本发明属于化妆品检测技术领域，具体涉及3,3′,5,5′-四甲基联苯胺在检测祛痘化妆品中过氧化苯甲酰中的用途。
背景技术：
过氧化苯甲酰(benzoylperoxide，以下用bpo表示)凝胶为外用于皮肤的氧化剂，可能通过缓慢释放的新生态氧氧化细菌的蛋白质，对痤疮丙酸杆菌具有抗菌作用，对厌氧菌感染也有效。同时具有角质溶解、脱屑及降低毛囊皮脂腺内游离脂肪酸的作用。外用过氧化苯甲酰时可能出现过敏性皮炎和皮肤干燥现象，甚至出现大量脱屑、红斑和水肿等症状。祛痘化妆品是一种特殊用途化妆品，有些不法商家为提高产品的效果，将过氧化苯甲酰添加在化妆品中，以增强化妆品的祛痘效果。2007年版的《化妆品卫生规范》中规定过氧化苯甲酰为限用物质，仅在人造指甲用品中使用且限量是0.7％。此后，由于人造指甲不再属于化妆品，2015年版的《化妆品安全技术规范》中删去了这一条规定，但并没有在禁用物质表中增补。根据《国际化妆品原料标准中文名称目录》，过氧化苯甲酰是位于第2106号的原料。我国尚未发布化妆品中过氧化苯甲酰的检测方法。
目前用于化妆品中过氧化苯甲酰的检测技术主要是色谱法和化学发光法两种。色谱法主要采用高效液相色谱法。这些方法中，采用无水乙醇提取化妆品中过氧化苯甲酰，再依靠庞大或昂贵的精密仪器来完成。化学发光法则是利用过氧化苯甲酰氧化鲁米诺(luminol)发光反应，利用自制的静态注射系统检测洗面奶(膏)、润肤霜(膏)中的过氧化苯甲酰。上述测定bpo的方法在实际应用特别是快检中具有一定的局限性。因此，建立操作简便、灵敏可靠、能满足bpo快检分析的新方法十分必要。
3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine,tmb)是一种新型安全的还原试剂，已逐步取代强致癌物联苯胺和其他致癌性的联苯胺衍生物，应用于临床化验、法医检验、刑事侦破及环境监测领域，迄今为止，该试剂在化妆品检测领域的应用尚未见报导。
技术实现要素：
本发明的目的是为了解决祛痘化妆品中过氧化苯甲酰无法快速检测的问题，提供了3,3′,5,5′-四甲基联苯胺在检测祛痘化妆品中过氧化苯甲酰中的用途，使用3,3′,5,5′-四甲基联苯胺检测祛痘化妆品中过氧化苯甲酰具有检测快速、检测结果稳定可靠等优点。
本发明的目的通过以下技术方案来具体实现：
3,3′,5,5′-四甲基联苯胺在检测祛痘化妆品中过氧化苯甲酰中的用途，包括定性检测或定量检测添加在祛痘化妆品中的过氧化苯甲酰。
进一步的，所述定性检测的方法为：向化妆品中加入乙酸-乙酸钠缓冲溶液，混匀后，再向其中滴加3,3′,5,5′-四甲基联苯胺的乙醇溶液，混合均匀，由溶液颜色的变化判断化妆品中是否含有过氧化苯甲酰：
(1)溶液颜色由乳白色或化妆品本底颜色快速变为蓝色，表明化妆品中含有过氧化苯甲酰；
(2)溶液颜色呈乳白色或化妆品本底颜色且在2min内不变蓝色，表明化妆品中不含有过氧化苯甲酰。
进一步的，所述定量检测的方法如下：
(1)分别向比色管中加入一系列不同浓度的过氧化苯甲酰的丙酮溶液500μl、加入浓度为2mmol/l的3,3′,5,5′-四甲基联苯胺的乙醇溶液500μl，并迅速加入2ml的乙酸-乙酸钠缓冲溶液，溶液迅速显现蓝色；
(2)利用分光光度计于658nm处测定溶液的吸光度，以过氧化苯甲酰的浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线；
(3)向0.2g膏霜或啫喱状的祛痘化妆品中加入5ml50vt％丙酮-水混合溶液，再加入饱和氯化钠溶液1ml，用5ml50vt％丙酮-水混合溶液定容至6ml，涡旋混匀后，离心处理，得到上清液；
