本发明属于生物工程制药、蛋白质多肽类药物及生物医学工程，具体涉及一种靶向人表皮细胞生长因子受体2的亲和肽及其应用。
背景技术：
1、在癌症转移到其他器官之前，早期发现恶性病变可以尽早进行明确的局部治疗，从而获得极高的生存率，因此，恶性肿瘤的早期诊断和治疗至关重要。对于肿瘤，常规影像诊断技术主要为b超、ct和mri，这些影像诊断技术是通过显示组织的功能变化来达到诊断的结果，有较好的应用价值，但在鉴别诊断、全身分期和早期疗效评价上仍存在一定的不足。近年来，随着对肿瘤及其相关学科的认识和研究，研究的重点开始转移到针对肿瘤细胞内异常表达靶点的特异性肿瘤诊断药物，用于进行肿瘤的早期诊断。针对靶点的特异性肿瘤诊断药物主要特异性结合于肿瘤细胞上，对正常细胞无结合，因而可以达到高选择、低毒性的诊断效果。目前认为，靶向多肽是比较理想的肿瘤靶向治疗手段，具有以下优势：1)血浆清除速度快，亲和力高，特异性强；2)良好的组织穿透性，能被肿瘤细胞所摄取；3)易于化学合成，且免疫原性低，可避免单克隆抗体治疗的不足。
2、表皮生长因子受体(egfr)是一个巨大的跨膜糖蛋白,分子量约为180kda,具有配体诱导的酪氨酸蛋白激酶活性，它是erbb这个保守的受体家族的一个成员,这个家族的其他成员包括her2/neu/erbb2,her3/erbb3和her4/erbb4。erbb受体的共同特征是:包含一个胞外(ec)配体结合区,是由两个重复的富含半胱氨酸的区域组成的单一跨膜区，以及含有酪氨酸蛋白激酶和自身磷酸化位点的胞内序列。当与配体结合后,受体二聚化,这对于改变配体和受体间的高亲和力状态以及受体在分子间传递磷酸化信号都至关重要。
3、her2也称为c-erb2(表皮细胞生长因子受体2)，由922个腺嘌呤、1,382个胞嘧啶、1,346个鸟嘌呤和880个胸腺嘧啶组成。人类该基因定位于染色体17q21，属于原癌基因。其编码产物her2蛋白为185kd的跨膜精蛋白，简称p185，由1255个氨基酸组成，720—987位属于酪氨酸激酶区。her2蛋白是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜蛋白，属于egfr家族成员之一。蛋白由胞外的配体结合区、单链跨膜区及胞内的蛋白酪氨酸激酶区三部分组成，由于尚未发现能与其直接结合的配体，her2蛋白主要通过与家族中其他成员包括egfr(herl/erbbi)、her3/erbb3、her4/erbb4形成异二聚体而与各自的配体结合。her2蛋白常为异二聚体首选伴侣，且活性常强于其它异二聚体。当与配体结合后，主要通过引起受体二聚化及胞浆内酪氨酸激酶区的自身磷酸化，激活酪氨酸激酶的活性。her2蛋白介导的信号转导途径主要有ras/raf/分裂素活化蛋白激酶(mapk)途径，磷脂酰肌醇3羟基激酶(pi3k)/akt途径，信号转导及转录激活(stat)途径和plc通路等。her2在正常人体各组织器官中的表达有限，但在阳性肿瘤中表达水平较高。因此her2受体可以成为肿瘤特异性成像的靶点。
技术实现思路
1、本发明的首要目的在于提供一种肿瘤靶向多肽，该多肽能够靶向表皮生长因子受体2(her2)，使其能够对her2受体高表达的肿瘤进行在体诊断，可用于制备新型的靶向药物载体。
2、本发明的另一目的在于提供上述肿瘤靶向多肽在制备肿瘤诊断试剂或肿瘤靶向药物载体中的应用。
3、本发明的又一目的在于提供一种肿瘤诊断试剂。
4、本发明的又一目的在于提供一种修饰的多肽及其应用。
5、本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
6、第一方面，本发明请求保护一种肿瘤靶向多肽，该肿瘤靶向多肽选自如下任意一条多肽:
7、yqgl-1：leu-homo-arg-leu-ser-ala-gly-hyp-gln；其中hyp代表羟脯氨酸，homo-arg代表高精氨酸；
8、yqgl-2：d-leu-arg-d-leu-ser-gly-gly-pro-gln；其中d-leu代表d型leu；
