子指定的每个位置处，所述密码子可改变成所描述的任何相应密码子而不改变编码的多肽。所述核酸变异是作为一个种类的经保守修饰变异的“沉默变异”。因此，举例来说，本文每个编码天然或非天然多肽的天然或非天然核酸序列还描述天然或非天然核酸的每个可能的沉默变异。本领域普通技术人员将认识到天然或非天然核酸中的每个密码子(除通常是甲硫氨酸的唯一密码子的aug和通常是色氨酸的唯一密码子的tgg之外)都可被修饰以产生在功能上相同的分子。因此，编码天然和非天然多肽的天然和非天然核酸的每个沉默变异都隐含于每个描述的序列中。关于氨基酸序列，对核酸、肽、多肽或蛋白质序列进行的改变、添加或缺失所编码序列中的单一天然和非天然氨基酸或小百分比的天然和非天然氨基酸的单个取代、缺失或添加是“经保守修饰变体”，其中改变导致氨基酸的缺失，氨基酸的添加，或天然和非天然氨基酸被化学类似氨基酸取代。提供功能类似天然氨基酸的保守性取代表在本领域中是熟知的。提供功能类似氨基酸的保守性取代表为本领域普通技术人员所知。以下八组各自含有彼此是保守性取代的氨基酸：1)丙氨酸(a)、甘氨酸(g)；2)天冬氨酸(d)、谷氨酸(e)；3)天冬酰胺(n)、谷氨酰胺(q)；4)精氨酸(r)、赖氨酸(k)；5)异亮氨酸(i)、亮氨酸(l)、甲硫氨酸(m)、缬氨酸(v)；6)苯丙氨酸(f)、酪氨酸(y)、色氨酸(w)；7)丝氨酸(s)、苏氨酸(t)；以及8)半胱氨酸(c)、甲硫氨酸(m)(参见例如creighton,proteins:structures and molecular properties(w hfreeman&co.；第2版,1993)。所述经保守修饰变体外加于并且不排除本文所述的组合物的多态性变体、物种间同源物和等位基因。
39、如本文所用的术语“药物”是指用于预防、诊断、缓和、治疗或治愈疾病或疾患诸如包括前列腺癌的癌症的任何物质。
40、如本文所用的术语“有效量”是指所施用的药剂、化合物或组合物的将在一定程度上减轻所治疗疾病或疾患的症状中的一者或多者的足够量。结果可为疾病的征象、症状或原因的减轻和/或缓和，或生物系统的任何其他所需改变。举例来说，所施用的药剂、化合物或组合物包括但不限于天然氨基酸多肽、非天然氨基酸多肽、经修饰天然氨基酸多肽、经修饰非氨基酸多肽、或抗体或其变体。可施用含有所述天然氨基酸多肽、非天然氨基酸多肽、经修饰天然氨基酸多肽、经修饰非天然氨基酸多肽、或抗体或其变体的组合物以达成防治性、增强性和/或治疗性治疗。在任何单个情况下的适当“有效”量都可使用诸如剂量逐步升高研究的技术来确定。
41、术语“增强(enhance/enhancing)”意指在效能或持续时间方面使所需作用增加或延长。举例来说，“增强”治疗剂的作用是指能够在效能或持续时间方面使治疗剂在治疗疾病、病症或疾患期间的作用增加或延长。如本文所用的“增强性有效量”是指足以增强治疗剂在治疗疾病、病症或疾患方面的作用的量。当在患者中使用时，有效达成这个用途的量将取决于疾病、病症或疾患的严重性和过程；先前疗法；患者的健康状况和对药物的响应；以及治疗医师的判断。
42、术语“人源化或嵌合抗体”是指通常使用重组技术制备的分子，具有源于来自非人物种(例如鼠)的免疫球蛋白的抗原结合位点，并且所述分子的其余免疫球蛋白结构基于人免疫球蛋白的结构和/或序列。一般来说，人源化抗体将包含大致上全部至少一个，并且通常两个可变结构域，其中全部或大致上全部高变环对应于非人免疫球蛋白的那些，并且全部或大致上全部框架残基/区域(fr)是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体任选地还将包含至少一部分免疫球蛋白恒定区(fc)，通常是人免疫球蛋白的至少一部分恒定区。啮齿动物抗体的人源化形式将基本上包含亲本啮齿动物抗体的相同cdr序列，但可包括某些氨基酸取代以增加亲和力，增加人源化抗体的稳定性，或出于其他原因。然而，因为cdr环交换不一律地产生与来源抗体具有相同结合性质的抗体，所以还可将作为cdr环支撑中涉及的残基的框架残基(fr)的变化引入人源化抗体中以保持抗原结合亲和力。抗原结合位点可包含融合于恒定结构域上的完全可变结构域，或仅包含移植于可变结构域中的适当框架区上的互补决定区(cdr)。抗原结合位点可为野生型的，或通过一个或多个氨基酸取代加以修饰。这消除了恒定区在人个体中作为免疫原，但保留了对外来可变区的免疫应答的可能性(lobuglio,a.f.等,"mouse/human chimeric monoclonal antibody in man:kineticsand immune response,"proc.natl.acad.sci.(usa)86:4220-4224,1989)。另一方法不仅集中于提供人源性恒定区，而且还对可变区进行修饰以便以尽可能接近于人形式的方式对它们进行重新塑造。已知的是重链与轻链两者的可变区均含有三个互补决定区(cdr)，所述互补决定区应答于所论述的抗原而变化，并且决定结合能力，由在给定物种中相对保守，并且推定为cdr提供骨架化的四个框架区(fr)侧接。当关于特定抗原制备非人抗体时，可变区可通过将源于非人抗体的cdr移植在存在于待修饰的人抗体中的fr上来“人源化”。这个方法对各种抗体的应用已由kettleborough,c.a.