本发明属于基因工程,尤其涉及大麦hvwrky22基因及其在小麦抗叶锈病中的应用。
背景技术:
1、小麦作为主要粮食作物,对我国的农业发展有重要意义。由小麦叶锈菌(pucciniatriticina,pt)引起的小麦叶锈病,是严重影响我国小麦生产的重要真菌病害。近年来由于种植密度的增加以及农业耕作制度的改变,小麦叶锈病的发生日趋严重。小麦叶锈病病原菌具有变异频率高的特点,其生理小种在短时间内就能完成多次变异,这使得单一抗性的小麦品种在短期内容易丧失抗性。因此,发掘新的抗病及抗旱种质资源显得尤为必要。
2、转录因子是指能够与基因启动子区域中的顺式作用元件发生特异性相互作用的一类结合蛋白。转录因子通过他们之间以及与其它相关蛋白之间的相互作用激活或抑制某些下游基因的表达,又称反式作用因子。本世纪以来,研究人员相继分离了一系列植物转录因子,并通过研究证明转录因子不仅调控植物生长发育和生理过程中相关基因的表达,在植物对外界环境包括病原物的入侵、低温、高盐、干旱、激素等胁迫反应方面也起着非常重要的作用。
3、wrky转录因子被认为是只存在于植物中的转录因子家族,具有高度保守的wrky域锌指蛋白。该保守域由约60个氨基酸残基组成,靠近n-末端的7个保守氨基酸残基wrkygqk,被视为wrky结构域的核心序列,能够和基因启动子区域的w-box专一性结合参与表达调控。研究表明,wrky类转录因子在植物抗病防卫反应过程中起着非常重要的调控作用。过表达拟南芥atwrky29基因的小麦转基因材料通过增强pti免疫反应,表现出对赤霉病的抗性水平提高。大麦hvwrky22与atwrky30/41/53同源,与非生物胁迫耐受或sa和ja之间的交叉信号调控相关。小麦tawrky70基因参与小麦对苗期高温抗小麦条锈菌的抗病反应。nac转录因子tasnac8-6a通过诱导生长素和干旱响应途径增强抗旱性,刺激侧根发育,进而提高水分利用效率。
技术实现思路
1、本发明的目的之一在于提供大麦hvwrky22基因,所述大麦hvwrky22基因的核苷酸序列如seq id no.1所示。
2、本发明的目的之二在于提供上述大麦hvwrky22基因的克隆方法,所述克隆方法是以大麦材料“golden promise”的叶片cdna为模板,利用pcr克隆获得大麦hvwrky22基因。
3、优选地,所述pcr中使用的引物序列如seq id no.2和seq id no.3所示。
4、本发明的目的之三在于提供一种表达载体,所述表达载体中含有上述大麦hvwrky22基因。
5、优选地,所述表达载体为真核表达载体。
6、更优选地,所述真核表达载体为plgy-02。
7、本发明的目的之五在于提供一种宿主,所述宿主中含有上述表达载体。
8、优选地,所述宿主为大肠杆菌或者农杆菌。
9、本发明的目的之六在于提供上述核苷酸序列在提高小麦抗叶锈病中的应用。
10、优选地,所述应用为将含有seq id no.1所示序列的载体转化小麦幼胚,获得过表达hvwrky22基因的小麦植株。
11、与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
12、本发明提供了hvwrky22基因序列,以及过表达hvwrky22小麦转基因材料的制备过程,并通过实验验证了所述小麦转基因材料对小麦叶锈病抗病性显著提高。
1.大麦hvwrky22基因,其特征在于,所述大麦hvwrky22基因的核苷酸序列如seq idno.1所示。
2.权利要求1所述大麦hvwrky22基因的克隆方法,其特征在于,所述克隆方法是以大麦材料“golden promise”的叶片cdna为模板,利用pcr克隆获得大麦hvwrky22基因。
3.根据权利要求2所述的克隆方法,其特征在于,所述pcr中使用的引物序列如seq idno.2和seq id no.3所示。
4.一种表达载体,其特征在于,所述表达载体中含有权利要求1中所述的大麦hvwrky22基因。
5.根据权利要求4所述的表达载体,其特征在于,所述表达载体为真核表达载体。
6.根据权利要求5所述的表达载体,其特征在于,所述真核表达载体为plgy-02。
7.一种宿主,其特征在于,所述宿主中含有权利要求4-6中任一项所述的表达载体。
8.根据权利要求7中所述的宿主,其特征在于,所述宿主为大肠杆菌或者农杆菌。
9.权利要求1中所述的核苷酸序列在提高小麦抗叶锈病中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,所述应用为将含有seq id no.1所示序列的载体转化小麦幼胚,获得过表达hvwrky22基因的小麦植株。