9、yqgl-3：leu-d-arg-leu-ser-gly-gly-pro-gln；其中d-arg代表d型arg；
10、yqgl-4：leu-homo-arg-leu-ser-gly-gly-pro-glu；其中homo-arg代表高精氨酸；
11、yqgl-5：d-leu-d-arg-leu-ser-gly-gly-hyp-glu；其中hyp代表羟脯氨酸,d-leu代表d型leu,d-arg代表d型arg；
12、yqgl-6：ac-lys-gly-gly-gly-leu-arg-leu-ser-gly-gly-hyp-glu；其中hyp代表羟脯氨酸。
13、第二方面，本发明请求保护上述的肿瘤靶向多肽在制备肿瘤诊断试剂或肿瘤靶向药物载体中的应用。
14、进一步，所述的肿瘤诊断试剂为肿瘤的荧光成像试剂或放射性显像试剂。更进一步，所述的肿瘤诊断试剂为用于肿瘤边界的精准定位和术中影像导航的肿瘤诊断显像剂以及放射性核素显像，但不限于此。本发明所述的多肽化合物可特异性靶向至肿瘤部位，并且在肿瘤部位有很好的摄取和滞留，具有较高的靶/非靶比值，适合用作荧光肿瘤显像剂以及放射性核素显像剂，并可用于制备肿瘤术中影像导航及肿瘤边界精准定位的光学显像药物。
15、第三方面，本发明请求保护一种修饰的多肽，该多肽具备以下通式：
16、m-l-yqgl-x，或m-yqgl-x，
17、其中，m表示光标记或放射性核素标记；
18、中间l为连接基团；
19、yqgl-x为上述的yqgl-1、yqgl-2、yqgl-3、yqgl-4、yqgl-5和yqgl-6中的任意一条多肽。
20、当m为光标记时，此时的：m-l-yqgl-x为一种具有优良显像性能的荧光分子影像探针，其结构中含有用于靶向肿瘤的本发明多肽yqgl-x和用于光学成像的光标记以及起到增加靶向多肽与光标记之间的距离并调节体内药代动力学特性的连接基团l。
21、进一步，所述的光标记选自有机发色团、有机荧光团、光吸收化合物、光反射化合物、光散射化合物和生物发光分子中的至少一种。更进一步，所述的有机荧光团为近红外荧光染料，更进一步优选自近红外荧光染料mpa(icg衍生物七甲川菁近红外染料)、irdye800、cy7.5和cy5.5中的至少一种。最优选为mpa。
22、进一步，所述的放射性核素选自99m tc、68ga，64cu，67ga，90y，111in或177lu和125i中的至少一种。
23、进一步，所述的连接基团选自叠氮戊酸、丙炔酸、聚乙二醇、1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸、7-[(4-羟基丙基)亚甲基]-1,4,7-三氮杂化壬烷-1,4-二乙酸、1,4,7,10-四氮杂环四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸、巯基乙酰三甘氨酸、mag2、n3s、n2s2类配体、二乙基三胺五乙酸、1,4-丁二酸、5-氨基戊酸、聚乙烯亚胺、6-肼基吡啶-3-甲酸、溴甲酸苯甲基和n-(2-氨基乙酸)马来酰亚胺中的任意一种或至少两种的组合。
24、更进一步，所述的连接基团选自6-氨基己酸、peg 4、peg 6、hynic-peg4和hynic中的任意一种或至少两种的组合。
25、第四方面，本发明请求保护上述的修饰的多肽在制备肿瘤诊断、治疗或示踪试剂中的应用。进一步，所述的肿瘤诊断、治疗或示踪试剂为肿瘤的荧光成像试剂或放射性显像试剂。进一步优选在制备肿瘤边界的精准定位和术中影像导航显像试剂或制备放射性核素显像试剂中的应用。
26、本发明所述的肿瘤靶向肽在制备肿瘤靶向药物载体中的应用也属于本发明的保护范围。
27、本发明所述的多肽能高度模拟her2(表皮细胞生长因子受体2)的肿瘤靶向，高效结合表皮细胞生长因子受体2(her2)至肿瘤部位，并且在肿瘤部位有很好的聚集和滞留，具有较高的靶和非靶比值，适合用作荧光肿瘤显像剂，并可用于制备肿瘤术中影像导航及肿瘤边界精准定位的光学显像药物。