等,"humanization of a mousemonoclonal antibody by cdr-grafting:the importance of framework residues onloop conformation,"protein engineering4:773-3783,1991；co,m.s.等,"humanizedantibodies for antiviral therapy,"proc.natl.acad.sci.(usa)88:2869-2873,1991；carter,p.等,"humanization of an anti-p185her2 antibody for human cancertherapy,"proc.natl.acad.sci.(usa)89:4285-4289,1992；以及co,m.s.等,"chimericand humanized antibodies with specificity for the cd33 antigen,"j.immunol.148:1149-1154,1992报道。在一些实施方案中，人源化抗体保持全部cdr序列(例如含有来自小鼠抗体的全部六个cdr的人源化小鼠抗体)。在其他实施方案中，人源化抗体具有一个或多个相对于原始抗体加以改变的cdr(一个、两个、三个、四个、五个、六个)，所述cdr也被称为一个或多个“源于”一个或多个来自原始抗体的cdr的cdr。
43、如本文所用的术语“同一”是指两个或更多个序列或子序列是相同的。此外，如本文所用的术语“大致上同一”是指如使用比较算法或通过手动比对和目视检查所测量，当历经比较窗或指定区域比较以及对准以达成最大对应时，两个或更多个序列具有某一百分比的相同连续单元。仅举例来说，如果历经指定区域，连续单元是约60％同一的，约65％同一的，约70％同一的，约75％同一的，约80％同一的，约85％同一的，约90％同一的，或约95％同一的，那么两个或更多个序列可为“大致上同一的”。所述百分比描述两个或更多个序列的“同一性百分比”。序列的同一性可历经长度是至少约75-100个连续单元的区域，历经长度是约50个连续单元的区域，或当未指定时跨越整个序列而存在。这个定义还涉及测试序列的互补序列。仅举例来说，历经指定区域，当氨基酸残基是相同的时，两个或更多个多肽序列是同一的，而如果氨基酸残基是约60％同一的，约65％同一的，约70％同一的，约75％同一的，约80％同一的，约85％同一的，约90％同一的，或约95％同一的，那么两个或更多个多肽序列是“大致上同一的”。同一性可历经长度是至少约75至约100个氨基酸的区域，历经长度是约50个氨基酸的区域，或当未指定时跨越多肽序列的整个序列而存在。此外，仅举例来说，历经指定区域，当核酸残基是相同的时，两个或更多个多核苷酸序列是同一的，而如果核酸残基是约60％同一的，约65％同一的，约70％同一的，约75％同一的，约80％同一的，约85％同一的，约90％同一的，或约95％同一的，那么两个或更多个多核苷酸序列是“大致上同一的”。同一性可历经长度是至少约75至约100个核酸的区域，历经长度是约50个核酸的区域，或当未指定时跨越多核苷酸序列的整个序列而存在。
44、如本文所用的术语“免疫原性”是指对治疗性药物的施用的抗体应答。对治疗性非天然氨基酸多肽的免疫原性可使用用于检测生物流体中的抗非天然氨基酸多肽抗体的定量和定性测定获得。所述测定包括但不限于放射免疫测定(ria)、酶联免疫吸附测定(elisa)、发光免疫测定(lia)和荧光免疫测定(fia)。分析对治疗性非天然氨基酸多肽的免疫原性涉及将在施用治疗性非天然氨基酸多肽后的抗体应答与在施用治疗性天然氨基酸多肽后的抗体应答进行比较。
45、如本文所用的术语“分离”是指使目标组分与非目标组分分离以及将目标组分从非目标组分移除。经分离物质可呈干燥或半干燥状态，或呈包括但不限于水溶液的溶液形式。经分离组分可呈同质状态，或经分离组分可为包含额外药学上可接受的载体和/或赋形剂的药物组合物的一部分。纯度和同质性可使用包括但不限于聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法的分析化学技术来测定。此外，当目标组分被分离，并且是制剂中存在的主要种类时，所述组分在本文中被描述为是大致上纯化的。如本文所用的术语“纯化”可指目标组分是至少85％纯净的，至少90％纯净的，至少95％纯净的，至少99％或更大百分比纯净的。仅举例来说，当核酸或蛋白质不含它在天然状态下与其相伴的细胞组分中的至少一些，或核酸或蛋白质已被浓缩至大于它的体内或体外产生浓度的水平时，所述核酸或蛋白质是“经分离的”。此外，举例来说，当与侧接于基因，并且编码除目标基因以外的蛋白质的开放阅读框分离时，所述基因是经分离的。
