本发明的主题是一种用于创建数据库的方法，所述数据库可以被使用来确定光透射聚集度测定测量的虚拟参考值。本发明的主体还是一种用于确定虚拟参考值用以在使用所创建的数据库的情况下对待检查的血样的富血小板血浆执行光透射聚集度测定测量以及在使用该虚拟参考值的情况下执行光透射聚集度测定测量的方法。
背景技术：
1、为了评价凝血细胞(血小板)功能性，光透射聚集测定(lta)是最常使用的方法之一。为了执行lta测量，借助于离心从由受试者提供的血样中获取所谓的富血小板血浆(prp)。由于具有在1.5μm至3μm之间的直径的圆盘状外形，在凝血细胞处发生光散射，所述光散射使prp呈现为浑浊液体。在给prp样本添加激活剂之后，凝血细胞交联并且构成聚集体，由此prp样本(至少在该prp样本源自健康受试者在范围上)的透光性增加，并且随着时间的推移，透光率接近最大值。在lta测量的范围中，在标准化条件下随着时间的推移测量透射率的增加(或消光的减少)，其方式是将光线对准prp样本并且测量从样本中射出的光线的强度。文献“sakayori taskuku等人：″evaluation of the newly developedadenosine diphosphate induced platelet aggregation level systeminaggregometer on automated coagulation analyzer″，clinical laboratory，bd.65，nr.12/2019，2019年12月1日(2019-12-01)，xp 055871304”公开一种lta方法，其中使用所谓的“adp诱导的血小板聚集水平(adp-induced platelet aggregation level，apal))来评估lta测量。在“ling li-qin等人：″evaluation of an automated light transmissionaggregometry”，platelets(london)，bd.28，nr.7，2.februar 2017(2017-02-02)，712-719页，xp 055871233”中介绍关于凝结分析仪的性能的研究。在文献“le blanc jessica等人：″advances in platelet function tenting-light transmission aggregometry andbeyond“，journal of clinical medicine，bd.9，nr.8，2020年8月13日(2020-08-13)，2636页，xp 055871250”中给出关于在lta测量方法的领域中的新进展的概览。us 2017/248576a1公开一种lta分析仪，所述lta分析仪具有三个用于发出三种不同的光波长的光源，其中针对不同的测量任务使用不同的波长。文献“mukaide kae：″overview of the automatedcoagulation analyzer cs5100′，sys-mex journal international，2013，xp 055871951”提供关于自动凝血分析仪“cs-5100”的产品概览。
2、为了能够解释光透射的变化，在现有技术中需要除了prp样本之外还提供来自同一受试者的贫血小板血浆(英文：“platelet-poor plasma”，下文中为“ppp”)样本。同样确定该ppp样本的透射率，并且用作用于在prp上进行的lta测量的参考值。由于ppp仅具有低的凝血细胞浓度，因此通常是透明液体并且具有最大的透射率。通常使在prp处测量的透射率与该最大透射率成比例。只有该行为方式使得在现有技术中能够有意义地解释lta测量并且尤其是能够评价聚集的最大程度以及聚集变化的速度。
