本发明涉及生物工程，具体地说，涉及一种分泌表达免疫调节肽y6的毕赤酵母及其构建方法与应用。
背景技术：
1、免疫调节肽作为机体免疫系统的重要组成部分，可直接杀灭病原体或通过调节机体的免疫功能。与抗生素干扰细菌代谢过程的机制不同，免疫调节肽主要通过静电作用与菌膜结合并物理性破坏菌膜结构导致细菌死亡，不易产生耐药性。功能研究表明，免疫调节肽具有广谱杀菌活性，且对哺乳动物细胞没有毒性，具有潜在的治疗价值。此外，免疫调节肽能够改善动物的免疫力和生长性能，有望开发为一种新型安全高效的饲料添加剂。然而，目前免疫调节肽采用化学合成方法，步骤复杂、产量低、成本高，限制了其在实际生产中的广泛应用。
2、毕赤酵母表达系统作为常用的真核表达系统之一，具有以下优点：1)具有蛋白质加工、折叠和翻译后的修饰；2)异源表达效率高，自身基本不分泌外源蛋白，有利于目的蛋白的分离纯化；3)能够在简单的培养基中实现高密度培养，且能够利用甘油和甲醇作为唯一碳源生产外源蛋白；4)外源基因能够在其基因组中的特定位点稳定整合；5)发酵纯化操作简便易于工业化生产。
技术实现思路
1、本发明的目的是提供一种分泌表达免疫调节肽y6的毕赤酵母及其构建方法与应用。
2、为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种编码免疫调节肽y6的基因，所述基因的核苷酸序列如seq id no:1所示。
3、本发明中，免疫调节肽y6的氨基酸序列如seq id no:2所示。
4、第二方面，本发明提供含有所述基因的生物材料，所述生物材料包括但不限于重组dna、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体或工程菌。
5、第三方面，本发明提供一种包含所述基因的重组质粒，所述重组质粒的出发载体为ppic9k。
6、第四方面，本发明提供一种分泌表达免疫调节肽y6的毕赤酵母的构建方法，包括：根据毕赤酵母遗传密码子偏好性对免疫调节肽y6的编码基因进行密码子优化，优化后的基因克隆至毕赤酵母表达载体中构建重组表达质粒，将其转化至毕赤酵母感受态细胞中并筛选高效表达菌株。
7、进一步地，所述表达载体为ppic9k，所述毕赤酵母感受态细胞为gs115。
8、进一步地，优化后的基因的核苷酸序列如seq id no:1所示。
9、第五方面，本发明提供按照上述方法构建得到的毕赤酵母工程菌。
10、第六方面，本发明提供免疫调节肽y6或所述工程菌在制备用于治疗细菌引起的感染的广谱抗菌药物中的应用。
11、所述菌包括但不限于大肠杆菌(escherichia coli)atcc25922、k88、k99，鼠伤寒沙门氏菌(salmonella typhimurium)sl1344、atcc14028，鼠柠檬酸杆菌(citrobacterrodentium)dbs100、atcc51459，金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)atcc6538、atcc25923、cvcc1882。
12、第七方面，本发明提供免疫调节肽y6或所述工程菌在制备用于预防或治疗动物腹泻的饲料添加剂以及改善动物生长性能或免疫功能的饲料添加剂中的应用；所述饲料添加剂具有耐胃肠消化降解的功能。
13、借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：
14、本发明根据毕赤酵母遗传密码子偏好性对免疫调节肽y6的基因进行密码子优化，优化后的基因定向克隆至毕赤酵母真核表达载体ppic9k中构建重组表达质粒，将其转化至毕赤酵母gs115感受态细胞中并筛选高效表达菌株，对高效表达免疫调节肽y6的工程菌株在5l发酵罐中进行高密度发酵培养，对异源表达免疫调节肽的发酵参数与工艺进行了优化。本发明首次以毕赤酵母为表达宿主，实现了免疫调节肽y6的异源表达实用技术，该免疫调节肽稳定性好，表达量高，具有广谱抗菌活性，本发明的构建方法操作简单、成本低，优化后的发酵工艺适用于大规模生产。
1.一种编码免疫调节肽y6的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如seq id no:1所示。
2.含有权利要求1所述基因的生物材料，其特征在于，所述生物材料为重组dna、表达盒、转座子、质粒载体、病毒载体或工程菌。
3.包含权利要求1所述基因的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒的出发载体为ppic9k。
4.一种分泌表达免疫调节肽y6的毕赤酵母的构建方法，其特征在于，包括：根据毕赤酵母遗传密码子偏好性对免疫调节肽y6的编码基因进行密码子优化，优化后的基因克隆至毕赤酵母表达载体中构建重组表达质粒，将其转化至毕赤酵母感受态细胞中并筛选高效表达菌株。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述表达载体为ppic9k，所述毕赤酵母感受态细胞为gs115。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，优化后的基因的核苷酸序列如seq idno:1所示。
7.按照权利要求4-6任一项所述方法构建得到的毕赤酵母工程菌。
8.免疫调节肽y6或权利要求7所述工程菌在制备用于治疗细菌引起的感染的广谱抗菌药物中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述菌选自大肠杆菌(escherichia coli)atcc25922、k88、k99，鼠伤寒沙门氏菌(salmonella typhimurium)sl1344、atcc14028，鼠柠檬酸杆菌(citrobacter rodentium)dbs100、atcc51459，金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)atcc6538、atcc25923、cvcc1882。
10.免疫调节肽y6或权利要求7所述工程菌在制备用于预防或治疗动物腹泻的饲料添加剂以及改善动物生长性能或免疫功能的饲料添加剂中的应用；所述饲料添加剂具有耐胃肠消化降解的功能。
