本发明中涉及风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，具体属于中药检测技术领域。
背景技术：
风湿宁药酒是卫生部药品标准中药成方制剂第十九册颁布品质，由鸡血藤、首乌、苍术、红藤、红花等二十二味中药材制成，具有祛风活血，利湿通络的作用。可以用于治疗风湿性的关节炎，对于关节出现的疼痛以及肢体出现麻木的情况，有很好的缓解作用。鸡血藤作为处方中的君要，具有补血，活血，通络的作用，用于血虚萎黄，麻木瘫痪，风湿痹痛；临床上用于手足麻木、肢体瘫痪、风湿痹痛；因此，研究一种能够高效、准确鉴别风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，显得尤为必要。
技术实现要素：
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，能够高效、准确地鉴别风湿宁药酒中鸡血藤的成分，其分离度好。
本发明的风湿宁药酒，是由鸡血藤、何首乌、苍术、红藤、乌梢蛇、老鹳草、红花、桂枝等二十二味中药材制成记得。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，所述鉴别方法是以芒柄花素对照品为对照，以三氯甲烷:甲醇＝15～25∶1～5∶1～3为展开剂的薄层色谱法。
上述的风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品于水浴上挥发至干，加入乙醇加热回流1-1.5h小时，滤过，滤液蒸于，残渣加甲醇溶解，加入硅胶拌匀，挥干溶剂，置硅胶柱上，依次用石油醚、甲醇-三氯甲烷洗脱，收集甲醇-三氯甲烷洗脱液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：另取芒柄花素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：照《中国药典》2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇为展开剂展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
上述的风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品100ml于水浴上挥发至干，乙醇looml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸于，残渣加甲醇2ml使溶解，加入硅胶lg拌匀，挥干溶剂，置硅胶柱上，依次用60～90℃石油醚30ml、用甲醇-三氯甲烷40ml为洗脱液洗脱，收集甲醇-三氯甲烷洗脱液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：另取芒柄花素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：依照2015年版中国药典四部通则簿层色谱法试验，吸取供试品溶液5～loμl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇＝20：1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
上述的风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，所述的洗脱液甲醇：三氯甲烷的比例为8:2。
为了确保本发明鉴别方法科学、合理、有效，对本发明的鉴别方法进行了研究和考察。
鸡血藤味苦微甘、性温，归肝、心、肾经；色赤入血，质润行散；具有活血舒筋，养血调经的功效；主治风湿痹痛，手足麻木，肢体瘫痪，月经不调，经行不畅，痛经，经闭，白细胞减少症；方中鸡血藤为主药，芒柄花素是其方中的专属性成分；
为此，采用薄层色谱法对鸡血藤药材进行专属性考察，并考察不同点样量、不同厂家薄层板、不同温度、不同湿度对本品中鸡血藤药材薄层色谱的影响。试验结果表明：以芒柄花素对照品为对照，以10℃下放置的三氯甲烷:甲醇＝15～25∶1～5∶1～3为展开剂，对鸡血藤药材进行鉴别的薄层色谱法特征明显，专属性强，可作为本品中鸡血藤的鉴别方法。
1、仪器与试剂
ms304s/01电子天平，mettlertoledo(梅特勒-托利多)，石油醚(天津科密欧化学试剂有限公司，分析纯)，三氯甲烷(西陇化工股份有限公司，分析纯)，p-1型薄层色谱展开缸(上海信谊仪器厂有限公司)，硅胶g薄层板(青岛海洋化工)，5μl点样毛细管(天津市思利达科技有限公司)。
风湿宁药酒(20180501、20180502、20180503，贵州信邦制药股份有限公司)，芒柄花素对照品(中国药品生物制品检定所)。
2、专属性考察
吸取供试品溶液、芒柄花素对照品溶液、鸡血藤阴性对照溶液各10μl，按供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液，分别于同一硅胶g薄层板点样，展开，取出，晾干，喷以三氯甲烷:甲醇溶液显色，在105℃条件下加热至显色清晰，分别置日光和紫外灯(254nm)下检视。供试品色谱中，置日光下检视，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；置254nm紫外光灯下检视，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。在阴性对照相应的位置无相同颜色的斑点或荧光斑点；说明本发明方法的专属性良好。
3、最佳点样量的考察
分别吸取步骤(1)和步骤(2)中供试品溶液和对照品溶液2、3、4、5、6、7、8、10、12、16μl，分别点于不同硅胶g薄层板上，进行考察，展开，取出，晾干，喷以三氯甲烷:甲醇溶液显色，在105℃条件下加热至显色清晰，分别置日光和紫外灯(254nm)下检视。其中，供试品8μl点样量效果最佳，当点样量大于10μl时，供试品溶液位置斑点出现拖尾现象，点样量低于5μl时，供试品溶液位置斑点不明显；对照品溶液点样量5～10μl时效果好，尤其是在8μl时效果最佳，故选择供试品溶液点样量为5～10μl，最佳点样量8μl；对照品溶液点样量5～10μl，最佳点样量8μl。
4、耐受性考察
4.1、不同品牌的薄层板
吸取供试品溶液、芒柄花素对照品溶液各8μl点样，更换不同品牌的薄层板，展开，取出，晾干，喷以三氯甲烷:甲醇溶液显色，在105℃条件下加热至显色清晰，分别置日光和紫外灯(254nm)下检视。置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。且更换不同薄层板后，各薄层板间无显著差异，表明更换不同品牌薄层板对鸡血藤的薄层鉴别无影响。
4.2、温度
吸取供试品溶液、芒柄花素对照品溶液各8μl点样，变换不同的温度条件，展开，取出，晾干，喷以三氯甲烷:甲醇溶液显色，在105℃条件下加热至显色清晰，分别置日光和紫外灯(254nm)下检视。置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。且变换不同温度后，各薄层板间无显著差异，表明变换不同温度对鸡血藤的薄层鉴别无影响。
4.3、湿度
