本发明属于药物分析，具体涉及一种槐米指纹图谱的构建方法和应用。
背景技术：
1、槐米是豆科植物槐干燥的花蕾，外表是黄褐色或者是黄绿色，稍显皱缩，下部花萼呈钟状先端具5齿裂，上部为未开放的花冠，大小不一，外面均疏生白色短柔毛，质松脆，气弱味微苦，花弯色绿且厚、花蕾壮，无枝梗者为佳，槐米花期为7-8月。
2、槐米性味苦，微寒，槐花有降压作用，能改善毛细血管功能，防止因毛细血管脆性过大，渗透过高而引起的出血，高血压，糖尿病患者服之有预防出血作用。现有技术关于槐米的研究较少，对槐米进行检测时，存在指标成分少，特征峰分离度较差，时间长等缺陷。
技术实现思路
1、因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术在检测槐米时，存在检出指标成分少、特征峰分离度差、检测时间长等缺陷，从而提供一种槐米指纹图谱的构建方法。
2、为此，本发明提供了以下技术方案。
3、本发明提供了一种槐米指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
4、供试品溶液的制备：将供试品制成供试品溶液；
5、取供试品溶液采用高效液相色谱法检测，以乙腈为流动相a，以磷酸水溶液为流动相b，梯度洗脱，梯度洗脱程序包括0-4min，流动相a的体积百分比10％→15％，流动相b的体积百分比90％→85％；4-10min，流动相a的体积百分比15％→16％，流动相b的体积百分比85％→84％；10-16min，流动相a的体积百分比16％→35％，流动相b的体积百分比84％→65％；16-19min，流动相a的体积百分比35％→50％，流动相b的体积百分比65％→50％；19-20min，流动相a的体积百分比50％→10％，流动相b的体积百分比50％→90％。
6、所述构建方法，高效液相色谱法的色谱条件还包括：柱温20℃-30℃；和/或，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；和/或，色谱柱的型号和规格为acquity beh c18，1.7μm，2.1×100mm；和/或，流速为0.2ml/min-0.4ml/min；和/或，进样量为0.5-2μl；和/或，检测波长为250-265nm；和/或，流动相b为0.05-0.3％磷酸水溶液。
7、所述构建方法，高效液相色谱法的色谱条件：柱温为25℃，流速为0.3ml/min；和/或，进样量为1μl；和/或，检测波长为257nm；和/或，流动相b为0.1％磷酸水溶液。
8、所述构建方法，在制备所述供试品溶液时，提取溶剂包括甲醇、乙醇和水中的至少一种；
9、优选地，提取溶剂为70-100％甲醇溶液；
10、优选地，在制备所述供试品溶液时，供试品的质量(g)与提取溶剂的体积(ml)的比值为(0.001-0.008):1。
11、所述槐米的指纹图谱包括11个特征峰，分别为1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰、6号峰、7号峰、8号峰、9号峰、10号峰和11号峰；
12、优选地，1号峰为槲皮素3-o-β-d-葡萄糖基(1→2)[α-l-鼠李糖基l(1→6)]-β-d-葡萄糖苷，2号峰为槲皮素3-o-芸香糖苷-7-o-鼠李糖苷，3号峰为异鼠李素3-o-[2-o-β-葡萄糖基-6-o-鼠李糖基]-β-葡萄糖苷，4号峰为槲皮素-3-o-β-木糖基(1→3)-o-α-l-鼠李糖基-(1→6)-o-β-d-葡萄糖苷，5号峰为芦丁，6号峰为山柰酚-3-o-芸香糖苷，7号峰为水仙苷，9号峰为槲皮素，10号峰为山柰素，11号峰为异鼠李素。
13、所述槐米的指纹图谱包括11个特征峰，分别为1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰、6号峰、7号峰、8号峰、9号峰、10号峰和11号峰；
14、以5号峰为参照物峰1，1号峰、2号峰、3号峰和4号峰的相对保留时间分别为0.63、0.70、0.79、0.88；
15、以9号峰为参照物峰2，8号峰、10号峰、11号峰的相对保留时间分别为0.93、1.11、1.13；
16、相对保留时间在规定值的±10％以内。
17、所述构建方法得到的特征图谱中5号峰与9号峰的峰面积比值≤14；和/或，
