本发明涉及适用于质谱分析的试剂以及使用所述试剂对分析物分子进行质谱测定的方法。
背景技术：
：质谱分析(ms)是一种广泛使用的技术，用于对从小分子到大分子范围内的化学物质进行定性和定量分析。通常，它是非常灵敏且特异性的方法，甚至允许对复杂的生物样品(例如环境样品或临床样品)进行分析。然而，对于若干种分析物，特别是如果从复杂的生物基质诸如血清分析，则测量的灵敏度仍是问题。ms往往与色谱技术特别是气相色谱和液相色谱诸如hplc联用。这里，将经过分析的目标分子进行色谱分离，并且各自进行质谱分析(higashi等人，(2016)j.ofpharmaceuticalandbiomedicalanalysis130，第181-190页)。然而，仍需要增加ms分析方法的灵敏度，特别是用于对低丰度分析物进行分析或当仅能获取极少量材料(诸如生物活检组织)时。本领域中，若干种旨在改善这些分析物的测量灵敏度的衍生化试剂是已知的。其中，试剂包含组合在单个功能性单元中的带电单元和中性丢失单元(例如，wo2011/091436)。其他包含独立单元的试剂在结构上相对较大，这影响样品制备和ms测量的一般工作流程(rahimoff等人，(2017)j.am.chem.soc.139(30)，第10359-10364页)。已知的衍生化试剂是，例如，cookson型试剂、amplifexdiene、amplifexketo、girardt、girardp。所有这些均存在以下问题：由于标记效率往往不足而导致的缺点、由于偶合化学反应而导致结构异构体的生成、非优化的离子化效率、在偶合后进行色谱分离的缺点、由于裂解途径众多而导致的非优化的裂解行为以及需要高碰撞能量。因此，本领域中亟需衍生化试剂，其允许从复杂生物基质中灵敏地检测分析物并且表现出不对ms测量工作流程造成负面影响的化学结构。这在随机存取的高通量ms设置中尤为重要，其中不得不在短时间内测量表现出不同化学特性的若干种不同分析物。本发明涉及新颖的试剂，其允许对生物样品中的分析物分子(诸如类固醇、蛋白质和其他类型的分析物)进行灵敏的测定。该试剂以模块化方式设计，以允许针对某些分析物的测量中出现的具体需求或针对具体工作流程调整进行个别调整。技术实现要素：在第一方面，本发明涉及式a化合物：x-l1-z-l2-y其中x是反应性基团，其能够与分析物分子形成共价键，l1和l2彼此独立地为取代或非取代的连接基，特别是线性连接基，y是中性丢失单元，z是包含至少一个永久带电部分的带电单元，包括所述化合物的任何盐。在第二方面，本发明涉及包含本发明第一方面的化合物的组合物。在第三方面，本发明涉及包含本发明第一方面的化合物或本发明第二方面的组合物的试剂盒。在第四方面，本发明涉及包含分析物分子与本发明第一方面的化合物的共价加合物，特别是通过分析物分子与本发明第一方面的化合物的化学反应形成的共价加合物。在第五方面，本发明涉及本发明第一方面的化合物、或本发明第二方面的组合物、或本发明第三方面的试剂盒的用途，以用于对分析物分子进行质谱测定。在第六方面，本发明涉及用于质谱测定分析物分子的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使分析物分子与本发明第一方面的式a化合物反应，从而形成分析物分子与本发明第一方面的式a化合物的共价加合物，以及(b)对来自步骤(a)的所述加合物进行质谱分析。附图说明图1：标记1-睾酮衍生物：(a)标记1-睾酮衍生物的ms裂解：2，5-二甲基四唑基团的中性丢失(δ96da)；(b)标记1-睾酮衍生物的前体离子(左轴，黑条)和产物离子(右轴，灰条)在不同碰撞能量下的峰面积；(c)标记1-睾酮在碰撞能量为35v时的ms谱。前体离子m/z为518.2426，产物离子m/z为422.2075。图2：与其他试剂比较：在0.1μg/ml浓度下，标记1-睾酮、试剂a-睾酮以及未标记的13c3-睾酮的产物离子在最大强度下的峰面积。图3：标记2-睾酮衍生物：(a)标记2-睾酮衍生物的ms裂解：1-苯基三唑-4-甲基的中性丢失(δ157da)；(b)标记2-睾酮衍生物的前体离子(左轴，黑条)和产物离子(右轴，灰条)在不同碰撞能量下的峰面积；(c)标记2-睾酮在碰撞能量为30v时的ms谱。前体离子m/z为579.3344，产物离子m/z为422.2726。图4：与未衍生睾酮和amplifex衍生化睾酮对比，确定衍生化试剂标记16、标记17和标记18的增强因子的工作流程示意图。图5：峰“分裂”示意图：描述色谱系统将因分析物分子衍生化反应产生的不同异构体彼此分离的能力。具体实施方式在下文中详细描述本发明之前，应理解，本发明并不限于本文所述的具体方法、方案和试剂，因为这些是可变的。也应理解，本文中使用的术语仅用于描述特定实施例的目的，并不旨在限制本发明的范畴，本发明的范畴仅由所附权利要求书限制。除非另外指明，否则本文所用的所有科学技术术语具有如本领域的普通技术人员通常理解的相同意义。本说明书文本全文引用了若干文献。本文所引用的文献(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商的说明书、使用说明等)中的每一篇，无论上文或下文中引用，均通过引用而以其整体并入本文。在此类并入的参考文献的定义或教导与本说明书中引用的定义或教导矛盾时，以本说明书文本为准。下面将描述本发明的元件。这些元件与具体实施例一起列出，然而，应理解，它们可以任何方式和任何数目组合以创建另外的实施例。各种描述的实例和优选实施例不应解释为仅将本发明限制为明确描述的实施例。此描述应理解为支持并且涵盖将明确描述的实施例与任何数目的所公开和/或优选元件组合的实施例。此外，除非上下文另有指示，否则本申请中所有所描述元件的任何排列和组合均应视为由本申请的说明书公开。定义词语“包括”以及变体诸如“包含”和“含有”应理解为暗示包括所陈述的整数或步骤或者整数或步骤组，但不排除任何其他整数或步骤或者整数或步骤组。如在本说明书和所附权利要求中所用，除非内容另外明确规定，否则单数形式“一个”、“一种”、“该”和“所述”包括复数指代物。百分比、浓度、量和其他数值数据在本文中可以“范围”格式表达或呈现。应理解，此类范围格式仅为简便起见，并因此应灵活地解释为不仅包括作为范围限值而明确引用的数值，而且包括该范围内所涵盖的所有个体数值或子范围，如同每个数值和子范围被明确引用一样。作为例示，数值范围“4％至20％”应解释为不仅包括明确引用的值4％至20％，而且包括所指示范围内的个体值和子范围。因此，此数值范围中包括个体值诸如4、5、6、7、8、9、10、...18、19、20％和子范围诸如4-10％、5-15％、10-20％等。此相同原则适用于引用最小值或最大值的范围。此外，无论范围的广度或所描述的特征如何，此类解释均应适用。当与数值相连使用时，术语“约”意为涵盖处于一定范围内的数值，该范围具有比所指示的数值小5％的下限和比所指示的数值大5％的上限。术语“质谱分析”(“massspec”或“ms”)涉及通过化合物的质量用于鉴别化合物的分析技术。ms是基于离子的质荷比或“m/z”来过滤、检测和测量离子的方法。ms技术通常包括(1)将化合物离子化以形成带电化合物；以及(2)检测该带电化合物的分子量并计算质荷比。化合物可通过任何合适的手段来离子化并检测。“质谱仪”通常包括电离器和离子检测器。通常，将一个或多个目标分子离子化，后续将离子引入质谱仪器中，在该仪器中，由于磁场和电场的组合，离子遵循取决于质量(“m”)和电荷(“z”)的空间路径。术语“离子化”或“电离”是指生成具有等于一个或多个电子单位的净电荷的分析物离子的过程。负离子是那些具有一个或多个电子单位的净负电荷的离子，而正电荷是那些具有一个或多个电子单位的净正电荷的离子。ms方法可以生成并检测负离子的“负离子模式”来执行或以生成并检测正离子的“正离子模式”来执行。“串联质谱分析”或“ms/ms”包括多个质谱分析选择步骤，其中分析物的裂解在各级之间发生。在串联质谱仪中，离子在离子源中形成，并在一级质谱分析(ms1)中按质荷比进行分离。选择特定质荷比的离子(前体离子或母离子)，并通过碰撞诱导解离、离子-分子反应或光解离产生碎片离子(或子离子)。然后，在二级质谱分析(ms2)中分离并检测所得离子。ms中大多数样品工作流程进一步包括样品制备和/或富集步骤，其中例如使用例如气相色谱或液相色谱将目标分析物从基质中分离出来。通常地，对于质谱分析测量，执行以下三个步骤：1.将包含目标分析物的样品离子化，一般通过与阳离子形成加合物来进行，经常通过质子化生成阳离子。离子化源包括但不限于电喷雾离子化(esi)和大气压化学离子化(apci)。2.根据离子的质量和电荷对离子进行分选和分离。高场不对称波形离子迁移谱(faims)可用作离子过滤器。3.然后，例如以多反应模式(mrm)检测所分离的离子，并将结果展示在图表上。术语“电喷雾离子化”或“esi”是指如下方法：在该方法中，溶液沿着短毛细管行进至被施加高正电位或高负电位的末端。到达该管末端的溶液被蒸发(雾化)成在溶剂蒸汽中存在非常小的溶液液滴的喷射或喷雾。此液滴雾流经蒸发室，将该蒸发室略微加热以防止冷凝并且蒸发溶剂。随着液滴变得更小，表面电荷密度增加，直到同类电荷之间的天然斥力造成离子以及中性分子得以释放。术语“大气压化学离子化”或“apci”是指与esi类似的质谱分析方法，然而apci通过在大气压力下于等离子体内发生的离子-分子反应来产生离子。通过喷雾毛细管与对电极之间的放电来维持等离子体。然后，通常使用一组差分泵分级分离器将离子提取至质量分析仪中。可使用干燥且预热的ni气体逆流以改善溶剂的移除。对于分析极性较低的实体，apci中的气相离子化可能比esi更有效。“多反应模式”或“mrm”是ms仪器的一种检测模式，在该模式下，选择性地检测前体离子和一种或多种碎片离子。“串联质谱分析”或“ms/ms”包括多个质谱分析选择步骤，其中分析物的裂解在各级之间发生。在串联质谱仪中，离子在离子源中形成，并在一级质谱分析(ms1)中按质荷比进行分离。选择特定质荷比的离子(前体离子或母离子)，并通过碰撞诱导解离、离子-分子反应或光解离产生碎片离子(或子离子)。然后，在二级质谱分析(ms2)中分离并检测所得离子。由于质谱仪分离并检测质量略有差异的离子，它容易区分给定元素的不同同位素。因此，质谱分析是对包括但不限于低分子量分析物、肽、多肽或蛋白质的分析物进行精确质量测定和表征的重要方法。其应用包括蛋白质及其翻译后修饰的鉴别；蛋白质复合物、其亚基和功能性相互作用的阐明；以及蛋白质组学中蛋白质的全局测量。通常地，可通过质谱分析执行对肽或蛋白质的从头测序而无需事先知晓氨基酸序列。质谱测定可与另外的分析方法联用，包括色谱方法诸如气相色谱(gc)、液相色谱(lc)特别是hplc和/或基于离子迁移的分离技术。在本公开的上下文中，术语“分析物”、“分析物分子”或“目标分析物”可互换使用，其是指待经由质谱分析的化学物质。适合经由质谱分析的化学物质，即分析物，可以是活体生物体中存在的任何种类的分子，包括但不限于核酸(例如，dna、mrna、mirna、rrna等)、氨基酸、肽、蛋白质(例如，细胞表面受体、胞质蛋白等)、代谢物或激素(例如，睾酮、雌激素、雌二醇等)、脂肪酸、脂质、碳水化合物、类固醇、酮类固醇、开环甾类化合物(例如，维生素d)、以另一分子的某一修饰(例如，蛋白质上的糖部分或磷酰残基、基因组dna上的甲基-残基)为特征的分子或已经由生物体内化的物质(例如，治疗性药物、滥用的药物、毒素等)或此类物质的代谢物。此类分析物可用作生物标志物。在本发明的上下文中，术语“生物标志物”是指生物系统内的物质，其用作所述系统的生物学状态的指标。术语“检测限”或“lod”是生物分析过程可将分析物与背景噪声轻易区分时的分析物最低浓度。术语“定量限”、“量化限”或“loq”是指可采用可接受的精确度和准确度定量测定时样品中分析物的最低量，其中相对标准偏差(rsd％)为20％且准确度为80％至120％。分析物可以存在于目标样品(例如生物样品和临床样品)中。术语“样品”或“目标样品”在本文中互换使用，其是指组织、器官或个体的一部分或切片，通常小于此类组织、器官或个体，旨在代表整个组织、器官或个体。在分析时，样品提供关于组织状态或者器官或个体的健康或患病状态的信息。样品的实例包括但不限于：液体样品，诸如血液、血清、血浆、滑液、脊髓液、尿液、唾液和淋巴液；或固体样品，诸如干血斑和组织提取物。样品的其他实例是细胞培养物或组织培养物。在本公开的上下文中，样品可以衍生自“个体”或“受试者”。通常地，受试者是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如牛、绵羊、猫、犬和马)、灵长类动物(例如人和非人灵长类动物，诸如猴)、兔以及啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。在经由质谱分析之前，可以以样品和/或分析物特异性的方式预处理样品。在本公开的上下文中，术语“预处理”是指允许经由质谱分析对所期望的分析物进行后续分析所需的任何措施。预处理措施通常包括但不限于，洗脱固体样品(例如，洗脱干血斑)、将溶血试剂(hr)添加到全血液样品中、以及将酶试剂添加到尿液样品中。而且，添加内标(istd)也视为样品的预处理。术语“溶血试剂(hr)”是指裂解样品中存在的细胞的试剂，在本发明的上下文中，溶血试剂特别是指裂解血液样品中存在的细胞(包括但不限于，全血液样品中存在的红细胞)的试剂。众所周知的溶血试剂是水(h2o)。溶血试剂的其他实例包括但不限于去离子水、高渗透性液体(例如，8m尿素)、离子液体和不同的清洗剂。通常地，内标(istd)是已知量的物质，当经历质谱检测工作流程(即，包括任何预处理、富集和实际检测步骤)时，其表现出与目标分析物类似的特性。尽管istd表现出与目标分析物类似的特性，它仍可明显地与目标分析物区分开来。举例而言，在色谱分离诸如气相色谱和液相色谱过程中，istd具有大致与来自样品中的目标分析物相同的保留时间。因此，分析物和istd两者均同时进入质谱仪中。然而，istd表现出与来自样品的目标分析物不同的分子质量。这使得在来自istd的离子与来自分析物的离子之间能够通过其不同的质荷(m/z)比进行质谱区分。两者均经历裂解并提供子离子。这些子离子可通过其m/z比而彼此区分并与各自的母离子区分。因此，可对来自istd和分析物的信号执行独立测定和定量。由于istd的添加的量是已知的，因此来自样品的分析物的信号强度可归因于该分析物的具体定量性的量。因此，istd的添加允许对所检测的分析物的量进行相对比较，并且在样品中存在的目标分析物到达质谱仪时，能够对该分析物进行无歧义的鉴别和定量。通常但不一定，istd是目标分析物的同位素标记的变体(包含例如2h、13c或15n等标记)。除了预处理之外，也可对样品进行一个或多个富集步骤。在本公开的上下文中，术语“第一富集过程”或“第一富集工作流程”是指在样品的预处理之后发生的富集过程，并且提供包含相对于初始样品富集的分析物的样品。第一富集工作流程可包括化学沉淀(例如，使用乙腈)或使用固相。合适的固相包括但不限于固相萃取(spe)盒和珠。珠可以是非磁性的、磁性的或顺磁性的。珠可以经差异性涂覆以具有对于目标分析物的特异性。依据预期的用途，即依据预期的捕获分子，涂层可以不同。哪种涂层适用于哪种分析物是技术人员众所周知的。珠可以由各种不同材料制成。珠可具有各种尺寸并且包含具有或不具有孔的表面。在本公开的上下文中，术语“第二富集过程”或“第二富集工作流程”是指在样品的预处理和第一富集过程之后发生的富集过程，并且提供包含相对于初始样品和第一富集过程之后的样品富集的分析物的样品。术语“色谱”是指一种过程，在该过程中，随着由液体或气体携带的化学混合物在液体或固体固定相周围或上方流动，作为化学实体的差异性分布的结果，该化学混合物被分离为多种组分。术语“液相色谱”或“lc”是指，随着流体均匀地渗透通过细碎物质填充的柱或通过毛细管道，该流体溶液中的一种或多种组分选择性滞后的过程。随着此流体相对于固定相移动，混合物组分在一种或多种固定相与体相流体(即，流动相)之间的分布导致该滞后。固定相的极性高于流动相(例如，甲苯作为流动相，二氧化硅作为固定相)的方法称为正相液相色谱(nplc)，而固定相的极性小于流动相(例如，水-甲醇混合物作为流动相，而c18(十八烷基硅烷基)作为固定相)的方法称为反相液相色谱(rplc)。“高效液相色谱”或“hplc”是指一种液相色谱方法，在该方法中，通过迫使流动相在压力下经过固定相，通常为密集填充柱，从而增加分离程度。通常地，使用由不规则形状或球形的颗粒、多孔整体层或多孔膜构成的固定相来填充柱。基于流动相和固定相的极性，hplc历来分为两个不同的子类。固定相的极性高于流动相(例如，甲苯作为流动相，二氧化硅作为固定相)的方法称为正相液相色谱(nplc)，反之(例如，水-甲醇混合物作为流动相，而c18(十八烷基硅烷基)作为固定相)则称为反相液相色谱(rplc)。微流lc是指使用具有窄的内柱直径(通常低于1mm，例如约0.5mm)的柱的hplc方法。“超高效液相色谱”或“uhplc”是指使用120mpa(17,405lbf/in2)或约1200大气压的hplc方法。快速lc是指使用具有如上所述的内径且长度短(＜2cm，例如1cm)的柱的lc方法，其采用如上所述的流速并使用如上所述的压力(微流lc、uhplc)。短快速lc方案包括使用单个分析柱的捕捉/洗涤/洗脱步骤，并在＜1min的极短时间内实现lc。其他众所周知的lc模式包括亲水作用色谱(hilic)、体积排阻lc、离子交换lc和亲和lc。lc分离可以是单通道lc或包含平行排列的多个lc通道的多通道lc。在lc中，可根据分析物的极性或logp值、尺寸或亲和力来分离该分析物，如技术人员通常所知。在本发明的上下文中，术语“化合物”是指具有具体化学结构的化学物质。所述化合物可包含一个或多个功能性单元。每个单元履行不同的功能性，或者两个或更多个功能性单元可履行相同功能。功能性单元包括但不限于反应性单元、带电单元和中性丢失单元。术语“中性丢失单元”是指一种单元，其能够失去不带电的实体，即，其能够释放中性实体。通常地，中性实体包含单个原子或多个原子。中性丢失单元可以是中性的、带正电的或带负电的。在ms的条件下，例如当进行碰撞诱导解离(cid)时，例如在三重四极杆ms中，中性丢失单元能够裂解，从而释放至少一个中性实体。在释放中性实体之后，中性丢失单元的剩余部分保持其原始电荷。据此，在中性丢失单元不带电的情况下，其在丢失中性实体之后保持中性。在中性丢失单元带正电的情况下，其在丢失中性实体之后保持带正电。在中性丢失单元带负电的情况下，其在丢失中性实体之后保持带负电。通常但不一定，释放一个中性实体。然而，也可以释放多于一个中性实体。这可在单个裂解事件中发生(即，同步释放两个或更多个中性实体)或在两个或更多个后续裂解事件中发生(首先释放一个中性实体，后续释放一个或多个其他中性实体)。术语“裂解”是指单个分子解离成两个或更多个独立分子。如本文所用，术语裂解是指特异性裂解事件，其中母分子中发生裂解事件的断裂点得到良好限定，并且其中由裂解事件导致的两个或更多个子分子得到良好表征。如何确定母分子的断裂点以及两个或多个所得子分子是技术人员众所周知的。所得子分子可以是稳定的，或者可以在后续裂解事件中解离。例如，正在裂解的母分子包括一个四唑单元时，技术人员能够根据所述分子的整个结构确定所述四唑单元是裂解释放n2实体，还是从所述母分子中完全释放出来，即，确定由此产生的子分子是n2分子或缺少n2的母分子，(仍包括所述剩余的四唑单元)，还是四唑分子和缺乏所述四唑单元的母分子。裂解可经由碰撞诱导解离(cid)、电子捕获解离(ecd)、电子转移解离(etd)、负电子转移解离(netd)、电子分离解离(edd)、光解离特别是红外多光子解离(irmpd)和黑体红外辐射解离(bird)、表面诱导解离(sid)、高能c形阱解离(hcd)、电荷远端裂解而发生。术语“反应性单元”是指能够与另一分子反应，即，能够与另一分子(如目标分析物)形成共价键的单元。通常地，此类共价键与其他分子中存在的化学基团而形成。据此，在进行化学反应时，化合物的反应性单元与分析物分子中存在的合适化学基团形成共价键。由于分析物分子中存在的此化学基团履行与化合物的反应性单元反应的功能，分析物分子中存在的化学基团也称为分析物的“官能团”。在每种情况下，共价键的形成均发生在化学反应中，其中新共价键在反应性基团的原子与分析物的官能团的原子之间形成。本领域的技术人员众所周知，在反应性基团与分析物的官能团之间形成共价键时，原子在此化学反应过程中丢失。术语“带电单元”是指化合物的包含带电部分的单元。电荷可以是永久的，或可依据周围条件而变。通常地，电荷是正电荷或负电荷。在带电单元包含至少一个永久带电部分的情况下，认为电荷并不基于周围条件而变，例如，ph值的变化并不导致永久带电单元的电荷变化。化合物的不同功能性单元可以经由连接基连接。术语连接基是指分支或不分支的化学结构，通常包含被取代或未被取代的烷基单元，并且也可以可选地包括一个或多个杂原子。连接基连接化合物内的不同功能性单元。通常地，不分支的连接基连接一个化合物中的两个功能性单元，即，不分支的连接基也可以称为双功能连接基或线性连接基。分支的连接基可以连接三个、四个、五个或更多个功能性单元，其取决于所述连接基包含多少个分支。在本公开的上下文中，术语“加合物”是指通过化合物与分析物分子的反应产生的产物。此反应导致在化合物与分析物之间形成共价键。据此，术语加合物是指通过化合物与分析物分子的反应形成的共价结合反应产物。“试剂盒”是包含至少一种本发明试剂的任何制品(例如，包装或容器)，该试剂例如用于治疗病症的药品，或用于特异性地检测生物标志物基因或蛋白质的探针。试剂盒优选作为用于执行本发明方法的单元来推销、分发或贩售。通常地，试剂盒可进一步包含划分出隔室以将一个或多个容器机构(诸如小瓶、管等)接纳在严格限定空间内的载体机构。特别地，容器机构中的每个包括待用于第一方面的方法中的独立元件中的一个。试剂盒可进一步包含一个或多个包含其他材料的其他容器，该其他材料包括但不限于缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头、注射器和带有使用说明书的包装插页。标签可存在于容器上以指示将组合物用于具体应用，并且也可指示体内或体外使用的指南。计算机程序代码可提供于数据存储介质或装置诸如光学存储介质(例如，光盘)上或直接提供于计算机或数据处理装置上。此外，试剂盒可包含如本文别处所述的用于校准目的生物标志物的标准量。“包装插页”用于指治疗产品或药品的商业包装中通常包括的说明书，其含有关于涉及此类治疗产品或药品的使用的适应症、用法、剂量、施用、禁忌症、待与所包装产品联用的其他治疗产品和/或警告的信息。实施例在第一方面，本发明涉及式a化合物：x-l1-z-l2-y其中x是反应性单元，l1和l2彼此独立地为取代或非取代的连接基，特别是线性连接基，y是中性丢失单元，z是带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是包含一个永久带电部分，包括所述化合物的任何盐。在本发明第一方面的实施例中，根据本发明的式a化合物包含能够与分析物分子反应的反应性单元x。反应性单元x能够与分析物分子反应，使得在式a化合物与分析物分子之间形成共价键。在本发明第一方面的实施例中，反应性单元x与式a化合物形成共价键。特别地，在式a化合物的反应性单元x与分析物分子中存在的官能团之间形成共价键。依据待测定的分析物分子中存在的官能团，技术人员将选择适宜的用于式a化合物的反应性单元x。决定哪种反应性单元x将符合与目标分析物的官能团结合是公知常识。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子包含选自由以下项组成的组的官能团：羰基基团、二烯基团、羟基基团、胺基团、亚胺基团、硫醇基团、二醇基团、酚基团、环氧化物基团、二硫化物基团和叠氮化物基团，这些基团中的每个能够与式a化合物的反应性单元x形成共价键。