本发明属于生物，涉及il-37在mers-cov感染疾病的治疗中的应用。
背景技术：
1、il-37属于白细胞介素-1(inteleukin-1,il-1)家族成员。il-1家族共有11个成员，都具有β-三叶草结构，可以与免疫球蛋白样受体结合，2000年，kumar等发现一种未成熟的前体肽il-1h4，于2001年被eleanor发现其为il-1家族的第7个细胞因子，命名其为il-1f7，至2010被正式更名为il-37。人类il-37基因存在于2号染色体上，其分子量是17～24kd，结构与il-1家族其它成员相似，由12条管状线组成，分为五个亚型il-37a、il-37b、il-37c、il-37d、il-37e，其中il-37b是占主导的亚型。il-37b由218个氨基酸组成，在n端存在一个前导序列，并含有一个caspase-1切割位点，其前体分子被casepase-1酶切后产生成熟的il-37b。
2、中东呼吸综合征冠状病毒(mers-cov)是被认为起源于蝙蝠的β冠状病毒。顾名思义，人感染mers-cov可能导致伴有急性呼吸窘迫综合征(ards)的严重的疾病。传播模式还不清楚。典型的mers症状包括发烧，咳嗽和气短。同时，肺炎亦较为常见，包括腹泻在内的胃肠道症状也有报道，但不是所有病例都会出现。mers报告病例的病死率约为36％。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的技术问题，本发明提供了以下的技术方案：
2、本发明第一方面提供了il-37在制备治疗或预防mers-cov病毒感染的药物组合物中的应用。
3、进一步，所述药物组合物制备后通过口服施用、栓剂施用、局部接触施用、静脉施用、肠胃外施用、腹腔施用、肌肉施用、病灶内施用、鞘内施用、鼻内施用或皮下施用。
4、进一步，所述药物组合物制备后通过腹腔施用。
5、术语“施用”包括通过任何将药物递送至感染位点的适当方法向对象进行的递送。药物的施用可为经口、经鼻、肠胃外、局部、经眼或透皮施用或以固体、半固体、冻干粉或液体剂型递送。剂型包括片剂、胶囊、锭剂、粉剂、溶液、悬浮液、栓剂等，优选适于单次精确剂量施用的单位剂型。
6、术语“药物组合物”是指包含至少一种生物活性药剂的任何组合物。当在本文中使用时，术语“药物组合物”还是指包含待递送到对象以例如实现治疗、预防、诊断、阻止或预后效果的活性药物成分的组合物。
7、术语“治疗”等通常意指获得期望的药理学和/或生理学效果。该效果在部分或完全治愈疾病和/或归因于该疾病的不良反应方面可以是治疗性的。如本文所用，术语“治疗”覆盖在哺乳动物，特别是人中的疾病的任何治疗，并且包括：(a)抑制疾病，即防止疾病的严重性或范围增加；(b)缓解疾病，即引起疾病的部分或完全改善；(c)防止疾病复发，即防止疾病在先前成功治疗疾病的症状或治疗疾病后恢复到活跃状态。
8、“预防”包括延迟在受试者中发展的状态、病症、疾病或病况的临床症状、并发症或生化指标的发作，该受试者可能患有或易感染该状态、病症、疾病或病况但尚未经历或表现出状态、病症、疾病或病况的临床或亚临床症状。“预防”包括防治性治疗受试者中或在受试者中发展的状态、病症、疾病或病况，其包括防治性治疗受试者中或在受试者中发展的状态、病症、疾病或病况的临床症状、并发症或生化指标。
9、进一步，所述药物组合物与第二药剂组合施用，所述第二药剂包括提高il-37活性的物质、诱导或增强细胞内源性il-37表达的物质、降低mers-cov病毒活性的物质或提升mers-cov病毒对il-37敏感度的物质和/或其任意组合。
10、本发明第二方面提供了一种用于治疗或预防mers-cov病毒感染的药物组合物，所述药物组合物包括治疗有效量或预防有效量的il-37。
11、进一步，所述药物组合物还包括第二药剂，所述第二药剂包括提高il-37活性的物质、诱导或增强细胞内源性il-37表达的物质、降低mers-cov病毒活性的物质或提升mers-cov病毒对il-37敏感度的物质和/或其任意组合。
12、进一步，所述药物组合物还包括药学上可接受的辅料。
13、进一步，所述辅料包括佐剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等渗剂、ph调节和/或缓冲剂、溶剂、表面活性剂或乳化剂。
14、在一些实施方案中，在mers-cov病毒感染的治疗过程中施用有效量所述药物组合物，有效量是指具有以下效应的组合物量：(1)减少病毒释放，(2)减少感染持续时间，(3)降低传染性，和/或(4)降低(或者优选地消除)一种或更多种与感染相关的其它症状的严重性，例如发热、头痛、乏力、干咳、咽喉痛、肌肉酸痛、结膜炎、流鼻涕和/或鼻塞。这样的有效剂量通常取决于上述因素。预防性有效剂量是降低感染mers-cov病毒可能性的剂量。预防性有效量是治疗有效量的约20％至约100％。
