本发明涉及细胞培养，具体为一种细胞培养方法。
背景技术：
1、巨噬细胞(英语：macrophages，缩写为m)是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞，巨噬细胞和单核细胞皆为吞噬细胞，在脊椎动物体内参与非特异性防卫(先天性免疫)和特异性防卫(细胞免疫)。目前，传统的巨噬细胞提取方法，提取较为的麻烦，而且根据传统的提取方法，巨噬细胞的培养效果较差，无法对其进行纯化处理。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种细胞培养方法，解决了传统的巨噬细胞提取方法，提取较为的麻烦，而且根据传统的提取方法，巨噬细胞的培养效果较差，无法对其进行纯化处理的问题。
2、为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种细胞培养方法，包括以下步骤：
3、1).巨噬细胞大多数选材为小鼠，以小鼠腹腔最为实用，其方法如下：
4、2).试验开始前，向小鼠腹腔内注射0.5ml含40μg刀豆球蛋白a的磷酸盐缓冲液。
5、3).3天后，引小鼠颈椎脱臼处死。
6、4).将小鼠全浸入75％酒精中3-5min，取出小鼠。
7、5).将小鼠置于无菌纸上，腹面朝上置于动物解剖台，用针头固定四肢，持镊剪开腹部皮肤，把皮肤拉向上下两侧，暴露出腹膜壁。
8、6).培养液制备：将多种氨基酸加入烧杯中，随后依次加入葡萄糖和双蒸馏水溶解，即可制备程培养液。
9、7).用70％酒精擦洗腹膜壁，注射器10ml吸入步骤6)中的培养液注入腹腔中，同时用手指从两侧压揉腹膜壁，使液体在腹腔内流动。
10、8).用针头轻挑起小鼠腹壁并微倾向一侧，使腹腔中液体集中于针头下吸取入针管内。
11、9).小心拔出针头，把步骤8)中取入针管内的液体注入离心管。
12、10).4-5℃下低速离心8-10min，去上清，重复两次后再次通过注射器10ml吸入步骤6)中的培养液注入其中。
13、11).以3×105个贴附细胞/平方厘米接种。
14、12).细胞悬液制备：将培养基加入新的烧杯中，随后加入20％小牛血清即可制备成细胞悬液。
15、13).接种3-5h后，除去培养液，随后使用步骤6)中制得的培养液冲洗1-2次，随后加入步骤12)中制备的细胞悬液，最后接种入培养器皿中，置温箱培养。
16、优选的，所述2)步骤中，注入磷酸盐缓冲液时，勿注入小鼠肠内。
17、优选的，所述5)步骤中，在操作的过程中勿伤及小鼠的腹膜壁。
18、优选的，所述6)步骤中的多种氨基酸为：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和硒半胱氨酸以上至少五种。
19、优选的，所述步骤10)中去上清的方法如下：用70-80目不锈钢纱网过滤后，吸去上清即可。
20、优选的，所述根据步骤13)中，置温箱培养2-3d。
21、优选的，所述步骤10)中，低速离心的转速为800-1000r/min。
22、本发明提供了一种细胞培养方法。具备以下有益效果：
23、本发明通过小鼠腹腔提取巨噬细胞，并且通过本发明的方法进行提取，每只小鼠可产生20-30×106细胞，其中90％为巨噬细胞，通过小鼠获取巨噬细胞，大多数均可获恶性，然后通过本发明的培养方法，培养中成功巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，易于培养，并可进行纯化。
1.一种细胞培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种细胞培养方法，其特征在于：所述2)步骤中，注入磷酸盐缓冲液时，勿注入小鼠肠内。
3.根据权利要求1所述的一种细胞培养方法，其特征在于：所述5)步骤中，在操作的过程中勿伤及小鼠的腹膜壁。
4.根据权利要求1所述的一种细胞培养方法，其特征在于：所述6)步骤中的多种氨基酸为：丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、精氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和硒半胱氨酸以上至少五种。
5.根据权利要求1所述的一种细胞培养方法，其特征在于：所述步骤10)中去上清的方法如下：用70-80目不锈钢纱网过滤后，吸去上清即可。
6.根据权利要求1所述的一种细胞培养方法，其特征在于：所述根据步骤13)中，置温箱培养2-3d。
7.根据权利要求1所述的一种细胞培养方法，其特征在于：所述步骤10)中，低速离心的转速为800-1000r/min。