此外，在本发明的范畴内也预期，分析物分子上存在的官能团将会首先转化为更容易与式a化合物的反应性单元x反应的另一基团。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子选自由以下项组成的组：类固醇、酮类固醇、开环甾类化合物、氨基酸、肽、蛋白质、碳水化合物、脂肪酸、脂质、核苷、核苷酸、核酸和其他生物分子(包括小分子代谢物和辅因子)以及治疗性药物、滥用的药物、毒素或其代谢物。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子包含羰基基团作为官能团，该羰基基团选自由以下项组成的组：羧酸基团、醛基团、酮基团、掩蔽的醛、掩蔽的酮基团、酯基团、酰胺基团和酐基团。在本发明第一方面的实施例中，其中羰基基团是酰胺基团，技术人员清楚地知道，这样的酰胺基团是稳定的基团，但可将其水解以将酰胺基团转化为羧酸基团和氨基基团。酰胺基团的水解可经由酸/碱催化的反应或酶促过程实现，以上两者中的任何一种均是技术人员众所周知的。在本发明第一方面的实施例中，其中羰基基团是掩蔽的醛基团或掩蔽的酮基团，各自的基团是半缩醛基团或缩醛基团，特别是环状半缩醛基团或缩醛基团。在本发明第一方面的实施例中，在与式a化合物反应之前，缩醛基团转化为醛或酮基团。在本发明第一方面的实施例中，羰基基团是酮基团。在本发明第一方面的实施例中，可在与式a化合物的反应性单元反应之前，将酮基团转移至中间体亚胺基团中。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个酮基团的分析物分子是酮类固醇。在本发明第一方面的特定实施例中，酮类固醇选自由以下项组成的组：睾酮、表睾酮、二氢睾酮(dht)、去氧甲基睾酮(dmt)、四氢孕三烯酮(thg)、醛固酮、雌酮、4-羟基雌酮、2-甲氧基雌酮、2-羟基雌酮、16-酮雌二醇、16α-羟基雌酮、2-羟基雌酮-3-甲基醚、泼尼松、泼尼松龙、孕烯醇酮、孕酮、dhea(脱氢表雄酮)、17-oh孕烯醇酮、17-oh孕酮、17-oh孕酮、雄酮、表雄酮和δ4雄烯二酮)11-去氧皮质醇皮质甾酮、21-脱氧皮质醇、11-脱氧皮质酮、别孕烯醇酮和醛固酮。在本发明第一方面的实施例中，羰基基团是羧基基团。在本发明第一方面的实施例中，羧基基团直接与式a化合物反应，或在与式a化合物反应前转化为活化的酯基团。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个羧基基团的分析物分子选自由以下项组成的组：δ8-四氢大麻酚-酸、苯甲酰芽子碱、水杨酸、2-羟基苯甲酸、加巴喷丁、普瑞巴林、丙戊酸、万古霉素、甲氨蝶呤、霉酚酸、孟鲁司特、瑞格列奈、呋喃苯胺酸、替米沙坦、吉非罗齐、双氯芬酸、布洛芬、吲哚美辛、佐美酸、伊索克酸和青霉素。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个羧基基团的分析物分子为选自由以下项组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甘氨酸。在本发明第一方面的实施例中，羰基基团是醛基团。在本发明第一方面的实施例中，可在与式a化合物的反应性单元反应之前，将醛基团转移至中间体亚胺基团中。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个醛基团的分析物分子选自由以下项组成的组：吡哆醛、n-乙酰基-d-葡萄糖胺、阿卡他定、链霉素、交沙霉素。在本发明第一方面的实施例中，羰基基团是羰基酯基团。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个酯基团的分析物分子选自由以下项组成的组：可卡因、海洛因、利他林、醋氯芬酸、乙酰胆碱、安西奈德、阿米洛酯、阿米洛卡因、氨苄哌替啶、阿雷地平、青蒿琥酯和哌替啶。在本发明第一方面的实施例中，羰基基团是酐基团。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个酐基团的分析物分子选自由以下项组成的组：斑蝥素、琥珀酸酐、偏苯三酸酐和马来酸酐。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个二烯基团，特别是共轭的二烯基团，作为官能团。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个二烯基团的分析物分子是开环甾类化合物。在实施例中，开环甾类化合物选自由以下项组成的组：胆钙化醇(维生素d3)、麦角钙化醇(维生素d2)、骨化二醇、骨化三醇、速固醇、光甾醇和他卡西醇。特别地，开环甾类化合物是维生素d，特别是维生素d2或d3或其衍生物。在特定实施例中，开环甾类化合物选自由以下项组成的组：维生素d2、维生素d3、25-羟基维生素d2、25-羟基维生素d3、3-表-25-羟基维生素d2、3-表-25-羟基维生素d3、1，25-二羟基维生素d2、1，25-二羟基维生素d3、24，25-二羟基微生物d2和24，25-二羟基维生素d3、维生素a、维甲酸、异维甲酸、阿利维甲酸、纳他霉素、西罗莫司、两性霉素b、制霉菌素、依维莫司、坦罗莫司和非达霉素。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个羟基基团作为官能团。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子包含单个羟基基团或两个羟基基团。在其中存在多于一个羟基基团的实施例中，两个羟基基团可以定位成彼此相邻(1，2二醇)或通过1、2或3个c原子分离(分别为1，3-二醇、1，4-二醇、1，5-二醇)。特别地，在第一方面的实施例中，分析物分子包含1，2二醇基团。在其中仅存在一个羟基基团的实施例中，所述分析物选自由以下项组成的组：伯醇、仲醇和叔醇。在本发明第一方面的实施例中，其中分析物分子包含一个或多个羟基基团，分析物选自由以下项组成的组：苄醇、薄荷醇、l-肉毒碱、吡哆醇、甲硝哒唑、单硝酸异山梨酯、愈创甘油醚、克拉维酸盐、米吉妥(migitol)、扎西他滨、异丙肾上腺素、阿昔洛韦、美索巴莫、曲马多、文拉法辛、阿托品、氯苯达诺、α-羟基阿普唑仑、α-羟基三唑仑、劳拉西泮、去甲羟基安定、替马西泮、乙基葡糖苷酸、乙基吗啡、吗啡、吗啡-3-葡糖苷酸、丁丙诺啡、可待因、二氢可待因、对羟基丙氧芬、o-去甲基曲马多、双氢奎尼丁和奎尼丁。在本发明第一方面的实施例中，其中分析物分子包含多于一个羟基基团，分析物选自由以下项组成的组：维生素c、葡萄糖胺、甘露醇、四氢生物蝶呤、阿糖胞苷、阿扎胞苷、利巴韦林、氟尿苷、吉西他滨、链脲佐菌素、腺苷、阿糖腺苷、克拉屈滨、雌三醇、三氟尿苷、氯法拉滨、纳多洛尔、扎那米韦、乳果糖、单磷酸腺苷、碘苷、瑞加德松(regadenoson)、林可霉素、克林霉素、卡格列净(canaglifozin)、妥布霉素、奈替米星、卡那霉素、替格瑞洛、表柔比星、多柔比星、阿贝卡星、链霉素、喹巴因(quabain)、阿米卡星、新霉素、新霉素b(framycetin)、巴龙霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、长春地辛、洋地黄毒苷、地高辛、甲泛葡胺、乙酰洋地黄毒苷、去乙酰毛花苷、氟达拉滨、氯法拉滨、吉西他滨、阿糖胞苷、卡培他滨、阿糖腺苷、三氟尿苷、碘苷和普卡霉素。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个硫醇基团(包括但不限于烷基-硫醇和硫醇-芳基基团)作为官能团。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个硫醇基团的分析物分子选自由以下项组成的组：硫代扁桃酸、dl-甲巯丙脯酸、dl-塞奥芬、n-乙酰基半胱氨酸、d-青霉胺、谷胱甘肽、l-半胱氨酸、泽芬诺普利(zefenoprilat)、硫普罗宁、二巯基丙醇和琥巯酸。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个二硫化物基团作为官能团。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个二硫化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：谷胱甘肽二硫化物、双硫氧吡啶、二硫化硒、双硫仑、硫辛酸、l-胱氨酸、呋喃硫胺、奥曲肽、去氨加压素、伐普肽、特利加压素、利那洛肽、培奈萨肽(peginesatide)。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个环氧化物基团作为官能团。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个环氧化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：卡巴西平10，11环氧化物、卡非佐米、呋喃苯胺酸环氧化物、磷霉素、司维拉姆、浅蓝菌素、东莨菪碱、噻托溴铵、甲溴东莨菪碱、依普利酮、莫匹罗星、纳他霉素、卡非佐米和醋竹桃霉素。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个酚基团作为官能团。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个酚基团的分析物分子是类固醇或类固醇样化合物。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个酚基团的分析物分子是具有sp2杂化的a环以及位于a环3位置的oh基团的类固醇或类固醇样化合物。在本发明第一方面的特定实施例中，类固醇或类固醇样分析物分子选自由以下项组成的组：雌激素、雌激素样化合物、雌酮(e1)、雌二醇(e2)、17a-雌二醇、17p-雌二醇、雌三醇(e3)、16-表雌三醇、17-表雌三醇和16，17-表雌三醇和/或其代谢物。在实施例中，代谢物选自由以下项组成的组：雌三醇、16-表雌三醇(16-epie3)、17-表雌三醇(17-epie3)、16，17-表雌三醇(16，17-epie3)、16-酮雌二醇(16-ketoe2)、16a-羟基雌酮(16a-ohe1)、2-甲氧基雌酮(2-meoe1)、4-甲氧基雌酮(4-meoe1)、2-羟基雌酮-3-甲基醚(3-meoe1)、2-甲氧基雌二醇(2-meoe2)、4-甲氧基雌二醇(4-meoe2)、2-羟基雌酮(20he1)、4-羟基雌酮(4-ohe1)、2-羟基雌二醇(2-ohe2)、雌酮(e1)、硫酸雌酮(e1s)、17a-雌二醇(e2a)、17p-雌二醇(e2b)、硫酸雌二醇(e2s)、马烯雌酮(eq)、17a-二氢马烯雌酮(eqa)、17p-二氢马烯雌酮(eqb)、马萘雌酮(eqilenin)(en)、17-二氢马萘雌酮(ena)、17β-二氢马萘雌酮(enb)、a8，9-脱氢雌酮(de1)、a8，9-脱氢雌酮硫酸酯(de1s)、δ9-四氢大麻酚、霉酚酸。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子包含胺基团作为官能团。在本发明第一方面的实施例中，胺基团是烷基-胺或芳基-胺基团。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个胺基团的分析物选自由以下项组成的组：蛋白质和肽。在本发明第一方面的实施例中，包含胺基团的分析物分子选自由以下项组成的组：3，4-亚甲二氧安非他明、3，4-亚甲二氧-n-乙基安非他明、3，4-亚甲二氧甲基安非他明、安非他明、甲基安非他明、n-甲基-1，3-苯并二氧杂环戊烯基仲丁胺、7-氨基氯硝西泮、7-氨基氟硝西泮、3，4-二甲基甲卡西酮、3-氟甲卡西酮、4-甲氧基甲卡西酮、4-甲基乙卡西酮、4-甲基甲卡西酮、安非拉酮、2-甲基氨基-1-(3′，4′-亚甲二氧基苯基)丁-1-酮(butylone)、乙卡西酮(ethcathinone)、氟芬酮(flephedrone)、甲卡西酮、亚甲基二氧基甲卡西酮(methylone)、亚甲二氧吡咯戊酮、苯甲酰爱康宁、去氢去甲氯胺酮、氯胺酮、去甲氯胺酮、美沙酮、去甲美沙酮、6-乙酰基吗啡、二乙酰基吗啡、吗啡、去甲氢可酮(norhydrocodone)、氧可酮、羟吗啡酮、苯环己哌啶、去甲丙氧芬、阿米替林、氯米帕明、度琉平、多虑平、丙咪嗪、去甲替林、三甲丙咪嗪、芬太尼、甘氨酰二甲基苯胺(glycylxylidide)、利多卡因、单乙基甘氨酰二甲基苯胺、n-乙酰基普鲁卡因酰胺、普鲁卡因酰胺、普瑞巴林、2-甲基氨基-1-(3，4-亚甲二氧苯基)丁烷、2-氨基-1-(3，4-亚甲二氧苯基)丁烷、去甲哌替啶、o-去甲基曲马多、曲马多、利多卡因、n-乙酰基普鲁卡因酰胺、普鲁卡因酰胺、加巴喷丁、拉莫三嗪、茶碱、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、万古霉素、甲氨蝶呤、加巴喷丁、西索米星和5-甲基胞嘧啶。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子是碳水化合物或具有碳水化合物部分的物质，例如糖蛋白或核苷。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子是单糖，特别是选自由以下项组成的组：核糖、脱氧核糖、阿拉伯糖、核酮糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖、果糖、n-乙酰基葡萄糖胺、n-乙酰基半乳糖胺、神经氨酸、n-乙酰基神经氨酸等。在实施例中，分析物分子是寡糖，特别是选自由以下项组成的组：二糖、三糖、四糖、多糖。在本发明第一方面的实施例中，二糖选自由以下项组成的组：蔗糖、麦芽糖和乳糖。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子是包含上述单糖、二糖、三糖、四糖、寡糖或多糖部分的物质。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子包含叠氮化物基团作为官能团，其选自由以下项组成的组：烷基叠氮化物或芳基叠氮化物。在本发明第一方面的实施例中，包含一个或多个叠氮化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：齐多夫定和叠氮西林。此类分析物分子可存在于生物样品或临床样品诸如体液(例如血液、血清、血浆、尿液、唾液、脊髓液等)、组织或细胞提取物等中。在本发明第一方面的实施例中，分析物分子存在于选自由以下项组成的组的生物样品或临床样品中：血液、血清、血浆、尿液、唾液、脊髓液和干血斑。在本发明第一方面的一些实施例中，分析物分子可存在于样品中，该样品是纯化或部分纯化的样品，例如，纯化或部分纯化的蛋白质混合物或提取物。在本发明第一方面的实施例中，反应性单元x选自由以下项组成的组：羰基反应性单元、二烯反应性单元、羟基反应性单元、氨基反应性单元、亚胺反应性单元、硫醇反应性单元、二醇反应性单元、酚反应性单元、环氧化物反应性单元、二硫化物反应性单元和叠氮基反应性单元。在本发明第一方面的实施例中，反应性单元x是羰基反应性单元，其能够与任何类型的具有羰基的分子反应。在本发明第一方面的实施例中，羰基反应性单元选自由以下项组成的组：羧基反应性单元、酮基反应性单元、醛反应性单元、酐反应性单元、羰基酯反应性单元和酰亚胺反应性单元。在本发明第一方面的实施例中，羰基反应性单元可以具有通过相邻o或n原子的α-效应强化的超亲核性n原子nh2-n/o或具有二硫醇分子。在本发明第一方面的实施例中，羰基反应性单元选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如，h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1是芳基、含有1个或多个杂原子的芳基、或c1-4烷基特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼单元，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2是芳基、含有1个或多个杂原子的芳基、或c1-4烷基特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(iii)羟氨基单元，例如，h2n-o-单元，以及(iv)二硫醇单元，特别是1，2-二硫醇或1，3-二硫醇单元。在本发明第一方面的实施例中，其中羰基反应性单元是羧基反应性单元，羧基反应性单元与分析物分子上的羧基基团反应。在本发明第一方面的实施例中，羧基反应性单元选自由以下项组成的组：重氮基单元、烷基卤、胺和肼单元。在本发明第一方面的实施例中，反应性单元x是二烯反应性单元，其能够与包含二烯基团的分析物反应。在本发明第一方面的实施例中，二烯反应性单元选自由以下项组成的组：cookson型试剂，例如，1，2，4-三唑啉-3，5-二酮，其能够作为亲二烯体发挥作用。在本发明第一方面的实施例中，反应性单元x是羟基反应性单元，其能够与包含羟基基团的分析物反应。在本发明第一方面的实施例中，羟基反应性单元选自由以下项组成的组：磺酰氯、活化的羧酸酯(nhs，或咪唑阴离子)和能够进行氟的亲核取代的含氟芳烃/杂芳烃(t.higashijsteroidbiochemmolbiol.2016sep；162：57-69)。在本发明第一方面的实施例中，反应性单元x是二醇反应性单元，其与分析物分子上的二醇基团反应。在本发明第一方面的实施例中，其中反应性单元是1，2二醇反应性单元，1，2二醇反应性单元包含硼酸。在其他实施例中，二醇可被氧化成相应的酮或醛，并随后与酮/醛反应性单元x反应。在本发明第一方面的实施例中，氨基反应性单元与分析物分子上的氨基基团反应。在本发明第一方面的实施例中，氨基反应性单元选自由以下项组成的组：活性酯基团诸如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、五氟苯基酯、羰基咪唑酯、方酸(quadraticacid)酯、羟基苯并三唑(hobt)酯、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯和磺酰氯单元。在本发明第一方面的实施例中，硫醇反应性单元与分析物分子上的硫醇基团反应。在本发明第一方面的实施例中，硫醇反应性单元选自由卤代乙酰基基团组成的组，特别是选自由以下项组成的组：br/i-ch2-c(＝o)-单元、丙烯酰胺/丙烯酸酯单元、不饱和酰亚胺单元诸如马来酰亚胺、甲磺酰基苯基噁二唑和磺酰氯单元。在本发明第一方面的实施例中，酚反应性单元与分析物分子上的酚基团反应。在本发明第一方面的实施例中，酚反应性单元选自由以下项组成的组：活性酯单元诸如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、五氟苯基酯、羰基咪唑酯、方酸(quadraticacid)酯、羟基苯并三唑(hobt)酯、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯和磺酰氯单元。分析物分子上存在的酚基团可经由反应(h.ban等人j.am.chem.soc.，2010，132(5)，第1523-1525页)与三唑二酮反应，或可替换地通过重氮化或者通过邻位硝基化，之后还原为胺，然后该胺与胺反应性试剂反应。在本发明第一方面的实施例中，反应性单元x是环氧化物反应性单元，其能够与包含环氧化物基团的分析物反应。在本发明第一方面的实施例中，环氧化物反应性单元选自由以下项组成的组：氨基、硫醇、通过相邻o或n原子的α-效应强化的超亲核性n原子nh2-n/o分子。在本发明第一方面的实施例中，环氧化物反应性单元选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如，h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1是芳基、含有1个或多个杂原子的芳基、或c1-4烷基特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼单元，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2是芳基、含有1个或多个杂原子的芳基、或c1-4烷基特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，以及(iii)羟氨基单元，例如，h2n-o-单元。在本发明第一方面的实施例中，反应性单元x是二硫化物反应性单元，其能够与包含二硫化物基团的分析物反应。在本发明第一方面的实施例中，二硫化物反应性单元选自由硫醇组成的组。在其他实施例中，二硫化物基团可被还原成相应的硫醇基团，然后与硫醇反应性单元x反应。在本发明第一方面的实施例中，反应性单元x是叠氮基反应性单元，其与分析物分子上的叠氮基基团反应。在本发明第一方面的实施例中，叠氮基反应性单元通过叠氮化物-炔环加成而与叠氮基基团反应。在本发明第一方面的实施例中，叠氮基反应性单元选自由以下项组成的组：炔(烷基或芳基)、线性炔或环状炔。叠氮基与炔之间的反应可在使用或不使用催化剂的情况下进行。在本发明第一方面的其他实施例中，叠氮基基团可被还原成相应的氨基基团，然后与氨基反应性单元x反应。式a化合物包含中性丢失单元y。中性丢失单元y能够失去不具有电荷的部分(中性实体)。中性丢失单元y能够裂解，即，在ms的条件下，例如当进行碰撞诱导解离(cid)时，例如在三重四极杆ms中，从而释放中性实体。丢失的中性实体是单个原子或多个原子。在释放中性实体之后，中性丢失单元y的剩余部分仍保持中性。通常但不一定，释放一个中性实体。在本发明第一方面的特定实施例中，释放了两个中性实体。在本发明第一方面的实施例中，中性丢失单元y在离子化时释放至少一个中性实体。中性实体是低分子量中性实体，特别是在具有10-200da，特别是在具有40-160da，特别是在具有80-160da的分子量的范围内。特别是，所述中性实体的分子量为200da或更少，特别是180da或更少，特别是160da或更少，特别是140da或更少，特别是120da或更少，特别是100da或更少，特别是90da或更少，特别是70da或更少，特别是50da或更少。在本发明第一方面的实施例中，所述中性实体在n2、no、no2、s2、so、so2、co、co2、三唑、苯基三唑、四唑或苯基四唑组成的组中筛选。在特定的情况下，所述中性实体是四唑或苯基三唑。在本发明第一方面的实施例中，中性实体的丢失导致质荷比(m/z)降低-28da(在丢失n2或co的情况下)、-30da(在丢失no的情况下)、-44da(在丢失co2的情况下)、-46da(在丢失no2的情况下)、-48da(在丢失so的情况下)、-64da(在丢失s2或so2的情况下)、-69da(在丢失三唑的情况下)、-84da(在丢失四唑的情况下)、-96da(在丢失二甲基四唑的情况下)或-157da(在丢失苯基三唑的情况下)。在本发明第一方面的实施例中，释放了一个中性实体。在本发明第一方面的实施例中，释放了两个中性实体。特别地，所释放的第二中性实体不同于所释放的第一中性实体。第二中性实体的释放与第一中性实体的释放同时发生或在后者之后发生。特别地，第二中性实体的释放与第一中性实体的释放同时发生，即，两个中性实体一次性释放，即在一次单个裂解事件中释放。在本发明第一方面的实施例中，中性丢失单元y包含能够裂解的环状部分或由其组成。在本发明第一方面的实施例中，中性丢失单元y包含4元、5元或6元杂环部分，特别是具有至少2个杂原子的4元、5元、6元杂环，或由其组成。