46、如本文所用的术语“键联”是指由接头的官能团与另一分子之间的化学反应形成的键或化学部分。所述键可包括但不限于共价键联和非共价键，而所述化学部分可包括但不限于酯、碳酸酯、亚胺、磷酸酯、腙、缩醛、原酸酯、肽键联和寡核苷酸键联。水解稳定键联意指键联在水中是大致上稳定的，并且在有用的ph值下不与水反应，包括但不限于在生理条件下持续延长时期，也许甚至是无限期。水解不稳定或可降解键联意指键联在水中或在包括例如血液的水溶液中可降解。酶不稳定或可降解键联意指键联可由一种或多种酶降解。仅举例来说，peg和相关聚合物可在聚合物骨架中或在聚合物骨架与聚合物分子的末端官能团中的一者或多者之间的接头基团中包括可降解键联。所述可降解键联包括但不限于通过peg羧酸或经活化peg羧酸与生物活性剂上的醇基团的反应来形成的酯键联，其中所述酯基团通常在生理条件下水解以释放所述生物活性剂。其他水解可降解键联包括但不限于碳酸酯键联；由胺和醛的反应产生的亚胺键联；通过使醇与磷酸基团反应来形成的磷酸酯键联；是酰肼和醛的反应产物的腙键联；是醛和醇的反应产物的缩醛键联；是甲酸酯和醇的反应产物的原酸酯键联；通过包括但不限于在聚合物诸如peg的末端的胺基团和肽的羧基来形成的肽键联；以及通过包括但不限于在聚合物的末端的亚磷酰胺基团和寡核苷酸的5'羟基来形成的寡核苷酸键联。
47、如本文所用的术语“代谢物”是指化合物举例来说天然氨基酸多肽、非天然氨基酸多肽、经修饰天然氨基酸多肽或经修饰非天然氨基酸多肽的衍生物，所述衍生物在所述化合物举例来说天然氨基酸多肽、非天然氨基酸多肽、经修饰天然氨基酸多肽或经修饰非天然氨基酸多肽被代谢时形成。术语“药物活性代谢物”或“活性代谢物”是指化合物举例来说天然氨基酸多肽、非天然氨基酸多肽、经修饰天然氨基酸多肽或经修饰非天然氨基酸多肽的生物活性衍生物，所述生物活性衍生物在这种化合物举例来说天然氨基酸多肽、非天然氨基酸多肽、经修饰天然氨基酸多肽或经修饰非天然氨基酸多肽被代谢时形成。
48、如本文所用的术语“代谢”是指特定物质由生物体改变所采用的过程的总和。所述过程包括但不限于水解反应和由酶催化的反应。关于代谢的其他信息可从thepharmacological basis of therapeutics,第9版,mcgraw-hill(1996)获得。仅举例来说，天然氨基酸多肽、非天然氨基酸多肽、经修饰天然氨基酸多肽或经修饰非天然氨基酸多肽的代谢物可通过以下方式来鉴定：向宿主施用所述天然氨基酸多肽、非天然氨基酸多肽、经修饰天然氨基酸多肽或经修饰非天然氨基酸多肽，以及分析来自所述宿主的组织样品；或使天然氨基酸多肽、非天然氨基酸多肽、经修饰天然氨基酸多肽或经修饰非天然氨基酸多肽与肝细胞一起在体外孵育，以及分析所得化合物。
49、如本文所用的术语“修饰”是指存在对天然氨基酸、非天然氨基酸、天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽的变化。所述变化或修饰可通过以下方式来获得：合成后修饰天然氨基酸、非天然氨基酸、天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽；或共翻译或翻译后修饰天然氨基酸、非天然氨基酸、天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽。
50、“非天然氨基酸”是指不是20种常见氨基酸或吡咯赖氨酸或硒代半胱氨酸中的一者的氨基酸。可与术语“非天然氨基酸”同义使用的其他术语是“非天然编码氨基酸”、“非天然氨基酸”、“非天然存在的氨基酸”以及它们的以各种方式以连字符连接和不以连字符连接的形式。术语“非天然氨基酸”包括但不限于通过修饰天然编码的氨基酸(包括但不限于20种常见氨基酸或吡咯赖氨酸和硒代半胱氨酸)而天然存在，但它们自身不通过翻译复合物并入增长的多肽链中的氨基酸。不是天然编码的天然存在的氨基酸的实例包括但不限于n-乙酰葡糖胺基-l-丝氨酸、n-乙酰葡糖胺基-l-苏氨酸和o-磷酸酪氨酸。另外，术语“非天然氨基酸”包括但不限于不天然存在，并且可合成获得或可通过修饰非天然氨基酸获得的氨基酸。
51、如本文所用的术语“核酸”是指脱氧核糖核苷酸、脱氧核糖核苷、核糖核苷或核糖核苷酸以及它们的呈单链或双链形式的聚合物。仅举例来说，所述核酸和核酸聚合物包括但不限于(i)天然核苷酸的与参考核酸具有类似结合性质，并且以与天然存在的核苷酸类似的方式被代谢的类似物；(ii)寡核苷酸类似物，包括但不限于pna(肽核酸)、用于反义技术中的dna类似物(硫代磷酸酯、氨基磷酸酯等)；(iii)它们的经保守修饰变体(包括但不限于简并密码子取代)以及互补序列和明确指示的序列。举例来说，简并密码子取代可通过产生其中一个或多个所选(或全部)密码子的第三位置被混合碱基和/或脱氧肌苷残基取代的序列来实现(batzer等,nucleic acid res.19:5081,1991；ohtsuka等,j.biol.chem.260:2605-2608,1985；以及rossolini等,mol.cell.probes 8:91-98,1994)。
52、如本文所用的术语“药学上可接受”是指包括但不限于盐、粘合剂、佐剂、赋形剂、载体或稀释剂的物质不消除化合物的生物活性或性质，并且是相对无毒的，即所述物质可向个体施用而不导致不合需要的生物作用或以有害方式与它含于其中的组合物的任何组分相互作用。