3、为了获取ppp样本而需要提取附加血液量可能对于受试者是负担。这尤其是适用于自然具有少的血液量的新生儿或婴儿，或也适用于由于既往疾病而只能有限度地采血的患者。此外，为了提供ppp样本需要附加的工作耗费以及附加的耗材。
技术实现思路
1、在此背景下，本发明的任务是提供一种用于创建用于确定lta测量的虚拟参考值的数据库的方法、用于确定虚拟参考值用以在使用所创建的数据库的情况下执行lta测量的方法以及用于执行lta测量的方法，所述方法以更少的耗费提供可靠的结果。该任务借助于独立权利要求的特征来解决。在从属权利要求中说明有利的实施方式。
2、根据本发明的用于创建用于确定lta测量用的虚拟参考值的数据库的方法包括以下步骤：
3、a.提供参考血样的富血小板血浆(prp)；
4、b.利用第一光波长和与所述第一光波长不同的第二光波长对所述参考血样的prp执行光透射测量；
5、c.提供所述参考血样的贫血小板血浆(ppp)；
6、d.对ppp执行光透射测量用于确定ppp参考值；
7、e.在数据库中将步骤d的测量结果分配给步骤b的测量结果；
8、f.对于多个参考血样重复步骤a至e。
9、首先，阐述在本描述的范围中使用的一些术语。根据本发明的方法需要提供血样的富血小板和贫血小板血浆。可以以原则上已知的方式、例如如在文献“leitlinie-thrombozytopathien，version 2.1(awmf register nr.086-003，update 2/2018)”中所描述的那样进行提供。在此尤其是将定义量的合适的抗凝剂(例如柠檬酸钠)加到血样中，以便防止血液凝固。
10、当对血样的prp或ppp执行光透射测量时，优选地将预先给定强度的光线对准prp或ppp的通常位于透光容器中的体积上，其中光线的强度在穿过该体积之后被测量。从初始预先给定的强度与在穿过之后的强度的比例中得出透光率，所述透光率可以表示光透射测量的结果。在对ppp的光透射测量的情况下，透射率可以形成ppp参考值。
11、如果利用第一波长并且利用第二波长执行光透射测量，则这些测量可以在时间上依次地或也可以同时地对所检查的体积的不同部分体积被执行。
12、在本描述的范围中，如果两个波长相差至少10nm，则认为所述两个波长是不同的。在一种实施方式中，第一波长与第二波长相差至少50nm，优选地相差至少100nm，进一步优选地相差至少200nm。第一波长可以处于300nm和500nm之间的范围中，并且优选地处于345nm和465nm之间，进一步优选地处于385nm和425nm之间。此外，第二波长可以处于在500nm和800nm之间的范围中，并且优选地处于550nm和700nm之间，进一步优选地处于600nm和640nm之间。
13、在本发明的范围内，可以利用至少具有上述波长间隔或位于上述范围内的单色光来执行对prp进行的光透射测量。在本发明的范围内也可能的是，使用通过叠加多个光波长形成的光束用于光透射测量。在这种情况下，光束的波长由光线中包含的波长的(优选地根据强度加权的)平均值给出。两个光束的波长间隔就此而言由光束的平均值的间隔预先给定。当在本描述的范围中谈论“一个波长的光”时，这也可以指其波长平均值处于该波长处的对应的光束。
14、在本发明的范围内，利用至少两个不同波长对参考血样的prp执行光透射测量，从中尤其是可以确定透射率。附加地，以从现有技术中原则上已知的方式对参考血样的ppp确定光透射的参考值(在下面也被称为ppp参考值)。在本发明的范围中已经认识到，在对prp利用至少两个不同波长的获取的测量值与ppp参考值之间存在统计上显著的关系，当针对多个参考血样评估在数据库中存放的值时，所述关系显露。这种统计关系使得能够在创建数据库之后，使用所述数据库来为患者的其他待检查的血样确定虚拟参考值，所述虚拟参考值表示ppp参考值的可靠估计值，而不必从同一患者附加地获取并且测量ppp样本。例如，可以从数据库中确定在对待检查的血样的prp获取的测量值与虚拟参考值之间的数学关系。这在下面结合用于确定虚拟参考值的方法以及用于执行lta测量的方法更加详细地予以阐述。可替代地，还可以利用其他手段、尤其是借助于原则上已知的统计方法(必要时在人工智能的帮助下)从数据库中确定针对ppp参考值的虚拟参考值。这样的方法原则上对于本领域技术人员是已知的。本发明的核心在于以下知识：通过根据本发明的方法步骤可以创建数据库，在所述数据库中存在足够的信息用于确定虚拟参考值。由于根据本发明的数据库，因此可以不需要附加采血(blutabnahme)用于获取ppp样本，并且可以避免由此引起的耗费。