在本发明第一方面的实施例中，中性丢失单元y包含咪唑、三唑、四唑、四嗪、噁二唑、噻二唑部分或其氢化衍生物，或由其组成。在本发明第一方面的实施例中，中性丢失单元y包含1，2，3-三唑、1，2，4-三唑部分、1，4，5-三唑、3，4，5-三唑部分、1，2，3，4-四唑、2，3，4，5-四唑或2，3，5，6四唑部分、或1，2，4，5四嗪部分，或由其组成。在本发明第一方面的实施例中，中性丢失单元y包含1，2，3-三唑或1，2，4-三唑部分、或1，2，3，4-四唑部分、或1，2，4，5四嗪部分，或由其组成。在本发明第一方面的实施例中，带电单元z是永久带电的，特别在中性条件下，特别在6-8的ph值下。在本发明第一方面的实施例中，带电单元z是带正电或带负电的，优选是带正电的。在本发明第一方面的实施例中，带电单元z包含以下项或由其组成(i)至少一个带正电的部分。或(ii)至少一个带负电的部分。在本发明第一方面的实施例中，带电单元z是带正电的单元。在本发明第一方面的实施例中，带正电的单元z是以导致式a化合物的pka为10或更高，更特别地是以导致pka为12或更高的方式选择的。在本发明第一方面的实施例中，带正电的单元z选自由以下项组成的组：伯铵、仲铵、叔铵、季铵、伯锍、仲锍、叔锍、季锍、伯咪唑鎓、仲咪唑鎓、叔咪唑鎓、季咪唑鎓、伯吡啶鎓、仲吡啶鎓、叔吡啶鎓、季吡啶鎓、或伯鏻、仲鏻、叔鏻、季鏻。在第一方面的特定实施例中，带正电的部分是三甲基铵、n，n-二甲基哌啶鎓或n-烷基-奎宁环鎓。在本发明第一方面的实施例中，带电单元z是带负电的单元。在本发明第一方面的实施例中，带负电的单元z是以导致式a化合物的pkb为10或更高，更特别地是以导致pkb为12或更高的方式选择的。在本发明第一方面的实施例中，带负电的单元z选自由以下项组成的组：磷酸盐、硫酸盐、磺酸盐或羧基盐。在本发明第一方面的实施例中，连接基l1和l2彼此独立地为线性连接基。在第一方面的实施例中，线性连接基l1和l2彼此独立地为式a化合物的两个功能性单元之间的单键，或包含1个至10个c原子，特别是1个至6个c原子，特别是1个、2个或3个c原子。在第一方面的实施例中，线性连接基l1和l2彼此独立地包含1个或多个杂原子，特别是n、o或s。在本发明第一方面的实施例中，连接基l1和l2彼此独立地被取代或未被取代，特别地，连接基l1和l2是未被取代的。在本发明第一方面的实施例中，连接基l1和/或l2不是可质子化的。在本发明第一方面的实施例中，线性连接基l1和/或l2包含稳定化单元。在本发明第一方面的实施例中，稳定化单元防止带电单元z在裂解事件期间丢失。在本发明第一方面的实施例中，稳定化单元通过使潜在形成的碳阳离子不稳定而防止带电单元z丢失。在本发明第一方面的实施例中，稳定化单元通过一个c原子与带电单元z分离。在本发明第一方面的实施例中，稳定化单元包含至少一个杂原子。在本发明第一方面的实施例中，稳定化单元选自由以下项组成的组：co，或其等电位类似物诸如so或so2。在第一方面的实施例中，所述线性连接基l2是一个连接所述带正电荷单元z和所述中性丢失单元y的单键，所述连接基l1包括1-10个c原子，特别是1-7个c原子，尤其是1个、2个或3个c原子，任选地包括一个或两个杂原子，特别是1个o原子，连接所述式a化合物的反应性单元x和带正电荷的单元z。在第一方面的实施例中，所述线性连接基l2包括1-10个c原子，特别是1-6个c原子，特别是1个、2个或3个c原子，其连接所述带正电荷单元z和所述中性丢失单元y，任选地包括一个或两个杂原子，特别是1个o原子或1个n原子和1个s原子；所述连接基l1包括1-10个c原子，特别是1-7个c原子，尤其是1个、2个或3个c原子，任选地包括一个或两个杂原子，特别是1个o原子，连接所述式a化合物的反应性单元x和带正电荷的单元z。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是羰基反应性单元，中性丢失单元y是5元杂环单元，并且带电单元z是永久带正电的单元。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是二烯反应性单元，中性丢失单元y是5元杂环单元，并且带电单元z是永久带正电的单元。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是肼单元，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z是叔铵基团。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是酰肼单元，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是叔铵基团。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是肼单元，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z是哌啶单元。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是酰肼单元，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是哌啶单元。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是肼单元，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z是吡啶单元。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是酰肼单元，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是吡啶单元。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是cookson型试剂，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是叔铵基团。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是cookson型试剂，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是哌啶单元。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是cookson型试剂，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是吡啶单元。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是叔铵单元。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是哌啶单元。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是吡啶单元。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-o-c-，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是二甲基哌啶或奎宁环单元。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是1，2，4-三唑啉-3，5-二酮，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是二甲基哌啶或奎宁环部分。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2，3-三唑或1，2，4-三唑，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2咪唑或吡唑，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是嘧啶，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2，3，4-四唑，并且带电单元z是咪唑鎓部分。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是苯并三唑，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第一方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2噁唑或1，3噁唑，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第一方面的实施例中，式a化合物选自由以下项组成的组：(i)标记1(ii)标记2式a化合物的其他实例如下：(iii)标记3(iv)标记4(v)标记5(vi)标记6(vii)标记7(viii)标记8(ix)标记9(x)标记10(xi)标记11(xii)标记12(xiii)标记13(xiv)标记14(xvi)标记15(xvii)标记16(xviii)标记17(xix)标记18在第二方面，本发明涉及包含如上文关于本发明第一方面详细公开的式a化合物的组合物。在第三方面，本发明涉及包含如上文中关于本发明第一方面详细公开的式a化合物或如上文中详细公开的本发明第二方面的组合物的试剂盒。在第四方面，本发明涉及一种加合物，该加合物包括彼此共价连接的分析物分子和如上文所公开的本发明第一方面的化合物。在实施例中，加合物具有式a′所示的结构：t-x‘-l1-z-l2-y其中t是分析物分子x′是式a化合物的反应性单元x与分析物分子t的反应所导致的部分，l1和l2彼此独立地为被取代或未被取代的连接基，特别是线性连接基y是中性丢失单元，z是带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是一个永久带电部分，包括所述化合物的任何盐。在本发明第四方面的实施例中，式a′的加合物包含在式a化合物的反应性单元x与分析物分子t中存在的官能团之间形成共价键所导致的x′。依据式a化合物的反应性单元x和分析物分子t的官能团，技术人员完全能够确定两者之间形成的共价键。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子包含选自由以下项组成的组的官能团：羰基基团、二烯基团、羟基基团、胺基团、亚胺基团、硫醇基团、二醇基团、酚基团、环氧化物基团、二硫化物基团和叠氮化物基团，这些基团中的每个能够与式a化合物的反应性单元x形成共价键。此外，在本发明的范畴内也预期，分析物分子上存在的官能团将会首先转化为更容易与式a化合物的反应性单元x反应的另一基团。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子选自由以下项组成的组：类固醇、酮类固醇、开环甾类化合物、氨基酸、肽、蛋白质、碳水化合物、脂肪酸、脂质、核苷、核苷酸、核酸和其他生物分子(包括小分子代谢物和辅因子)以及治疗性药物、滥用的药物、毒素或其代谢物。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子包含羰基基团作为官能团，该羰基基团选自由以下项组成的组：羧酸基团、醛基团、酮基团、掩蔽的醛、掩蔽的酮基团、酯基团、酰胺基团和酐基团。在本发明第四方面的实施例中，其中羰基基团是酰胺基团，技术人员清楚地知道，这样的酰胺基团是稳定的基团，但可将其水解以将酰胺基团转化为羧酸基团和氨基基团。酰胺基团的水解可经由酸/碱催化的反应或酶促过程实现，以上两者中的任何一种均是技术人员众所周知的。在本发明第四方面的实施例中，其中羰基基团是掩蔽的醛基团或掩蔽的酮基团，各自的基团是半缩醛基团或缩醛基团，特别是环状半缩醛基团或缩醛基团。在本发明第四方面的实施例中，在与式a化合物反应之前，缩醛基团转化为醛或酮基团。在本发明第四方面的实施例中，羰基基团是酮基团。在本发明第四方面的实施例中，可在与式a化合物的反应性单元反应之前，将酮基团转移至中间体亚胺基团中。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个酮基团的分析物分子是酮类固醇。在本发明第四方面的特定实施例中，酮类固醇选自由以下项组成的组：睾酮、表睾酮、二氢睾酮(dht)、去氧甲基睾酮(dmt)、四氢孕三烯酮(thg)、醛固酮、雌酮、4-羟基雌酮、2-甲氧基雌酮、2-羟基雌酮、16-酮雌二醇、16α-羟基雌酮、2-羟基雌酮-3-甲基醚、泼尼松、泼尼松龙、孕烯醇酮、孕酮、dhea(脱氢表雄酮)、17-oh孕烯醇酮、17-oh孕酮、17-oh孕酮、雄酮、表雄酮和δ4雄烯二酮)11-去氧皮质醇皮质甾酮、21-脱氧皮质醇、11-脱氧皮质酮、别孕烯醇酮和醛固酮。在本发明第四方面的实施例中，羰基基团是羧基基团。在本发明第四方面的实施例中，羧基基团直接与式a化合物反应，或在与式a化合物反应前转化为活化的酯基团。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个羧基基团的分析物分子选自由以下项组成的组：δ8-四氢大麻酚-酸、苯甲酰芽子碱、水杨酸、2-羟基苯甲酸、加巴喷丁、普瑞巴林、丙戊酸、万古霉素、甲氨蝶呤、霉酚酸、孟鲁司特、瑞格列奈、呋喃苯胺酸、替米沙坦、吉非罗齐、双氯芬酸、布洛芬、吲哚美辛、佐美酸、伊索克酸和青霉素。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个羧基基团的分析物分子为选自由以下项组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甘氨酸。在本发明第四方面的实施例中，羰基基团是醛基团。在本发明第四方面的实施例中，可在与式a化合物的反应性单元反应之前，将醛基团转移至中间体亚胺基团中。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个醛基团的分析物分子选自由以下项组成的组：吡哆醛、n-乙酰基-d-葡萄糖胺、阿卡他定、链霉素、交沙霉素。在本发明第四方面的实施例中，羰基基团是羰基酯基团。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个酯基团的分析物分子选自由以下项组成的组：可卡因、海洛因、利他林、醋氯芬酸、乙酰胆碱、安西奈德、阿米洛酯、阿米洛卡因、氨苄哌替啶、阿雷地平、青蒿琥酯和哌替啶。在本发明第四方面的实施例中，羰基基团是酐基团。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个酐基团的分析物分子选自由以下项组成的组：斑蝥素、琥珀酸酐、偏苯三酸酐和马来酸酐。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个二烯基团，特别是共轭的二烯基团，作为官能团。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个二烯基团的分析物分子是开环甾类化合物。在实施例中，开环甾类化合物选自由以下项组成的组：胆钙化醇(维生素d3)、麦角钙化醇(维生素d2)、骨化二醇、骨化三醇、速固醇、光甾醇和他卡西醇。特别地，开环甾类化合物是维生素d，特别是维生素d2或d3或其衍生物。在特定实施例中，开环甾类化合物选自由以下项组成的组：维生素d2、维生素d3、25-羟基维生素d2、25-羟基维生素d3、3-表-25-羟基维生素d2、3-表-25-羟基维生素d3、1，25-二羟基维生素d2、1，25-二羟基维生素d3、24，25-二羟基微生物d2和24，25-二羟基维生素d3、维生素a、维甲酸、异维甲酸、阿利维甲酸、纳他霉素、西罗莫司、两性霉素b、制霉菌素、依维莫司、坦罗莫司和非达霉素。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个羟基基团作为官能团。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子包含单个羟基基团或两个羟基基团。在其中存在多于一个羟基基团的实施例中，两个羟基基团可以定位成彼此相邻(1，2二醇)或通过1、2或3个c原子分离(分别为1，3-二醇、1，4-二醇、1，5-二醇)。在第四方面的特定实施例中，分析物分子包含1，2二醇基团。在其中仅存在一个羟基基团的实施例中，所述分析物选自由以下项组成的组：伯醇、仲醇和叔醇。在本发明第四方面的实施例中，其中分析物分子包含一个或多个羟基基团，分析物选自由以下项组成的组：苄醇、薄荷醇、l-肉毒碱、吡哆醇、甲硝哒唑、单硝酸异山梨酯、愈创甘油醚、克拉维酸盐、米吉妥(migitol)、扎西他滨、异丙肾上腺素、阿昔洛韦、美索巴莫、曲马多、文拉法辛、阿托品、氯苯达诺、α-羟基阿普唑仑、α-羟基三唑仑、劳拉西泮、去甲羟基安定、替马西泮、乙基葡糖苷酸、乙基吗啡、吗啡、吗啡-3-葡糖苷酸、丁丙诺啡、可待因、二氢可待因、对羟基丙氧芬、o-去甲基曲马多、双氢奎尼丁和奎尼丁。在本发明第四方面的实施例中，其中分析物分子包含多于一个羟基基团，分析物选自由以下项组成的组：维生素c、葡萄糖胺、甘露醇、四氢生物蝶呤、阿糖胞苷、阿扎胞苷、利巴韦林、氟尿苷、吉西他滨、链脲佐菌素、腺苷、阿糖腺苷、克拉屈滨、雌三醇、三氟尿苷、氯法拉滨、纳多洛尔、扎那米韦、乳果糖、单磷酸腺苷、碘苷、瑞加德松(regadenoson)、林可霉素、克林霉素、卡格列净(canaglifozin)、妥布霉素、奈替米星、卡那霉素、替格瑞洛、表柔比星、多柔比星、阿贝卡星、链霉素、喹巴因(quabain)、阿米卡星、新霉素、新霉素b(framycetin)、巴龙霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、长春地辛、洋地黄毒苷、地高辛、甲泛葡胺、乙酰洋地黄毒苷、去乙酰毛花苷、氟达拉滨、氯法拉滨、吉西他滨、阿糖胞苷、卡培他滨、阿糖腺苷、三氟尿苷、碘苷和普卡霉素。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个硫醇基团(包括但不限于烷基-硫醇和硫醇-芳基基团)作为官能团。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个硫醇基团的分析物分子选自由以下项组成的组：硫代扁桃酸、dl-甲巯丙脯酸、dl-塞奥芬、n-乙酰基半胱氨酸、d-青霉胺、谷胱甘肽、l-半胱氨酸、泽芬诺普利(zefenoprilat)、硫普罗宁、二巯基丙醇和琥巯酸。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个二硫化物基团作为官能团。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个二硫化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：谷胱甘肽二硫化物、双硫氧吡啶、二硫化硒、双硫仑、硫辛酸、l-胱氨酸、呋喃硫胺、奥曲肽、去氨加压素、伐普肽、特利加压素、利那洛肽、培奈萨肽(peginesatide)。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个环氧化物基团作为官能团。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个环氧化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：卡巴西平10，11环氧化物、卡非佐米、呋喃苯胺酸环氧化物、磷霉素、司维拉姆、浅蓝菌素、东莨菪碱、噻托溴铵、甲溴东莨菪碱、依普利酮、莫匹罗星、纳他霉素、卡非佐米和醋竹桃霉素。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个酚基团作为官能团。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个酚基团的分析物分子是类固醇或类固醇样化合物。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个酚基团的分析物分子是具有sp2杂化的a环以及位于a环3位置的oh基团的类固醇或类固醇样化合物。在本发明第四方面的特定实施例中，类固醇或类固醇样分析物分子选自由以下项组成的组：雌激素、雌激素样化合物、雌酮(e1)、雌二醇(e2)、17a-雌二醇、17p-雌二醇、雌三醇(e3)、16-表雌三醇、17-表雌三醇和16，17-表雌三醇和/或其代谢物。在实施例中，代谢物选自由以下项组成的组：雌三醇、16-表雌三醇(16-epie3)、17-表雌三醇(17-epie3)、16，17-表雌三醇(16，17-epie3)、16-酮雌二醇(16-ketoe2)、16a-羟基雌酮(16a-ohe1)、2-甲氧基雌酮(2-meoe1)、4-甲氧基雌酮(4-meoe1)、2-羟基雌酮-3-甲基醚(3-meoe1)、2-甲氧基雌二醇(2-meoe2)、4-甲氧基雌二醇(4-meoe2)、2-羟基雌酮(20he1)、4-羟基雌酮(4-ohe1)、2-羟基雌二醇(2-ohe2)、雌酮(e1)、硫酸雌酮(e1s)、17a-雌二醇(e2a)、17p-雌二醇(e2b)、硫酸雌二醇(e2s)、马烯雌酮(eq)、17a-二氢马烯雌酮(eqa)、17p-二氢马烯雌酮(eqb)、马萘雌酮(eqilenin)(en)、17-二氢马萘雌酮(ena)、17β-二氢马萘雌酮(enb)、a8，9-脱氢雌酮(de1)、a8，9-脱氢雌酮硫酸酯(de1s)、δ9-四氢大麻酚、霉酚酸。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子包含胺基团作为官能团。在本发明第四方面的实施例中，胺基团是烷基-胺或芳基-胺基团。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个胺基团的分析物选自由以下项组成的组：蛋白质和肽。在本发明第四方面的实施例中，包含胺基团的分析物分子选自由以下项组成的组：3，4-亚甲二氧安非他明、3，4-亚甲二氧-n-乙基安非他明、3，4-亚甲二氧甲基安非他明、安非他明、甲基安非他明、n-甲基-1，3-苯并二氧杂环戊烯基仲丁胺、7-氨基氯硝西泮、7-氨基氟硝西泮、3，4-二甲基甲卡西酮、3-氟甲卡西酮、4-甲氧基甲卡西酮、4-甲基乙卡西酮、4-甲基甲卡西酮、安非拉酮、2-甲基氨基-1-(3′，4′-亚甲二氧基苯基)丁-1-酮(butylone)、乙卡西酮(ethcathinone)、氟芬酮(flephedrone)、甲卡西酮、亚甲基二氧基甲卡西酮(methylone)、亚甲二氧吡咯戊酮、苯甲酰爱康宁、去氢去甲氯胺酮、氯胺酮、去甲氯胺酮、美沙酮、去甲美沙酮、6-乙酰基吗啡、二乙酰基吗啡、吗啡、去甲氢可酮(norhydrocodone)、氧可酮、羟吗啡酮、苯环己哌啶、去甲丙氧芬、阿米替林、氯米帕明、度琉平、多虑平、丙咪嗪、去甲替林、三甲丙咪嗪、芬太尼、甘氨酰二甲基苯胺(glycylxylidide)、利多卡因、单乙基甘氨酰二甲基苯胺、n-乙酰基普鲁卡因酰胺、普鲁卡因酰胺、普瑞巴林、2-甲基氨基-1-(3，4-亚甲二氧苯基)丁烷、2-氨基-1-(3，4-亚甲二氧苯基)丁烷、去甲哌替啶、o-去甲基曲马多、曲马多、利多卡因、n-乙酰基普鲁卡因酰胺、普鲁卡因酰胺、加巴喷丁、拉莫三嗪、茶碱、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、万古霉素、甲氨蝶呤、加巴喷丁、西索米星和5-甲基胞嘧啶。