53、在一些实施方案中，本发明涉及聚合物。如本文所用的术语“聚合物”是指由重复亚单元组成的分子。所述分子包括但不限于多肽、多核苷酸、或多糖或聚亚烷基二醇。本发明聚合物可为线性或分支聚合聚醚多元醇，包括但不限于聚乙二醇、聚丙二醇、聚丁二醇以及它们的衍生物。其他示例性实施方案例如列于商业供应商目录诸如shearwatercorporation的目录“polyethylene glycol and derivatives for biomedicalapplications”(2001)中。仅举例来说，所述聚合物具有在约0.1kda至约100kda之间的平均分子量。所述聚合物包括但不限于在约100da与约100,000da之间或更大分子量。聚合物的分子量可在约100da与约100,000da之间，包括但不限于约100,000da、约95,000da、约90,000da、约85,000da、约80,000da、约75,000da、约70,000da、约65,000da、约60,000da、约55,000da、约50,000da、约45,000da、约40,000da、约35,000da、约30,000da、约25,000da、约20,000da、约15,000da、约10,000da、约9,000da、约8,000da、约7,000da、约6,000da、约5,000da、约4,000da、约3,000da、约2,000da、约1,000da、约900da、约800da、约700da、约600da、约500da、400da、约300da、约200da和约100da。在一些实施方案中，聚合物的分子量在约100da与约50,000da之间。在一些实施方案中，聚合物的分子量在约100da与约40,000da之间。在一些实施方案中，聚合物的分子量在约1,000da与约40,000da之间。在一些实施方案中，聚合物的分子量在约2,000至约50,000da之间。在一些实施方案中，聚合物的分子量在约5,000da与约40,000da之间。在一些实施方案中，聚合物的分子量在约10,000da与约40,000da之间。在一些实施方案中，聚(乙二醇)分子是分支聚合物。分支链peg的分子量可在约1,000da与约100,000da之间，包括但不限于约100,000da、约95,000da、约90,000da、约85,000da、约80,000da、约75,000da、约70,000da、约65,000da、约60,000da、约55,000da、约50,000da、约45,000da、约40,000da、约35,000da、约30,000da、约25,000da、约20,000da、约15,000da、约10,000da、约9,000da、约8,000da、约7,000da、约6,000da、约5,000da、约4,000da、约3,000da、约2,000da和约1,000da。在一些实施方案中，分支链peg的分子量在约1,000da与约50,000da之间。在一些实施方案中，分支链peg的分子量在约1,000da与约40,000da之间。在一些实施方案中，分支链peg的分子量在约5,000da与约40,000da之间。在一些实施方案中，分支链peg的分子量在约5,000da与约20,000da之间。在其他实施方案中，分支链peg的分子量在约2,000至约50,000da之间。术语“peg化(pegylating/pegylated)”意指指定合成氨基酸共价键合于聚乙二醇(peg)分子。方法可包括使包含合成氨基酸的经分离α-psma adc多肽与包含与所述合成氨基酸反应的部分的水溶性聚合物接触。
54、术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换用于指代氨基酸残基的聚合物。也就是说，涉及多肽的描述同等适用于对肽的描述和对蛋白质的描述，并且反之亦然。所述术语适用于天然存在的氨基酸聚合物以及其中一个或多个氨基酸残基是非天然氨基酸的氨基酸聚合物。另外，所述“多肽”、“肽”和“蛋白质”包括任何长度的氨基酸链，包括全长蛋白质，其中氨基酸残基由共价肽键连接。
55、术语“翻译后修饰”是指天然或非天然氨基酸的在这种氨基酸已以翻译方式并入多肽链中之后发生的任何修饰。所述修饰包括但不限于共翻译体内修饰、共翻译体外修饰(诸如在无细胞翻译系统中)、翻译后体内修饰以及翻译后体外修饰。
56、如本文所用的术语“前药”或“药学上可接受的前药”是指在体内或在体外转化成母体药物的药剂，所述药剂不消除药物的生物活性或性质，并且是相对无毒的，即物质可向个体施用而不导致不合需要的生物作用或以有害方式与它含于其中的组合物的任何组分相互作用。前药通常是药物前体，所述药物前体在向受试者施用以及后续吸收之后通过某一过程诸如通过代谢路径进行的转化来转化成活性物质或活性更大的物质。一些前药具有存在于前药上的致使它活性较小和/或对药物赋予溶解性或某一其他性质的化学基团。一旦化学基团已被从前药裂解和/或修饰，即产生活性药物。前药在身体内通过酶促或非酶促反应来转化成活性药物。前药可提供改进的生理化学性质，诸如更好的溶解性；增强的递送特征，诸如特异性靶向特定细胞、组织、器官或配体；以及药物的改进治疗价值。所述前药的益处包括但不限于(i)相较于母体药物，容易施用；(ii)前药可通过口服施用而具有生物可用性，而母体药物并非如此；和(iii)相较于母体药物，前药还可在药物组合物中具有改进的溶解性。前药包括活性药物的药理学上非活性或活性降低的衍生物。前药可被设计来通过操控药物的性质来调节药物或生物活性分子的到达所需作用部位的量，所述性质诸如是生理化学性质、生物药物性质或药物代谢动力学性质。在不加限制下，前药的一实例将是非天然氨基酸多肽，其以酯(“前药”)形式施用以有助于跨越细胞膜(在细胞膜中，水溶性对于移动性是有害的)进行传送，并且接着一旦在细胞内部(在细胞内部中，水溶性是有益的)，即被代谢水解成羧酸，即活性实体。前药可被设计成可逆药物衍生物，以作为调节剂用于使药物向位点特异性组织的运送增强。