15、在本发明的范围中已经认识到，对于具体的血样，不仅ppp参考值而且对prp利用不同的波长获取的测量值都与血样的生理状态、也即尤其是血样中包含的成分的类型和浓度有关，这些影响ppp样本(以及从而ppp参考值)和prp样本的透射率。这样的成分可以例如是血红蛋白、铜蓝蛋白、胆红素、脂蛋白或由药物馈送的其他成分。发明人假设存在特定成分，所述特定成分根据光波长影响透射率。因此通过使用至少两个不同的光波长，在数据库内得出在对prp确定的测量值和ppp参考值之间的在相关性，因为不仅prp测量值而且ppp参考值都以预定的方式受在血样中所包含的成分的类型和/或浓度影响。在创建了数据库之后，因此在检查其他血样时，可以仅仅通过利用不同的波长测量prp并且必要时在使用数据库(或从中获得的数学关系)的情况下推断出ppp参考值，而不必获取附加的ppp样本。
16、在一种优选的实施方式中，用于创建数据库的方法包括其他步骤：
17、g.在执行了根据步骤b的测量之后，给参考血样的prp添加预先给定量的激活剂；
18、h.在添加激活剂之后并且在通过激活剂触发的聚集开始之前重复根据步骤b的测量；
19、i.在数据库中将步骤h的测量结果分配给步骤d的测量结果；
20、.j.对于多个参考血样重复步骤g至i。
21、在此，术语“激活剂”表示一种试剂或多种试剂，所述一种试剂或多种试剂被设立用于在添加至prp之后触发凝血细胞的聚集。激活剂可以包括一种或多种试剂，所述试剂选自瑞斯托菌素、花生四烯酸、三磷酸腺苷(adp)、肾上腺激素(肾上腺素)、胶原蛋白、凝血酶受体激活肽(trap)。在添加了激活剂之后，聚集以时间延迟开始。凝血细胞在一定时间段上保持在激活状态，并且仍不发生光透射增加，所述增加由凝血细胞的交联触发。优选地，在该时间段期间、即在实际聚集发生之前执行步骤h的重复测量。在添加所述激活剂之后根据步骤h的光透射测量优选地在添加所述激活剂之后在0和10s之间、优选地在0和5s之间的时间段内被执行，其中优选地为了检测透射值在1s和6s之间、优选地在3s和5s之间的时间段上形成时间平均值。在添加激活剂之前的光透射测量优选地紧接在添加激活剂之前发生，例如在添加激活剂之前0s和10s之间的时间段内发生。在prp体积与根据步骤g添加到prp体积中的激活剂的体积之间的混合比通常为9：1，但是也可以例如处于20：1与2：1之间，优选地处于15：1和4：1之间、进一步优选地处于7：1和11：1之间。
22、在上述实施方式的情况下，不仅在添加预先给定量的激活剂之前而且在之后利用两种光波长执行光透射测量。已经表明，通过附加地获取的测量值可以更加精确地和更有说服力地推断出ppp参考值。尤其是已经认识到，给prp添加预先给定量的激活剂引起光透射的初始的以及与单独的prp样本有关的改变，这可以是光透射的减少或增加。这种初始的改变同样具有与血样并且尤其是与其成分的生理状态的依赖性。在所描述的实施方式中，附加信息因此被添加到数据库，所述附加信息使得能够以改善的方式在统计上推断出ppp参考值。
23、在本发明的一种实施方式中，在方法步骤g中，在第一参考血样的情况下使用第一激活剂，并且在第二参考血样的情况下使用与第一激活剂不同的第二激活剂。由此变得有可能的是，在数据库内在借助于不同的激活剂获得的测量数据之间进行区分。如果稍后在使用特定激活剂的情况下确定待检查的血样的虚拟参考值，则可以在数据库内动用在使用同一激活剂的情况下对参考血样检测的测量结果(或动用由此确定的数学关系)。如果可以期望不同的激活剂不引起不同的测量结果，则根据不同的激活剂获得的测量结果也可以在数据库中被组合或一起被使用来确定数学关系。
