本发明涉及一种药物的检测方法，尤其涉及一种治疗偏头痛的新药琥珀酸呋罗曲坦片的异构体检测方法，属医药技术领域。
背景技术：
偏头痛是临床最常见的原发性头痛类型，临床以发作性中重度、搏动样头痛为主要表现，头痛多为偏侧，一般持续4-72小时，可伴有恶心、呕吐，光、声刺激或日常活动均可加重头痛，安静环境、休息可缓解头痛。偏头痛是一种常见的慢性神经血管性疾患，多起病于儿童和青春期，中青年期达发病高峰，女性多见，人群中患病率为5%-10%，常有遗传背景。
偏头痛原发于中枢神经系统功能紊乱，而血管变化是继发的，偏头痛发作时伴有血及脑脊液中众多神经介质紊乱。有人还提出神经源性炎症引起偏头痛，认为通过刺激三叉神经周围血管纤维可释放出血管活性肽，引起硬脑膜及其所供应组织的神经源性炎症，其主要表现为血浆蛋白外渗和血管扩张。近来研究发现存在于中枢神经系统内的no对疼痛刺激在中枢的传递起重要作用。但近年来倍受关注的是三叉神经血管反射学说，将神经、血管和神经介质三者结合起来，并统一于三叉神经血管系统中。这种假设认为通过刺激大脑中的某些特定区域，经过一系列反应引起颅外血管扩张和颈内动脉血管扩张，产生头痛。在此过程中，血小板释放的5-ht增强了血管受体的敏感性，对疼痛的产生起着重要作用。这一假设较好地解释了一些偏头痛的临床表现，为一些既作用于中枢神经神经系统也作用于外周神经系统的药物用于治疗偏头痛提供了合理的解释。
琥珀酸呋罗曲坦是多种物种（包括人）的离体脑血管收缩剂。在离体动脉血管上观察了琥珀酸呋罗曲坦作为血管收缩剂的活性，并与舒马曲坦进行了比较。在人大脑中动脉上，琥珀酸呋罗曲坦是一种部分激动剂（相对于5-ht），且效应至少是舒马曲坦的5倍。琥珀酸呋罗曲坦对人基底动脉是一种完全激动剂，其效应约是舒马曲坦的8.3倍。琥珀酸呋罗曲坦对兔基底动脉和猫脑中动脉的效应分别是舒马曲坦的23和3倍。在兔，与5-ht相比，琥珀酸呋罗曲坦是一种部分激动剂，而舒马曲坦是一种完全激动剂。在猫，相对于5-ht，琥珀酸呋罗曲坦和舒马曲坦都是部分激动剂。
技术实现要素：
发明目的：本发明中使用高效液相色谱法对新药琥珀酸呋罗曲坦片的异构体进行检测，能够更好地控制新药琥珀酸呋罗曲坦片的异构体。
技术方案：为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：新药琥珀酸呋罗曲坦片的异构体测定方法，该方法包括如下步骤：
（1）供试品溶液的制备：取本品细粉适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，取续滤液，作为供试品溶液；
（2）对照溶液的制备：精密量取适量供试品溶液，用流动相定量稀释制成每1ml约含1μg的溶液，作为对照溶液；
（3）系统适用性溶液的制备：取琥珀酸呋罗曲坦消旋体适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含1.0mg的溶液，摇匀，作为系统适用性溶液；
（4）异构体测定：取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%～25%；再精密量取供试溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中对映异构体峰面积不得超过对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%）。
具体实施方式
下面通过试验例来进一步阐述本发明，应理解这些试验例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
试验例1.色谱条件
色谱柱：大赛璐chiralpakad-h柱（250mm×4.6mm，5μm）
流动相：正己烷：乙醇：二乙胺=700:300:0.5
检测波长：245nm
流速：1.0ml/min
进样量：10μl
精密称取琥珀酸呋罗曲坦外消旋物适量，加流动相溶解并定量稀释成每1ml中约含琥珀酸呋罗曲坦1.0mg的溶液。精密量取10μl注入液相色谱仪中，记录色谱图。结果显示，两峰分离度良好，保留时间正常。
试验例2.专属性试验
精密称取琥珀酸呋罗曲坦外消旋物适量，加流动相溶解并定量稀释成每1ml中约含琥珀酸呋罗曲坦1.0mg的溶液，作为对照溶液。
将上述溶液注入液相色谱仪中，出峰顺序为：异构体峰、呋罗曲坦峰。
试验例3.供试样品溶液的稳定性
配制浓度为0.1mg/ml的样品溶液，分别在配制后0、1、2、3、4、5、6、7、8小时取续滤液进样，以面积归一化考察异构体含量，结果见表1。
表1异构体溶液稳定性
试验结果表明：在此测定条件下，供试品溶液在8小时内基本稳定。
试验例4.供试品溶液的重复性
取本品适量，分别置于6个量瓶内，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，取续滤液作为供试品溶液。精密量取10μl上述溶液注入液相色谱仪中，记录色谱图。比较异构体峰面积的大小，结果见表2。
表2溶液重复性
试验结果表明：在此测定条件下，供试品溶液重复性良好。
试验例5.异构体测定方法的确定
琥珀酸呋罗曲坦异构体测定方法学验证总结见表3。
表3琥珀酸呋罗曲坦异构体测定方法学验证总结（hplc法）
由上表可知本测定方法经重复性、稳定性等方法学考察，各项实验结果均符合相关要求，表明此法可用于本品异构体测定，故确定异构体测定方法如下：
照高效液相色谱法测定
色谱条件与系统适用性试验以chiralpakad-h（4.6×250mm,5μm）为色谱柱；以正己烷：乙醇：二乙胺=700:300:0.5(v:v:v)为流动相；流速为1.0ml/min；检测波长为245nm。取消旋体适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含1.0mg的溶液，摇匀，作为系统适用性溶液。精密量取系统适用性溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序为异构体峰和呋罗曲坦峰，呋罗曲坦峰与异构体峰之间的分离度应不低于1.5。
测定法取本品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，取续滤液作为供试品溶液，精密量取适量，用流动相定量稀释制成每1ml约含1μg的溶液，作为对照溶液。取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%～25%；再精密量取供试溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱图中对映异构体峰面积不得超过对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%）。
试验例6样品异构体测定
照上述方法分别对本品三批样品及市售品异构体进行测定，测定结果见表4。
表4样品异构体测定结果
1.一种治疗偏头痛的新药琥珀酸呋罗曲坦片的异构体检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
（1）供试品溶液的制备：取本品细粉适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，取续滤液，作为供试品溶液；
（2）对照溶液的制备：精密量取适量供试品溶液，用流动相定量稀释制成每1ml约含1μg的溶液，作为对照溶液；
（3）系统适用性溶液的制备：取琥珀酸呋罗曲坦消旋体适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含1.0mg的溶液，摇匀，作为系统适用性溶液；
（4）异构体测定：取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%～25%；再精密量取供试溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中对映异构体峰面积不得超过对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%）。
技术总结