57、如本文所用的术语“防治有效量”是指防治性施加于患者的含有至少一种非天然氨基酸多肽或至少一种经修饰非天然氨基酸多肽的组合物的将在一定程度上减轻所治疗疾病、疾患或病症的症状中的一者或多者的量。在所述防治性施加中，所述量可取决于患者的健康状态、重量等。被视为完全属于本领域的技能的是通过包括但不限于剂量逐步升高临床试验的常规实验来确定所述防治有效量。
58、术语“重组宿主细胞”，也被称为“宿主细胞”，是指包括外源性多核苷酸的细胞，其中用于将所述外源性多核苷酸插入细胞中的方法包括但不限于直接摄取、转导、f交配或本领域中已知的用以创建重组宿主细胞的其他方法。仅举例来说，所述外源性多核苷酸可为非整合载体，包括但不限于质粒，或可整合至宿主基因组中。
59、如本文所用的术语“受试者”是指作为治疗、观察或实验对象的动物。仅举例来说，受试者可为但不限于哺乳动物，包括但不限于人。
60、如本文所用的术语“大致上纯化”是指目标组分可大致上或基本上不含在纯化之前通常伴随所述目标组分或与所述目标组分相互作用的其他组分。仅举例来说，当目标组分的制剂含有小于约30％、小于约25％、小于约20％、小于约15％、小于约10％、小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约2％或小于约1％(以干重计)的污染性组分时，所述目标组分可为“大致上纯化的”。因此，“大致上纯化的”目标组分可具有约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的纯度水平。仅举例来说，天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽可从天然细胞纯化，或在重组产生的天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽的情况下从宿主细胞纯化。举例来说，当制剂含有小于约30％、小于约25％、小于约20％、小于约15％、小于约10％、小于约5％、小于约4％、小于约3％、小于约2％或小于约1％(以干重计)的污染性物质时，天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽的所述制剂可为“大致上纯化的”。举例来说，当天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽由宿主细胞重组产生时，所述天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽可在细胞干重的约30％、约25％、约20％、约15％、约10％、约5％、约4％、约3％、约2％或约1％或更小下存在。举例来说，当天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽由宿主细胞重组产生时，所述天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽可在约5g/l、约4g/l、约3g/l、约2g/l、约1g/l、约750mg/l、约500mg/l、约250mg/l、约100mg/l、约50mg/l、约10mg/l或约1mg/l或更低的细胞干重下存在于培养基中。举例来说，“大致上纯化的”天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽可具有约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约99％或更高的纯度水平，如通过包括但不限于sds/page分析、rp-hplc、sec和毛细管电泳的适当方法所测定。
61、如本文所用的术语“治疗有效量”是指向已罹患疾病、疾患或病症的患者施用的含有至少一种非天然氨基酸多肽和/或至少一种经修饰非天然氨基酸多肽的组合物的足以治愈或至少部分地遏止或在一定程度上减轻所治疗的所述疾病、病症或疾患的症状中的一者或多者的量。所述组合物的有效性取决于各种状况，包括但不限于疾病、病症或疾患的严重性和过程；先前疗法；患者的健康状况和对药物的响应；以及治疗医师的判断。仅举例来说，治疗有效量可通过包括但不限于剂量逐步升高临床试验的常规实验来确定。