24、可以利用至少三种彼此不同的光波长执行步骤b和/或步骤h的光透射测量。尤其是，第一波长的光可以具有在380nm和420nm之间、优选地在400nm和410nm之间的范围内的波长。第二波长的光可以具有在500nm和550nm之间、优选地在520nm和530nm之间的范围内的波长。第三波长的光可以具有在620nm和700nm之间、优选地在620nm和630nm之间的范围内的波长。已经表明，通过使用三个波长进一步提高精度，可以以所述精度推断出ppp参考值。优选地使用三个波长不仅用于在添加之前的测量而且用于在添加之后的测量。
25、在一种有利的实施方式中，多个参考血样具有第一参考血样和第二参考血样，其中第一参考血样具有至少一种第一成分，所述第一成分不包含在第二参考血样中或者以较低的浓度包含在第二参考血样中。例如，该成分在第一参考血样中的浓度可以是该成分在第二参考血样中的浓度的超过1.5倍、优选地超过3倍、进一步优选地超过5倍。例如20倍的浓度差异也是可能的。第一成分可以优选地选自由血红蛋白、铜蓝蛋白、脂蛋白、甘油三酯、胆红素组成的组中。第一成分也可以是来自药物或食品的染料或组成成分，或其分解产物。如果参考血样在其成分方面不同，则数据库涵盖血样的不同生理状态的更宽泛的基础。优选地，使用多个参考血样(例如超过5个、优选地超过10个、进一步优选地超过20个)来创建数据库，所述参考血样在至少一种其成分的类型和/或浓度方面例如由于上述浓度差异分别成对地彼此不同。还可能的是，在使用参考血样的情况下创建数据库，所述参考血样分别成对地通过超过一种、优选地超过2种、进一步优选地超过5种成分彼此不同，其中该差异可以由上面提到的浓度差给出。由此进一步改善可以从数据库中在统计上推断的精度。
26、可以规定，将参考血样的prp体积划分成多个子体积，其中对这些子体积中的每一个执行根据本发明的方法，其中随后在多个子体积上分别形成所确定的测量值的平均值并且记录到数据库中。通过这种求平均值可以进一步提高统计精度。
27、在一种实施方式中，将第一成分手动地添加到第一参考血样。还可能的是，以不同的预先给定的浓度将成分馈送给不同的参考血样。这具有以下优点，即可以系统地检测成分对在本发明范围内确定的测量值的影响并且记录到数据库中。尤其是，可以利用多个参考血样进行测量系列，其中将成分以多种不同浓度添加到不同的参考血样和/或其中将多种不同的成分必要时以不同的浓度添加到不同的参考血样。
28、原则上也可能的是，用于执行根据本发明的方法所使用的参考血样的至少一部分从受试者获取，其中例如由于先期疾病或药物服用或其他影响可能考虑到参考血样在其中包含的成分的类型和/或浓度上彼此不同。
29、本发明的主题此外是一种用于在使用根据本发明的数据库的情况下确定虚拟参考值用以对待检查的血样的prp执行lta测量的方法。该方法包括以下步骤：
30、a.提供待检查的血样的prp；
31、b.利用第一光波长和与所述第一光波长不同的第二光波长对待检查的血样的prp执行光透射测量；
32、c.使用通过步骤b获得的测量结果以及根据本发明的数据库来确定待检查的血样的虚拟参考值。
33、在创建了根据本发明的数据库之后，可以利用上述方法来对于其他待检查的血样确定所谓虚拟参考值。当前，虚拟参考值表示根据数据库和对prp执行的测量确定的ppp参考值的估计值。借助于虚拟参考值，可以有意义地解释随后执行的lta测量，而不必从同一患者获取ppp的样本。
34、用于确定虚拟参考值的方法优选地包括其他步骤：
35、d.在执行了的根据步骤b的测量之后，给待检查的血样的prp添加预先给定量的激活剂；
36、e.在给待检查的血样的prp中添加激活剂之后以及在开始通过激活剂触发的聚集之前，重复根据步骤b的测量；
