本发明涉及土壤修复，特别涉及一种土壤修复复配噬油菌剂及其制备方法和应用。
背景技术：
1、石油是一种粘稠的、深褐色液体，被称为“工业的血液”，主要成分是各种烷烃、环烷烃、芳香烃的混合物。石油在勘探、开采、炼制、清罐、储运过程中，由于事故、跑冒、滴漏、自然沉降等原因，产生大量的石油烃污染土壤。被石油污染后的土壤成分复杂，含有大量老化原油、沥青质、胶质、石蜡、悬浮固体以及各种酸性、腐烛性药剂，具有难降解、有毒、有害等特点，石油烃污染土壤在自然环境中很难降解恢复，长期的污染会造成土壤、植被和水体等生态系统的污染，破坏土壤生态系统的结构和功能，影响土壤的透气性和渗水性，肥力下降。石油中的一些致畸致癌物质通过食物链的生物富集作用，直接危害人类健康。
2、近年来，填埋、分散施耕、集中干燥焚烧、化学固化处理、化学氧化降解、化学溶剂清洗、混凝法固液分离以及萃取法处理石油污染土壤的方法在国内外普遍采用，但这些方法本身也有不足，如成本高，易造成二次污染的问题。微生物法修复石油污染土壤，修复条件温和，不破坏土壤性质，不产生二次污染，是一种环境友好型的修复方式。目前，普遍认为生物法是土壤修复的一种发展趋势。
技术实现思路
1、为克服背景技术中存在的现有石油污染土壤的处理方法成本高易造成二次污染的问题，本发明的第一个目的在于提供土壤修复复配噬油菌剂。本发明筛选得到的土壤修复复配噬油菌剂，成本低，修复条件温和，不破坏土壤性质，不产生二次污染，是一种环境友好型的修复方式。
2、一种土壤修复复配噬油菌剂，包括霍氏肠杆菌nr_126208.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_116240.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_075005.2、铜绿假单胞菌nr_113599.1、解淀粉芽孢杆菌nr_117946.1；所述霍氏肠杆菌nr_126208.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_116240.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_075005.2、铜绿假单胞菌nr_113599.1、解淀粉芽孢杆菌nr_117946.1按照活菌数比为1:1:1:1:4-4:1:1:1:1复配。
3、本发明的第二个目的在于提供土壤修复复配噬油菌剂的制备方法，包括以下步骤：
4、步骤1、分别将霍氏肠杆菌nr_126208.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_116240.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_075005.2、铜绿假单胞菌nr_113599.1、解淀粉芽孢杆菌nr_117946.1接种于pda琼脂培养基中，转速165r/min下振荡培养72小时，得到5种活化的菌株；
5、步骤2、将步骤1中活化的5种菌株各自分别接种到lb肉汤液体培养基，放入摇床37℃温度、165r/min下培养48小时得到5种种子液；
6、步骤3、将步骤2中得到的5种种子液各自按照lb发酵培养基体积的10％进行接种，于37℃、140r/min振荡培养36-40h，得到5种菌液；
7、步骤4、将步骤3中得到的5种菌液按一定活菌数比混合后得到复配菌剂。
8、进一步的，所述pda琼脂培养基的配制方法为：取20克土豆削皮切块，加入一升水微沸熬煮半小时后，加入20克糖，加水补齐至1升后加入20克琼脂。
9、进一步的，所述lb肉汤液体培养基的配制方法为：每1l水中含有5克氯化钠，3克牛肉膏，10克蛋白胨构成；
10、进一步的，所述lb发酵培养基的配制方法为：每1l水中含有氯化钠1g，蛋白胨2g，红糖12g磷酸氢二钾1.1g，酵母侵膏1.1g。
11、进一步的，所述复配菌剂按霍氏肠杆菌nr_126208.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_116240.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_075005.2、铜绿假单胞菌nr_113599.1、解淀粉芽孢杆菌nr_117946.1活菌数比为1:1:1:1:4-4:1:1:1:1复配；
12、所述复配的复合菌剂为液态的，活菌浓度为2×108cfu/ml-6×108cfu/ml。