62、如本文所用的术语“毒剂”或“毒性部分”或“毒性基团”或“细胞毒性剂”或“细胞毒性有效载荷”或“有效载荷”是指可导致伤害、紊乱或死亡的化合物。毒性部分包括但不限于澳瑞他汀(auristatin)、dna小沟结合剂、dna小沟烷基化剂、烯二炔(enediyne)、莱西曲辛(lexitropsin)、倍癌霉素(duocarmycin)、紫杉烷(taxane)、嘌呤霉素(puromycin)、多拉司他汀、类美登素(maytansinoid)、长春花生物碱(vincaalkaloid)、afp、mmaf、mmae、aeb、aevb、澳瑞他汀e、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西他赛(docetaxel)、cc-1065、sn-38、拓扑替康(topotecan)、吗啉代多柔比星(morpholino-doxorubicin)、根霉素(rhizoxin)、氰基吗啉代多柔比星(cyanomorpholino-doxorubicin)、多拉司他汀-10、棘霉素(echinomycin)、考布他汀(combretatstatin)、卡奇霉素(chalicheamicin)、美登素(maytansine)、dm-1、纺锤菌素(netropsin)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)(例如依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)等)、浆果赤霉素(baccatin)和它的衍生物、抗微管蛋白剂(anti-tubulinagent)、念珠藻素(cryptophysin)、考布他汀(combretastatin)、长春新碱(vincristine)、长春花碱(vinblastine)、长春地辛(vindesine)、长春瑞滨(vinorelbine)、vp-16、喜树碱(camptothecin)、埃博霉素a(epothilone a)、埃博霉素b、诺考达唑(nocodazole)、秋水仙碱(colchicines)、秋水仙胺(colcimid)、雌氮芥(estramustine)、西马多丁(cemadotin)、盘皮海绵内酯(discodermolide)、美登素(maytansine)、软珊瑚醇(eleutherobin)、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、美法仑(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀(lomustine)、司莫司汀(semustine)、链脲霉素(streptozocin)、氯脲菌素(chlorozotocin)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)、氮芥(chlormethine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、哌泊溴烷(pipobroman)、三亚乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三亚乙基硫代磷酸胺(triethylenethiophosphoramine)、白消安(busulfan)、达卡巴嗪(dacarbazine)和替莫唑胺(temozolomide)、阿糖胞苷(ytarabine)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosine arabinoside)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、氟尿苷(floxuridine)、6-硫鸟嘌呤(6-thioguanine)、6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine)、喷司他汀(pentostatin)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、甲氨蝶呤(methotrexate)、10-炔丙基-5,8-二脱氮杂叶酸(10-propargyl-5,8-dideazafolate)、5,8-二脱氮杂四氢叶酸(5,8-dideazatetrahydrofolic acid)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)、磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)、喷司他汀(pentostatine)、吉西他滨(gemcitabine)、ara-c、脱氧柯福霉素(deoxycoformycin)、丝裂霉素-c(mitomycin-c)、l-天冬酰胺酶(l-asparaginase)、咪唑硫嘌呤(azathioprine)、布喹那(brequinar)、抗生素(例如蒽环霉素(anthracycline)、庆大霉素(gentamicin)、头孢噻吩(cefalotin)、万古霉素(vancomycin)、替拉万星(telavancin)、达托霉素(daptomycin)、阿奇霉素(azithromycin)、红霉素(erythromycin)、罗红霉素(rocithromycin)、呋喃唑酮(furazolidone)、阿莫西林(amoxicillin)、氨苄青霉素(ampicillin)、羧苄西林(carbenicillin)、氟