本发明涉及适用于质谱分析的试剂以及使用所述试剂对分析物分子进行质谱测定的方法。
背景技术：
：质谱(ms)是一种在小分子至大分子化学物质的定性和定量分析中广泛使用的技术。通常，该方法的灵敏度和特异性非常高，甚至适用于分析复杂的生物样品(例如环境或临床样品)。但是，对于多种分析物，尤其是分析复杂生物基质诸如血清中的分析物时，测量灵敏度仍然是一个问题。ms通常与色谱技术(尤其是气相色谱和液相色谱诸如hplc)组合使用。其中目标分析分子经过色谱分离，然后单独进行质谱分析(higashi等人(2016)j.ofpharmaceuticalandbiomedicalanalysis，第130卷，第181-190页)。但是，仍然需要提高ms分析方法的灵敏度，尤其是在分析丰度低或只有少量材料(诸如活检组织)的分析物时。在本领域中，已知多种旨在提高这些分析物的测量灵敏度的衍生化试剂。其中，试剂包含组合在单个功能单元中的带电单元和中性丢失单元(例如，wo2011/091436)。包含单独单元的其他试剂在结构上相对较大，影响样品制备和ms测量的一般工作流程(rahimoff等人(2017)j.am.chem.soc.139(30)，第10359-10364页)。已知的衍生化试剂为例如cookson型试剂、amplifexdiene、amplifexketo、girardt、girardp。所有这些试剂均存在缺点，其原因在于通常标记效率不足、偶联化学反应生成结构异构体、离子化效率不佳、偶联后的色谱分离不佳、许多裂解途径引起裂解行为不佳以及需要高碰撞能量。因此，本领域中迫切需要能够灵敏地检测复杂生物基质中的分析物并且表现对ms测量工作流程无不利影响的化学结构的衍生化试剂。这在随机访问的高通量ms设置中尤为重要，其中必须在短时间内测量多种表现不同化学性质的分析物。本发明涉及一种新型试剂，其可以灵敏地测定生物样品中的分析物分子诸如类固醇、蛋白质及其他类型的分析物。该试剂采用模块化设计，可针对某些分析物测量中产生的特定需求或特定的工作流程进行个性化调整。技术实现要素：在第一方面，本发明涉及式a的化合物：其中x为反应基团，其能够与分析物分子形成共价键，l1为支化连接基，特别是三官能连接基，y为中性丢失单元，z为带电单元，其包含至少一个永久带电部分，包括所述化合物的任何盐。在第二方面，本发明涉及一种组合物，该组合物包含本发明的第一方面的化合物。在第三方面，本发明涉及一种试剂盒，该试剂盒包含本发明的第一方面的化合物或本发明的第二方面的组合物。在第四方面，本发明涉及一种共价加合物，该共价加合物包含分析物分子以及本发明的第一方面的化合物，特别是通过分析物分子与本发明的第一方面的化合物的化学反应形成的共价加合物。在第五方面，本发明涉及本发明第一方面的化合物或本发明第二方面的组合物或本发明第三方面的试剂盒在分析物分子的质谱测定中的用途。在第六方面，本发明涉及一种用于质谱测定分析物分子的方法，该方法包括以下步骤：(a)使分析物分子与本发明的第一方面的化合物反应，从而形成分析物分子与式a的化合物的共价加合物；以及(b)对步骤(a)中的加合物进行质谱分析。附图说明图1：标记物1-睾酮衍生物：(a)标记物1-睾酮衍生物的ms裂解：四唑基团的n2(δ28da)中性丢失；(b)标记物1-睾酮衍生物在不同碰撞能量下的前体离子(左侧轴，黑色条)和产物离子(右侧轴，灰色条)的峰面积；(c)标记物1-睾酮在30v的碰撞能量下的ms质谱图。前体离子m/z716.4305，产物离子m/z688.4276。图2：与其他试剂的比较：(a)0.1μg/ml的标记物1-睾酮、试剂a-睾酮和无标记的13c3-睾酮的最大强度的产物离子的峰面积；(b)0.1μg/ml的标记物1-睾酮、reagenta-睾酮、amplifexketo-睾酮、girardp-睾酮和无标记的13c3-睾酮的最高强度的前体离子的峰面积。