本发明涉及生物技术和医学领域,具体涉及circslc8a1在制备慢性肾脏病检测试剂盒中的应用。
背景技术:
1、慢性肾脏病(chronic kidney disease,ckd)发病率高达10%以上,已成为全球严重的公共健康问题。肾间质纤维化是各种病因导致的进展性ckd的共同病理表现和终末通路。肾小管上皮细胞(tubular epithelial cell,tec)是肾脏的主要固有细胞,极易受到损伤并做出应答。越来越多的证据表明,tec损伤后发生的部分上皮-间充质转化(partialepithelial-mesenchymal transition,partial emt)是启动适应性不良修复的关键环节,直接驱动间质纤维化的发生发展,深入了解调节tec损伤致纤维化的分子机制将有助于寻找抗纤维化的诊断标志物,延缓或阻止慢性肾脏病的进展。
2、环状rna(circular rna,circrna)是一类具有强大功能的非编码rna(non-codingrna,ncrna),通过转录、表观遗传、翻译和翻译后多个层面发挥病理生理作用。近年来,越来越多的研究表明包括血液、唾液、尿液等在内的体液中的circrna,对于肿瘤、代谢性疾病、自身免疫性疾病等多种疾病的早期诊断、病情评估、治疗应答以及生存预后具有重要的意义,可作为多种疾病临床诊断的潜在生物学标志物及治疗靶点。
3、目前,尚缺乏特异性肾间质纤维化诊断指标,在研开发的抗肾间质纤维化治疗的靶点和实验药物正处于临床前和临床试验阶段。
技术实现思路
1、本发明的第一个目的是提供circslc8a1在制备慢性肾脏病检测试剂盒或/和肾间质纤维化检测试剂盒中的应用,所述circslc8a1的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2、优选地,所述circslc8a1在慢性肾脏病患者肾组织中表达量低于正常肾组织,在ckd3-5期患者肾组织中表达量低于ckd1-2期患者肾组织中表达量。
3、优选地,所述circslc8a1在肾间质纤维化时表达下调。
4、本发明的第二个目的是提供一种慢性肾脏病或/和肾间质纤维化检测试剂盒,其含特异性引物对:atcgaagggactgccagagg和tgaaagacttaatcgccgc,或含特异性探针:5'-cacaacctaacaatttcatcattct-3'。
5、优选地,所述试剂盒为rt-qpcr试剂盒或原位杂交试剂盒。
6、本发明的第三个目的是提供上述试剂盒在生物样品中检测circslc8a1表达中的应用。
7、优选地,所述生物样品为肾组织或血清。
8、本发明的第四个目的是提供一种检测生物样品中circslc8a1表达的方法,为使用上述的试剂盒进行检测。
9、优选地,包括如下步骤:提取生物样品总rna,反转录后进行rt-qpcr;或包括如下步骤:将肾脏石蜡切片脱蜡、封闭、靶标修复、消化、杂交、洗涤、结合、显色、复染-脱水-封片、阅片。
10、优选地,所述rt-qpcr以β-actin为内参基因,所述β-actin的引物为gtgctatgttgctctagacttcg和atgccacaggattccatacc;所述杂交条件为40℃孵育2h;所述复染为苏木素染核、氨水返蓝。
11、优选地,所述生物样品为肾组织或血清。
12、本发明的优点:
13、本发明首次提出circslc8a1用于ckd肾间质纤维化的检测。本发明通过研究circslc8a1在人肾组织中的表达以及其在肾间质纤维化过程中的作用及机制,发现circslc8a1在ckd患者肾组织中表达明显下降,与肾功能、蛋白尿、肾脏病理等临床指标显著相关,circslc8a1有望成为评估ckd患者肾间质纤维化程度的生物学标志物。
14、本发明提供的技术方案具有较高的灵敏度及特异度,程序具有标准化、简洁的特点,节约时间、材料及人力成本,便于临床医生及时采取个性化的防治方案。本发明有望成为ckd有效诊断方法的选择
1.circslc8a1在制备慢性肾脏病检测试剂盒或/和肾间质纤维化检测试剂盒中的应用,其特征在于,所述circslc8a1的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的应用,其特征在于,所述circslc8a1在慢性肾脏病患者肾组织中表达量低于正常肾组织,在ckd3-5期患者肾组织中表达量低于ckd1-2期患者肾组织中表达量;或所述circslc8a1在肾间质纤维化时表达下调。
3.一种慢性肾脏病或/和肾间质纤维化检测试剂盒,其特征在于,含特异性引物对:atcgaagggactgccagagg和tgaaagacttaatcgccgc,或含特异性探针:5'-cacaacctaacaatttcatcattct-3'。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒为rt-qpcr试剂盒或原位杂交试剂盒。
5.权利要求3或4所述的试剂盒在生物样品中检测circslc8a1表达中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于,所述生物样品为肾组织或血清。
7.一种检测生物样品中circslc8a1表达的方法,其特征在于,使用权利要求3或4所述的试剂盒进行检测。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,包括如下步骤:提取生物样品总rna,反转录后进行rt-qpcr;或包括如下步骤:将肾脏石蜡切片脱蜡、封闭、靶标修复、消化、杂交、洗涤、结合、显色、复染-脱水-封片、阅片。
9.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,所述rt-qpcr以β-actin为内参基因,所述β-actin的引物为gtgctatgttgctctagacttcg和atgccacaggattccatacc;所述杂交条件为40℃孵育2h;所述复染为苏木素染核、氨水返蓝。
10.根据权利要求7或8所述的方法,其特征在于,所述生物样品为肾组织或血清。