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子是碳水化合物或具有碳水化合物部分的物质，例如糖蛋白或核苷。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子是单糖，特别是选自由以下项组成的组：核糖、脱氧核糖、阿拉伯糖、核酮糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖、果糖、n-乙酰基葡萄糖胺、n-乙酰基半乳糖胺、神经氨酸、n-乙酰基神经氨酸等。在实施例中，分析物分子是寡糖，特别是选自由以下项组成的组：二糖、三糖、四糖、多糖。在本发明第四方面的实施例中，二糖选自由以下项组成的组：蔗糖、麦芽糖和乳糖。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子是包含上述单糖、二糖、三糖、四糖、寡糖或多糖部分的物质。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子包含叠氮化物基团作为官能团，其选自由以下项组成的组：烷基叠氮化物或芳基叠氮化物。在本发明第四方面的实施例中，包含一个或多个叠氮化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：齐多夫定和叠氮西林。此类分析物分子可存在于生物样品或临床样品诸如体液(例如血液、血清、血浆、尿液、唾液、脊髓液等)、组织或细胞提取物等中。在本发明第四方面的实施例中，分析物分子存在于选自由以下项组成的组的生物样品或临床样品中：血液、血清、血浆、尿液、唾液、脊髓液和干血斑。在本发明第四方面的一些实施例中，分析物分子可存在于样品中，该样品是纯化或部分纯化的样品，例如，纯化或部分纯化的蛋白质混合物或提取物。在本发明第四方面的实施例中，反应性单元x选自由以下项组成的组：羰基反应性单元、二烯反应性单元、羟基反应性单元、氨基反应性单元、亚胺反应性单元、硫醇反应性单元、二醇反应性单元、酚反应性单元、环氧化物反应性单元、二硫化物反应性单元和叠氮基反应性单元。在本发明第四方面的实施例中，反应性单元x是羰基反应性单元，其能够与任何类型的具有羰基的分子反应。在本发明第四方面的实施例中，羰基反应性单元选自由以下项组成的组：羧基反应性单元、酮基反应性单元、醛反应性单元、酐反应性单元、羰基酯反应性单元和酰亚胺反应性单元。在本发明第四方面的实施例中，羰基反应性单元可以具有通过相邻o或n原子的α-效应强化的超亲核性n原子nh2-n/o或具有二硫醇分子。在本发明第四方面的实施例中，羰基反应性单元选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如，h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1是芳基、含有1个或多个杂原子的芳基、或c1-4烷基特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼单元，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2是芳基、含有1个或多个杂原子的芳基、或c1-4烷基特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(iii)羟氨基单元，例如，h2n-o-单元，以及(iv)二硫醇单元，特别是1，2-二硫醇或1，3-二硫醇单元。在本发明第四方面的实施例中，其中羰基反应性单元是羧基反应性单元，羧基反应性单元与分析物分子上的羧基基团反应。在本发明第四方面的实施例中，羧基反应性单元选自由以下项组成的组：重氮基单元、烷基卤、胺和肼单元。在本发明第四方面的实施例中，反应性单元x是二烯反应性单元，其能够与包含二烯基团的分析物反应。在本发明第四方面的实施例中，二烯反应性单元选自由以下项组成的组：cookson型试剂，例如，1，2，4-三唑啉-3，5-二酮，其能够作为亲二烯体发挥作用。在本发明第四方面的实施例中，反应性单元x是羟基反应性单元，其能够与包含羟基基团的分析物反应。在本发明第四方面的实施例中，羟基反应性单元选自由以下项组成的组：磺酰氯、活化的羧酸酯(nhs，或咪唑阴离子)和能够进行氟的亲核取代的含氟芳烃/杂芳烃(t.higashijsteroidbiochemmolbiol.2016sep；162：57-69)。在本发明第四方面的实施例中，反应性单元x是二醇反应性单元，其与分析物分子上的二醇基团反应。在本发明第四方面的实施例中，其中反应性单元是1，2二醇反应性单元，1，2二醇反应性单元包含硼酸。在其他实施例中，二醇可被氧化成相应的酮或醛，并随后与酮/醛反应性单元x反应。在本发明第四方面的实施例中，氨基反应性单元与分析物分子上的氨基基团反应。在本发明第四方面的实施例中，氨基反应性单元选自由以下项组成的组：活性酯基团诸如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、五氟苯基酯、羰基咪唑酯、方酸(quadraticacid)酯、羟基苯并三唑(hobt)酯、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯和磺酰氯单元。在本发明第四方面的实施例中，硫醇反应性单元与分析物分子上的硫醇基团反应。在本发明第四方面的实施例中，硫醇反应性单元选自由卤代乙酰基基团组成的组，特别是选自由以下项组成的组：br/i-ch2-c(＝o)-单元、丙烯酰胺/丙烯酸酯单元、不饱和酰亚胺单元诸如马来酰亚胺、甲磺酰基苯基噁二唑和磺酰氯单元。在本发明第四方面的实施例中，酚反应性单元与分析物分子上的酚基团反应。在本发明第四方面的实施例中，酚反应性单元选自由以下项组成的组：活性酯单元诸如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、五氟苯基酯、羰基咪唑酯、方酸(quadraticacid)酯、羟基苯并三唑(hobt)酯、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯和磺酰氯单元。分析物分子上存在的酚基团可经由反应(h.ban等人j.am.chem.soc.，2010，132(5)，第1523-1525页)与三唑二酮反应，或可替换地通过重氮化或者通过邻位硝基化，之后还原为胺，然后该胺与胺反应性试剂反应。在本发明第四方面的实施例中，反应性单元x是环氧化物反应性单元，其能够与包含环氧化物基团的分析物反应。在本发明第四方面的实施例中，环氧化物反应性单元选自由以下项组成的组：氨基、硫醇、通过相邻o或n原子的α-效应强化的超亲核性n原子nh2-n/o分子。在本发明第四方面的实施例中，环氧化物反应性单元选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如，h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1是芳基、含有1个或多个杂原子的芳基、或c1-4烷基特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼单元，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2是芳基、含有1个或多个杂原子的芳基、或c1-4烷基特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，以及(iii)羟氨基单元，例如，h2n-o-单元。在本发明第四方面的实施例中，反应性单元x是二硫化物反应性单元，其能够与包含二硫化物基团的分析物反应。在本发明第四方面的实施例中，二硫化物反应性单元选自由硫醇组成的组。在其他实施例中，二硫化物基团可被还原成相应的硫醇基团，然后与硫醇反应性单元x反应。在本发明第四方面的实施例中，反应性单元x是叠氮基反应性单元，其与分析物分子上的叠氮基基团反应。在本发明第四方面的实施例中，叠氮基反应性单元通过叠氮化物-炔环加成而与叠氮基基团反应。在本发明第四方面的实施例中，叠氮基反应性单元选自由以下项组成的组：炔(烷基或芳基)、线性炔或环状炔。叠氮基与炔之间的反应可在使用或不使用催化剂的情况下进行。在本发明第四方面的其他实施例中，叠氮基基团可被还原成相应的氨基基团，然后与氨基反应性单元x反应。式a化合物包含中性丢失单元y。中性丢失单元y能够失去不具有电荷的部分(中性实体)。中性丢失单元y能够裂解，即，在ms的条件下，例如当进行碰撞诱导解离(cid)时，例如在三重四极杆ms中，从而释放中性实体。丢失的中性实体是单个原子或多个原子。在释放中性实体之后，中性丢失单元y的剩余部分仍保持中性。通常但不一定，释放一个中性实体。在本发明第四方面的特定实施例中，释放了两个中性实体。在本发明第四方面的实施例中，中性丢失单元y在离子化时释放至少一个中性实体。中性实体是低分子量中性实体，特别是在具有10-200da，特别是在具有40-160da，特别是在具有80-160da的分子量的范围内。特别是，所述中性实体的分子量为200da或更少，特别是180da或更少，特别是160da或更少，特别是140da或更少，特别是120da或更少，特别是100da或更少，特别是90da或更少，特别是70da或更少，特别是50da或更少。在本发明第四方面的实施例中，中性实体选自由以下项组成的组：n2、no、no2、s2、so、so2、co、co2、三唑、苯基三唑、四唑或苯基四唑。在特定的情况下，所述中性实体是四唑或苯基三唑。在本发明第四方面的实施例中，中性实体的丢失导致质荷比(m/z)降低-28da(在丢失n2或co的情况下)、-30da(在丢失no的情况下)、-44da(在丢失co2的情况下)、-46da(在丢失no2的情况下)、-48da(在丢失so的情况下)、-64da(在丢失s2或so2的情况下)、-69da(在丢失三唑的情况下)、-84da(在丢失四唑的情况下)、-96da(在丢失二甲基四唑的情况下)或-157da(在丢失苯基三唑的情况下)。在本发明第四方面的实施例中，释放了一个中性实体。在本发明第四方面的实施例中，释放了两个中性实体。特别地，所释放的第二中性实体不同于所释放的第一中性实体。第二中性实体的释放与第一中性实体的释放同时发生或在后者之后发生。特别地，第二中性实体的释放与第一中性实体的释放同时发生，即，两个中性实体一次性释放，即在一次单个裂解事件中释放。在本发明第四方面的实施例中，中性丢失单元y包含能够裂解的环状部分或由其组成。在本发明第四方面的实施例中，中性丢失单元y包含4元、5元或6元杂环部分，特别是具有至少2个杂原子的4元、5元、6元杂环，或由其组成。在本发明第四方面的实施例中，中性丢失单元y包含咪唑、三唑、四唑、四嗪、噁二唑、噻二唑部分或其氢化衍生物，或由其组成。在本发明第四方面的实施例中，中性丢失单元y包含1，2，3-三唑、1，2，4-三唑部分、1，4，5-三唑、3，4，5-三唑部分、1，2，3，4-四唑、2，3，4，5-四唑或2，3，5，6四唑部分、或1，2，4，5四嗪部分，或由其组成。在本发明第四方面的实施例中，中性丢失单元y包含1，2，3-三唑或1，2，4-三唑部分、或1，2，3，4-四唑部分、或1，2，4，5四嗪部分，或由其组成。在本发明第四方面的实施例中，带电单元z是永久带电的，特别在中性条件下，特别在6-8的ph值下。在本发明第四方面的实施例中，带电单元z是带正电或带负电的，优选是带正电的。在本发明第四方面的实施例中，带电单元z包含以下项或由其组成(i)至少一个带正电的部分。或(ii)至少一个带负电的部分。在本发明第四方面的实施例中，带电单元z是带正电的单元。在本发明第四方面的实施例中，带正电的单元z是以导致式a化合物的pka为10或更高，更特别地是以导致pka为12或更高的方式选择的。在本发明第四方面的实施例中，带正电的单元z选自由以下项组成的组：伯铵、仲铵、叔铵、季铵、伯锍、仲锍、叔锍、季锍、伯咪唑鎓、仲咪唑鎓、叔咪唑鎓、季咪唑鎓、伯吡啶鎓、仲吡啶鎓、叔吡啶鎓、季吡啶鎓、或伯鏻、仲鏻、叔鏻、季鏻。在第四方面的特定实施例中，带正电的部分是三甲基铵、n，n-二甲基哌啶鎓或n-烷基-奎宁环鎓。在本发明第四方面的实施例中，带电单元z是带负电的单元。在本发明第四方面的实施例中，带负电的单元z是以导致式a化合物的pkb为10或更高，更特别地是以导致pkb为12或更高的方式选择的。在本发明第四方面的实施例中，带负电的单元z选自由以下项组成的组：磷酸盐、硫酸盐、磺酸盐或羧基盐。在本发明第四方面的实施例中，连接基l1和l2彼此独立地为线性连接基。在第四方面的实施例中，线性连接基l1和l2彼此独立地为式a化合物的两个功能性单元之间的单键，或包含1个至10个c原子，特别是1个至6个c原子，特别是1个、2个或3个c原子。在第四方面的实施例中，线性连接基l1和l2彼此独立地包含1个或多个杂原子，特别是n、o或s。在本发明第四方面的实施例中，连接基l1和l2彼此独立地被取代或未被取代，特别地，连接基l1和l2是未被取代的。在本发明第四方面的实施例中，连接基l1和/或l2不是可质子化的。在本发明第四方面的实施例中，线性连接基l1和/或l2包含稳定化单元。在本发明第四方面的实施例中，稳定化单元防止带电单元z在裂解事件期间丢失。在本发明第四方面的实施例中，稳定化单元通过使潜在形成的碳阳离子不稳定而防止带电单元z丢失。在本发明第四方面的实施例中，稳定化单元通过一个c原子与带电单元z分离。在本发明第四方面的实施例中，稳定化单元包含至少一个杂原子。在本发明第四方面的实施例中，稳定化单元选自由以下项组成的组：co，或其等电位类似物诸如so或so2。在第四方面的实施例中，所述线性连接基l2是连接带正电荷的单元z和中性丢失单元y的单键，所述连接基l1包括1-10个，特别是1-7个，尤其是1个、2个或3个c原子，任选包括一个或两个杂原子，特别是1个o原子，连接所述式a化合物的所述反应性单元x和带正电荷的单元z。在第四方面的实施例中，所述线性连接基l2包括1-10个c原子，特别是1-6个c原子，尤其是1个c原子，连接带正电荷的单元z和中性丢失单元y，所述连接基l1包括1-10个，特别是1-7个，尤其是1个、2个或3个c原子，任选地包括一个或两个杂原子，特别是1个o原子，连接所述式a化合物的所述反应性单元x和带正电荷的单元z。在本发明第四方面的实施例中，所述化合物具有式a的结构，其中，所述反应性单元x是一个羰基反应性单元，中性丢失单元y是一个5元杂环单元，所述带电单元z是一个永久正电荷的单元。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是二烯反应性单元x与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是5元杂环单元，并且带电单元z是永久带正电的单元。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是肼单元x与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z是叔铵基团。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是酰肼单元x与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是叔铵基团。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是肼单元x与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z是哌啶单元。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是酰肼单元x与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是哌啶单元。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是肼单元x与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z是吡啶单元。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是腙单元x与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是吡啶单元。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是cookson型试剂与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是叔铵基团。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是cookson型试剂与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是哌啶单元。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是cookson型试剂与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是吡啶单元。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是h2n-nh-与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是叔铵单元。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是h2n-nh-与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是哌啶单元。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是h2n-nh-与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是吡啶单元。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是h2n-o-c-与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是二甲基哌啶或奎宁环单元。在本发明第四方面的实施例中，加合物具有式a′所示的结构，其中x′是1，2，4-三唑啉-3，5-二酮与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是二甲基哌啶或奎宁环部分。在本发明第四方面的实施例中，化合物具有式a′所示的结构，其中x′是h2n-nh-与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是1，2，3-三唑或1，2，4-三唑，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第四方面的实施例中，化合物具有式a′所示的结构，其中x′是h2n-nh-与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是咪唑或吡唑，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第四方面的实施例中，化合物具有式a′所示的结构，其中x′是h2n-nh-与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是嘧啶，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第四方面的实施例中，化合物具有式a′所示的结构，其中x′是h2n-nh-与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是1，2，3，4-四唑，并且带电单元z是咪唑鎓部分。在本发明第四方面的实施例中，化合物具有式a′所示的结构，其中x′是h2n-nh-与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是苯并三唑，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第四方面的实施例中，化合物具有式a′所示的结构，其中x′是h2n-nh-与分析物分子t的反应所导致的，中性丢失单元y是1，2噁唑或1，3噁唑，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在实施例中，式a′的加合物选自由以下项组成的组：(i)加合物1(ii)加合物2在第五方面，本发明涉及式a化合物：x-l1-z-l2-y其中x是反应性单元，l1和l2彼此独立地为被取代或未被取代的连接基，特别是线性连接基，y是中性丢失单元，z是带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是一个永久带电部分，包括所述化合物的任何盐，或包含至少一种式a化合物的组合物或试剂盒，用于分析物分子的质谱测定中的用途，其中所述质谱测定特别地包括串联质谱测定，更特别地在三重四极杆装置中。在本发明第五方面的实施例中，式a化合物的用途包括用作衍生化试剂。在本发明第五方面的实施例中，使用式a化合物来增加ms测量的灵敏度。在实施例中，使用式a化合物以较低的检测水平特别是在较低的定量水平检测目标分析物。在本发明第五方面的实施例中，根据本发明的式a化合物包含能够与分析物分子反应的反应性单元x。反应性单元x能够与分析物分子反应，使得在式a化合物与分析物分子之间形成共价键。在本发明第五方面的实施例中，反应性单元x与式a化合物形成共价键。特别地，在式a化合物的反应性单元x与分析物分子中存在的官能团之间形成共价键。依据待测定的分析物分子中存在的官能团，技术人员将选择适宜的用于式a化合物的反应性单元x。决定哪种反应性单元x将符合与目标分析物的官能团结合是公知常识。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子包含选自由以下项组成的组的官能团：羰基基团、二烯基团、羟基基团、胺基团、亚胺基团、硫醇基团、二醇基团、酚基团、环氧化物基团、二硫化物基团和叠氮化物基团，这些基团中的每个能够与式a化合物的反应性单元x形成共价键。此外，在本发明的范畴内也预期，分析物分子上存在的官能团将会首先转化为更容易与式a化合物的反应性单元x反应的另一基团。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子选自由以下项组成的组：类固醇、酮类固醇、开环甾类化合物、氨基酸、肽、蛋白质、碳水化合物、脂肪酸、脂质、核苷、核苷酸、核酸和其他生物分子(包括小分子代谢物和辅因子)以及治疗性药物、滥用的药物、毒素或其代谢物。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子包含羰基基团作为官能团，该羰基基团选自由以下项组成的组：羧酸基团、醛基团、酮基团、掩蔽的醛、掩蔽的酮基团、酯基团、酰胺基团和酐基团。在本发明第五方面的实施例中，其中羰基基团是酰胺基团，技术人员清楚地知道，这样的酰胺基团是稳定的基团，但可将其水解以将酰胺基团转化为羧酸基团和氨基基团。酰胺基团的水解可经由酸/碱催化的反应或酶促过程实现，以上两者中的任何一种均是技术人员众所周知的。在本发明第五方面的实施例中，其中羰基基团是掩蔽的醛基团或掩蔽的酮基团，各自的基团是半缩醛基团或缩醛基团，特别是环状半缩醛基团或缩醛基团。在本发明第五方面的实施例中，在与式a化合物反应之前，缩醛基团转化为醛或酮基团。