图3：标记物2-睾酮衍生物：(a)标记物2-睾酮衍生物的ms裂解：四唑基团的n2(δ28da)中性丢失；(b)标记物2-睾酮衍生物在不同碰撞能量下的前体离子(左侧轴，黑色条)和产物离子(右侧轴，灰色条)的峰面积；(c)标记物2-睾酮在35v的碰撞能量下的ms质谱图。前体离子m/z684.4454，产物离子m/z656.4384图4：确定衍生化试剂标记物16、标记物17和标记物18相比于未衍生化的睾酮和amplifex衍生化睾酮的增强因子的工作流程的示意图图5：峰“分裂”示意图：描述了色谱系统分离由分析物分子的衍生化反应得到的不同异构体的能力具体实施方式在下文详细描述本发明之前，应当理解，本发明不限于本文所述的特定方法、方案和试剂，因为这些方法、方案和试剂可以变化。还应当理解，本文所用的术语仅出于描述特定实施例的目的，并非旨在限制本发明的范围，本发明的范围仅受所附权利要求的限制。除非另外指明，本文所用的所有科学技术术语具有本领域的普通技术人员通常理解的相同意义。在本说明书全文中引用了若干文档。无论在上文还是在下文中，本文所引用的每篇文档(包括所有专利、专利申请、科学出版物、制造商说明书、说明等)的全部内容均以引用方式并入本文。如果此类并入的参考文献的定义或教导内容与本说明书中引用的定义或教导内容之间发生冲突，则以本说明书的文本为准。下面将描述本发明的要素。这些要素与具体实施例一起列出，但是，应该理解，它们可通过任何方式和任何数量组合以形成其他实施例。本文所述的各种实例和优选实施例不应解释为将本发明限制为仅明确描述的实施例。本说明书应理解为支持并包含将明确描述的实施例与任意数量的所公开和/或优选的要素相组合的实施例。此外，除非上下文中另有说明，否则本申请中所描述的所有要素的任意排列和组合均应视为由本申请的说明书公开。定义词语“包括”以及诸如“包含”和“含有”的变体应被理解为暗示包括所陈述的整数或步骤或整数或步骤组，但不排除任何其他整数或步骤或整数或步骤组。如在本说明书和所附权利要求中所用，单数形式“一个”、“一种”、“该”和“所述”包括复数指代物，除非上下文另外明确规定。百分比、浓度、量及其他数值数据均可能在本文中以“范围”格式表示或呈现。应当理解，此类范围格式仅出于方便和简洁而使用，因此应灵活地解释为不仅包括明确列举为范围限值的数值，而且包括该范围所涵盖的所有单独的数值或子范围，就如同明确列举出每个数值和子范围一样。作为示例，数值范围“4％至20％”应解释为不仅包括明确列举出的4％至20％的值，而且包括所示范围内的单个值和子范围。因此，该数值范围内包括单个值诸如4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％……18％、19％、20％以及子范围，例如4-10％、5-15％、10-20％等。同一原则适用于列举最小值或最大值的范围。此外，无论所述范围或特征的广度如何，均适用此类解释。当与数值结合使用时，术语“约”意指涵盖具有比所示数值小5％的下限以及比所示数值大5％的上限的范围内的数值。术语“质谱”(“massspec”或“ms”)涉及用于根据化合物的质量对其进行鉴定的分析技术。ms是根据离子的质荷比或“m/z”对离子进行过滤、检测和测量的方法。ms技术通常包括：(1)电离化合物以形成带电荷的化合物；以及(2)检测带电荷的化合物的分子量，并且计算质荷比。化合物可通过任何合适的方式电离和检测。“质谱仪”通常包括离子发生器和离子检测器。通常，一个或多个目标分子发生电离，然后将这些离子引入质谱仪中，由于磁场和电场的组合，这些离子沿空间中的一条路径传输，该路径取决于离子的质量(m)和电荷(z)。术语“电离”或“离子化”是指生成分析物离子的过程，该分析物离子具有等于一个或多个电子单位的净电荷。负离子是具有一个或多个电子单位的净负电荷的离子，而正离子是具有一个或多个电子单位的净正电荷的离子。ms方法既可以在生成并且检测负离子的“负离子模式”下执行，也可以在生成并且检测正离子的“正离子模式”下执行。“串联质谱”或“ms/ms”涉及多个质谱选择步骤，其中分析物裂解发生在两级之间。