(4)向0.2g乳液或洁面乳类祛痘化妆品中加入5ml70vt％丙酮-水混合溶液，再分别加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液各250μl，用70vt％丙酮-水混合溶液定容至6ml，涡旋混匀后，离心处理，得到上清液；
(5)用步骤(3)或(4)得到的上清液代替步骤(1)中的过氧化苯甲酰溶液，根据658nm处测得的吸光度值和步骤(2)的浓度-吸光度标准曲线即可计算出祛痘化妆品中过氧化苯甲酰的含量。
更进一步的，所述乙酸-乙酸钠缓冲溶液的乙酸钠为20mmol/l，ph值为3.8。
更进一步的，步骤(4)中，所述亚铁氰化钾溶液的浓度为92g/l，所述乙酸锌溶液的浓度为183g/l。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供的3,3′,5,5′-四甲基联苯胺在检测祛痘化妆品中过氧化苯甲酰中的用途，可实现祛痘化妆品中过氧化苯甲酰的快速检测，3,3′,5,5′-四甲基联苯胺与过氧化苯甲酰接触后迅速反应，生成的产物具有明显的蓝色，反应的灵敏度高，可简单迅速的定性检测出过氧化苯甲酰；定量检测时，样品处理简单，无需经过复杂繁琐的步骤即可实现显色反应，最低可检测出化妆品中0.07g/kg的过氧化苯甲酰，节省了检测时间，检测结果稳定可靠，且3,3′,5,5′-四甲基联苯胺对人体无毒害，对环境无危害。
附图说明
图1为实施例1的步骤(1)中过氧化苯甲酰系列标准溶液加入3,3′,5,5′-四甲基联苯胺溶液的显色图。
图2为实施例2的定性检测中加入3,3′,5,5′-四甲基联苯胺溶液的显色图。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
祛痘化妆品中过氧化苯甲酰的定量检测方法，步骤如下：
(1)分别向比色管中加入一系列不同浓度的过氧化苯甲酰的丙酮溶液500μl、加入浓度为2mmol/l的3,3′,5,5′-四甲基联苯胺的乙醇溶液500μl，并迅速加入2.0ml的乙酸-乙酸钠缓冲溶液(乙酸钠20mmol/l，ph3.8，提供酸性环境，有利于反应的进行)，溶液迅速显现蓝色；图1中配制的过氧化苯甲酰系列浓度0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.4mmol/l；
(2)利用分光光度计于658nm处测定溶液的吸光度，以过氧化苯甲酰的浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线；
(3)向0.2g膏霜或啫喱状的祛痘化妆品中加入5ml50vt％丙酮-水混合溶液作为提取液，再加入1ml饱和氯化钠溶液，助于化妆品样品充分分散在提取液中，用50vt％丙酮-水混合溶液定容至6ml，涡旋混匀后，离心处理，得到上清液；
(4)向0.2g乳液或洁面乳类祛痘化妆品中加入5ml70vt％丙酮-水混合溶液作为提取液，再分别加入亚铁氰化钾溶液(92g/l)和乙酸锌溶液(183g/l)各250μl，使得化妆品中的大分子物质絮凝沉淀，然后用70vt％丙酮-水混合溶液定容至6ml，涡旋混匀后，离心处理，得到上清液；
(5)用步骤(3)或(4)得到的上清液代替步骤(1)中的过氧化苯甲酰溶液，根据658nm处测得的吸光度值和步骤(2)的浓度-吸光度标准曲线即可计算出祛痘化妆品中过氧化苯甲酰的含量。
如果上清液中过氧化苯甲酰的含量太高，将会导致吸光度超出标曲范围，此时需要用提取液将上清液稀释至适当倍数后再检测。