15、术语“药学上可接受的辅料”是指与药物施用相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、等渗剂和吸收延迟剂等。将此类介质和试剂用于药物活性物质在本领域中是众所周知的。该组合物还可以含有提供补充的、额外的或增强的治疗功能的其他活性化合物。
16、术语“有效”是指足以实现所期望的，预期的或意图的结果。
17、术语“治疗有效量”意指将引发组织、系统、动物或人的生物学或医学反应的il-37的量，该生物学或医学反应是研究人员、兽医、医师或其他临床医师正在寻求的。术语“治疗有效量”可适用于任何医学治疗的合理益处/风险比下，赋予所治疗受试者治疗效果的药剂的量。治疗效果可以是客观的(即，可通过一些测试或标志物来测量)或主观的(即，受试者给出指示或感觉到效果)。治疗有效量通常以可包含多个单位剂量的给药方案施用。对于任何特定的医药剂，治疗有效量(和/或有效给药方案内的适当单位剂量)可以变化，例如，取决于施用途径，取决于与其他医药剂的组合。此外，任何特定受试者的特定治疗有效量(和/或单位剂量)可能取决于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所用的特定医药剂的活性；采用的具体组合物；受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所用的特定医药剂的施用时间、施用途径和/或排泄或代谢速率；治疗的持续时间；以及医学领域中众所周知的类似因素。
18、本发明第三方面提供了il-37在抑制mers-cov病毒活性中的应用。
19、进一步，所述mers-cov病毒活性包括mers-cov病毒复制活性。
20、在一些实施方案中，所述il-37在施用后，mers-cov病毒的复制活性减弱，同等病毒数量的情况下il-37的施用有效降低了mers-cov病毒的载量与滴度。
21、术语“病毒活性”是指病毒的任何活性状态或任何活力作用或动作或活性。因此，术语“病毒复制”是指遗传物质、单细胞生物或病毒繁殖或复制其本身的任何过程。
22、本发明第四方面提供了il-37在制备调节mers-cov病毒感染对象的细胞因子表达水平的产品中的应用。
23、进一步，所述细胞因子包括mcp-1、il-6、ifn-γ、tnf-α、il-10、il-20。
24、进一步，所述表达水平包括基因表达水平和/或蛋白表达水平。
25、进一步，所述基因表达水平包括dna表达水平和/或rna表达水平。
26、进一步，所述rna表达水平包括mrna表达水平。
27、术语“对象”可以指人类和非人动物。优选地，“对象”是指人。术语“对象”还可以指发育完全的人、发育完全的非人动物、未发育完全发育的人和/或未发育完全发育的非人动物。发育完全的人可以为成年人。未发育完全的人可以为儿童。优选地，术语“对象”是指发育完全的人。进一步优选地，术语“对象”是指未发育完全的人。最优选地，该术语是指发育完全的人和/或未发育完全的人。
28、术语“蛋白”、“多肽”、“肽”和“蛋白质”可互换使用以指代氨基酸残基的聚合物。所述术语还适用于其中一个或多个氨基酸残基是人工化学模拟物或相应的天然存在的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物。因此，在本发明的上下文中，术语“蛋白”涉及包含通过肽(酰胺)键连接的氨基酸单体的链或由所述链组成的分子。肽键是当一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基反应时形成的共价化学键。本文中“蛋白”不限于具有确定长度的分子。因此，本文术语“蛋白”涉及包含氨基酸链的肽、寡肽、蛋白质或多肽，其中氨基酸残基通过共价肽键连接。然而，本文中术语“蛋白”还涵盖此类蛋白质/多肽的肽模拟物，其中一个或多个氨基酸和/或一个或多个肽键已被功能性类似物替代。术语多肽还指具有修饰的多肽，例如糖基化、乙酰化、磷酸化等修饰的多肽。此类修饰在本领域中有充分描述。
29、本发明第五方面提供了il-37在制备治疗mers-cov感染疾病的药物组合物中的应用。
30、进一步，所述mers-cov感染疾病包括中东呼吸综合征。
31、进一步，所述mers-cov感染疾病包括呼吸道感染、高热、咳嗽、呼吸浅短、肺炎、胃肠症状、器官衰竭、败血性休克。
