本公开涉及生物，尤其涉及一种用于培养nk细胞的激活剂及其应用。
背景技术：
1、nk细胞的发现距今已有几十年的历史，其属于固有免疫系统，是人体免疫系统的第一道防线。nk细胞约占血液中淋巴细胞的5％～15％，是一类无t和b细胞特征性标志的淋巴细胞，同时也存在于外周组织中，如肝脏、腹膜腔、胎盘等，在外周血中循环的nk细胞通常处于免疫静止状态，一旦被细胞因子激活，它们会渗透到大多数组织中攻击肿瘤细胞和病毒感染细胞。
2、nk细胞是固有免疫系统的重要组成部分，是机体抗御感染和防止细胞恶性转化的重要免疫调节细胞，nk细胞识别靶细胞无mhc限制性，可以在无预先致敏的情况下杀伤肿瘤细胞。同时，还可以产生一系列的细胞因子，进而对机体的适应性免疫进行调节，是连接机体固有免疫和适应性免疫的桥梁。
技术实现思路
1、本公开提供一种用于培养nk细胞的激活剂、激活培养基、nk细胞的制备方法、nk细胞以及药物组合物，以解决相关技术中的不足。
2、根据本公开实施例的第一方面，提供一种用于培养nk细胞的激活剂，包括：重组人flt-3配体蛋白、重组人scf蛋白、重组人il-3蛋白、重组人il-7蛋白、重组人il-15蛋白和注射用重组人il-2蛋白；其中，所述重组人flt-3配体蛋白、重组人scf蛋白、重组人il-3蛋白、重组人il-7蛋白和重组人il-15蛋白在所述激活剂中的浓度范围依次选自0.01～0.5μg/ml、0.01～0.5μg/ml、0.01～0.5μg/ml、0.01～0.5μg/ml和0.01～1μg/ml。
3、可选的，所述激活剂还包括：抗人cd16单克隆抗体、重组人anti-her-2蛋白、retronectin、ok-432、抗人cd52单克隆抗体和抗人cd137单克隆抗体。
4、可选的，所述抗人cd16单克隆抗体、重组人anti-her-2蛋白、retronectin、ok-432、抗人cd52单克隆抗体和抗人cd137单克隆抗体在所述激活剂中的浓度范围依次选自0.1～20μg/ml、0.01～0.5μg/ml、1～50μg/ml、0.1～20μg/ml、0.01～1μg/ml和0.01～1μg/ml。
5、可选的，所述激活剂还包括：重组人il-1α蛋白、重组人il-1β蛋白、重组人il-12蛋白、重组人il-18蛋白、重组人il-21蛋白、重组人4-1bb蛋白和重组人ox-40配体蛋白。
6、可选的，所述重组人il-1α蛋白、重组人il-1β蛋白、重组人il-12蛋白、重组人il-18蛋白、重组人il-21蛋白、重组人4-1bb蛋白和重组人ox-40配体蛋白在所述激活剂中的浓度范围依次选自0.005～0.1μg/ml、0.005～0.1μg/ml、0.05～0.5μg/ml、0.05～0.5μg/ml、0.05～0.6μg/ml、0～1μg/ml、0.01～5μg/ml。
7、可选的，所述注射用重组人il-2蛋白在所述激活剂中的浓度范围选自1～5000iu/ml。
8、根据本公开实施例的第二方面，提供一种激活培养基，包括：前述激活剂、第一基础培养基和1％～15％的自体灭活血浆。
9、根据本公开实施例的第三方面，提供一种nk细胞的制备方法，所述方法包括使用前述激活剂和前述激活培养基对nk细胞进行诱导和/或扩增。
10、可选的，所述方法包括：
11、(1)培养板包被：使用ok-432、抗人cd52单克隆抗体、抗人cd137单克隆抗体、抗人cd16单克隆抗体、重组人anti-her-2蛋白和retronectin中的至少一者包被培养板；
12、(2)复苏单个核细胞；
13、(3)静置单个核细胞：向包含密度为2×106～2×107个/ml的单个核细胞的培养基加入1％～15％的自体灭活血浆，在37℃的细胞培养箱中静置3～24小时；
14、(4)接种单个核细胞：向包含密度为1×106～1×107个/ml的单个核细胞的培养基加入前述激活剂和1％～15％的自体灭活血浆，进行接种培养；
15、(5)加入激活培养基：第3～4天向接种培养的单个核细胞补加前述激活培养基和1％～15％的自体灭活血浆；
16、(6)加入扩增培养基：第5～21天内，每隔1～2天，加入扩增培养基；所述扩增培养基包括扩增剂、第二基础培养基和0.5％～5％的自体灭活血浆；
17、(7)收获细胞。
18、可选的，所述扩增剂包括重组人il-2蛋白和重组人il-15蛋白，其中，所述重组人il-2蛋白和重组人il-15蛋白在所述扩增剂中的浓度范围依次选自100～5000iu/ml和0.01～0.5μg/ml。