氯西林(flucloxacillin)、甲氧西林(methicillin)、青霉素(penicillin)、环丙沙星(ciprofloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、多西环素(doxycycline)、米诺环素(minocycline)、羟四环素(oxytetracycline)、四环素(tetracycline)、链霉素(streptomycin)、利福布丁(rifabutin)、乙胺丁醇(ethambutol)、利福昔明(rifaximin)等)、抗病毒药物(例如阿巴卡韦(abacavir)、阿昔洛韦(acyclovir)、安普利根(ampligen)、昔多福韦(cidofovir)、德拉韦定(delavirdine)、地达诺新(didanosine)、依法韦仑(efavirenz)、恩替卡韦(entecavir)、膦乙酸(fosfonet)、更昔洛韦(ganciclovir)、伊巴他滨(ibacitabine)、异丙肌苷(imunovir)、碘苷(idoxuridine)、肌苷(inosine)、洛匹那韦(lopinavir)、甲吲噻腙(methisazone)、奈沙韦(nexavir)、奈韦拉平(nevirapine)、奥司他韦(oseltamivir)、喷昔洛韦(penciclovir)、司他夫定(stavudine)、三氟胸苷truvada(trifluridine)、特鲁瓦达(truvada)、伐昔洛韦(valaciclovir)、扎那米韦(zanamivir)等)、盐酸柔红霉素(daunorubicin hydrochloride)、道诺霉素(daunomycin)、红比霉素(rubidomycin)、司比定(cerubidine)、伊达比星(idarubicin)、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)和吗啉代衍生物、吩噁嗪酮双环肽(例如更生霉素(dactinomycin))、碱性糖肽(例如博莱霉素(bleomycin))、蒽醌糖苷(例如光神霉素(plicamycin)、米拉霉素(mithramycin))、蒽二酮(例如米托蒽醌(mitoxantrone))、氮丙啶吡咯并吲哚二酮(例如丝裂霉素(mitomycin))、大环免疫抑制剂(例如环孢灵(cyclosporine)、fk-506、他克莫司(tacrolimus)、普乐可复(prograf)、雷帕霉素(rapamycin)等)、诺维本(navelbene)、cpt-11、阿那曲唑(anastrazole)、来曲唑(letrazole)、卡培他滨(capecitabine)、雷洛昔芬(reloxafine)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、异环磷酰胺(ifosamide)、卓洛昔芬(droloxafine)、别秋水仙碱(allocolchicine)、大田软海绵素b(halichondrinb)、秋水仙碱(colchicine)、秋水仙碱衍生物、美登素(maytansine)、根霉素(rhizoxin)、太平洋紫杉醇、太平洋紫杉醇衍生物、多西他赛、硫代秋水仙碱(thiocolchicine)、三苯甲基半胱氨酸(trityl cysterin)、硫酸长春花碱(vinblastinesulfate)、硫酸长春新碱(vincristinesulfate)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、羟基脲(hydroxyurea)、n-甲基肼(n-methylhydrazine)、表鬼臼毒素(epidophyllotoxin)、丙卡巴肼(procarbazine)、米托蒽醌(mitoxantrone)、甲酰四氢叶酸和替加氟(tegafur)。“紫杉烷”包括太平洋紫杉醇以及任何活性紫杉烷衍生物或前药。
63、如本文所用的术语“治疗(treat/treating/treatment)”包括缓和、预防、减弱或改善疾病或疾患症状；预防额外症状；改善或预防症状的潜伏代谢原因；抑制疾病或疾患，例如遏止疾病或疾患的发展；减轻疾病或疾患；导致疾病或疾患的消退；减轻由疾病或疾患引起的状况；或终止疾病或疾患的症状。术语“治疗”包括但不限于防治性治疗和/或治疗性治疗。术语“治疗”可指减弱、减轻或改善一种或多种与前列腺癌相关的症状。
64、如本文所用，术语“水溶性聚合物”是指可溶于水性溶剂中的任何聚合物。所述水溶性聚合物包括但不限于聚乙二醇、聚乙二醇丙醛、其单c1-c10烷氧基或芳基氧基衍生物(描述于以引用的方式并入本文的美国专利号5,252,714中)、单甲氧基-聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚氨基酸、二乙烯基醚顺丁烯二酸酐、n-(2-羟丙基)-甲基丙烯酰胺、右旋糖酐、包括硫酸右旋糖酐的右旋糖酐衍生物、聚丙二醇、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙基化多元醇、肝素、肝素片段、多糖、寡糖、聚糖、纤维素和包括但不限于甲基纤维素和羧甲基纤维素的纤维素衍生物、血清白蛋白、淀粉和淀粉衍生物、多肽、聚亚烷基二醇及其衍生物、聚亚烷基二醇及其衍生物的共聚物、聚乙烯基乙醚和α-β-聚[(2-羟乙基)-dl-天冬酰胺等、或它们的混合物。仅举例来说，所述水溶性聚合物偶联于天然氨基酸多肽或非天然多肽可导致包括但不限于以下的变化：水溶性增加；血清半衰期增加或得到调节；相对于未修饰形式，治疗半衰期增加或得到调节；生物可用度增加；生物活性得到调节；循环时间延长；免疫原性得到调节；包括但不限于聚集和多聚体形成的物理缔合特征得到调节；受体结合改变；与一种或多种结合配偶体的结合改变；以及受体二聚化或多聚化改变。此外，所述水溶性聚合物可或可不具有它们自身的生物活性。