在本发明第五方面的实施例中，羰基基团是酮基团。在本发明第五方面的实施例中，可在与式a化合物的反应性单元反应之前，将酮基团转移至中间体亚胺基团中。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个酮基团的分析物分子是酮类固醇。在本发明第五方面的特定实施例中，酮类固醇选自由以下项组成的组：睾酮、表睾酮、二氢睾酮(dht)、去氧甲基睾酮(dmt)、四氢孕三烯酮(thg)、醛固酮、雌酮、4-羟基雌酮、2-甲氧基雌酮、2-羟基雌酮、16-酮雌二醇、16α-羟基雌酮、2-羟基雌酮-3-甲基醚、泼尼松、泼尼松龙、孕烯醇酮、孕酮、dhea(脱氢表雄酮)、17-oh孕烯醇酮、17-oh孕酮、17-oh孕酮、雄酮、表雄酮和δ4雄烯二酮)11-去氧皮质醇皮质甾酮、21-脱氧皮质醇、11-脱氧皮质酮、别孕烯醇酮和醛固酮。在本发明第五方面的实施例中，羰基基团是羧基基团。在本发明第五方面的实施例中，羧基基团直接与式a化合物反应，或在与式a化合物反应前转化为活化的酯基团。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个羧基基团的分析物分子选自由以下项组成的组：δ8-四氢大麻酚-酸、苯甲酰芽子碱、水杨酸、2-羟基苯甲酸、加巴喷丁、普瑞巴林、丙戊酸、万古霉素、甲氨蝶呤、霉酚酸、孟鲁司特、瑞格列奈、呋喃苯胺酸、替米沙坦、吉非罗齐、双氯芬酸、布洛芬、吲哚美辛、佐美酸、伊索克酸和青霉素。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个羧基基团的分析物分子为选自由以下项组成的组的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甘氨酸。在本发明第五方面的实施例中，羰基基团是醛基团。在本发明第五方面的实施例中，可在与式a化合物的反应性单元反应之前，将醛基团转移至中间体亚胺基团中。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个醛基团的分析物分子选自由以下项组成的组：吡哆醛、n-乙酰基-d-葡萄糖胺、阿卡他定、链霉素、交沙霉素。在本发明第五方面的实施例中，羰基基团是羰基酯基团。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个酯基团的分析物分子选自由以下项组成的组：可卡因、海洛因、利他林、醋氯芬酸、乙酰胆碱、安西奈德、阿米洛酯、阿米洛卡因、氨苄哌替啶、阿雷地平、青蒿琥酯和哌替啶。在本发明第五方面的实施例中，羰基基团是酐基团。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个酐基团的分析物分子选自由以下项组成的组：斑蝥素、琥珀酸酐、偏苯三酸酐和马来酸酐。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个二烯基团，特别是缀合的二烯基团，作为官能团。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个二烯基团的分析物分子是开环甾类化合物。在实施例中，开环甾类化合物选自由以下项组成的组：胆钙化醇(维生素d3)、麦角钙化醇(维生素d2)、骨化二醇、骨化三醇、速固醇、光甾醇和他卡西醇。特别地，开环甾类化合物是维生素d，特别是维生素d2或d3或其衍生物。在特定实施例中，开环甾类化合物选自由以下项组成的组：维生素d2、维生素d3、25-羟基维生素d2、25-羟基维生素d3、3-表-25-羟基维生素d2、3-表-25-羟基维生素d3、1，25-二羟基维生素d2、1，25-二羟基维生素d3、24，25-二羟基微生物d2和24，25-二羟基维生素d3、维生素a、维甲酸、异维甲酸、阿利维甲酸、纳他霉素、西罗莫司、两性霉素b、制霉菌素、依维莫司、坦罗莫司和非达霉素。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个羟基基团作为官能团。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子包含单个羟基基团或两个羟基基团。在其中存在多于一个羟基基团的实施例中，两个羟基基团可以定位成彼此相邻(1，2二醇)或通过1、2或3个c原子分离(分别为1，3-二醇、1，4-二醇、1，5-二醇)。在第五方面的特定实施例中，分析物分子包含1，2二醇基团。在其中仅存在一个羟基基团的实施例中，所述分析物选自由以下项组成的组：伯醇、仲醇和叔醇。在本发明第五方面的实施例中，其中分析物分子包含一个或多个羟基基团，分析物选自由以下项组成的组：苄醇、薄荷醇、l-肉毒碱、吡哆醇、甲硝哒唑、单硝酸异山梨酯、愈创甘油醚、克拉维酸盐、米吉妥(migitol)、扎西他滨、异丙肾上腺素、阿昔洛韦、美索巴莫、曲马多、文拉法辛、阿托品、氯苯达诺、α-羟基阿普唑仑、α-羟基三唑仑、劳拉西泮、去甲羟基安定、替马西泮、乙基葡糖苷酸、乙基吗啡、吗啡、吗啡-3-葡糖苷酸、丁丙诺啡、可待因、二氢可待因、对羟基丙氧芬、o-去甲基曲马多、双氢奎尼丁和奎尼丁。在本发明第五方面的实施例中，其中分析物分子包含多于一个羟基基团，分析物选自由以下项组成的组：维生素c、葡萄糖胺、甘露醇、四氢生物蝶呤、阿糖胞苷、阿扎胞苷、利巴韦林、氟尿苷、吉西他滨、链脲佐菌素、腺苷、阿糖腺苷、克拉屈滨、雌三醇、三氟尿苷、氯法拉滨、纳多洛尔、扎那米韦、乳果糖、单磷酸腺苷、碘苷、瑞加德松(regadenoson)、林可霉素、克林霉素、卡格列净(canaglifozin)、妥布霉素、奈替米星、卡那霉素、替格瑞洛、表柔比星、多柔比星、阿贝卡星、链霉素、喹巴因(quabain)、阿米卡星、新霉素、新霉素b(framycetin)、巴龙霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、长春地辛、洋地黄毒苷、地高辛、甲泛葡胺、乙酰洋地黄毒苷、去乙酰毛花苷、氟达拉滨、氯法拉滨、吉西他滨、阿糖胞苷、卡培他滨、阿糖腺苷、三氟尿苷、碘苷和普卡霉素。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个硫醇基团(包括但不限于烷基-硫醇和硫醇-芳基基团)作为官能团。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个硫醇基团的分析物分子选自由以下项组成的组：硫代扁桃酸、dl-甲巯丙脯酸、dl-塞奥芬、n-乙酰基半胱氨酸、d-青霉胺、谷胱甘肽、l-半胱氨酸、泽芬诺普利(zefenoprilat)、硫普罗宁、二巯基丙醇和琥巯酸。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个二硫化物基团作为官能团。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个二硫化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：谷胱甘肽二硫化物、双硫氧吡啶、二硫化硒、双硫仑、硫辛酸、l-胱氨酸、呋喃硫胺、奥曲肽、去氨加压素、伐普肽、特利加压素、利那洛肽、培奈萨肽(peginesatide)。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个环氧化物基团作为官能团。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个环氧化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：卡巴西平10，11环氧化物、卡非佐米、呋喃苯胺酸环氧化物、磷霉素、司维拉姆、浅蓝菌素、东莨菪碱、噻托溴铵、甲溴东莨菪碱、依普利酮、莫匹罗星、纳他霉素、卡非佐米和醋竹桃霉素。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个酚基团作为官能团。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个酚基团的分析物分子是类固醇或类固醇样化合物。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个酚基团的分析物分子是具有sp2杂化的a环以及位于a环3位置的oh基团的类固醇或类固醇样化合物。在本发明第五方面的特定实施例中，类固醇或类固醇样分析物分子选自由以下项组成的组：雌激素、雌激素样化合物、雌酮(e1)、雌二醇(e2)、17a-雌二醇、17p-雌二醇、雌三醇(e3)、16-表雌三醇、17-表雌三醇和16，17-表雌三醇和/或其代谢物。在实施例中，代谢物选自由以下项组成的组：雌三醇、16-表雌三醇(16-epie3)、17-表雌三醇(17-epie3)、16，17-表雌三醇(16，17-epie3)、16-酮雌二醇(16-ketoe2)、16a-羟基雌酮(16a-ohe1)、2-甲氧基雌酮(2-meoe1)、4-甲氧基雌酮(4-meoe1)、2-羟基雌酮-3-甲基醚(3-meoe1)、2-甲氧基雌二醇(2-meoe2)、4-甲氧基雌二醇(4-meoe2)、2-羟基雌酮(20he1)、4-羟基雌酮(4-ohe1)、2-羟基雌二醇(2-ohe2)、雌酮(e1)、硫酸雌酮(e1s)、17a-雌二醇(e2a)、17p-雌二醇(e2b)、硫酸雌二醇(e2s)、马烯雌酮(eq)、17a-二氢马烯雌酮(eqa)、17p-二氢马烯雌酮(eqb)、马萘雌酮(eqilenin)(en)、17-二氢马萘雌酮(ena)、17β-二氢马萘雌酮(enb)、a8，9-脱氢雌酮(de1)、a8，9-脱氢雌酮硫酸酯(de1s)、δ9-四氢大麻酚、霉酚酸。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子包含胺基团作为官能团。在本发明第五方面的实施例中，胺基团是烷基-胺或芳基-胺基团。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个胺基团的分析物选自由以下项组成的组：蛋白质和肽。在本发明第五方面的实施例中，包含胺基团的分析物分子选自由以下项组成的组：3，4-亚甲二氧安非他明、3，4-亚甲二氧-n-乙基安非他明、3，4-亚甲二氧甲基安非他明、安非他明、甲基安非他明、n-甲基-1，3-苯并二氧杂环戊烯基仲丁胺、7-氨基氯硝西泮、7-氨基氟硝西泮、3，4-二甲基甲卡西酮、3-氟甲卡西酮、4-甲氧基甲卡西酮、4-甲基乙卡西酮、4-甲基甲卡西酮、安非拉酮、2-甲基氨基-1-(3′，4′-亚甲二氧基苯基)丁-1-酮(butylone)、乙卡西酮(ethcathinone)、氟芬酮(flephedrone)、甲卡西酮、亚甲基二氧基甲卡西酮(methylone)、亚甲二氧吡咯戊酮、苯甲酰爱康宁、去氢去甲基氯胺酮、氯胺酮、去甲氯胺酮、美沙酮、去甲美沙酮、6-乙酰基吗啡、二乙酰基吗啡、吗啡、去甲氢可酮(norhydrocodone)、氧可酮、羟吗啡酮、苯环己哌啶、去甲丙氧芬、阿米替林、氯米帕明、度琉平、多虑平、丙咪嗪、去甲替林、三甲丙咪嗪、芬太尼、甘氨酰二甲基苯胺(glycylxylidide)、利多卡因、单乙基甘氨酰二甲基苯胺、n-乙酰基普鲁卡因酰胺、普鲁卡因酰胺、普瑞巴林、2-甲基氨基-1-(3，4-亚甲二氧苯基)丁烷、2-氨基-1-(3，4-亚甲二氧苯基)丁烷、去甲哌替啶、o-去甲基曲马多、曲马多、利多卡因、n-乙酰基普鲁卡因酰胺、普鲁卡因酰胺、加巴喷丁、拉莫三嗪、茶碱、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、万古霉素、甲氨蝶呤、加巴喷丁、西索米星和5-甲基胞嘧啶。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子是碳水化合物或具有碳水化合物部分的物质，例如糖蛋白或核苷。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子是单糖，特别是选自由以下项组成的组：核糖、脱氧核糖、阿拉伯糖、核酮糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖、果糖、n-乙酰基葡萄糖胺、n-乙酰基半乳糖胺、神经氨酸、n-乙酰基神经氨酸等。在实施例中，分析物分子是寡糖，特别是选自由以下项组成的组：二糖、三糖、四糖、多糖。在本发明第五方面的实施例中，二糖选自由以下项组成的组：蔗糖、麦芽糖和乳糖。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子是包含上述单糖、二糖、三糖、四糖、寡糖或多糖部分的物质。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子包含叠氮化物基团作为官能团，其选自由以下项组成的组：烷基叠氮化物或芳基叠氮化物。在本发明第五方面的实施例中，包含一个或多个叠氮化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：齐多夫定和叠氮西林。此类分析物分子可存在于生物样品或临床样品诸如体液(例如血液、血清、血浆、尿液、唾液、脊髓液等)、组织或细胞提取物等中。在本发明第五方面的实施例中，分析物分子存在于选自由以下项组成的组的生物样品或临床样品中：血液、血清、血浆、尿液、唾液、脊髓液和干血斑。在本发明第五方面的一些实施例中，分析物分子可存在于样品中，该样品是纯化或部分纯化的样品，例如，纯化或部分纯化的蛋白质混合物或提取物。在本发明第五方面的实施例中，反应性单元x选自由以下项组成的组：羰基反应性单元、二烯反应性单元、羟基反应性单元、氨基反应性单元、亚胺反应性单元、硫醇反应性单元、二醇反应性单元、酚反应性单元、环氧化物反应性单元、二硫化物反应性单元和叠氮基反应性单元。在本发明第五方面的实施例中，反应性单元x是羰基反应性单元，其能够与任何类型的具有羰基的分子反应。在本发明第五方面的实施例中，羰基反应性单元选自由以下项组成的组：羧基反应性单元、酮基反应性单元、醛反应性单元、酐反应性单元、羰基酯反应性单元和酰亚胺反应性单元。在本发明第五方面的实施例中，羰基反应性单元可以具有通过相邻o或n原子的α-效应强化的超亲核性n原子nh2-n/o或具有二硫醇分子。在本发明第五方面的实施例中，羰基反应性单元选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如，h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1是芳基、含有1个或多个杂原子的芳基、或c1-4烷基特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼单元，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2是芳基、含有1个或多个杂原子的芳基、或c1-4烷基特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(iii)羟氨基单元，例如，h2n-o-单元，以及(iv)二硫醇单元，特别是1，2-二硫醇或1，3-二硫醇单元。在本发明第五方面的实施例中，其中羰基反应性单元是羧基反应性单元，羧基反应性单元与分析物分子上的羧基基团反应。在本发明第五方面的实施例中，羧基反应性单元选自由以下项组成的组：重氮基单元、烷基卤、胺和肼单元。在本发明第五方面的实施例中，反应性单元x是二烯反应性单元，其能够与包含二烯基团的分析物反应。在本发明第五方面的实施例中，二烯反应性单元选自由以下项组成的组：cookson型试剂，例如，1，2，4-三唑啉-3，5-二酮，其能够作为亲二烯体发挥作用。在本发明第五方面的实施例中，反应性单元x是羟基反应性单元，其能够与包含羟基基团的分析物反应。在本发明第五方面的实施例中，羟基反应性单元选自由以下项组成的组：磺酰氯、活化的羧酸酯(nhs，或咪唑阴离子)和能够进行氟的亲核取代的含氟芳烃/杂芳烃(t.higashijsteroidbiochemmolbiol.2016sep；162：57-69)。在本发明第五方面的实施例中，反应性单元x是二醇反应性单元，其与分析物分子上的二醇基团反应。在本发明第五方面的实施例中，其中反应性单元是1，2二醇反应性单元，1，2二醇反应性单元包含硼酸。在其他实施例中，二醇可被氧化成相应的酮或醛，并随后与酮/醛反应性单元x反应。在本发明第五方面的实施例中，氨基反应性单元与分析物分子上的氨基基团反应。在本发明第五方面的实施例中，氨基反应性单元选自由以下项组成的组：活性酯基团诸如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、五氟苯基酯、羰基咪唑酯、方酸(quadraticacid)酯、羟基苯并三唑(hobt)酯、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯和磺酰氯单元。在本发明第五方面的实施例中，硫醇反应性单元与分析物分子上的硫醇基团反应。在本发明第五方面的实施例中，硫醇反应性单元选自由卤代乙酰基基团组成的组，特别是选自由以下项组成的组：br/i-ch2-c(＝o)-单元、丙烯酰胺/丙烯酸酯单元、不饱和酰亚胺单元诸如马来酰亚胺、甲磺酰基苯基噁二唑和磺酰氯单元。在本发明第五方面的实施例中，酚反应性单元与分析物分子上的酚基团反应。在本发明第五方面的实施例中，酚反应性单元选自由以下项组成的组：活性酯单元诸如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、五氟苯基酯、羰基咪唑酯、方酸(quadraticacid)酯、羟基苯并三唑(hobt)酯、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯和磺酰氯单元。分析物分子上存在的酚基团可经由反应(h.ban等人j.am.chem.soc.，2010，132(5)，第1523-1525页)与三唑二酮反应，或可替换地通过重氮化或者通过邻位硝基化，之后还原为胺，然后该胺与胺反应性试剂反应。在本发明第五方面的实施例中，反应性单元x是环氧化物反应性单元，其能够与包含环氧化物基团的分析物反应。在本发明第五方面的实施例中，环氧化物反应性单元选自由以下项组成的组：氨基、硫醇、通过相邻o或n原子的α-效应强化的超亲核性n原子nh2-n/o分子。在本发明第五方面的实施例中，环氧化物反应性单元选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如，h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1是芳基、含有1个或多个杂原子的芳基、或c1-4烷基特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼单元，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2是芳基、含有1个或多个杂原子的芳基、或c1-4烷基特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，以及(iii)羟氨基单元，例如，h2n-o-单元。在本发明第五方面的实施例中，反应性单元x是二硫化物反应性单元，其能够与包含二硫化物基团的分析物反应。在本发明第五方面的实施例中，二硫化物反应性单元选自由硫醇组成的组。在其他实施例中，二硫化物基团可被还原成相应的硫醇基团，然后与硫醇反应性单元x反应。在本发明第五方面的实施例中，反应性单元x是叠氮基反应性单元，其与分析物分子上的叠氮基基团反应。在本发明第五方面的实施例中，叠氮基反应性单元通过叠氮化物-炔环加成而与叠氮基基团反应。在本发明第五方面的实施例中，叠氮基反应性单元选自由以下项组成的组：炔(烷基或芳基)、线性炔或环状炔。叠氮基与炔之间的反应可在使用或不使用催化剂的情况下进行。在本发明第五方面的其他实施例中，叠氮基基团可被还原成相应的氨基基团，然后与氨基反应性单元x反应。式a化合物包含中性丢失单元y。中性丢失单元y能够失去不具有电荷的部分(中性实体)。中性丢失单元y能够裂解，即，在ms的条件下，例如当进行碰撞诱导解离(cid)时，例如在三重四极杆ms中，从而释放中性实体。丢失的中性实体是单个原子或多个原子。在释放中性实体之后，中性丢失单元y的剩余部分仍保持中性。通常但不一定，释放一个中性实体。在本发明第五方面的特定实施例中，释放了两个中性实体。在本发明第五方面的实施例中，中性丢失单元y在离子化时释放至少一个中性实体。中性实体是低分子量中性实体，特别是在具有10-200da，特别是在具有40-160da，特别是在具有80-160da的分子量的范围内。特别是，所述中性实体的分子量为200da或更少，特别是180da或更少，特别是160da或更少，特别是140da或更少，特别是120da或更少，特别是100da或更少，特别是90da或更少，特别是70da或更少，特别是50da或更少。在本发明第五方面的实施例中，中性实体选自由以下项组成的组：n2、no、no2、s2、so、so2、co、co2、三唑、苯基三唑、四唑或苯基四唑。在特定的情况下，所述中性实体是四唑或苯基三唑。在本发明第五方面的实施例中，中性实体的丢失导致质荷比(m/z)降低-28da(在丢失n2或co的情况下)、-30da(在丢失no的情况下)、-44da(在丢失co2的情况下)、-46da(在丢失no2的情况下)、-48da(在丢失so的情况下)、-64da(在丢失s2或so2的情况下)、-69da(在丢失三唑的情况下)、-84da(在丢失四唑的情况下)、-96da(在丢失二甲基四唑的情况下)或-157da(在丢失苯基三唑的情况下)。在本发明第五方面的实施例中，释放了一个中性实体。在本发明第五方面的实施例中，释放了两个中性实体。特别地，所释放的第二中性实体不同于所释放的第一中性实体。第二中性实体的释放与第一中性实体的释放同时发生或在后者之后发生。特别地，第二中性实体的释放与第一中性实体的释放同时发生，即，两个中性实体一次性释放，即在一次单个裂解事件中释放。在本发明第五方面的实施例中，中性丢失单元y包含能够裂解的环状部分或由其组成。在本发明第五方面的实施例中，中性丢失单元y包含4元、5元或6元杂环部分，特别是具有至少2个杂原子的4元、5元、6元杂环，或由其组成。在本发明第五方面的实施例中，中性丢失单元y包含咪唑、三唑、四唑、四嗪、噁二唑、噻二唑部分或其氢化衍生物，或由其组成。在本发明第五方面的实施例中，中性丢失单元y包含1，2，3-三唑、1，2，4-三唑部分、1，4，5-三唑、3，4，5-三唑部分、1，2，3，4-四唑、2，3，4，5-四唑或2，3，5，6四唑部分、或1，2，4，5四嗪部分，或由其组成。在本发明第五方面的实施例中，所述中性丢失单元y包括或由1，2，3-三唑、1，2，4-三唑部分、或1，2，3，4-四唑部分、或1，2，4，5-四嗪部分组成。在本发明第五方面的实施例中，所述带电单元z特别是在中性条件下，尤其是在ph值为6-8时永久带电。在本发明第五方面的实施例中，带电单元z是带正电或带负电的，优选是带正电的。在本发明第五方面的实施例中，带电单元z包含以下项或由其组成(i)至少一个带正电的部分。或(ii)至少一个带负电的部分。在本发明第五方面的实施例中，带电单元z是带正电的单元。在本发明第五方面的实施例中，带正电的单元z是以导致式a化合物的pka为10或更高，更特别地是以导致pka为12或更高的方式选择的。在本发明第五方面的实施例中，带正电的单元z选自由以下项组成的组：伯铵、仲铵、叔铵、季铵、伯锍、仲锍、叔锍、季锍、伯咪唑鎓、仲咪唑鎓、叔咪唑鎓、季咪唑鎓、伯吡啶鎓、仲吡啶鎓、叔吡啶鎓、季吡啶鎓、或伯鏻、仲鏻、叔鏻、季鏻。