本发明涉及adnps的应用，具体是指一种鲜黄芪来源纳米颗粒的制备方法及其应用。
背景技术：
1、最近十年来，对细胞外囊泡的研究已成为生命科学领域中发展最迅速的方向之一。细胞外囊泡(extracellular particles，eps)由于其封闭结构，常含有蛋白质、基因等大量胞内的生物活性物质，被认为是细胞间通讯的主要物质基础之一。研究发现，不同纳米囊泡能有效被不同细胞摄取，并递送物质进入细胞或进一步改变细胞功能。因此，细胞外囊泡与不同细胞的作用逐渐成为研究热点。多项研究表明，不同的植物来源的eps具有其独特的性质和生物学功能。如体内实验中西柚、生姜来源的eps具有抗炎作用；柠檬来源的eps具有抗癌作用。
2、鲜黄芪来源的纳米囊泡是一种新型的药物载体，用于提高药物的溶解性、稳定性和生物利用度，而黄芪是一种传统的中药材，被广泛应用于提高免疫力、抗疲劳和抗氧化等方面。
3、然而现有技术中对于鲜黄芪来源的adnps研究较少。
技术实现思路
1、本发明要解决的技术问题是，克服以上技术缺陷，提供一种对于adnps在dc细胞活化中应用研究的一种鲜黄芪来源纳米颗粒的制备方法及其应用。
2、为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种鲜黄芪来源纳米颗粒的制备方法，步骤1：准备鲜黄芪原料，将鲜黄芪原料用去离子水刷洗，在室温下晾置去掉表面的多余水分；
3、步骤2：将得到的鲜黄芪榨汁，放入低速离心榨汁机获得黄芪粗提汁；
4、步骤3：对得到的黄芪粗提汁进一步的弃去大颗粒及纤维，在离心后取上清液重复三次；
5、步骤4：对最后获得的上清液进行超高速离心，取离心缓沉淀，将其重悬于pbs中，使用水平转子进行离心洗脱；
6、步骤5：将囊泡溶液加入蔗糖密度梯度溶液中用水平转子进行超高速离心；
7、步骤6：将adnps离心沉淀后，将沉淀重悬于pbs中，用0.45μm无菌膜过滤除菌，分装于1.5ml无菌管中，保存于-80℃冰箱。
8、优选的，所述步骤1中鲜黄芪原料用去离子水洗刷三遍，室温晾置1h。
9、优选的，所述黄芪粗提汁的三次离心分别为200g，10min；2000g，20min；10000g，30min。
10、优选的，所述超高速离心为100000g，60min，其中水平转子的使用参数同样为100000g，60min。
11、优选的，所述步骤5中蔗糖密度梯度溶液为8％、15％、30％、45％和60％，使用透射电镜拍摄，adnps在透射电镜下大小为404nm×308nm。
12、一种adnps的应用，包括通过adnps在dc细胞活化中的应用。
13、优选的，包括制备小鼠骨髓细胞，同时对bmdc的大量制备加入adnps在24h后检测bmdc细胞表面mhcii、cd80、cd86的表达；
14、还包括制备脾脏悬液，将脾脏悬液中加入adnps在24h后流式上机检测cd45、cd80、cd86、cd 11c。
15、优选的，取小鼠的股骨和胫骨，将获得的股骨和胫骨使用用盛有70％酒精的无菌培养皿浸泡2-5min消毒，消毒后后用无菌的pbs洗两次，将骨移植至个盛有pbs的培养皿中，将骨髓腔内细胞通过pbs冲洗至培养皿中，吸取pbs细胞溶液至ep管，离心，弃上清，适量培养基重悬后转移至100mm培养皿中；补足培养基至10ml进行培养，加入bmdc培养基进行bmdc的大量制备。
16、优选的，取小鼠脾脏并于灭菌的40μm滤网中研磨获得脾细胞悬浮液，将悬浮液300g离心5min后获得细胞沉淀，加入红细胞裂解液，5min后进行300g离心5min，在脾脏悬液中加入adnps5或10μg/ml，处理24h。
17、本发明与现有技术相比的优点在于：在本发明中提供了一种鲜黄芪来源纳米颗粒的制备方法，通过多重离心过滤，或者较高纯度的adnps，方便后续的研究使用，同时在本发明中，提供了小鼠骨髓细胞和脾脏悬液的制备方法，与adnps在小鼠骨髓细胞和脾脏悬液的应用方法，从而提供adnps在dc细胞活化中的应用。
1.一种鲜黄芪来源纳米颗粒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种鲜黄芪来源纳米颗粒的制备方法，其特征在于：所述步骤1中鲜黄芪原料用去离子水洗刷三遍，室温晾置1h。
3.根据权利要求1所述的一种鲜黄芪来源纳米颗粒的制备方法，其特征在于：所述黄芪粗提汁的三次离心分别为200g，10min；2000g，20min；10000g，30min。
4.根据权利要求1所述的一种鲜黄芪来源纳米颗粒的制备方法，其特征在于：所述超高速离心为100000g，60min，其中水平转子的使用参数同样为100000g，60min。
5.根据权利要求1所述的一种鲜黄芪来源纳米颗粒的制备方法，其特征在于：所述步骤5中蔗糖密度梯度溶液为8％、15％、30％、45％和60％，使用透射电镜拍摄，adnps在透射电镜下大小为404nm×308nm。
6.一种adnps的应用，其特征在于：包括应用权利要求1-5任意所述的一种鲜黄芪来源纳米颗粒的制备方法制得的adnps对dc细胞活化。
7.根据权利要求6所述的一种adnps的应用，其特征在于：包括制备小鼠骨髓细胞，同时对bmdc的大量制备加入adnps在24h后检测bmdc细胞表面mhcii，cd80，cd86的表达；
8.根据权利要求7所述的一种adnps的应用，其特征在于：取小鼠的股骨和胫骨，将获得的股骨和胫骨使用用盛有70％酒精的无菌培养皿浸泡2-5min消毒，消毒后后用无菌的pbs洗两次，将骨移植至个盛有pbs的培养皿中，将骨髓腔内细胞通过pbs冲洗至培养皿中，吸取pbs细胞溶液至ep管，离心，弃上清，适量培养基重悬后转移至100mm培养皿中；补足培养基至10ml进行培养，加入bmdc培养基进行bmdc的大量制备。
9.根据权利要求7所述的一种adnps的应用，其特征在于：取小鼠脾脏并于灭菌的40μm滤网中研磨获得脾细胞悬浮液，将悬浮液300g离心5min后获得细胞沉淀，加入红细胞裂解液，5min后进行300g离心5min，在脾脏悬液中加入adnps5或10μg/ml，处理24h。