65、如本文所用，术语“经调节血清半衰期”是指经修饰生物活性分子相对于它的非修饰形式，在循环半衰期方面的正性或负性变化。举例来说，经修饰生物活性分子包括但不限于天然氨基酸、非天然氨基酸、天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽。举例来说，血清半衰期通过以下方式来测量：在施用生物活性分子或经修饰生物活性分子之后在各个时间点获取血液样品，以及测定每个样品中那个分子的浓度。血清浓度与时间关联允许计算血清半衰期。举例来说，经调节血清半衰期可为血清半衰期增加，此可使得能够改进给药方案或避免毒性作用。所述血清增加可为增加至至少约两倍、至少约三倍、至少约五倍、或至少约十倍。用于评估血清半衰期的方法在本领域中是已知的，并且可用于评估本发明的抗体和抗体药物缀合物的血清半衰期。
66、如本文所用的术语“经调节治疗半衰期”是指治疗有效量的经修饰生物活性分子相对于它的非修饰形式，在半衰期方面的正性或负性变化。举例来说，经修饰生物活性分子包括但不限于天然氨基酸、非天然氨基酸、天然氨基酸多肽或非天然氨基酸多肽。举例来说，治疗半衰期通过在施用之后在各个时间点测量分子的药物代谢动力学和/或药物效应动力学性质来测量。治疗半衰期增加可使得能够达成特定有益给药方案、特定有益总剂量，或避免非所需作用。举例来说，治疗半衰期增加可由效能增加、经修饰分子与它的靶标的结合增加或降低、非修饰分子的另一参数或作用机理的增加或降低、或由诸如仅举例来说是蛋白酶的酶对分子的分解增加或降低所致。用于评估治疗半衰期的方法在本领域中是已知的，并且可用于评估本发明的抗体和抗体药物缀合物的治疗半衰期。
1.一种抗前列腺特异性膜抗原抗体(抗psma)，所述抗前列腺特异性膜抗原抗体包含选自seq id no:8、10、12或14的重链序列和选自seq id no:9、11、13或15的轻链序列。
2.如权利要求1所述的抗psma抗体，其中所述重链包含选自seq id no:1的可变区序列，并且所述轻链包含选自seq id no:2、3、4或5的组的可变区序列。
3.如权利要求1所述的抗psma抗体，其中所述重链序列包含非天然编码氨基酸。
4.如权利要求3所述的抗psma抗体，其中所述非天然编码氨基酸包含羰基、氨基氧基、肼基团、酰肼基团、氨基脲基团、叠氮基团或炔基团。
5.如权利要求4所述的抗psma抗体，其中所述非天然编码氨基酸是对乙酰基苯丙氨酸、对硝基苯丙氨酸、对磺基酪氨酸、对羧基苯丙氨酸、邻硝基苯丙氨酸、间硝基苯丙氨酸、对硼羰基苯丙氨酸、邻硼羰基苯丙氨酸、间硼羰基苯丙氨酸、对氨基苯丙氨酸、邻氨基苯丙氨酸、间氨基苯丙氨酸、对酰基苯丙氨酸、邻酰基苯丙氨酸、间酰基苯丙氨酸、p-ome苯丙氨酸、o-ome苯丙氨酸、m-ome苯丙氨酸、对磺基苯丙氨酸、邻磺基苯丙氨酸、间磺基苯丙氨酸、5-硝基his、3-硝基tyr、2-硝基tyr、硝基取代的leu、硝基取代的his、硝基取代的de、硝基取代的trp、2-硝基trp、4-硝基trp、5-硝基trp、6-硝基trp、7-硝基trp、3-氨基酪氨酸、2-氨基酪氨酸、o-磺基酪氨酸、2-磺氧基苯丙氨酸、3-磺氧基苯丙氨酸、邻羧基苯丙氨酸、间羧基苯丙氨酸、对乙酰基-l-苯丙氨酸、对炔丙基-苯丙氨酸、o-甲基-l-酪氨酸、l-3-(2-萘基)丙氨酸、3-甲基-苯丙氨酸、o-4-烯丙基-l-酪氨酸、4-丙基-l-酪氨酸、三-o-乙酰基-glcnacβ-丝氨酸、l-多巴、氟化苯丙氨酸、异丙基-l-苯丙氨酸、对叠氮基-l-苯丙氨酸、对酰基-l-苯丙氨酸、对苯甲酰基-l-苯丙氨酸、l-磷酸丝氨酸、膦酰基丝氨酸、膦酰基酪氨酸、对碘-苯丙氨酸、对溴苯丙氨酸、对氨基-l-苯丙氨酸、异丙基-l-苯丙氨酸或对炔丙基氧基-苯丙氨酸。
6.如权利要求5所述的抗psma抗体，其中所述非天然编码氨基酸是对乙酰基苯丙氨酸。
7.一种抗体药物缀合物，所述抗体药物缀合物包含缀合于至少一个选自表1-表3的药物-接头的根据权利要求1所述的包含重链序列和轻链序列的人源化抗psma抗体，其中所述缀合通过并入所述重链序列中的非天然编码氨基酸来发生。
8.如权利要求7所述的抗体药物缀合物，其中所述药物-接头包含细胞毒性剂。
9.如权利要求8所述的抗体药物缀合物，其中所述细胞毒性剂是多拉司他汀、多拉司他汀衍生物或它们的类似物。
10.如权利要求9所述的抗体药物缀合物，其中所述多拉司他汀、多拉司他汀衍生物或类似物是选自单甲基澳瑞他汀f(mmaf)或单甲基澳瑞他汀e(mmae)的单甲基澳瑞他汀。