在第五方面的特定实施例中，带正电的部分是三甲基铵、n，n-二甲基哌啶鎓或n-烷基-奎宁环鎓。在本发明第五方面的实施例中，带电单元z是带负电的单元。在本发明第五方面的实施例中，带负电的单元z是以导致式a化合物的pkb为10或更高，更特别地是以导致pkb为12或更高的方式选择的。在本发明第五方面的实施例中，带负电的单元z选自由以下项组成的组：磷酸盐、硫酸盐、磺酸盐或羧基盐。在本发明第五方面的实施例中，连接基l1和l2彼此独立地为线性连接基。在第五方面的实施例中，线性连接基l1和l2彼此独立地为式a化合物的两个功能性单元之间的单键，或包含1个至10个c原子，特别是1个至6个c原子，特别是1个、2个或3个c原子。在第五方面的实施例中，线性连接基l1和l2彼此独立地包含1个或多个杂原子，特别是n、o或s。在本发明第五方面的实施例中，连接基l1和l2彼此独立地被取代或未被取代，特别地，连接基l1和l2是未被取代的。在本发明第五方面的实施例中，连接基l1和/或l2不是可质子化的。在本发明第五方面的实施例中，线性连接基l1和/或l2包含稳定化单元。在本发明第五方面的实施例中，稳定化单元防止带电单元z在裂解事件期间丢失。在本发明第五方面的实施例中，稳定化单元通过使潜在形成的碳阳离子不稳定而防止带电单元z丢失。在本发明第五方面的实施例中，稳定化单元通过一个c原子与带电单元z分离。在本发明第五方面的实施例中，稳定化单元包含至少一个杂原子。在本发明第五方面的实施例中，稳定化单元选自由以下项组成的组：co，或其等电位类似物诸如so或so2。在第五方面的实施例中，所述线性连接基l2是连接带正电荷的单元z和中性丢失单元y的单键，所述连接基l1包括1-10个，特别是1-7个，尤其是1个、2个或3个c原子，任选包括一个或两个杂原子，特别是1个o原子，连接所述式a化合物的所述反应性单元x和带正电荷的单元z。在第五方面的实施例中，所述线性连接基l2包括1-10个c原子，特别是1-6个c原子，尤其是1个c原子，连接带正电荷的单元z和中性丢失单元y，所述连接基l1包括1-10个，特别是1-7个，尤其是1个、2个或3个c原子，任选地包括一个或两个杂原子，特别是1个o原子，连接所述式a化合物的所述反应性单元x和带正电荷的单元z。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是羰基反应性单元，中性丢失单元y是5元杂环单元，并且带电单元z是永久带正电的单元。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是二烯反应性单元，中性丢失单元y是5元杂环单元，并且带电单元z是永久带正电的单元。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是肼单元，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z是叔铵基团。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是酰肼单元，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是叔铵基团。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是肼单元，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z是哌啶单元。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是酰肼单元，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是哌啶单元。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是肼单元，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z是吡啶单元。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是酰肼单元，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是吡啶单元。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是cookson型试剂，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是叔铵基团。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是cookson型试剂，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是哌啶单元。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是cookson型试剂，中性丢失单元y是包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z是吡啶单元。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是叔铵单元。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是哌啶单元。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是吡啶单元。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-o-c-，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是二甲基哌啶或奎宁环单元。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是1，2，4-三唑啉-3，5-二酮，中性丢失单元y是1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z是二甲基哌啶或奎宁环部分。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2，3-三唑或1，2，4-三唑，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是咪唑或吡唑，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是嘧啶，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2，3，4-四唑，并且带电单元z是咪唑鎓部分。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是苯并三唑，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第五方面的实施例中，化合物具有式a所示的结构，其中反应性单元x是h2n-nh-，中性丢失单元y是1，2噁唑或1，3噁唑，并且带电单元z是吡啶鎓部分。在本发明第五方面的实施例中，式a化合物选自由以下项组成的组：(i)标记1(ii)标记2式a化合物的其他实例如下：(iii)标记3(iv)标记4(v)标记5(vi)标记6(vii)标记7(viii)标记8(ix)标记9(x)标记10(xi)标记11(xii)标记12(xiii)标记13(xiv)标记14(xvi)标记15(xvii)标记16(xviii)标记17(xix)标记18在第六方面，本发明涉及用于质谱测定分析物分子的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使分析物分子与如上文中关于本发明第一方面所公开的化合物反应，从而形成分析物分子与式a化合物的共价加合物，以及(b)对步骤(a)的加合物进行质谱分析，步骤(a)可在质谱测定之前的样品制备工作流程内的不同阶段发生。包含分析物分子的样品可以进行预处理和/或通过各种方法进行富集。预处理方法取决于样品类型诸如血液(新鲜的或干燥的)、血浆、血清、尿液或唾液，而富集方法取决于目标分析物。哪种预处理样品适用于哪种样品类型是技术人员众所周知的。哪种富集方法适用于哪种目标分析物也是技术人员众所周知的。在本发明第六方面的实施例中，本方法的对分析物分子进行质谱测定的方法的步骤(a)发生在i)样品的预处理步骤之后，ii)样品的第一次富集之后，或iii)样品的第二次富集之后。在本发明第六方面的实施例中，其中样品是全血样品，将其分配到两个预定义的样品预处理(pt)工作流程中的一个，两个工作流程均包括添加内标(istd)和溶血试剂(hr)以及之后的预定义孵育期(inc)，两个工作流程之间的差异之处是添加内标(istd)和溶血试剂(hr)的次序。在添加水作为溶血试剂的实施例中，特别是以0.5∶1至20∶1ml水/ml样品的量，以1∶1至10∶1ml水/ml样品的量，以2∶1至5∶1ml水/ml样品的量添加。在本发明第六方面的实施例中，其中样品是尿液样品，将其分配到其他两个预定义的pt工作流程中的一个，两个工作流程均包括添加内标和酶试剂以及之后的预定义孵育期，两个工作流程之间的差异之处是添加内标和酶试剂的次序。酶试剂通常是用于葡糖苷酸切割或蛋白质切割或分析物或基质的任何预处理的试剂。在另外的步骤中，添加衍生化试剂诸如上文或下文中所公开的本发明化合物，之后为孵育期。在本发明第六方面的实施例中，酶试剂选自由以下项组成的组：葡萄糖醛酸酶、(部分的)外切型或内切型去糖基化酶、或外切型或内切型蛋白酶。在实施例中，以0.5至10mg/ml的量，特别是以1至8mg/ml的量，特别是以2至5mg/ml的量，来添加葡萄糖醛酸酶。在本发明第六方面的实施例中，其中样品是血浆或血清，将其分配到另一预定义pt工作流程，该工作流程仅包括添加内标(istd)以及之后的预定义孵育时间。选择哪种孵育时间和温度进行样品处理、化学反应或上文或下文中虑及并命名的方法步骤是技术人员众所周知的。特别地，技术人员知道孵育时间和温度是彼此依赖的，例如，高温通常导致较短的孵育时间，反之亦然。在本发明第六方面的实施例中，孵育温度在4至45℃范围内，特别是在10至40℃范围内，特别是在20至37℃范围内。在实施例中，孵育时间在30秒至120分钟，特别是30秒至1分钟、30秒至5分钟、30秒至10分钟、1分钟至10分钟或1分钟至20分钟、10分钟至30分钟、30分钟至60分钟或60分钟至120分钟范围内。在特定实施例中，孵育时间是36秒的倍数。据此，在本方法的实施例中，步骤a)发生在上文公开的样品预处理步骤之后。在本发明第六方面的实施例中，其中步骤a)中式(a)化合物与分析物分子的反应发生在任何富集过程之前，将式(a)化合物添加到经过预处理的目标样品中。据此，分析物分子与式(i)化合物的加合物在预处理之后并且在第一富集过程之前形成。因此，加合物在经历步骤b)的质谱分析之前经历第一富集过程和第二富集过程。经过预处理的样品可以进一步经历分析物富集工作流程。分析物富集工作流程可包括一种或多种富集方法。富集方法是本领域众所周知的，并且包括但不限于，化学富集方法，包括但不限于化学沉淀；以及使用固相的富集方法，包括但不限于，固相萃取方法、珠工作流程和色谱方法(例如，气相色谱和液相色谱)。在本发明第六方面的实施例中，第一富集工作流程包括添加将分析物选择性基团携带至经过预处理的样品的固相，特别是固体珠。在本发明第六方面的实施例中，第一富集工作流程包括添加将分析物选择性基团携带至经过预处理的样品的磁珠或顺磁珠。在本发明第六方面的实施例中，磁珠的添加包括搅拌或混合。之后是用于将目标分析物捕获在珠上的预定义孵育期。在本发明第六方面的实施例中，工作流程包括在与磁珠一起孵育之后的洗涤步骤(w1)。依据分析物，执行一个或多个另外的洗涤步骤(w2)。一个洗涤步骤(w1、w2)包括一系列包括以下项的步骤：通过包含磁体或电磁体的磁珠处置单元来分离磁珠、抽吸液体、添加洗涤缓冲液、将磁珠重新悬浮、另一个磁珠分离步骤和另一次抽吸液体。此外，除了洗涤循环的体积和数量或组合之外，洗涤步骤可以在溶剂类型层面(水/有机物/盐/ph)上有所不同。如何选择相应参数是技术人员众所周知的。在最后一个洗涤步骤(w1、w2)之后，添加洗脱试剂，之后将磁珠重新悬浮，并经历预定义孵育期，以用于从磁珠释放目标分析物。然后分离无结合物的磁珠，并捕获含有经过衍生化的目标分析物的上清液。在本发明第六方面的实施例中，第一富集工作流程包括添加将基质选择性基团携带至经过预处理的样品的磁珠。在本发明第六方面的实施例中，磁珠的添加包括搅拌或混合。之后是用于将基质捕获在珠上的预定义孵育期。此时，目标分析物并未与磁珠结合，而是保留在上清液中。之后，分离磁珠，并收集含有经过富集的目标分析物的上清液。在本发明第六方面的实施例中，使上清液经历第二富集工作流程。这里，将上清液转移至lc站，或在通过添加稀释液体进行的稀释步骤之后转移至lc站。通过改变例如溶解类型(水/有机物/盐/ph)和体积，也可以使用不同的洗脱规程/试剂。各种参数是技术人员众所周知并且容易选择的。在本发明第六方面的实施例中，其中本方法的步骤a)不直接发生在预处理方法之后，步骤a)可发生在如上文中所述使用磁珠进行的第一富集工作流程之后。在本发明第六方面的使用分析物特异性磁珠的实施例中，在洗涤步骤(w1、w2)结束之后，将如上文或下文中所公开的式(a)化合物在洗脱溶剂之前、与洗脱溶剂一起或在洗脱溶剂之后添加到目标样品中，之后是孵育期(规定的时间和温度)。在本发明第六方面的实施例中，然后分离无结合物的磁珠，并收集含有步骤a)的加合物的上清液。在本发明第六方面的实施例中，将含有步骤a)的加合物的上清液转移至第二富集工作流程，特别是直接转移至lc站或在通过添加稀释液体进行的稀释步骤之后转移至lc站。在本发明第六方面的实施例中，其中使用了基质特异性磁珠，将如上文或下文中所公开的式(a)化合物在分离磁珠之前或在分离磁珠之后添加到目标样品中。在本发明第六方面的实施例中，将含有步骤a)的加合物的上清液转移至第二富集工作流程，特别是直接转移至lc站或在通过添加稀释液体进行的稀释步骤之后转移至lc站。据此，在本发明第六方面的实施例中，其中步骤a)中式(a)化合物与分析物分子的反应发生在第一富集过程之后，在第一富集过程特别是使用磁珠进行的第一富集过程结束之后，将式(a)化合物添加到目标样品中。据此，样品首先如上文所述经过预处理，然后经历第一富集过程特别是使用如上文所述的携带分析物选择基团的磁珠进行的第一富集过程，并且在从磁珠洗脱之前、同时或之后，添加式(a)化合物。据此，分析物分子与式(a)化合物的加合物在第一富集过程之后并且在第二富集过程之前形成。因此，加合物在经历步骤b)的质谱分析之前经历第二富集过程。在本发明第六方面的另一个实施例中，本方法的步骤(a)发生在第二个分析物富集工作流程之后。在第二个富集工作流程中，使用色谱分离来进一步富集样品中目标分析物。在本发明第六方面的实施例中，色谱分离是气相色谱或液相色谱。两种方法均是技术人员众所周知的。在本发明第六方面的实施例中，液相色谱选自由以下项组成的组：hplc、快速lc、微流-lc、流动注射、以及捕捉和洗脱。在本发明第六方面的实施例中，本方法的步骤a)在色谱分离的同时或之后发生。在本发明第六方面的实施例中，将式(a)化合物与洗脱缓冲液一起添加到柱内。在另选的实施例中，式(a)化合物在柱后添加。在本发明第六方面的实施例中，第一富集过程包括使用分析物选择性磁珠。在本发明第六方面的实施例中，第二富集过程包括使用色谱分离，特别是使用液相色谱。在实施例中，质谱分析步骤(b)包括：(i)使所述加合物的离子进入质谱分析的第一阶段，从而根据其质荷(m/z)比来表征所述加合物的母离子，(ii)使所述加合物的母离子裂解好，从而释放第一中性实体并生成所述加合物的子离子，其中所述加合物的子离子在其m/z比上不同于所述加合物母离子，以及(iii)使所述加合物的子离子进入质谱分析的第二级，从而根据所述加合物的子离子的m/z比对所述加合物的子离子进行表征，并且/或者其中(ii)可进一步包括所述加合物离子的另一种裂解，从而释放出不同于所述第一中性实体的第二中性实体，并且生成所述加合物的第二子离子，并且其中(iii)可进一步包括使所述加合物的第一子离子和第二子离子进入质谱分析的第二级，从而根据所述加合物的第一子离子和第二子离子的m/z比对所述加合物的第一子离子和第二子离子进行表征。据此，在本发明第六方面的实施例中，其中步骤a)中式(a)化合物与分析物分子的反应发生在第二富集过程之后，在使用色谱特别是液相色谱的第二富集过程结束之后，将式(a)化合物添加到目标样品中。据此，在此情况下，样品首先如上文所述经过预处理，然后经历第一富集过程特别是使用如上文所述的磁珠，之后是色谱分离特别是使用液相色谱，并且在色谱分离之后添加式(a)化合物。据此，分析物分子与式(a)化合物的加合物在第二富集过程之后形成。因此，加合物在经历步骤b)的质谱分析之前不经历富集过程。在其他实施例中，本发明涉及以下方面：1.一种式a化合物：x-l1-z-l2-y其中x是反应性单元，其特别是能够与分析物分子形成共价键，l1和l2彼此独立地为被取代或未被取代的连接基，特别是线性连接基y是中性丢失单元，z是带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是包含一个永久带电部分，包括所述化合物的任何盐。。2.根据方面1所述的化合物，其中所述反应性单元x选自由以下项组成的组：羰基反应性单元、二烯反应性单元、羟基反应性单元、氨基反应性单元、亚胺反应性单元、硫醇反应性单元、二醇反应性单元、酚反应性单元、环氧化物反应性单元、二硫化物反应性单元和叠氮化物反应性单元。3.根据前述方面中任一项所述的化合物，其中所述反应性单元x是羰基反应性基团，特别地，其中x选自由以下项组成的组(i)肼单元，特别是h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1为芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，任选地被取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2为芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，任选地被取代，(iii)羟氨基单元，特别是h2n-o-单元，以及(iv)二硫醇单元，特别是1，2-二硫醇或1，3-二硫醇单元。4.根据方面1或2所述的化合物，其中所述反应性单元x是硫醇反应性基团或氨基反应性基团，诸如活性酯基团，例如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、羟基苯并三唑(hobt)酯或1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯基团。5.根据前述方面中任一项所述的化合物，其中所述中性丢失单元y在离子化时释放中性实体。6.根据前述方面中任一项所述的化合物，其中所述带电单元z是永久带电的。7.根据前述方面中任一项所述的化合物，其中所述连接基l1l2彼此独立地包含1个至10个c原子，其可选地包含1个或多个杂原子。8.根据前述方面中任一项所述的化合物，其中所述反应性单元x是羰基反应性基团，所述中性丢失单元y是5元杂环部分，所述带电单元z包含一个永久带正电的部分。9.根据前述方面中任一项所述的化合物，其中所述反应性单元x是h2n-nh-，所述中性丢失单元y是三唑或四唑，并且所述带电单元z包括哌啶单元。10.一种组合物，其包含根据方面1至9中任一项所述的化合物。11.一种试剂盒，其包含根据方面1至9中任一项所述的化合物或根据方面10所述的组合物。12.一种共价加合物，其包含彼此共价连接的分析物分子与根据方面1至9中任一项所述的化合物，特别地，其中所述共价加合物通过所述分析物分子与根据方面1至9中任一项所述的化合物的化学反应而形成。13.式a化合物：其中x-l1-z-l2-yx是反应性单元，其特别是能够与分析物分子形成共价键l1和l2彼此独立地为被取代或未被取代的连接基，特别是线性连接基，y是中性丢失单元，z是带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是包含一个永久带电部分，包括所述化合物的任何盐，或包含至少一种式a化合物的组合物或试剂盒用于分析物分子的质谱测定中的用途，其中所述质谱测定特别地包括串联质谱测定，更特别地在三重四极杆装置中。14.一种用于质谱测定分析物分子的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使所述分析物分子与根据方面1至9中任一项所定义的式a化合物反应，从而形成所述分析物分子与所述式a化合物的共价加合物，以及(b)对来自步骤(a)的所述加合物进行质谱分析，优选地，其中所述质谱分析步骤(b)包括：(i)使所述加合物的离子进入质谱分析的第一级，从而根据其质荷(m/z)比对所述加合物的离子进行表征，(ii)使所述加合物离子裂解，从而释放出第一中性实体，特别是低分子量中性实体，并且生成所述加合物的子离子，其中所述加合物的子离子在其m/z比上不同于所述加合物离子，以及(iii)使所述加合物的子离子进入质谱分析的第二级，从而根据所述加合物的子离子的m/z比对所述加合物的子离子进行表征，并且/或者其中(ii)可进一步包括所述加合物离子的另一种裂解，从而释放出不同于所述第一中性实体的第二中性实体，并且生成所述加合物的第二子离子，并且其中(iii)可进一步包括使所述加合物的第一子离子和第二子离子进入质谱分析的第二级，从而根据所述加合物的第一子离子和第二子离子的m/z比对所述加合物的第一子离子和第二子离子进行表征。实例提供以下实例来例证但不限制本文主张的发明。实例1：标记1的合成1.步骤：2-[1-[(2-甲基四唑-5-基)甲基]吡啶-1-鎓-3-基]乙酰肼；2，2，2-三氟乙酸盐；2，2，2-三氟乙酸的合成：在10ml闪蒸液中，向搅拌的吡啶-3-乙酸甲酯(114mg，0.76mmol)中加入5-(氯甲基)-2-甲基四氮唑(100mg，0.76mmol)，并将反应混合物在70℃下搅拌5h形成作为无色稠油的中间体。通过制备型hplc纯化产物，得到247mg无色油状tfa盐的中间产物。将产物溶于10mlmeoh中，然后加入一水合肼(379mg，7.58mmol)。在50℃下静置反应2h。然后，真空(去除过量肼的高真空泵)下去除溶剂，通过制备型hplc以同样的方法纯化无色油状粗品，得到194.7mg，收率54％为黄色至无色油状的所期望产物(tfa盐)。hplc方法c-18柱：0min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；0-10min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；10-60min：70％h2o0.1％tfa；30％ch3cn0.1％tfa；60-90min：20％h2o0.1％tfa；80％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm3.69(s，2h)4.36(s，3h)6.26(s，2h)8.05-8.23(m，1h)8.53-8.64(m，1h)9.04-9.17(m，2h)。13cnmr(101mhz，dmso-d6)δppm37.29(1c)40.33(1c)54.82(1c)128.19(1c)137.65(1c)144.50(1c)145.72(1c)148.58(1c)160.48(1c)167.50(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值248.1259，实测值248.33实例2：标记2的合成1.