13、本发明的第三个目的在于提供一种土壤修复复配噬油菌剂在石油烃污染土壤生物修复上的应用。
14、进一步的，土壤修复复配噬油菌剂在石油烃污染土壤生物修复上的应用方法，包括以下步骤：
15、(11)确定石油烃污染土壤区域的面积及深度，确定待修复石油烃污染土壤的总量，对待修复土壤的石油烃含量及湿度进行测定；
16、(12)向待修复土壤中添加5wt％牛粪以及8wt％的木屑，添加后进行耙地翻耕，使其与土壤混合均匀；
17、(13)将复配菌剂溶解于水中，按照复配菌剂稀释比例为1:20配制成复配菌剂溶液；向待修复土壤区域喷洒所述复配菌剂溶液，复配菌剂溶液的喷洒量为待修复土壤质量的0.5％，喷洒后进行耙地，使得污染土壤与喷洒在土壤表面的溶液充分混合均匀，对污染土壤进行养护60天。
18、进一步的，所述步骤(12)及步骤(13)中所述的耙地深度应等于步骤(11)中所确定的石油烃污染土壤区域的深度。
19、进一步的，步骤(13)中土壤养护的具体方式为：每天耙地3～5次，养护期间根据土壤湿度情况向待修复区域补充适量水分，使得土壤湿度维持在45％～60％之间。
20、进一步的，石油烃污染土壤的石油烃含量≤6wt％。
21、本发明与上述背景技术相比较可具有如下有益效果：
22、本发明提供的五种菌株均是从大庆油田石油污染土壤内分离筛选的，对石油烃具有较好的降解作用，对石油污染土壤具有良好的生物修复效果，无二次污染，为石油污染的微生物修复提供重要的参考。
23、本发明提供的一种针石油烃污染土壤的微生物菌剂修复方法，具有工艺简单、经济成本低、二次污染小、易于工业实现等优点；对于石油烃含量6％以下污染土壤，可以实现原位修复，避免造成土壤生态系统的二次破坏，处理过程中所用微生物菌剂环境友好，不产生次生危害，具有显著的环境及经济效益。
1.一种土壤修复复配噬油菌剂，其特征在于：该噬油菌剂包括霍氏肠杆菌nr_126208.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_116240.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_075005.2、铜绿假单胞菌nr_113599.1及解淀粉芽孢杆菌nr_117946.1；所述霍氏肠杆菌nr_126208.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_116240.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_075005.2、铜绿假单胞菌nr_113599.1、解淀粉芽孢杆菌nr_117946.1按照活菌数比为1:1:1:1:4-4:1:1:1:1复配。
2.权利要求1所述的一种土壤修复复配噬油菌剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述pda琼脂培养基的配制方法为：取20克土豆削皮切块，加入一升水微沸熬煮半小时后，加入20克糖，加水补齐至1升后加入20克琼脂。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述lb肉汤液体培养基的配制方法为：每1l水中加入5克氯化钠，3克牛肉膏，10克蛋白胨；
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述复配菌剂按霍氏肠杆菌nr_126208.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_116240.1、贝莱斯芽孢杆菌nr_075005.2、铜绿假单胞菌nr_113599.1、解淀粉芽孢杆菌nr_117946.1活菌数比为1:1:1:1:4-4:1:1:1:1复配；
6.权利要求1所述的一种土壤修复复配噬油菌剂在石油烃污染土壤生物修复上的应用。
7.根据权利要求6所述的一种应用，其特征在于：包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的一种应用，其特征在于：所述步骤（12）及步骤（13）中所述的耙地深度等于步骤（11）中所确定的石油烃污染土壤区域的深度。
9.根据权利要求7所述的一种应用，其特征在于：步骤（13）中土壤养护的具体方式为：每天耙地3~5次，养护期间根据土壤湿度情况向待修复区域补充适量水分，使得土壤湿度维持在45%~60%之间。
10.根据权利要求7所述的一种应用，其特征在于，石油烃污染土壤的石油烃含量≤6wt%。