在串联质谱仪中，离子在离子源中形成，并且在第一级质谱(ms1)中按质荷比将其分离。选择具有特定质荷比的离子(前体离子或母离子)，并且通过碰撞诱导解离、离子-分子反应或光解离形成碎片离子(或子离子)。然后分离所得离子，并且在第二级质谱(ms2)中进行检测。ms中的大多数样品工作流程进一步包括样品制备和/或富集步骤，其中例如使用例如气相色谱法或液相色谱法将一种或多种目标分析物从基质中分离出来。通常，在质谱测量中执行以下三个步骤：1.电离包含目标分析物的样品，通常通过与阳离子形成加合物，经常通过质子化为阳离子。离子源包括但不限于电喷雾电离(esi)和大气压化学电离(apci)。2.离子根据其质量和电荷进行分类和分离。可使用高场不对称波形离子迁移谱(faims)作为离子过滤器。3.然后，在例如多反应模式(mrm)下检测分离出的离子，并且将结果显示在图表上。术语“电喷雾电离”或“esi”是指使溶液穿过短长度的毛细管的方法，其中向毛细管的末端施加高的正电势或负电势。到达毛细管末端的溶液蒸发(雾化)为溶剂蒸气中非常小的溶液液滴的喷射流或喷雾。这些微滴雾流过蒸发室，该蒸发室被稍微加热以防止冷凝并且蒸发溶剂。随着液滴变小，表面电荷密度增加，直至同类电荷之间的自然排斥导致离子以及中性分子被释放。术语“大气压化学电离”或“apci”是指类似于esi的质谱法；但是，apci通过离子-分子反应产生离子，这些反应在大气压下发生在等离子体内。等离子体通过喷雾毛细管和反电极之间的放电得以保持。然后，通常使用一组差分泵送的截取器级将离子提取到质量分析器中。可使用干燥且经过预热的ni气体逆流来改善溶剂的去除。在分析极性较小的实体时，apci中的气相电离比esi更有效。“多反应模式”或“mrm”是ms质谱仪的一种检测模式，其中选择性地检测前体离子和一种或多种碎片离子。“串联质谱”或“ms/ms”涉及多个质谱选择步骤，其中分析物裂解发生在两级之间。在串联质谱仪中，离子在离子源中形成，并且在第一级质谱(ms1)中按质荷比将其分离。选择具有特定质荷比的离子(前体离子或母离子)，并且通过碰撞诱导解离、离子-分子反应或光解离形成碎片离子(或子离子)。然后分离所得离子，并且在第二级质谱(ms2)中进行检测。由于质谱仪分离并且检测质量略有不同的离子，因此可轻松区分给定元素的不同同位素。因此，质谱是准确质量测定和表征包括但不限于低分子量分析物、肽、多肽或蛋白质等分析物的重要方法。其应用包括鉴定蛋白质及其翻译后修饰、解析蛋白质复合物、其亚基和功能相互作用以及蛋白质组学中蛋白质的全面测量。通常无需事先了解氨基酸序列，即可通过质谱法对肽或蛋白质进行从头测序。质谱测定可与其他分析方法组合使用，这些方法包括色谱法诸如气相色谱(gc)、液相色谱(lc)(特别是hplc)和/或基于离子迁移的分离技术。在本公开的上下文中，术语“分析物”、“分析物分子”或“一种或多种目标分析物”可互换使用，是指要通过质谱进行分析的化学物质。适合通过质谱进行分析的化学物质(即分析物)可为活生物体中存在的任何种类的分子，其中包括但不限于核酸(例如，dna、mrna、mirna、rrna等)、氨基酸、肽、蛋白质(例如，细胞表面受体、胞质蛋白等)、代谢物或激素(例如，睾酮、雌激素、雌二醇等)、脂肪酸、脂质、碳水化合物、类固醇、酮类固醇、开环甾类化合物(例如维生素d)、特征在于另一种分子经过特定修饰的分子(例如，蛋白质上的糖部分或磷酰基残基、基因组dna上的甲基残基)或已被生物体内化的物质(例如，治疗药物、滥用药物、毒素等)或此类物质的代谢物。此类分析物可用作生物标志物。在本发明的上下文中，术语“生物标志物”是指生物系统内的一种物质，其用作所述系统的生物状态的指示物。术语“检测限”或“lod”是指生物分析程序能够可靠地区分分析物与背景噪声的分析物的最低浓度。术语“定量限”、“量化限”或“loq”是指样品中能够以可接受的精密度和准确度(相对标准偏差(rsd％)为20％并且准确度为80％至120％)定量测定的分析物的最低量。