步骤：2-[1-[(1-苯基三唑-4-基)甲基]吡啶-1-鎓-3-基]乙酸甲酯的合成：将3-吡啶乙酸甲酯(60mg，0.39mmol)和4-氯甲基-1-苯基-1h-1，2，3-三唑(100mg，0.39mmol)溶于2dmf中。在115℃下，将所述反应混合物搅拌2h。真空下去除溶剂。将干残渣溶于4mlh2o中，并通过制备型hplc纯化，得到为含有一些nh4coo的白色固体的233mg所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：h2o中含有95％的25mmnh4coo，ch3cn/h2o中(80∶20)含有5％的25mmnh4coo；0-40min：h2o中含有0％的25mmnh4coo，ch3cn/h2o中(80∶20)含有100％的25mmnh4coo；1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm3.65(s，3h)4.08(s，2h)6.00-6.11(m，2h)7.49-7.58(m，1h)7.59-7.69(m，2h)7.84-7.92(m，2h)8.16-8.27(m，1h)8.36(s，4h)8.57-8.66(m，1h)9.00-9.08(m，2h)9.15-9.21(m，1h)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值309.13515，实测值309.22.步骤：合成[[2-[1-[(1-苯基三唑-4-基)甲基]吡啶-1-鎓-3基]乙酰基]氨基]二甲酸铵：将乙酸吡啶鎓(230mg，取0.39mmol)溶于2mlh2o中。加入一水合肼(163mg，2.73mmol)，并将反应混合物在115℃下搅拌2h。将反应混合物冷却至室温，并通过制备型hplc纯化得到26mg，收率17％为无色油状的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：95％h2o1％hcooh，5％ch3cn1％hcooh；0-35min：20％h2o1％hcooh，80％ch3cn1％hcooh；1hnmr(400mhz，meod-d4)δppm3.74-3.84(m，2h)6.02-6.11(m，2h)7.49-7.57(m，1h)7.57-7.65(m，2h)7.82-7.88(m，2h)8.08-8.15(m，1h)8.52-8.55(m，1h)8.55-8.58(m，2h)8.76-8.81(m，1h)9.05-9.10(m，1h)9.13(s，1h)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值309.14638，实测值309.2实例3：标记1-睾酮衍生物的制备和通过ms对其进行的分析将睾酮溶解在ms级甲醇中，最终浓度为1mg/ml。将标记1(2-[1-[(2-甲基四唑-5-基)甲基]吡啶-1-鎓-3-基]乙酰肼；2，2，2-三氟乙酸盐；2，2，2-三氟乙酸)溶于ms级甲醇中，得到最终浓度为100mg/ml。在70μlms级甲醇和10μl冰乙酸中，用10μl的标记1将10μl的睾酮衍生化。衍生化反应在45℃和1200rpm的eppendorf恒温混匀仪中孵育2小时。产率＝84％，通过lc-ms分析基于未标记的睾酮的面积计算。在正离子模式下，分别在5、10、15、20、30、35、40、50和60v的碰撞能量下，通过lc-ms全扫描对10μl的稀释(1∶1000，在80％甲醇中)衍生化反应进行分析。对于lc/ms分析，在与watersacquityhclasshplc连通的xevog2-xs-qtoflc-ms系统(沃特世公司(waters))上分析样品。在45℃下，使用c18-柱(acquityuplchsst31.8μm，2.1x50mm柱，waters)执行色谱分析，以2mmnh4ac、0.1％甲酸在水中的溶液(a)或在甲醇中的溶液(b)作为流动相，流速为450μl/min。使用以下分级梯度：0至2min，25％b；2至6min，25％至99.9％b；6至8min，99.9％b；以及8至10min，25％b。优化的esi源条件如下：脱溶剂温度650℃，源温度150℃，锥孔气流速150l/hr，脱溶剂气流速800l/hr，碰撞气体流速0.18ml/min，源补偿电压80v，和毛细管电压3.5v。tof-ms质量范围是50至1200da，数据格式为棒状，扫描时间0.2秒，分析器模式为灵敏度，动态范围为正常，低端分辨率15，高端分辨率10。通过masslynx软件(版本4.1，scn949)采集数据，并使用targetlynx(版本4.1，scn909)评估数据。在气相中，标记1-睾酮衍生物发生2，5-二甲基四唑基团(δ96da)的中性丢失，正电荷仍留在产物片段上，并稳定在吡啶鎓基团上，如图1a所示。表1示出了标记1-睾酮衍生物的前体离子和产物离子的m/z的计算值和测量值。表1：标记1-睾酮衍生物的前体离子和产物离子的m/z的计算值和测量值计算的测量的前体离子[m/z]518.32518.24产物离子[m/z]422.28422.21中性丢失[da]96.0496.03在不同的碰撞能量下，通过正离子模式的全扫描分析标记1-睾酮衍生物。前体离子和产物离子的对应峰面积在图1b中示出。产物离子的最大强度是在35v的碰撞能量下获得。相应的ms光谱如图1c所示，产物离子m/z422.2075对应最强峰值。在相同的分析物浓度(0.1μg/ml)下，标记1-睾酮衍生物的产物离子的最大峰面积与未标记的13c3-睾酮相比，观察到4倍的强度增加(图2)。此外，在相同的分析物浓度下(0.1μg/ml，图2)，标记1产生的产物离子强度与来自rahimoff等人(2017)的试剂a相比高1.3倍。实例4：标记2-睾酮衍生物的制备和通过ms对其进行的分析将睾酮溶解在ms级甲醇中，最终浓度为1mg/ml。标记2([[2-[1-[(1-苯基三唑-4-基)甲基]吡啶-1-鎓-3基]乙酰基]氨基]二甲酸铵)溶解在ms级甲醇中，得到最终浓度为100mg/ml。在70μlms级甲醇和10μl冰乙酸中，用10μl的标记1将10μl的睾酮衍生化。衍生化反应在45℃和1200rpm的eppendorf恒温混匀仪中孵育2小时。产率＝100％，通过lc-ms分析基于未标记的睾酮的面积计算。在正离子模式下，分别在5、10、15、20、30、35、40、50和60v的碰撞能量下，通过lc-ms全扫描对10μl的稀释(1∶1000，在80％甲醇中)衍生化反应进行分析。如上文关于实例3所述，执行lc/ms。在气相中，标记2-睾酮衍生物发生1-苯基三唑-4-甲基基团(δ157da)的中性丢失，正电荷仍留在产物片段上，并稳定在吡啶鎓基团上，如图3a所示。表2示出了标记2-睾酮衍生物的前体离子和产物离子的m/z的计算值和测量值。表2：标记2-睾酮衍生物的前体离子和产物离子的m/z的计算值和测量值。计算的测量的前体离子[m/z]579.34579.33产物离子[m/z]422.28422.27中性丢失[da]157.06157.06在不同的碰撞能量下，通过正离子模式的全扫描分析标记2-睾酮衍生物。前体离子和产物离子的对应峰面积在图3b中示出。产物离子的最大强度是在30v的碰撞能量下获得。相应的ms光谱如图3c所示，产物离子m/z422.2726对应最强峰值。实例5：标记13的合成1.步骤：1-[(1-苯基-1h-1，2，3-三唑-4-基)甲基]吡啶-1-鎓-4-羧酸三氟乙酸甲酯的合成：将吡啶-4-羧酸甲酯(38.5mg，0.281mmol)和4-(氯甲基)-1-苯基-1h-1，2，3-三唑(60.6mg，0.313mmol)的混合物溶于干dmf(1ml)中，并在70℃下搅拌。24h后加入吡啶-4-羧酸甲酯(101.1mg，0.737mmol)的第2部分。48h后加入吡啶-4-羧酸甲酯(102.6mg，0.748mmol)的第3部分。该溶液在50℃下再搅拌2.5d。用meoh猝灭所述反应混合物，并在真空下去除溶剂。粗品混合物经制备型hplc纯化，得到52.7mg，收率41％为无色固体的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa；0-80min：20％h2o0.1％tfa，80％ch3cn0.1％tfa；80-85min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；85-93min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；93-96min：60％h2o0.1％tfa，40％ch3cn0.1％tfa；96-99min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；99-100min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δppm4.05(s，3h)6.14(s，2h)7.50-7.54(m，1h)7.55-7.66(m，2h)7.77-7.88(m，2h)8.58(d，j＝6.65hz，2h)8.77(s，1h)9.33(d，j＝6.90hz，2h)。13cnmr(101mhz，甲醇-d4)δppm53.04(1c)55.67(1c)120.28(2c)123.43(1c)127.50(2c)129.14(1c)129.65(2c)136.62(1c)140.04(1c)145.51(1c)146.16(2c)162.05(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值295.11950，实测值295.45。2.步骤：[[1-[(1-苯基-1h-1，2，3-三唑-4-基)甲基]吡啶-1-鎓-4-羰基]氨基]双三氟乙酸铵的合成：将1-[(1-苯基-1h-1，2，3-三唑-4-基)甲基]吡啶-1-鎓-4-羧酸三氟乙酸甲酯(24.0mg，0.059mmol)溶于干meoh(1ml)中，并将所述混合物在0℃下搅拌。在加入水合肼(30.0μl，0.617mmol)后，将所述溶液在0℃下搅拌5min，并在真空下去除溶剂。然后，剩余粗品经制备型hplc纯化，得到19.7mg，收率64％为灰白色固体的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa；0-60min：50％h2o0.1％tfa，50％ch3cn0.1％tfa；60-64min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；64-80min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；80-83min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；83-89min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；89-90min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δppm6.12(s，2h)7.48-7.56(m，1h)7.56-7.64(m，2h)7.81-7.86(m，2h)8.43(d，j＝6.90hz，2h)8.78(s，1h)9.29(d，j＝6.97hz2h)。13cnmr(101mhz，甲醇-d4)δppm55.43(1c)120.28(2c)123.42(1c)125.96(2c)129.12(1c)129.64(2c)136.63(1c)140.14(1c)145.80(2c)148.44(1c)161.53(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值295.13073，实测值295.11。实例6：标记14的合成1.步骤：1-[(1-苯基-1h-1，2，3-三唑-4-基)甲基]吡啶-1-鎓-3-羧酸三氟乙酸甲酯的合成：将吡啶-4-羧酸甲酯(244.3mg，1.781mmol)与4-(氯甲基)-1-苯基-1-h-1，2，3-三唑(56.7mg，0.293mmol)混合，并溶解在干dmf(1ml)中。所述溶液在50℃下搅拌4.5d，用meoh淬灭后停止搅拌。在真空下去除溶剂，将粗品混合物进行制备型hplc，得到59.0mg，收率49％为无色固体的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa；0-60min：50％h2o0.1％tfa，50％ch3cn0.1％tfa；60-64min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；64-80min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；80-83min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；83-89min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；89-90min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；hplc-ms(m/z)[m] 计算值295.11950，实测值295.38。2.步骤：[[1-[(1-苯基-1h-1，2，3-三唑-4-基)甲基]吡啶-1-鎓-3-羰基]氨基]双三氟乙酸铵的合成：将1-[(1-苯基-1h-1，2，3-三唑-4-基)甲基]吡啶-1-鎓-4-羧酸三氟乙酸甲酯(46.9mg，0.115mmol)溶于干meoh(1ml)中，并将所述混合物在0℃下搅拌。在加入水合肼(55.0μl，1.132mmol)后，将所述溶液在0℃下搅拌5min，并在真空下去除溶剂。然后，剩余粗品经制备型hplc纯化，得到16.6mg，收率28％为灰白色固体的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa；0-60min：50％h2o0.1％tfa，50％ch3cn0.1％tfa；60-64min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；64-80min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；80-83min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；83-89min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；89-90min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δppm6.14(s，2h)7.49-7.54(m，1h)7.56-7.61(m，2h)7.81-7.85(m，2h)8.24-8.28(m，1h)8.79(s，1h)8.94-8.96(m，1h)9.29-9.31(m，1h)9.60(s，1h)。13cnmr(101mhz，甲醇-d4)δppm55.75(1c)120.28(2c)123.43(1c)128.27(1c)129.12(1c)129.63(2c)133.37(1c)136.62(1c)140.12(1c)143.93(1c)144.66(1c)146.71(1c)161.30(1c)hplc-ms(m/z)[m] 计算值295.13073，实测值295.11。实例7：标记15的合成1.步骤：2-[1-[(3-甲基咪唑-4-基)甲基]吡啶-1-鎓-3-基]乙酸三氟乙酸甲酯的合成：将3-吡啶乙酸甲酯(52.0mg，0.344mmol)与5-(氯甲基)-1-甲基-1h-咪唑盐酸盐(46.3mg，0.277mmol)混合，并溶解在干dmf(1ml)中。所述溶液在50℃下搅拌1d，用meoh淬灭后停止搅拌。在真空下去除溶剂，将粗品混合物经制备型hplc，得到73.1mg，收率73％为无色油状的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa；0-60min：50％h2o0.1％tfa，50％ch3cn0.1％tfa；60-64min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；64-72min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；72-74min：40％h2o0.1％tfa；60％ch3cn0.1％tfa；74-79min：40％h2o0.1％tfa；60％ch3cn0.1％tfa；79-80min：40％h2o0.1％tfa；60％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δppm3.75(s，3h)3.91(s，3h)4.05(s，2h)6.14(s，2h)7.91(s，1h)8.15(dd，j＝7.97，6.21hz，1h)8.63(d，j＝8.03hz，1h)8.95-9.07(m，2h)9.11(s，1h)。13cnmr(101mhz，甲醇-d4)δppm32.99(1c)36.14(1c)51.71(1c)52.28(1c)122.98(1c)126.59(1c)127.99(1c)136.95(1c)138.29(1c)143.08(1c)145.22(1c)148.02(1c)170.03(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值246.12425，实测值246.39。2.步骤：[[2-[1-[(3-甲基咪唑-4-基)甲基]吡啶-1-鎓-3-基]乙酰基]氨基]双三氟乙酸铵的合成：将2-[1-[(3-甲基咪唑-4-基)甲基]吡啶-1-鎓-3-基]乙酸三氟乙酸甲酯(73.1mg，0.203mmol)溶于干meoh(1ml)中，并将所述混合物在0℃下搅拌。在加入水合肼(100μl，2.057mmol)后，将所述溶液在0℃下搅拌2.5h，并在真空下去除溶剂。然后，剩余粗品经制备型hplc纯化，得到43.4mg，收率45％为微红色固体的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa；0-60min：70％h2o0.1％tfa，30％ch3cn0.1％tfa；60-64min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；64-80min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；80-83min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；83-89min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；89-90min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δppm3.91(s，3h)6.13(s，2h)7.90(d，j＝1.51hz，1h)8.14(dd，j＝8.03，6.15hz，1h)8.61(d，j＝8.03hz，1h)8.99-9.02(m，2h)9.11(s，1h)。13cnmr(101mhz，甲醇-d4)δppm32.97(1c)35.62(1c)52.30(1c)123.04(1c)126.56(1c)128.02(1c)136.85(1c)138.32(1c)143.08(1c)145.19(1c)147.75(1c)168.05(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值246.13549，实测值246.23。实例8：标记16的合成1.步骤：2-[1-(嘧啶-1-鎓-2-基甲基)吡啶-1-鎓-3-基]乙酸双三氟乙酸甲酯的合成：将3-吡啶乙酸甲酯(59.3mg，0.392mmol)与2-(氯甲基)嘧啶(70.6mg，0.549mmol)混合，并溶解在干dmf(1ml)中。所述溶液在60℃下搅拌2.5d，用meoh淬灭后停止搅拌。在真空下去除溶剂，将粗品混合物进行制备型hplc，得到148.4mg，收率80％为无色油状的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa；0-60min：50％h2o0.1％tfa，50％ch3cn0.1％tfa；60-64min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；64-80min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；80-83min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；83-89min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；89-90min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δppm3.75(s，3h)4.07(s，2h)6.15(s，2h)7.46-7.49(m，1h)8.14-8.19(m，1h)8.67(d，j＝8.03hz，1h)8.77-8.79(m，2h)9.03-9.05(m，1h)9.11(s，1h)。13cnmr(101mhz，甲醇-d4)δppm36.26(1c)51.71(1c)64.74(1c)120.89(1c)127.26(1c)136.16(1c)144.70(1c)146.59(1c)147.54(1c)157.87(2c)162.29(1c)169.93(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值244.10860，实测值244.39。2.步骤：[[2-[1-(嘧啶-1-鎓-2-基甲基)吡啶-1-鎓-3-基]乙酰基]氨基]三氟乙酸铵的合成：将2-[1-(嘧啶-1-鎓-2-基甲基)吡啶-1-鎓-3-基]乙酸双三氟乙酸甲酯(148.8mg，0.315mmol)溶于干meoh(1ml)中，并将所述混合物在0℃下搅拌。在加入水合肼(200μl，4.115mmol)后，将所述溶液在0℃下搅拌5.5h，并在真空下去除溶剂。然后，剩余粗品经制备型hplc纯化，得到97.8mg，收率53％为微红色固体的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa；0-20min：50％h2o0.1％tfa，50％ch3cn0.1％tfa；20-24mm：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；24-30min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；30-33min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；33-39min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；39-40min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δppm3.85-3.99(m，2h)6.10-6.12(m，2h)7.45(ss，j＝4.96，4.96hz，1h)8.14(dd，j＝8.03，6.15hz，1h)8.63(dddd，j＝8.02，6.54，1.38，1.38hz，1h)8.76(dd，j＝5.02，1.13hz，2h)8.99-9.02(m，1h)9.07(m，1h)。