18、7号峰与9号峰的峰面积比值＞0.9。
19、所述供试品为槐米饮片、槐米药材、槐米冻干粉或槐米配方颗粒。
20、所述构建方法还包括对照品溶液的制备；
21、优选地，以芦丁、山柰酚-3-o-芸香糖苷、水仙苷和槲皮素中的至少一种作为对照品。
22、本发明还提供了一种上述构建方法在槐米产品质量检测或鉴别中的应用。
23、进一步地，在槐米产品质量检测或鉴别时，槐米产品可以是药材、饮片、配方颗粒、冻干粉等任意剂型。
24、进一步地，以5号峰与9号峰的峰面积比值作进一步限定，可以用于槐米和炒槐米的区分。
25、7号峰与9号峰的峰面积比值作进一步限定，用于槐米样品质量控制。
26、本发明技术方案，具有如下优点：
27、1.本发明提供的槐米指纹图谱的构建方法，该构建方法包括供试品溶液的制备，以乙腈为流动相a，以磷酸水溶液为流动相b，梯度洗脱，梯度洗脱程序包括0-4min，流动相a的体积百分比10％→15％，流动相b的体积百分比90％→85％；4-10min，流动相a的体积百分比15％→16％，流动相b的体积百分比85％→84％；10-16min，流动相a的体积百分比16％→35％，流动相b的体积百分比84％→65％；16-19min，流动相a的体积百分比35％→50％，流动相b的体积百分比65％→50％；19-20min，流动相a的体积百分比50％→10％，流动相b的体积百分比50％→90％。该构建方法可以得到11个共有特征峰，共有特征峰间的分离度好，特征峰分布均匀，并且可以指认共有特征峰的有效成分，利用这些有效化学成分可以精确鉴别槐米，克服了由于槐米药材中化学成分复杂造成的干扰以致不能全面、清楚、有效地对槐米进行质量检测和鉴别的缺陷，该方法适用于对槐米产品进行检测。进一步地，该构建方法还具有检测时间短、精密度高、重复性和稳定性好等优点，能够全面对槐米质量进行监控。
28、2.本发明提供的槐米指纹图谱的构建方法，该构建方法能够通过控制不同特征峰之间的相对峰面积进一步对槐米质量进行监控，可以快速判断槐米与其易混淆产品。
1.一种槐米指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，高效液相色谱法的色谱条件还包括：柱温20℃-30℃；和/或，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；和/或，色谱柱的型号和规格为acquity beh c18，1.7μm，2.1×100mm；和/或，流速为0.2ml/min-0.4ml/min；和/或，进样量为0.5-2μl；和/或，检测波长为250-265nm；和/或，流动相b为0.05-0.3％磷酸水溶液。
3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，高效液相色谱法的色谱条件：柱温为25℃，流速为0.3ml/min；和/或，进样量为1μl；和/或，检测波长为257nm；和/或，流动相b为0.1％磷酸水溶液。
4.根据权利要求1-3任一项所述的构建方法，其特征在于，在制备所述供试品溶液时，提取溶剂包括甲醇、乙醇和水中的至少一种；
5.根据权利要求1-4任一项所述的构建方法，其特征在于，所述槐米的指纹图谱包括11个特征峰，分别为1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰、6号峰、7号峰、8号峰、9号峰、10号峰和11号峰；
6.根据权利要求1-5任一项所述的构建方法，其特征在于，所述槐米的指纹图谱包括11个特征峰，分别为1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰、6号峰、7号峰、8号峰、9号峰、10号峰和11号峰；
7.根据权利要求1-6任一项所述的构建方法，其特征在于，所述构建方法得到的特征图谱中5号峰与9号峰的峰面积比值≤14；和/或，
8.根据权利要求1-7任一项所述的构建方法，其特征在于，所述供试品为槐米饮片、槐米药材、槐米冻干粉或槐米配方颗粒。
9.根据权利要求1-8任一项所述的构建方法，其特征在于，还包括对照品溶液的制备；
10.权利要求1-9任一项所述构建方法在槐米产品质量检测或鉴别中的应用。