分析物可存在于目标样品中，例如生物或临床样品中。术语“样品”或“目标样品”在本文中可互换使用，是指组织、器官或个体的一部分或一块，其通常小于此类组织、器官或个体，旨在代表整个组织、器官或个体。样品经过分析，可提供有关器官或个体的组织状态或健康状况或疾病状态的信息。样品的实例包括但不限于：流体样品，诸如血液、血清、血浆、滑液、脊髓液、尿液、唾液和淋巴液；或固体样品，诸如干血斑和组织提取物。样品的其他实例为细胞培养物或组织培养物。在本公开的上下文中，样品可源自“个体”或“受试者”。通常，受试者为哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如牛、绵羊、猫、犬和马)、灵长类动物(例如人和非人灵长类动物，诸如猴)、兔以及啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。在通过质谱进行分析之前，可按照针对特定样品和/或分析物的方式对样品进行预处理。在本公开的上下文中，术语“预处理”是指通过质谱对期望的分析物进行后续分析所需的任何措施。预处理措施通常包括但不限于洗脱固体样品(例如，洗脱干血斑)、将溶血试剂(hr)加入全血样品中以及将酶试剂加入尿样中。另外，添加内标(istd)也被视为样品的预处理。术语“溶血试剂(hr)”是指裂解样品中存在的细胞的试剂，在本发明的上下文中，溶血试剂特别是指裂解血样中存在的细胞(包括但不限于存在于全血样品中的红细胞)的试剂。一种众所周知的溶血试剂是水(h2o)。溶血试剂的其他实例包括但不限于去离子水、具有高渗透压的液体(例如8m尿素)、离子液体和不同的洗涤剂。通常，内标(istd)是一种已知量的物质，其在目标分析物经过质谱检测工作流程(即，包括任何预处理、富集和实际检测步骤)时表现出与目标分析物相似的特性。尽管istd表现与目标分析物类似的特性，但是仍然与目标分析物存在明显的区别。例如，在色谱分离诸如气相色谱或液相色谱过程中，istd的保留时间与样品中目标分析物的保留时间大致相同。因此，分析物和istd同时进入质谱仪。但是，istd显示分子量不同于样品中的目标分析物。这使得可通过来自istd的离子和来自分析物的离子的不同的质荷比(m/z)对其进行质谱区分。两者均发生裂解，并且产生子离子。这些子离子可通过其质荷比彼此分开并且与其相应的母离子分开。因此，可对istd和分析物的信号进行单独的测定和定量。由于istd以已知的量添加，因此样品中分析物的信号强度可归因于分析物的具体定量结果。因此，添加istd可对检测的分析物的量进行相对比较，并且能够在样品中存在的一种或多种分析物到达质谱仪时明确鉴定并且定量这些目标分析物。通常但并非必须，istd为目标分析物的同位素标记的变体(包含例如2h、13c或15n等标记)。除预处理以外，样品还可经过一个或多个富集步骤处理。在本公开的上下文中，术语“第一富集过程”或“第一富集工作流程”是指发生在样品预处理之后的富集过程，其提供相对于初始样品包含富集的分析物的样品。第一富集工作流程可包括化学沉淀(例如，使用乙腈)或使用固相。合适的固相包括但不限于固相萃取(spe)盒和珠粒。珠粒可为非磁性珠、磁珠或顺磁性珠。珠粒可以经差异性涂覆以具有对于目标分析物的特异性。涂层可根据预期用途(即预期捕获分子)而有所不同。本领域的技术人员熟知适用于特定分析物的涂层。珠粒可由各种不同的材料制成。珠粒可具有各种尺寸，并且包括带孔或不带孔的表面。在本公开的上下文中，术语“第二富集过程”或“第二富集工作流程”是指发生在样品预处理和第一富集过程之后的富集过程，其提供相对于初始样品和经过第一富集过程处理的样品包含富集的分析物的样品。术语“色谱”是指一种过程，其中由液体或气体携带的化合混合物在固定相液体或固相周围或上方流动时由于化学实体的分布不同而分离为各种组分。术语“液相色谱”或“lc”是指当流体均匀渗透通过细粒物质的柱或通过毛细管通道时选择性阻滞流体溶液中的一种或多种组分的过程。