13cnmr(101mhz，甲醇-d4)δppm36.22(1c)64.44(1c)120.87(1c)127.18(1c)136.62(1c)144.53(1c)146.39(1c)147.28(1c)157.83(2c)162.22(1c)169.56(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值244.11984，实测值244.39。实例9：标记18的合成1.步骤：2-[1-(噁唑-2-基甲基)吡啶-1-鎓-3-基]乙酸三氟乙酸甲酯的合成：将3-吡啶乙酸甲酯(73.6mg，0.487mmol)与2-氯甲基噁唑(62.6mg，0.533mmol)混合，并溶解在干dmf(1ml)中。所述溶液在50℃下搅拌3.5d，用meoh淬灭后停止搅拌。在真空下去除溶剂，粗品混合物经制备型hplc得到145.1mg，收率86％为褐色油状的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa；0-60min：30％h2o0.1％tfa，70％ch3cn0.1％tfa；60-64min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；64-80min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；80-83min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；83-89min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；89-90min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δppm3.74(s，3h)4.05(s，2h)6.11(s，2h)7.23(s，1h)8.03(d，j＝0.75hz，1h)8.17(dd，j＝8.03，6.15hz，1h)8.66(d，j＝8.16hz，1h)9.07(d，j＝6.15hz，1h)9.15(s，1h)。13cnmr(101mhz，甲醇-d4)δppm36.22(1c)51.71(1c)56.34(1c)127.64(1c)127.74(1c)136.73(1c)141.61(1c)143.96(1c)145.95(1c)148.13(1c)156.55(1c)169.81(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值233.09262，实测值233.36。2.步骤：[[2-[1-(噁唑-2-基甲基)吡啶-1-鎓-3-基]乙酰基]氨基]双三氟乙酸铵的合成：将2-[1-(噁唑-2-基甲基)吡啶-1-鎓-3-基]乙酸三氟乙酸甲酯(72.5mg，0.209mmol)溶于干meoh(1ml)中，并将所述混合物在0℃下搅拌。在加入水合肼(100μl，2.058mmol)后，将所述溶液在0℃下搅拌3h，并在真空下去除溶剂。然后，剩余粗品经制备型hplc纯化，得到52.7mg，收率55％为黄色油状的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa；0-40min：90％h2o0.1％tfa，10％ch3cn0.1％tfa；40-44min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；44-50min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；50-53min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；53-59min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；59-60min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，乙腈-d3)δppm3.76(s，2h)5.89(s，2h)7.20(d，j＝0.75hz，1h)7.93(d，j＝0.88hz，1h)8.04(dd，j＝8.09，6.21hz，1h)8.55(dd，j＝8.28，1.38hz，1h)8.77(dd，j＝6.24，1.21hz，1h)8.96(s，1h)。13cnmr(101mhz，乙腈-d3)δppm36.49(1c)56.66(1c)127.85(1c)128.01(1c)137.73(1c)141.66(1c)143.54(1c)145.53(1c)147.91(1c)156.09(1c)167.63(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值233.10385，实测值232.70。实例10：标记17的合成1.步骤：2-[1-(苯并三唑-1-基甲基)吡啶-1-鎓-3-基]乙酸三氟乙酸甲酯的合成：将3-吡啶乙酸甲酯(81.6mg，0.540mmol)与1-(氯甲基)-1h-苯并三唑(104.8mg，0.625mmol)混合，并溶解在干dmf(1ml)中。所述溶液在50℃下搅拌3.5d，用meoh淬灭后停止搅拌。在真空下去除溶剂，粗品混合物经制备型hplc得到139.9mg，收率65％为淡黄色油状的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa；0-60min：50％h2o0.1％tfa，50％ch3cn0.1％tfa；60-64min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；64-80min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；80-83min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；83-89min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；89-90min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，甲醇-d4)δppm3.70(s，3h)4.04(s，2h)7.52(dd，j＝7.68，7.68hz，1h)7.59(s，2h)7.70(dd，j＝7.73，7.73hz，1h)8.04-8.08(m，2h)8.16(dd，j＝7.97，6.34hz，1h)8.64(d，j＝8.03hz，1h)9.22(d，j＝6.15hz，1h)9.33(s，1h)。13cnmr(101mhz，甲醇-d4)δppm36.17(1c)51.69(1c)68.18(1c)109.40(1c)119.65(1c)125.31(1c)128.08(1c)129.39(1c)132.60(1c)137.13(1c)142.57(1c)144.66(1c)145.87(1c)149.18(1c)169.75(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值283.11950，实测值283.41。2.步骤：[[2-[1-(苯并三唑-1-基甲基)吡啶-1-鎓-3-基]乙酰基]氨基]双三氟乙酸铵的合成：将2-[1-(苯并三唑-1-基甲基)吡啶-1-鎓-3-基]乙酸三氟乙酸甲酯(70.0mg，0.177mmol)溶于干meoh(1ml)中，并将所述混合物在0℃下搅拌。在加入水合肼(85μl，1.749mmol)后，将所述溶液在0℃下搅拌3h，并在真空下去除溶剂。然后，剩余粗品经制备型hplc纯化，得到7.0mg，收率8％为无色固体的所期望产物。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa；0-40min：90％h2o0.1％tfa，10％ch3cn0.1％tfa；40-44min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；44-50min：2％h2o0.1％tfa；98％ch3cn0.1％tfa；50-53min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；53-59min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；59-60min：60％h2o0.1％tfa；40％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，乙腈-d3)δppm3.71(s，2h)7.28(s，2h)7.54(ddd，j＝8.28，7.15，1.00hz，1h)7.72(ddd，j＝8.31，7.12，1.00hz，1h)7.97(dd，j＝8.41，0.88hz，1h)8.04(dd，j＝8.16，6.15hz，1h)8.14(dd，j＝8.41，0.94hz，1h)8.52(d，j＝8.16hz，1h)8.91(d，j＝6.15hz，1h)9.03(s，1h)。13cnmr(101mhz，乙腈-d3)δppm36.37(1c)68.38(1c)109.78(1c)120.13(1c)125.34(1c)128.22(1c)129.42(1c)132.89(1c)137.94(1c)142.30(1c)144.04(1c)146.07(1c)148.98(1c)167.53(1c)。实例11：使用标记1、2、8、13和14进行睾酮的衍生化处理在甲醇中制备500ng/ml的睾酮溶液(s1)。与含有过量衍生化试剂(标记1、2、8、13和14)中任一种的溶液(s1)相比，加入甲醇(摩尔比＞1000)稀释的溶液(s2)，并用冰乙酸(20％v/v)酸化溶液。将所述溶液s1和s2混合后产生溶液s3，在65℃下保温2h，然后在室温下保温12h。12h后，用甲醇稀释溶液s3，根据睾酮的分子质量给出五个独立的浓缩水平，分别为1eq睾酮；1/20eq睾酮；1/40eq睾酮；1/100eq睾酮和1/200eq睾酮。选择1eq仍在检测器的线性范围内，1/200eq睾酮在所用仪器的检测限以下。例如，watersquattromicro系统采用了以下浓度(100ng/ml；5ng/ml；2.5ng/ml；1ng/ml；500pg/ml)。用溶液s2制备0ng/ml的空白溶液。在所述分析物分子衍生化后，获得的衍生物异构体，往往会产生多个峰。需要量化各自的性质来解决这些异构体的色谱行为问题。例如，图5描述了在5％的绝对峰高下应用某种色谱方法的信号随时间的分布。参数“分裂”描述了色谱系统分离衍生化反应产生所述分析物分子异构体的能力。如果使用反相色谱材料进行分离，在异构体峰的重心测量的保留时间可以描述由此所得的衍生物的极性。面积a1和a2以信号计数*min来测量，并分别以各自的比例报告所产生的衍生异构体。如果峰a1和a2的比例为50/50，则生成的异构体数量相同。如果所述标记影响了该比例不等于50/50，则会主要产生一种异构体。因此，信号强度分布不均，并因此提高信号高度以对抗未受到影响的背景噪声。对于每一种标记物质，经液相色谱分离后，用电喷雾电离质谱分析已测定其各自的睾酮衍生物，并且已执行碰撞能量为15v、20v、25v、30v、35v和40v时的不同裂解扫描。分子离子峰和最丰富的碎片离子峰(中性丢失)的质量信号已用于裂解优化。如果涉及到中性丢失单元带电分子的信号增益，则裂解能量是最重要的调谐参数之一。裂解能量至关重要，因为在源和进一步的离子路径条件下，分子需要不碎裂。所述中性丢失片段的裂解只应发生在碰撞池(及或相关装置)中，形成一定的目标碎片。如果对所述中性丢失碎片的裂解需要很高的碰撞能量，还会出现其他多余的导致中性丢失裂解路径的信号强度丢失的裂解路径。因此，要获得最佳的裂解行为，所述碰撞能量不应过小，也不应过大。由各自的碰撞能量计算的面积中的最大值已用于进一步的检测限量化方法。对于每一种标记物质，各自的睾酮衍生物通过在液相色谱法下注射到质谱仪已完成其在三重四极杆质谱仪上的调谐。所述调谐参数为碰撞能量，它可在五次独立碰撞能量实验中生成各色谱峰的最高信号。色谱和ms参数·极性es ·校准静态2·毛细管电压(kv)3.003.00·锥孔电压(v)50.0053.36·提取器电压(v)3.003.54·rf透镜电压(v)0.20.2·源温度(℃)140138·脱溶剂温度(℃)350348·锥孔气流速(l/hr)5049·脱溶剂气流速(l/hr)650646·lm1分辨率5.0·hm1分辨率15.0·离子能量11.0·入口50-65·碰撞2-15·出口50-65·lm2分辨率5.0·hm2分辨率15.0·离子能量21.0·倍增器(v)650-647·注射泵流速(ul/min)40.0·气室皮拉尼压力(mbar)1.87e-4·仪器参数-功能2：·极性es ·校准静态2·毛细管电压(kv)3.003.00·锥孔电压(v)50.0053.36·提取器电压(v)3.003.54·rf透镜电压(v)0.20.2·源温度(℃)140138·脱溶剂温度(℃)350348·锥孔气流速(l/hr)5049·脱溶剂气流速(l/hr)650646·lm1分辨率5.0·hm1分辨率15.0·离子能量11.0·入口50-65·碰撞2-15·出口50-65·lm2分辨率5.0·hm2分辨率15.0·离子能量21.0·倍增器(v)650-647·注射泵流速(ul/min)40.0·气室皮拉尼压力(mbar)1.87e-4·仪器参数-功能3：·极性es ·校准静态2·毛细管电压(kv)3.003.00·锥孔电压(v)50.0053.36·提取器电压(v)3.003.54·rf透镜电压(v)0.20.2·源温度(℃)140138·脱溶剂温度(℃)350348·锥孔气流速(l/hr)5049·脱溶剂气流速(l/hr)650646·lm1分辨率5.0·hm1分辨率15.0·离子能量11.0·入口50-65·碰撞2-15·出口50-65·lm2分辨率5.0·hm2分辨率15.0·离子能量21.0·倍增器(v)650-647·注射泵流速(ul/min)40.0·气室皮拉尼压力(mbar)1.87e-4·ace实验记录·---------------------运行方法参数----------------·watersacquitysds·运行时间：10.00min·注释：·溶剂选择a：a1·溶剂选择b：b1·低压限：0.000bar·高压限：1034.200bar·溶剂名称a：水·溶剂名称b：乙腈·开关1：无变化·开关2：开·开关3：无变化·密封垫清洗：5.0min·出图1：系统压力·出图2：％b·系统压力数据通道：是·流速数据通道：否·％a数据通道：否·％b数据通道：否·初级a压力数据通道：否·蓄能器a压力数据通道：否·初级b压力数据通道：否·蓄能器b压力数据通道：否·脱气器压力数据通道：否·【梯度表】·时间(min)流速％a％b曲线·1.初始0.40098.02.0·2.7.000.40020.080.06·3.7.100.4000.0100.06·4.8.000.4000.0100.06·5.8.100.40098.02.06·6.10.000.40098.02.06·运行事件：是·【事件表】·运行时间(min)事件动作参数·1.0.10开关2开0.00·2.3.50开关2关0.00·3.9.00开关2开0.00··waters996pda·开始波长(nm)210.00·结束波长(nm)400.00·分辨率(nm)1.2·采样速率(张谱图/秒)2.000·滤波器响应1·曝光时间(ms)自动·插入656是·采集停止时间(min)10.00·保存至磁盘：是·waters996pda模拟通道1·输出模式关·waters996pda模拟通道2·输出模式关··watersacquityautosampler·运行时间：10.00min·注释：·加载之前：已禁用·环选项：部分环，针溢出·环离线：禁用·弱清洗溶剂名称：甲醇·弱清洗体积：600ul·强清洗溶剂名称：甲醇·强清洗体积：200ul·目标柱温：40.0c·柱温报警带：20.0c·目标样品温度：10.0c·样品温度报警带：10c·满环进样溢流系数：自动·注射器抽出率：自动·针放置：自动·吸气前气隙：自动·吸气后气隙：自动·柱温数据通道：是·环境温度数据通道：是·样品温度数据通道：否·样品管理器温度数据通道：否·样品压力数据通道：否·开关1：无变化·开关2：开·开关3：无变化·开关4：无变化·出图：样品压力·样品温度报警：启用·柱温报警：启用·运行事件：是·【事件表】·运行时间(min)事件动作·1.0.10开关2开·2.3.00开关2关·3.3.10开关2切换·4.8.00开关2脉冲·5.8.10开关2关·6.10.00开关2开·针溢出冲洗：自动·样品运行进样参数进样体积(ul)-10.00使用dineniso32645中描述的程序，从线性校准曲线中获得各自的检测限。增强因子的计算基于标记的睾酮检测限(lod)与未衍生化睾酮的lod的比较。结果如下表3所示。表3：特定标记的结果当前第1页1 2 3
技术特征：1.一种式a化合物：
x-l1-z-l2-y
其中
x是反应性单元，其特别是能够与分析物分子形成共价键，
l1和l2彼此独立地为被取代或未被取代的连接基，特别是线性连接基
y是中性丢失单元，
z是带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是包含一个永久带电部分，
包括所述化合物的任何盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述反应性单元x选自由以下项组成的组：羰基反应性单元、二烯反应性单元、羟基反应性单元、氨基反应性单元、亚胺反应性单元、硫醇反应性单元、二醇反应性单元、酚反应性单元、环氧化物反应性单元、二硫化物反应性单元和叠氮化物反应性单元。
3.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述反应性单元x是羰基反应性基团，特别地，其中x选自由以下项组成的组：
(i)肼单元，特别是h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1是芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，任选地被取代，
(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2是芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，任选地被取代，
(iii)羟氨基单元，特别是h2n-o-单元，以及
(iv)二硫醇单元，特别是1，2-二硫醇或1，3-二硫醇单元。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中所述反应性单元x是硫醇反应性基团或氨基反应性基团，诸如活性酯基团，例如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、羟基苯并三唑(hobt)酯或1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯基团。
5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述中性丢失单元y在电离时释放出中性实体。
6.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述带电单元z永久带电。
7.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述连接基l1、l2彼此独立地包含1个至10个c原子，可选地包含1个或多个杂原子。
8.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述反应性单元x是羰基反应性基团，所述中性丢失单元y是5元杂环部分，所述带电单元z包含一个永久带正电的部分
9.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述反应性单元x是h2n-nh-，所述中性丢失单元y是三唑或四唑，并且所述带电单元z包括哌啶单元。
10.一种组合物，其包含根据权利要求1-9中任一项所述的化合物。
11.一种试剂盒，其包含根据权利要求1-9中任一项所述的化合物或根据权利要求10所述的组合物。
12.一种共价加合物，其包含彼此共价连接的分析物分子与根据权利要求1-9中任一项所述的化合物，特别地，其中所述共价加合物通过所述分析物分子与根据权利要求1至9中任一项所述的化合物的化学反应而形成。
13.式a化合物：
其中
x-l1-z-l2-y
x是反应性单元，其特别是能够与分析物分子形成共价键，
l1和l2彼此独立地为被取代或未被取代的连接基，特别是线性连接基，
y是中性丢失单元，
z是带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是包含一个永久带电部分，
包括所述化合物的任何盐，
或包含至少一种式a化合物的组合物或试剂盒
用于分析物分子的质谱测定中的用途，其中所述质谱测定特别地包括串联质谱测定，更特别地在三重四极杆装置中。
14.一种用于质谱测定分析物分子的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)使所述分析物分子与根据权利要求1-9中任一项所定义的式a化合物反应，从而形成所述分析物分子与所述式a化合物的共价加合物，以及
(b)对来自步骤(a)的所述加合物进行质谱分析，
优选地，其中所述质谱分析步骤(b)包括：
(i)使所述加合物的离子进入质谱分析的第一级，从而根据其质荷(m/z)比对所述加合物的离子进行表征，
(ii)使所述加合物离子裂解，从而释放出第一中性实体，特别是低分子量中性实体，并且生成所述加合物的子离子，其中所述加合物的子离子在其m/z比上不同于所述加合物离子，以及
(iii)使所述加合物的子离子进入质谱分析的第二级，从而根据所述加合物的子离子的m/z比对所述加合物的子离子进行表征，并且/或者
其中(ii)可进一步包括所述加合物离子的另一种裂解，从而释放出不同于所述第一中性实体的第二中性实体，并且生成所述加合物的第二子离子，并且
其中(iii)可以进一步包括使所述加合物的第一子离子和第二子离子进入质谱分析的第二级，从而根据所述加合物的第一子离子和第二子离子的m/z比对所述加合物的第一子离子和第二子离子进行表征。
技术总结本发明涉及适用于质谱分析的试剂以及使用所述试剂对分析物分子进行质谱测定的方法。
技术研发人员：S·贝赫尔;A-S·盖尔曼;D·海因德尔;H-P·约塞尔;U·科博尔德;A·莱南巴赫;S·F·洛伊布尔;J·米利克;N·皮尔克尔;G·普伦西佩;M·雷姆普特;C·赛德尔
受保护的技术使用者：豪夫迈·罗氏有限公司
技术研发日：2019.07.23
技术公布日：2021.03.12