32、进一步，所述胃肠症状包括腹泻。
33、进一步，所述器官衰竭包括肾衰竭或肾功能不全。
34、在一些实施方案中，所述il-37可以治疗mers-cov感染导致的疾病。在一个实施方案中，所述il-37可以治疗mers-cov感染导致的中东呼吸综合征。在一个实施方案中，所述il-37可以治疗mers-cov感染导致的呼吸道感染。在一个实施方案中，所述il-37可以治疗mers-cov感染导致的高热。在一个实施方案中，所述il-37可以治疗mers-cov感染导致的咳嗽。在一个实施方案中，所述il-37可以治疗mers-cov感染导致的呼吸浅短。在一个实施方案中，所述il-37可以治疗mers-cov感染导致的肺炎。在一个实施方案中，所述il-37可以治疗mers-cov感染导致的胃肠症状如腹泻。在一个实施方案中，所述il-37可以治疗mers-cov感染导致的器官衰竭如肾衰竭或肾功能不全。在一个实施方案中，所述il-37可以治疗mers-cov感染导致的败血性休克。
35、本发明第六方面提供了表达载体在制备治疗或预防mers-cov病毒感染的药物组合物中的应用，所述表达载体包括il-37的编码序列。
36、进一步，所述il-37为重组il-37蛋白。
37、进一步，所述il-37包括il-37a、il-37b、il-37c、il-37d、il-37e。
38、进一步，所述il-37为il-37b。
39、术语“il-37”广泛指来自任何哺乳动物来源的任何天然il-37，包括灵长类动物(例如人)和啮齿动物(例如小鼠和大鼠)。所述术语涵盖“全长”、未加工的il-37以及由细胞中的加工产生的任何形式的il-37。例如，本发明涵盖全长il-37和成熟形式二者，其中il-37通过在表达期间半胱天冬酶-1的切割从无活性前体状态转化为活性状态。所述术语还涵盖天然存在的il-37变体，例如剪接变体或等位基因变体。
40、进一步，所述表达载体包括：病毒表达载体、非病毒表达载体。
41、进一步，所述病毒表达载体包括腺病毒表达载体、慢病毒表达载体、腺相关病毒表达载体。
42、进一步，所述非病毒表达载体包括质粒、转座子载体。
43、术语“表达载体”包括能够指导核酸表达的任何核酸。因此，术语“表达载体”包括病毒载体、质粒载体和类似物。可以使用两种基本的递送方案将表达载体递送至细胞：使用病毒载体的基于病毒的递送系统和使用例如质粒载体的基于非病毒的递送系统。这些方法在本领域中是已知的并且容易适应本文描述的药物组合物和应用之中。
44、本发明第七方面提供了细胞在制备治疗或预防mers-cov病毒感染的药物组合物中的应用，所述细胞经基因改造而产生il-37。
45、进一步，所述il-37为重组il-37蛋白。
46、进一步，所述il-37包括il-37a、il-37b、il-37c、il-37d、il-37e。
47、进一步，所述il-37为il-37b。
48、进一步，所述细胞包括真核细胞或原核细胞。
49、进一步，所述真核细胞包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、卵生动物细胞、酵母细胞。
50、进一步，所述原核细胞包括细菌、放线菌、古细菌、螺旋体、衣原体、支原体、立克次氏体和蓝细菌。
51、在一些具体的实施方案中，所述细胞包括转化体或转化细胞，不考虑其传代次数，后代的多核苷酸含量可以并非与亲本细胞完全相同，可包含突变。
52、术语“细胞”涵盖植物和动物细胞，并且包括无脊椎动物、非哺乳类脊椎动物和哺乳动物细胞。所有这样的名称包括细胞群体和后代。示例性非哺乳类脊椎动物细胞包括，例如，禽类细胞、爬行动物细胞和两栖动物细胞。示例性无脊椎动物细胞包括但不限于昆虫细胞，例如蠋(草地贪夜蛾)细胞、蚊(埃及伊蚊)细胞、果蝇(黑腹果蝇)细胞、schneider细胞和家蚕细胞。细胞可以为分化、部分分化或未分化的，例如干细胞，包括胚胎干细胞和多能干细胞。来源于器官或器官系统的额外的组织样品可以根据本发明使用。示例性哺乳动物细胞包括，例如，来源于人，非人灵长类，猫，狗，绵羊，山羊，奶牛，马，猪，兔，包括小鼠、仓鼠、大鼠和豚鼠在内的啮齿类的细胞，以及其任何衍生物和后代。
53、本发明第八方面提供了il-37的增强剂在制备治疗或预防mers-cov病毒感染的药物组合物中的应用。
54、进一步，所述il-37的增强剂包括用于增强或诱导细胞内源性产生il-37的试剂或增强il-37活性的试剂。