过氧化苯甲酰含量的计算：
其中，w为化妆品中过氧化苯甲酰的含量(mg/kg)；c为步骤(5)溶液中过氧化苯甲酰的浓度(mg/l)；v为步骤(3)溶液的定容体积(l)；m为所称取化妆品的质量(kg)。
实施例2
祛痘化妆品中过氧化苯甲酰的定性检测方法为：向化妆品中加入乙酸-乙酸钠缓冲溶液(20mmol/l，ph3.8)，混匀后，再向其中滴加3,3′,5,5′-四甲基联苯胺的乙醇溶液，混合均匀，由溶液颜色的变化判断化妆品中是否含有过氧化苯甲酰：
(1)溶液颜色由乳白色或化妆品本底颜色快速变为蓝色，表明化妆品中含有过氧化苯甲酰；
(2)溶液颜色呈乳白色或化妆品本底颜色且在2min内不变蓝色，表明化妆品中不含有过氧化苯甲酰。
图2中是对露得清祛痘膏中过氧化苯甲酰的定性检测，其中，祛痘膏0.2g，乙酸-乙酸钠缓冲溶液1ml，3,3′,5,5′-四甲基联苯胺的乙醇溶液浓度为2mmol/l，滴加2-5滴即可。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
1.3,3',5,5'-四甲基联苯胺在检测祛痘化妆品中过氧化苯甲酰中的用途，其特征在于，包括定性检测或定量检测添加在祛痘化妆品中的过氧化苯甲酰。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述定性检测的方法为：向化妆品中加入乙酸-乙酸钠缓冲溶液，混匀后，再向其中滴加3,3',5,5'-四甲基联苯胺的乙醇溶液，混合均匀，由溶液颜色的变化判断化妆品中是否含有过氧化苯甲酰：
(1)溶液颜色由乳白色或化妆品本底颜色快速变为蓝色，表明化妆品中含有过氧化苯甲酰；
(2)溶液颜色呈乳白色或化妆品本底颜色且在2min内不变蓝色，表明化妆品中不含有过氧化苯甲酰。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述定量检测的方法如下：
(1)分别向比色管中加入一系列不同浓度的过氧化苯甲酰的丙酮溶液500μl、加入浓度为2mmol/l的3,3',5,5'-四甲基联苯胺的乙醇溶液500μl，并迅速加入2ml的乙酸-乙酸钠缓冲溶液，溶液迅速显现蓝色；
(2)利用分光光度计于658nm处测定溶液的吸光度，以过氧化苯甲酰的浓度为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线；
(3)向0.2g膏霜或啫喱状的祛痘化妆品中加入5ml50vt％丙酮-水混合溶液，再加入饱和氯化钠溶液1ml，用5ml50vt％丙酮-水混合溶液定容至6ml，涡旋混匀后，离心处理，得到上清液；
(4)向0.2g乳液或洁面乳类祛痘化妆品中加入5ml70vt％丙酮-水混合溶液，再分别加入亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液各250μl，用70vt％丙酮-水混合溶液定容至6ml，涡旋混匀后，离心处理，得到上清液；
(5)用步骤(3)或(4)得到的上清液代替步骤(1)中的过氧化苯甲酰溶液，根据658nm处测得的吸光度值和步骤(2)的浓度-吸光度标准曲线即可计算出祛痘化妆品中过氧化苯甲酰的含量。
4.根据权利要求2或3所述的用途，其特征在于，所述乙酸-乙酸钠缓冲溶液的乙酸钠为20mmol/l，ph值为3.8。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，步骤(4)中，所述亚铁氰化钾溶液的浓度为92g/l，所述乙酸锌溶液的浓度为183g/l。
技术总结