背景技术:
1、本文公开的主题涉及从全血中分离和富集病原体的技术。具体地,所公开的技术涉及改进从沉降工作流程中回收病原体并且可以与随后的鉴定和/或敏感性分析结合使用的方法、系统和组合物。
2、可能导致败血症、休克和其他危及生命的并发症的血流感染是主要的全球医疗保健挑战。血源性病原体的及时鉴定是这些感染管理中公认的临床瓶颈。例如,从患者抽取小瓶血液并培养长达五天,以检测病原体的存在。如果培养物是阳性的,则将来自培养物的样品用于病原体的革兰氏染色和分子分析(例如,聚合酶链反应)以鉴定物种。因此,培养和鉴定患者样品中存在的病原体可能需要几天时间。细菌感染的确认和细菌种类的鉴定可以促进基于抗微生物敏感性测试的病原体特异性治疗的选择。由于从血液中获得微生物鉴定和抗微生物敏感性测试的这些耗时过程,在获得精确诊断之前通常给患者开具广谱抗生素处方。然而,与广谱抗生素相比,精确的抗生素治疗更有效并且可以最小化对共生微生物群的破坏,从而改善了临床结果。不幸的是,微生物诊断的长期延迟促进了抗生素的非靶向使用,这可能导致患者治疗效果不佳,并且还可能促进抗生素抗性病原体的出现。
技术实现思路
1、下文概述了与最初要求保护的主题范围相称的某些实施方案。这些实施方案并非旨在限制要求保护的主题的范围,而是这些实施方案仅旨在提供可能的实施方案的简要概述。实际上,本发明可包括多种形式,这些形式可类似于或不同于下文所述的实施方案。
2、在一个实施方案中,提供了一种从包含红细胞的生物样品中分离细菌细胞的方法。所述方法包括以下步骤:使所述生物样品与聚集剂和抗凝剂接触,以在样品处理容器中形成具有第一体积的沉降溶液;允许发生重力沉降,使得在所述样品处理容器中形成顶层和底层,其中所述底层相对于所述顶层富集红细胞;将所述顶层与所述底层分离;离心所分离的顶层以形成沉淀;从上清液中分离沉淀;以及将所分离的沉淀重悬浮于第二体积的悬浮溶液中以形成样品溶液,所述第二体积小于所述第一体积。
3、在一个实施方案中,提供了一种用于沉降生物样品中的细胞的试剂盒。所述试剂盒包括聚集剂,所述聚集剂具有至少100kda的分子量;以及抗凝剂。
4、在一个实施方案中,提供了一种用于分析全血的方法。所述方法包括以下步骤:在包括生物样品、聚集剂和抗凝剂的样品处理容器中经由重力沉降来形成顶层和底层,其中所述底层相对于所述顶层富集红细胞;离心所述顶层以形成沉淀;将所分离的沉淀重悬浮于第二体积的悬浮溶液中以形成样品溶液;以及分析所述样品溶液中细菌的存在。
1.一种从包含红细胞的生物样品中分离细菌细胞的方法,所述方法包括:
2.根据权利要求1所述的方法,所述方法包括将所述样品溶液加载在微流体分析装置中。
3.根据权利要求1所述的方法,所述方法包括使用所述微流体分析装置以进行抗微生物敏感性测试。
4.根据权利要求1所述的方法,所述方法包括使用所述微流体分析装置以鉴定所述样品溶液中的一种或多种病原体。
5.根据权利要求1所述的方法,其中所述聚集剂包含高分子量聚合物。
6.根据权利要求5所述的方法,其中所述聚集剂在所述溶液中的重量体积比为1%-10%。
7.根据权利要求1所述的方法,其中所述接触包括使所述生物样品同时与所述抗凝剂和所述聚集剂接触。
8.根据权利要求1所述的方法,其中所述抗凝剂包括阿加曲班,并且所述聚集剂包括具有至少100kda的分子量的葡聚糖。
9.根据权利要求1所述的方法,所述方法包括在将所述样品溶液加载到所述微流体分析装置中之前洗涤所分离的沉淀。
10.一种用以沉降生物样品中的细胞的试剂盒,所述试剂盒包括:
11.根据权利要求10所述的试剂盒,其中所述聚集剂在溶液中。
12.根据权利要求11所述的试剂盒,其中所述聚集剂在所述溶液中的重量体积比为1%至8%。
13.根据权利要求11所述的试剂盒,所述试剂盒包括所述生物样品,其中所述生物样品为全血,并且其中所述全血的体积和所述溶液的体积具有在0.8:1至1:1.5的范围内的比率。
14.根据权利要求11所述的试剂盒,其中所述抗凝剂在所述溶液中。
15.根据权利要求10所述的试剂盒,其中所述抗凝剂是凝血酶抑制剂。
16.根据权利要求10所述的试剂盒,其中所述聚集剂是羟乙基淀粉或明胶。
17.根据权利要求10所述的试剂盒,其中所述抗凝剂是阿加曲班。
18.根据权利要求10所述的试剂盒,其中所述聚集剂是葡聚糖。
19.根据权利要求10所述的试剂盒,所述试剂盒包括样品处理容器,在所述样品处理容器中设置有所述聚集剂和所述抗凝剂。
20.一种用以分析全血的方法,所述方法包括:
21.根据权利要求20所述的方法,其中在所述分析之前不培养所述样品溶液。