55、术语“增强剂”是指增强施用后的il-37的生物利用度的物质，还包括能够刺激细胞产生il-37的物质，前述的产生是指能够使细胞中内源性il-37数量的增加。因此在一些实施方案中，所述增强剂是生物利用度增强剂。代表性的增强剂包括但不限于核酸(dna和rna如cdna和mrna)、寡核苷酸、多肽、肽、抗体、融合蛋白、抗生素、小分子、脂质/脂肪、糖、载体、缀合物、疫苗、基因疗法药剂、细胞疗法药剂等，例如小分子、编码多肽的mrna、crispr向导rna(grna)、rna干扰剂、小干扰rna(sirna)、crispr rna(crrna和tracrrna)、小发夹rna(shrna)、微rna(mirna)、piwi相互作用rna(pirna)、反义寡核苷酸、肽或肽模拟物抑制剂、适体、结合并活化或抑制蛋白质生物标志物的天然配体和其衍生物、抗体、细胞内抗体。
56、本发明第九方面提供了il-37的增强剂在制备治疗mers-cov感染疾病的药物组合物中的应用。
57、本发明第十方面提供了一种治疗或预防mers-cov病毒感染的药物组合物，所述药物组合物包括il-37的增强剂。
58、进一步，所述il-37的增强剂包括用于增强或诱导细胞内源性产生il-37的试剂或增强il-37活性的试剂。
59、进一步，所述药物组合物还包括il-37，降低mers-cov病毒活性的物质或提升mers-cov病毒对il-37敏感度的物质和/或其任意组合。
60、术语“物质”可以包括例如化合物；核酸；糖类；脂类；糖蛋白；糖脂；脂蛋白；氨基酸；多肽；蛋白质；多酚类；趋化因子；选自包含上述物质的最终代谢物、中间代谢物和合成原料物质的组的至少一种代谢物质；金属离子；或微生物。另外，物质可以是单质，或者可以是多种物质的混合物。优选地，术语“物质”包括例如医药品、准医药品、药用化妆品、食品、特定保健用食品、具有功能声称食品及其候选。另外，术语“物质”还可以包括在医药批准的临床前试验或临床试验期间中止或中断测试的物质。
61、术语“包含”、“包括”、“含有”及其任何变体旨在涵盖非排他性的包涵，使得包含、包括或含有一个要素或要素列表的工艺、方法、工艺产物或物质组合物不仅包括那些要素，还可包括未明确列出的或此类工艺、方法、工艺产物或物质组合物固有的其他要素。
62、术语“mers-cov”也称作“mers冠状病毒”，指新发生的中东呼吸综合征-冠状病毒，其首先在2012年于阿拉伯半岛分离(zaki等2012,nejm 367:1814-1820)并鉴定为严重的急性呼吸疾病的暴发的原因。其最初称为人冠状病毒-emc(伊拉斯姆斯医疗中心；hcov-emc)。mers冠状病毒已发现与在蝙蝠和骆驼中发现的冠状病毒密切相关。其经由病毒刺突蛋白与人宿主细胞受体二肽基肽酶4(dpp4)结合。mers-cov刺突蛋白已发现与其他物种的dpp4结合，特别是蝙蝠和骆驼(raj等2013,nature 495:251-254)。
63、本发明的优点和有益效果：
64、mers-cov感染，能够导致感染病毒的小鼠体重下降、炎性细胞因子分泌增多，诱导炎症发生。il-37治疗能够显著降低mers-cov感染小鼠的肺部载量、血清和肺部炎性因子表达，发挥保护作用。在体外实验中，感染mers-cov的细胞给予il-37后病毒载量降低、病毒滴度降低、多种炎性因子表达降低，说明il-37能够针对mers-cov病毒，治疗mers-cov病毒感染导致的疾病。
1.il-37在制备治疗或预防mers-cov病毒感染的药物组合物中的应用；
2.一种用于治疗或预防mers-cov病毒感染的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括治疗有效量或预防有效量的il-37；
3.il-37在抑制mers-cov病毒活性中的应用；
4.il-37在制备调节mers-cov病毒感染对象的细胞因子表达水平的产品中的应用；
5.il-37在制备治疗mers-cov感染疾病的药物组合物中的应用。
6.表达载体在制备治疗或预防mers-cov病毒感染的药物组合物中的应用，其特征在于，所述表达载体包括il-37的编码序列。
7.细胞在制备治疗或预防mers-cov病毒感染的药物组合物中的应用，其特征在于，所述细胞经基因改造而产生il-37。
8.il-37的增强剂在制备治疗或预防mers-cov病毒感染的药物组合物中的应用；
9.il-37的增强剂在制备治疗mers-cov感染疾病的药物组合物中的应用。
10.一种治疗或预防mers-cov病毒感染的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括il-37的增强剂；
