本发明涉及小麦粉中呕吐毒素的基体标准物质制备的,特别是一种快速发酵生产、且发酵产物单一、杂质少的小麦粉中呕吐毒素基体标准物质的制备方法。
背景技术:
1、呕吐毒素,也叫脱氧雪腐镰刀菌烯醇,因引起猪的呕吐而得名,主要由尖孢镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、禾谷镰刀菌、串珠镰刀菌、粉红镰刀菌等镰刀菌产生,属于3类致癌物。
2、呕吐毒素在适宜的温度和湿度条件会在小麦上迅速的生长并大量产生毒素,对于人类和动物会产生较强的毒性。为了监测和控制小麦中呕吐毒素的产生,对于呕吐毒素含量的精准测定是十分重要的工作,呕吐毒素含有多羟基,化学结构复杂,esi源质谱的电离程度较低,且在测定过程中存在着较强的基质效应,严重限制了小麦中呕吐毒素的精准定量。
3、在测定过程中,采用相同种类的基体标准物质能够有效的减小基质效应,但目前我国的小麦中呕吐毒素基体标准物质较少,部分是国外进口,价格贵,并且含有较多的呕吐毒素的乙酰化衍生物,不利于呕吐毒素的快速准确定量。
4、因此,为了提高小麦粉中呕吐毒素的检测精度,降低国外进口的成本和周期,需要开发一种快速有效、能够产生单一的且不含乙酰化衍生物的呕吐毒素基体标准物质的制备方法。
技术实现思路
1、本发明的目的在于提供一种快速有效、能够产生单一的且不含乙酰化衍生物的呕吐毒素基体标准物质的制备方法,以弥补现有技术的不足。
2、为了达到上述目的,本发明采用如下技术方案:
3、一种用于小麦中呕吐毒素测定的基体标准物质制备方法,包括以下步骤:
4、1)利用小麦粉,接种禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌和串珠镰刀菌,加入偏铝酸钠和硅酸钠,发酵生产呕吐毒素;
5、2)经发酵后生产了呕吐毒素的小麦粉,加入硫酸铝钾、肌醇六磷酸后混匀,利用真空冷冻干燥机去除水分;
6、3)再进一步粉碎和混合均匀后,利用γ射线灭菌后进行分装密封,-4℃低温避光储存。
7、优选的,所述步骤1)利用小麦粉,加入无菌纯水,按照10%-12%的接种量接种禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌和串珠镰刀菌,所述步骤1)中无菌水与小麦粉的重量比为1-2:6-7。
8、优选的,所述禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌和串珠镰刀菌的比例为1-5:1-8:1-4。
9、优选的,所述步骤1)中加入偏铝酸钠和硅酸钠的总量占小麦粉的0.8%-1.5%,所述偏铝酸钠和硅酸钠添加比例为2-3:3-4。
10、优选的,所述步骤1)的发酵温度为45-50℃,发酵时间为9-10h。
11、优选的,所述步骤2)中硫酸铝钾和肌醇六磷酸加入的总量占所述步骤1)加入的小麦粉重量的4.5%-10%。
12、优选的,所述硫酸铝钾和肌醇六磷酸添加比例为1-3:1-2。
13、优选的,所述步骤2)中干燥时间为9-10h,干燥温度为-20℃~-25℃,干燥真空度为-10kpa~-15kpa。
14、优选的,所述步骤3)利用强度为15-20kgy的γ射线灭菌灭菌10-15min,过分子筛去除大颗粒物质后进行分装密封,-2℃~-4℃下避光储存。
15、本发明的另一目的是提供了一种用于小麦中呕吐毒素测定的基体标准物质。
16、本发明通过在小麦粉中接种禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌和串珠镰刀菌等真菌,快速有效的发酵产生呕吐毒素,并添加相关的碱性盐和抗氧化剂等,快速制备得到呕吐毒素残留基体标准物质,与现有的技术相比,能够快速发酵产生呕吐毒素,且几乎不产生呕吐毒素的乙酰化衍生物,呕吐毒素在长期的保存过程中能够不发生羟基氧化反应,稳定性较好,适用于工业化基体标准物质的大规模生产。
1.一种用于小麦中呕吐毒素测定的基体标准物质制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
2.根据权利要求1所述的一种用于小麦中呕吐毒素测定的基体标准物质制备方法,其特征在于,所述步骤1)利用小麦粉,加入无菌纯水,按照小麦粉重量10%-12%的接种量接种禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌和串珠镰刀菌,所述步骤1)中无菌水与小麦粉的重量比为1-2:6-7。
3.根据权利要求1所述的一种用于小麦中呕吐毒素测定的基体标准物质制备方法,其特征在于,所述禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌和串珠镰刀菌的比例为1-5:1-8:1-4。
4.根据权利要求1所述的一种用于小麦中呕吐毒素测定的基体标准物质制备方法,其特征在于,所述步骤1)中加入偏铝酸钠和硅酸钠的总量占小麦粉的0.8%-1.5%,所述偏铝酸钠和硅酸钠添加比例为2-3:3-4。
5.根据权利要求1所述的一种用于小麦中呕吐毒素测定的基体标准物质制备方法,其特征在于,所述步骤1)的发酵温度为45-50℃,发酵时间为9-10h。
6.根据权利要求1所述的一种用于小麦中呕吐毒素测定的基体标准物质制备方法,其特征在于,所述步骤2)中硫酸铝钾和肌醇六磷酸加入的总量占所述步骤1)加入的小麦粉重量的4.5%-10%。
7.根据权利要求6所述的一种用于小麦中呕吐毒素测定的基体标准物质制备方法,其特征在于,所述硫酸铝钾和肌醇六磷酸添加比例为1-3:1-2。
8.根据权利要求1所述的一种用于小麦中呕吐毒素测定的基体标准物质制备方法,其特征在于,所述步骤2)中干燥时间为9-10h,干燥温度为-20℃~-25℃,干燥真空度为-10kpa~-15kpa。
9.根据权利要求1所述的一种用于小麦中呕吐毒素测定的基体标准物质制备方法,其特征在于,所述步骤3)利用强度为15-20kgy的γ射线灭菌灭菌10-15min,过分子筛去除大颗粒物质后进行分装密封,-2℃~-4℃下避光储存。
10.权利要求1-9任一项所述的制备方法制备得到的用于小麦中呕吐毒素测定的基体标准物质。