本发明涉及植物组织培养，尤其涉及一种云南松组培苗的繁殖方法。
背景技术：
云南松（
pinus yunnanensis）属松科松属植物，为云贵高原的主要乡土树种，也是西南地区特有的森林植被类型，仅云南省内，云南松林就占到全省林地面积的19.56%。云南松具有适应性强、耐干旱瘠薄、木材用途广泛等特点，是西南地区荒山造林的先锋树种和重要经济林木。由于基因遗传、人为干扰、病虫害等因素的影响，云南松林分质量低劣，遗传资源大量流失或消失，天然更新的云南松常见扭干现象，使林分质量呈下降趋势，对云南松林分的生产力与碳收支产生一定影响。因此，通过有效的手段对云南松优良种质进行繁殖、保存和改良显得尤为重要，而无性繁殖是解决这一问题的重要途径之一。
现有云南松种子园由于产量有限，无法持续供应足够的云南松优良种子，因此，而利用植物组织培养技术可以解决此类问题，实现云南松优良种质的快速扩繁。云南松作为木本裸子植物，其植物组织培养十分困难，如何建立稳定的组培育苗技术体系，确保云南松良种在造林中的普及应用就显得尤为重要。云南松的组培研究虽有相关报道，但其相关工作仍需不断推进。目前，云南松组织培养的研究虽有零星报道，但由于易褐化、再分化困难、生根困难等问题，云南松的组培快繁工作推进较为缓慢。因此，若能以云南松优良种质为材料，利用植物组织培养技术实现云南松组培快繁，对于云南松的遗传改良、新品种培育具有重要意义，同时也可为西南地区的低产低效林改造、人工林营造过程中优质种苗的培育提供技术支撑。
背景技术
技术实现思路
1、基于背景技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种不受环境影响、增殖稳定的云南松组培苗繁殖方法。
2、具体的，本发明提供以下技术方案：
3、一种云南松组培苗的繁殖方法，包括以下步骤：
4、（1）种子催芽和消毒：选取云南松的成熟健康种子，首先利用初始温度为50～55°c温水持续浸泡，直到自然冷却，在浸泡24h后更换冷水1次，催芽累计持续48h，消毒后获得无菌种子备用；
5、（2）无菌萌发：无菌条件下，将步骤（1）获得的无菌种子接种于无菌培养瓶中萌发生长，获得无菌实生苗；
6、（3）丛生芽诱导：无菌条件下，将步骤（2）获得的无菌实生苗的顶芽接种于丛生芽诱导培养基上，进行丛生芽诱导；所述丛生芽诱导培养基的配方为：1/2ms+1.0mg/l 6-ba+0.15 mg/l iba+1.5 mg/l kt+4.4 g/l琼脂+30 g/l 蔗糖，ph 5.6；
7、（4）伸长生长：将诱导出的丛生芽转接至伸长生长培养基上进行生长；所述伸长生长培养基为1/4 ms+0.2%活性炭+30 g/l 蔗糖，ph 5.6，在该培养基上培养45～60天后，将丛生芽取出切成单芽，转移到相同培养基上培养30～45天，至芽的高度为2.0～3.0cm左右；
8、（5）生根培养：选择高度为2.0～3.0cm的单芽，然后置于含有生长素的无菌溶液中浸泡20～30 min，结束后置于无菌纸上吸干水分，最后接种于生根培养基上；所述含有生长素的无菌溶液中含0.15 mg/liba+0.15 mg/l naa的生长素；所述生根培养基配方为：1/4ms+0.2%活性炭+20 g/l 蔗糖，ph 5.6；
9、（6）移栽炼苗：将生根苗在室内自然光下，闭瓶炼苗10 d，取出生根苗并用清水洗净基部培养基，移栽至田园土中。
10、进一步的，步骤（3）中，丛生芽诱导后将诱导出的丛生芽进行继代扩繁，所述继代扩繁使用的培养基为在丛生芽诱导培养基中添加0.1%活性炭制备而成。
11、优选的，所述无菌萌发、丛生芽诱导、伸长生长和生根培养，培养条件均为：温度21±2°c，光照时间为14～16 h/d，光照强度为2000～2500 lx。
12、优选的，步骤（1）中，所述消毒方法为：使用0.1%的hgcl2浸泡消毒1.5～2 h后，再用无菌水浸泡20～30 min，挑出种子置于无菌滤纸上吸干水分，获得无菌种子。
13、优选的，步骤（6）中，所述移栽炼苗过程中的环境条件为：温度为20～30°c，空气湿度保持在80%以上。
14、本发明的技术进步和有益效果是：
15、（1）本发明以带种皮的云南松种子为起始的外植体材料，在消毒过程中可以延长消毒时间，消毒后几乎不会影响种子活力。
16、（2）消毒后的种子直接接种在组培瓶内的无菌纸上，不用去种皮，操作省时省力，且萌发速度快；避免了种子在培养基上受水势影响，出现发现慢或发芽困难的问题。
17、（3）本发明不经过愈伤组织，直接通过顶芽形成丛生芽，缩短了培育时间，节省了成本。
18、（4）本发明中利用植物组织培养的方法进行材料扩繁，不受季节限制，条件可控，可连续生产。
19、（5）本发明实现了云南松的组培苗高效扩繁，能够为云南松优良种质的规模化培育提供技术保障。
1.一种云南松组培苗的繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于，步骤（3）中，丛生芽诱导后将诱导出的丛生芽进行继代扩繁，所述继代扩繁使用的培养基为在丛生芽诱导培养基中添加0.1%活性炭制备而成。
3.根据权利要求1或2所述的繁殖方法，其特征在于，所述无菌萌发、丛生芽诱导、丛生芽进行继代扩繁、伸长生长和生根培养，培养条件均为：温度21±2°c，光照时间为14～16h/d，光照强度为2000～2500 lx。
4.根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于，步骤（1）中，所述消毒方法为：使用0.1%的hgcl2浸泡消毒1.5～2 h后，再用无菌水浸泡20～30 min，挑出种子置于无菌滤纸上吸干水分，获得无菌种子。
5.根据权利要求1所述的繁殖方法，其特征在于，步骤（6）中，所述移栽炼苗过程中的环境条件为：温度为20～30°c，空气湿度保持在80%以上。