吸取供试品溶液、芒柄花素对照品溶液各8μl点样，变换不同的湿度条件，展开，取出，晾干，喷以三氯甲烷:甲醇溶液显色，在105℃条件下加热至显色清晰，分别置日光和紫外灯(254nm)下检视。置日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。且变换不同湿度后，各薄层板间无显著差异，表明变换不同湿度对鸡血藤的薄层鉴别无影响。
本发明的有益之处在于：本发明提供的一种风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，操作可行性较强，能够实现高效、准确地鉴别风湿宁药酒中鸡血藤的成分。本发明的方法可控性更高，操作简单、分离度高、重现性好，并且阴性对照无干扰，不同厂家薄层板和温度、湿度条件均不影响。本发明鉴别方法能够对风湿宁药酒中鸡血藤成分进行准确、全面、科学有效的鉴别，提升了质量检测标准，进一步确保了产品质量的稳定、安全、有效。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步的介绍。
实施例1
风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品100ml于水浴上挥发至干，乙醇looml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸于，残渣加甲醇2ml使溶解，加入硅胶lg拌匀，挥干溶剂，置硅胶柱上，依次用60～90℃石油醚30ml、用甲醇-三氯甲烷(9:1)40ml为洗脱液洗脱，收集甲醇-三氯甲烷洗脱液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：另取芒柄花素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：依照2015年版中国药典四部通则簿层色谱法试验，吸取供试品溶液8μl、对照品溶液8μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇＝15：1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例2
风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品100ml于水浴上挥发至干，乙醇looml，加热回流1.5小时，滤过，滤液蒸于，残渣加甲醇2ml使溶解，加入硅胶lg拌匀，挥干溶剂，置硅胶柱上，依次用60～90℃石油醚30ml、用甲醇-三氯甲烷(8:2)40ml为洗脱液洗脱，收集甲醇-三氯甲烷洗脱液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：另取芒柄花素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：依照2015年版中国药典四部通则簿层色谱法试验，吸取供试品溶液8μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇＝25：3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例3
风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品100ml于水浴上挥发至干，乙醇looml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸于，残渣加甲醇2ml使溶解，加入硅胶lg拌匀，挥干溶剂，置硅胶柱上，依次用60～90℃石油醚30ml、用甲醇-三氯甲烷(9:1)40ml为洗脱液洗脱，收集甲醇-三氯甲烷洗脱液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：另取芒柄花素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：依照2015年版中国药典四部通则簿层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇＝20：3为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
1.风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，其特征在于：所述鉴别方法是以芒柄花素对照品为对照，以三氯甲烷:甲醇＝15～25∶1～5∶1～3为展开剂的薄层色谱法。
2.根据权利要求1所述的风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，其特征在于：具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品于水浴上挥发至干，加入乙醇加热回流1-1.5h小时，滤过，滤液蒸于，残渣加甲醇溶解，加入硅胶拌匀，挥干溶剂，置硅胶柱上，依次用石油醚、甲醇-三氯甲烷洗脱，收集甲醇-三氯甲烷洗脱液，蒸干，残渣加三氯甲烷使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：另取芒柄花素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：照中国药典2015年版四部通则0502薄层色谱法试验，吸取对照品溶液、供试品溶液，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇为展开剂展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.根据权利要求2所述的风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，其特征在于：具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本品100ml于水浴上挥发至干，乙醇looml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸于，残渣加甲醇2ml使溶解，加入硅胶lg拌匀，挥干溶剂，置硅胶柱上，依次用60～90℃石油醚30ml、用甲醇-三氯甲烷40ml为洗脱液洗脱，收集甲醇-三氯甲烷洗脱液，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照品溶液的制备：另取芒柄花素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
(3)鉴别：依照2015年版中国药典四部通则簿层色谱法试验，吸取供试品溶液5～loμl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以三氯甲烷-甲醇＝20：1为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
4.根据权利要求3所述的风湿宁药酒中鸡血藤的鉴别方法，其特征在于：所述的洗脱液甲醇：三氯甲烷的比例为8:2。
技术总结