28、药效学实验证明本发明的多肽可用于癌症诊断和治疗中。这些高亲和多肽能和多种肿瘤细胞特异性结合，优选乳腺癌、肝癌、肺癌、结直肠癌、脑胶质瘤、胰腺癌、前列腺癌。利用靶向肽高亲和力特性可用于恶性肿瘤的光学成像和核医学显像。这些高亲和力多肽单体，多肽二聚体或者多肽的多聚体直接或间接的偶联荧光染料可作为肿瘤特异性靶向分子探针，预期能达到对肿瘤边界精准定位的效果，可为术前和术中影像导航带来实时性，具有提高手术精确度的优点。此系列多肽单体，二聚体或者多聚体还可偶联放射性核素在体实时检测恶性肿瘤，以达到疾病诊断或者治疗的目的。
29、本发明的有益效果为：
30、1、本发明开发了一系列新的模拟her2(表皮细胞生长因子受体2)的高亲和力的多肽，可用于靶向表皮细胞生长因子受体2(her2)。利用her2受体在肿瘤中高表达，基于yqgl-x(x＝1-6)多肽与her2受体特异性结合的原理，可用于her2高表达肿瘤的早期诊断。
31、2、这些多肽均为低分子量多肽，合成成本低廉，并且此系列短肽引入了非天然氨基酸进行修饰，从而极大提高了多肽在活体内的稳定性。通过延长多肽的半衰期来提高其在体内的循环时间，促进影像探针在肿瘤部位的浓聚和滞留，进而获得更好的肿瘤显像效果，使其更利于临床推广应用。
32、3、这些肽均为首次报道，制备方法简单,获取渠道方便。
33、4、yqgl-x(x＝1-6)系列多肽可以和肿瘤细胞特异性结合，经活体光学成像和结果证实对多种肿瘤具有优异的显像效果，包括乳腺癌、肝癌、宫颈癌及结直肠癌等。
34、5、本发明利用近红外荧光染料mpa穿透深度更深、背景组织自发荧光更弱的优点，在荧光成像和荧光指导手术中有良好的应用前景。
35、6、yqgl-x(x＝1-6)多肽放射性药物可用于肿瘤的筛查和早期诊断，还可以实时无损在位监测早期恶性肿瘤以及治疗。
1.一种肿瘤靶向多肽，其特征在于，该肿瘤靶向多肽选自如下任意一条多肽:
2.权利要求1所述的肿瘤靶向多肽在制备肿瘤诊断试剂或肿瘤靶向药物载体中应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤诊断试剂为肿瘤的荧光成像试剂或放射性显像试剂。
4.一种修饰的多肽，其特征在于，该多肽具备以下通式：
5.根据权利要求4所述的修饰的多肽，其特征在于，所述的光标记选自有机发色团、有机荧光团、光吸收化合物、光反射化合物、光散射化合物和生物发光分子中的至少一种；所述的放射性核素选自99m tc、68ga，64cu，67ga，90y，111in或177lu和125i中的至少一种。
6.根据权利要求5所述的修饰的多肽，其特征在于，所述的光标记选自近红外荧光染料mpa、irdye800、cy7.5、cy5.5中的至少一种。
7.根据权利要求4所述的修饰的多肽，其特征在于，所述的连接基团选自叠氮戊酸、丙炔酸、聚乙二醇、1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸、7-[(4-羟基丙基)亚甲基]-1,4,7-三氮杂化壬烷-1,4-二乙酸、1,4,7,10-四氮杂环四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸、巯基乙酰三甘氨酸、mag2、n3s、n2s2类配体、二乙基三胺五乙酸、1,4-丁二酸、5-氨基戊酸、聚乙烯亚胺、6-肼基吡啶-3-甲酸、溴甲酸苯甲基、n-(2-氨基乙酸)马来酰亚胺中的任意一种或至少两种的组合。
8.根据权利要求4所述的修饰的多肽，其特征在于，所述的连接基团选自6-氨基己酸、peg 4、peg 6、hynic-peg4、hynic中的任意一种或至少两种的组合。
9.权利要求4～8中任一所述的修饰的多肽在如下(1)或(2)中的应用：
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤诊断、治疗或示踪的试剂为肿瘤的荧光成像试剂或放射性显像试剂。
