本申请涉及生物学，由其涉及一种car-t细胞的培养方法。
背景技术：
1、car-t细胞免疫治疗就是嵌合抗原受体t细胞免疫疗法，英文全称chimericantigen receptor t-cell immunotherapy。这是一种治疗肿瘤的新型精准靶向疗法，近几年通过优化改良在临床肿瘤治疗上取得很好的效果，是一种非常有前景的，能够精准、快速、高效，且有可能治愈癌症的新型肿瘤免疫治疗方法；更加具体来说，它通过基因工程和细胞 培养技术将编码嵌合抗原受体(car)的基因转导到患者自身的t细胞上，使t细胞获得识别和杀伤肿瘤的新功能。经过体外激活、增殖后，大量car-t细胞被回输到患者体内，可准确定位到肿瘤部位，发挥抗肿瘤作用。所述体外激活是指利用病毒载体或非病毒载体将嵌合抗原受体基因导入t细胞中，使其表达嵌合抗原受体。car-t细胞治疗已经在血液系统肿瘤尤其是淋巴瘤领域显示出强大的临床疗效。
2、car-t细胞治疗的优势在于，它结合了细胞治疗与基因治疗的优点，实现了对免疫细胞功能的精准编程和控制。car结构中包含肿瘤抗原识别域及t细胞激活域，可重新定向t细胞与特定的肿瘤细胞亚群结合，从而发挥杀伤作用。同时，car-t细胞还保留了t细胞的增殖能力，能在体内进行扩增，产生持久的抗肿瘤免疫应答。经过近30年的技术积累，car-t细胞工程化制备平台已经日趋成熟。
技术实现思路
1、本发明提供一种car-t细胞的培养方法，包括如下步骤：
2、s1：对细胞培养容器进行包被处理；
3、s2：配置培养基，所述培养基包括自体血浆、alys505n0无血清细胞培养基以及gomesin，所述gomesin的氨基酸序列如seq id no.1所示；
4、s3：用含有5μm的唑来膦酸的培养基调整pbmcs密度，然后加入细胞培养容器中；将细胞培养容器放置于培养箱中，在第一培养条件下培养18h；
5、s4：在细胞培养容器中加入polybrene以及mesothelin car的慢病毒；在培养箱中，第二培养条件下培养48h；
6、s5：在细胞培养容器中加入所述培养基，在培养箱中，第三培养条件下培养24h；
7、s6：采用一次性移液管悬起细胞，并且收集细胞悬液，将所述细胞悬液转移至15ml离心管中，离心后弃除上清液，使用所述培养基悬起细胞沉淀，然后将细胞放置于新的所述细胞培养容器中，继续培养箱中，在第四培养条件下培养；
8、s7：采用半量换液或补液的方式调整细胞密度,培养12天后收获细胞。
9、可选的，所述培养基中所述gomesin的浓度为40μg/ml~80μg/ml。
10、可选的，所述细胞培养容器为6孔板。
11、可选的，采用包被液对所述细胞培养容器进行包被处理；所述包被液采用多聚赖氨酸、纤维蛋白以及明胶中一种。
12、可选的，所述对细胞培养容器进行包被处理包括以下步骤：
13、s11: 使用pbs缓冲液将retronectin稀释至100μg/ml，得到retronectin稀释液；
14、s12: 将所述retronectin稀释液溶液加入6孔板中，每孔加入2ml；
15、s13: 然后将装有所述retronectin稀释液的6孔板置于培养箱中。在35℃温度条件下静置8h。
16、可选的，所述培养基含有10％自体血浆、600u/ml il2的alys505n-0无血清细胞培养液和60μg/ml的gomesin。
17、可选的，所述用含有5μm的唑来膦酸的培养基调整pbmcs密度，然后加入细胞培养容器中包括以下步骤：
18、用含有5μm唑来膦酸的培养基将pbmcs密度调整至2×105个细胞/ml培养基，然后加入所述6孔板中，每孔2ml。
19、可选的，所述第一培养条件、第二培养条件、第三培养条件以及第四培养条件相同。
20、可选的，所述第一培养条件为所述培养箱内温度为35~38℃，所述培养箱内co2浓度为4~8%；且/或者，
21、所述第二培养条件为所述培养箱内温度为35~38℃，所述培养箱内co2浓度为4~8%；且/或者；
22、所述第三培养条件为所述培养箱内温度为35~38℃，所述培养箱内co2浓度为4~8%；且/或者；
23、所述第四培养条件为所述培养箱内温度为35~38℃，所述培养箱内co2浓度为4~8%。
24、可选的，按照moi＝10的比例在一个孔中加入所述mesothelin car的慢病毒。
25、本发明提供的所述一种car-t细胞的培养方法，相比于现有技术，能够有效的提高以显car-t细胞对肿瘤细胞的杀伤效能。
1.一种car-t细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的car-t细胞的培养方法，其特征在于，所述培养基中所述gomesin的浓度为40μg/ml~80μg/ml。
3.根据权利要求2所述的car-t细胞的培养方法，其特征在于，所述细胞培养容器为6孔板。
4.根据权利要求3所述的car-t细胞的培养方法，其特征在于，采用包被液对所述细胞培养容器进行包被处理；所述包被液采用多聚赖氨酸、纤维蛋白以及明胶中一种。
5.根据权利要求4所述的car-t细胞的培养方法，其特征在于，所述对细胞培养容器进行包被处理包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的car-t细胞的培养方法，其特征在于，所述培养基含有10％自体血浆、600u/ml il2的alys505n-0无血清细胞培养液和60μg/ml的gomesin。
7.根据权利要求6所述的car-t细胞的培养方法，其特征在于，所述用含有5μm的唑来膦酸的培养基调整pbmcs密度，然后加入细胞培养容器中包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的car-t细胞的培养方法，其特征在于，所述第一培养条件、第二培养条件、第三培养条件以及第四培养条件相同。
9.根据权利要求1所述的car-t细胞的培养方法，其特征在于，所述第一培养条件为所述培养箱内温度为35~38℃，所述培养箱内co2浓度为4~8%；且/或者，
10.根据权利要求8所述的car-t细胞的培养方法，其特征在于，按照moi＝10的比例在一个孔中加入所述mesothelin car的慢病毒。