37、f.将通过步骤e获得的测量结果包含在步骤c的确定之内。
38、根据步骤a提供prp以及根据步骤b和/或e执行光透射测量可以以与上面结合用于创建数据库的方法描述的相同方式进行。尤其是可以规定，为了测量，使用(至少基本上)相同的光波长或光波长范围和/或使用在prp体积与所添加的激活剂的体积之间的(至少基本上)相同的比例。就此而言可以通过上面已经结合用于创建数据库的方法描述的特征来改进用于确定虚拟参考值的方法。由此可以确保在与创建数据库时相同或至少尽可能相似的条件下检测测量结果。由此可以以高精度进行根据对待检查的血样检测的测量结果得出的推断。
39、在最简单的情况下，可以通过在待检查的血样的测量结果(通过步骤b和必要时e获得)与数据库中包含的测量结果进行比较之间来确定虚拟参考值。如果在数据库中包含参考血样的测量结果，所述测量结果与待检查的血样的测量结果相同或基本相同，则可以使用在数据库中针对该参考血样存在的ppp参考值作为虚拟参考值。
40、然而，在许多情况下，在数据库中将不能找到参考血样的与待检查的血样的数据记录充分一致的数据记录。此外，原则上在数据库中包含的单个数据记录也可能有测量误差，使得追索(rückgriff)单一数据记录来确定虚拟参考值可能易于出错。因此，优选地规定，构建基于数据库的数学关系，该数学关系具有从待检查的血样获取的测量结果作为输入参量并且具有待检查的血样的虚拟参考值作为输出参量。尤其是，已经表明虚拟参考值virtppp(在说明书的范围中部分地也称为virtref)可以被说明为测量值的数学函数：
41、virtppp＝virtppp(xd1，xd2，xd3，xd4)，其中
42、xd1：在添加激活剂之前，在波长λ1的情况下对待检查的血样的prp测量的透射率，
43、xd2：在添加激活剂之前，在波长λ2的情况下对待检查的血样的prp测量的透射率，
44、xd3：在添加激活剂之后，在波长λ1的情况下对待检查的血样的prp测量的透射率，
45、xd4：在添加激活剂之后，在波长λ2的情况下对待检查的血样的prp测量的透射率，
46、λ1：第一波长，和
47、λ2：第二波长。
48、数学关系或函数virtppp(xd1，xd2，xd3，xd4)可以借助于原则上从现有技术中已知的统计适配方法从数据库中来获取。
49、在一种有利的实施方式中，在数学关系的范围中确定比例v1＝xd1/xd2、v2＝xd3/xd4和v3＝v2/v1并且用于计算虚拟参考值。
50、只要使用了超过两个的光波长来创建数据库并且测量待检查的血样，则可以借助于在现有技术中原则上已知的统计适配方法来相应地扩展该函数。
51、本发明的主题此外是一种用于对待检查的血样执行lta测量的方法，所述方法包括以下步骤：
52、a.执行根据本发明的用于确定待检查的血样的虚拟参考值的方法，
53、b.在使用虚拟参考值的情况下执行lta测量。
54、尤其是，光透射聚集度测定测量可以随着时间的推移紧接在用于确定虚拟参考值的方法之后。如果在确定参考值时已经加上了激活剂，则可以在紧接着的lta测量的范围中检测由此引起的聚集。激活剂优选地被构造为使得所述激活剂适用于lta测量。在用于确定虚拟参考值的方法之后的lta测量原则上可以利用单个波长或利用多个波长来进行，所述波长交替地被引导穿过prp的体积或者同时穿过prp的不同子体积。
55、本发明的主题此外是一种用于确定虚拟参考值用于对待检查的血样的prp执行lta测量的装置，所述装置包括用于选择性地发出第一光波长以及与第一光波长不同的第二光波长的光的照明模块；用于插入prp样本使得照明模块的光穿过prp的样本容纳部；光传感器，所述光传感器被构造用于检测穿过prp的光；以及控制模块，所述控制模块被构造用于操控所述装置使得执行以下步骤：
56、a.利用第一光波长和与所述第一光波长不同的第二光波长对待检查的血样的prp执行光透射测量；