19、可选的，在补加激活培养基的过程中，所述激活培养基的体积为原细胞培养体积的1～5倍。
20、可选的，所述单个核细胞为pbmc细胞。
21、根据本公开实施例的第四方面，提供一种nk细胞，所述nk细胞通过前述的制备方法得到。
22、根据本公开实施例的第五方面，提供一种用于抗肿瘤的药物组合物，所述药物组合物包括有效治疗量的前述nk细胞。
23、可选的，所述nk细胞与肿瘤细胞的效靶比选自(0.25～80)：1。
24、可选的，所述nk细胞与肿瘤细胞的效靶比选自(0.25～10)：1。
25、可选的，所述nk细胞与肿瘤细胞的效靶比选自5：1。
26、可选的，所述肿瘤为泌尿系肿瘤。
27、可选的，所述药物组合物的作用时间选自0.5～48小时。
28、可选的，所述药物组合物的作用时间选自0.5～4小时。
29、本公开的实施例提供的技术方案可以包括以下有益效果：
30、由上述实施例可知，本公开提供了一种用于培养nk细胞的激活剂、激活培养基、以及使用该激活剂和/或激活培养基进行nk细胞的制备方法；该方法步骤简单，可操作性强，缩短原代细胞的培养周期，获得的nk细胞状态稳定。
31、应当理解的是，以上的一般描述和后文的细节描述仅是示例性和解释性的，并不能限制本公开。
1.一种用于培养nk细胞的激活剂，其特征在于，所述激活剂包括：重组人flt-3配体蛋白、重组人scf蛋白、重组人il-3蛋白、重组人il-7蛋白、重组人il-15蛋白和注射用重组人il-2蛋白；
2.根据权利要求1所述的激活剂，其特征在于，所述激活剂还包括：抗人cd16单克隆抗体、重组人anti-her-2蛋白、retronectin、ok-432、抗人cd52单克隆抗体和抗人cd137单克隆抗体；
3.根据权利要求1所述的激活剂，其特征在于，所述激活剂还包括：重组人il-1α蛋白、重组人il-1β蛋白、重组人il-12蛋白、重组人il-18蛋白、重组人il-21蛋白、重组人4-1bb蛋白和重组人ox-40配体蛋白。
4.根据权利要求2所述的激活剂，其特征在于，所述重组人il-1α蛋白、重组人il-1β蛋白、重组人il-12蛋白、重组人il-18蛋白、重组人il-21蛋白、重组人4-1bb蛋白和重组人ox-40配体蛋白在所述激活剂中的浓度范围依次选自0.005～0.1μg/ml、0.005～0.1μg/ml、0.05～0.5μg/ml、0.05～0.5μg/ml、0.05～0.6μg/ml、0.01～1μg/ml、0.01～5μg/ml。
5.根据权利要求1所述的激活剂，其特征在于，所述注射用重组人il-2蛋白在所述激活剂中的浓度范围选自1～5000iu/ml。
6.一种激活培养基，其特征在于，所述激活培养基包括：权利要求1～4任一项所述的激活剂、第一基础培养基和1％～15％的自体灭活血浆。
7.一种nk细胞的制备方法，其特征在于，所述方法包括使用权利要求1～5任一项所述的激活剂和/或权利要求6所述的激活培养基对nk细胞进行诱导和/或扩增。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述扩增剂包括重组人il-2蛋白和重组人il-15蛋白，其中，所述重组人il-2蛋白和重组人il-15蛋白在所述扩增剂中的浓度范围依次选自100～5000iu/ml和0.01～0.5μg/ml。
10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，在补加激活培养基的过程中，所述激活培养基的体积为原细胞培养体积的1～5倍。
11.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述单个核细胞为pbmc细胞。
12.一种nk细胞，其特征在于，所述nk细胞通过权利要求7～11任一项所述的制备方法得到。
13.一种用于抗肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括有效治疗量的权利要求12所述的nk细胞。
14.根据权利要求13所述的药物组合物，其特征在于，所述nk细胞与肿瘤细胞的效靶比选自(0.25～10)：1。
15.根据权利要求13所述的药物组合物，其特征在于，所述肿瘤为泌尿系肿瘤。
16.根据权利要求13所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的作用时间选自0.5～4小时。