57、b.使用通过步骤a获得的测量结果以及根据本发明的数据库来确定待检查的血样的虚拟参考值。
58、在一种优选的实施方式中，所述装置包括用于自动地将预先给定量的激活剂添加给prp的施加器，其中所述控制模块被构造为操控所述装置，使得执行以下步骤：
59、c.在执行根据步骤a的测量之后，给所述待检查的血样的prp添加预先给定量的激活剂；
60、d.在给待检查的血样的prp添加激活剂之后并且在开始通过所述激活剂触发的聚集之前，重复根据步骤a的测量；
61、e.将通过步骤d获得的测量结果包含在步骤b的测量之内。
62、该装置尤其是可以具有计算模块，所述计算模块被构造用于访问基于根据本发明的数据库的数学关系并且基于该数学关系和在步骤a中或在步骤a和d中获得的测量值来确定虚拟参考值。数学关系尤其可以存放在计算模块中。
63、根据本发明的装置可以通过已经结合用于创建数据库的方法、用于确定虚拟参考值的方法和/或用于执行光透射聚集度测定测量的方法描述的其他特征来改进。
1.一种用于创建数据库的方法，所述数据库用于确定光透射聚集度测定测量的ppp参考值的虚拟参考值，所述方法包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一和/或第二波长满足以下特征中的至少一个：
3.根据权利要求1或2所述的方法，包括其他步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其中根据步骤h的光透射测量在添加所述激活剂之后在0和10s之间、优选地在0和5s之间的时间段内被执行。
5.根据权利要求4所述的方法，其中在根据步骤h的光透射测量期间，在1s和6s之间、优选地在3s和5s之间的时间段上形成光透射的时间平均值。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中利用至少三种彼此不同的光波长来执行步骤b的光透射测量。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述多个参考血样包括第一参考血样和第二参考血样，其中所述第一参考血样具有至少一种第一成分，所述第一成分不包含在第二参考血样中或以是第一成分在所述第二参考血样中的浓度的不到1.5分之一、优选地不到3分之一、更优选地不到5分之一的浓度包含在第二参考血样中，其中所述第一成分优选地选自由血红蛋白、铜蓝蛋白、脂蛋白、甘油三酯、胆红素组成的组中。
8.根据权利要求7所述的方法，其中将所述第一成分手动添加到所述第一参考血样。
9.一种用于在使用根据权利要求1至8中任一项的数据库的情况下确定对待检查血样的prp的光透射聚集度测定测量的ppp参考值的虚拟参考值的方法，所述方法包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述的方法，此外包括以下步骤：
11.根据权利要求9或10中任一项所述的方法，其中建立基于所述数据库的数学关系，所述数学关系具有在待检查的血样处获取的测量结果作为输入参量以及具有所述待检查的血样的虚拟参考值作为输出参量。
12.一种用于对待检查的血样执行光透射聚集度测定测量的方法，所述方法包括以下步骤：
13.一种用于确定虚拟参考值用于对待检查的血样的prp执行lta测量的装置，所述装置包括用于选择性地发出第一光波长以及与所述第一光波长不同的第二光波长的光的照明模块(13)；用于插入prp样本(17)使得所述照明模块(13)的光穿过prp(17)的样本容纳部(16)；光传感器(18)，所述光传感器被构造用于检测穿过prp(17)的光；以及控制模块(19)，所述控制模块被构造用于操控所述装置使得执行以下步骤：
14.根据权利要求13所述的装置，所述装置具有用于自动地将预先给定量的激活剂添加到prp(17)的施加器(22)，其中所述控制模块(19)被构造为操控所述装置，使得执行以下步骤：