该阻滞是由于当流体相对于一种或多种固定相运动时，混合物的组分分布在一种或多种固定相和自由流体(即流动相)之间而导致的。固定相的极性高于流动相的方法(例如，以甲苯作为流动相，以硅胶作为固定相)称为正相液相色谱(nplc)，固定相的极性低于流动相的方法(例如，以水-甲醇混合物作为流动相，以c18(十八烷基甲硅烷基)作为固定相)称为反相液相色谱(rplc)。“高效液相色谱”或“hplc”是指一种液相色谱法，其中通过推动流动相在压力下通过固定相(通常为致密装填的柱)来提高分离度。通常，柱填充有固定相，该固定相由不规则颗粒或球形颗粒、多孔整体层或多孔膜组成。过去，hplc根据流动相和固定相的极性分为两个不同的亚类。其中固定相的极性高于流动相的方法(例如，以甲苯作为流动相，以硅胶作为固定相)称为正相液相色谱法(nplc)，反之(例如，以水-甲醇混合物作为流动相，以c18(十八烷基甲硅烷基)作为固定相)则称为反相液相色谱法(rplc)。微流lc(microlc)是指使用具有窄内柱径(通常小于1mm，例如约0.5mm)柱的hplc方法。“超高效液相色谱”或“uhplc”指的是使用120mpa(17,405lbf/in2)或约1200个大气压的hplc方法。快速lc是指使用具有上述内径、长度小于2cm(例如为1cm)的柱并且应用如上所述的流速和如上所述的压力(microlc和uhplc)的lc方法。分析时间短的快速lc方案包括使用单个分析柱的捕集/洗涤/洗脱步骤，可在非常短的时间内(小于1min)内完成液相色谱分析。其他众所周知的液相色谱模式包括亲水作用色谱(hilic)、体积排阻lc、离子交换lc和亲和lc。lc分离可为单通道lc或包括多个平行布置的lc通道的多通道lc。如本领域的技术人员所熟知的，在lc中，分析物可根据其极性或logp值、大小或亲和力得到分离。在本发明的上下文中，术语“化合物”是指具有特定化学结构的化学物质。所述化合物可包含一个或多个功能单元。每个单元可实现不同的功能，或者两个或更多个功能单元可实现相同的功能。功能单元包括但不限于反应性单元、带电单元和中性丢失单元。术语“中性丢失单元”是指能够释放不带电荷的实体的单元，即能够释放中性实体的单元。通常，中性实体包括单个原子或多个原子。中性丢失单元可以为中性、带正电荷或带负电荷。中性丢失单元y能够在ms条件下(例如在碰撞诱导解离(cid)时，例如在三重四极杆ms中)发生裂解，从而释放出至少一个中性实体。释放出中性实体后，其余中性丢失单元保持其原始电荷。因此，如果中性丢失单元不带电荷，则在中性实体的丢失后仍然保持中性。如果中性丢失单元带正电荷，则在中性实体的丢失后仍然带正电荷。如果中性丢失单元带负电荷，则在中性实体的丢失后仍然带负电荷。通常但并非必须，释放出一个中性实体。但是，也可释放出多于一个中性实体。这可能发生在单个裂解事件(即同时释放两个或更多个中性实体)或两个或更多个相继裂解事件中(首先释放一个中性实体，随后释放一个或多个其他中性实体)。术语“裂解”是指单个分子解离为两个或更多个单独的分子。如本文所用，术语“裂解”是指特定的裂解事件，其中明确定义了发生裂解事件的母分子中的断裂点，并且其中很好地表征了由裂解事件产生的两个或更多个子分子。本领域的技术人员熟知如何确定母分子的断裂点以及两个或更多个所得子体分子。所得子分子可保持稳定，或在随后的裂解事件中解离。例如，如果发生裂解的母分子包含三唑或四唑单元，则本领域的技术人员将能够基于分子的整体结构确定三唑或四唑单元裂解以释放出n2实体，即所得子分子将是n2分子以及缺少n2的母分子(仍然包含三唑或四唑单元的其余部分)的位置。裂解可通过碰撞诱导解离(cid)、电子捕获解离(ecd)、电子转移解离(etd)、负电子转移解离(netd)、电子分离解离(edd)、光解离(特别是红外多光子解离(irmpd)和黑体红外辐射解离(bird))、表面诱导解离(sid)、高能c形阱解离(hcd)、电荷远程裂解发生。术语“反应性单元”是指能够与另一分子反应的单元，即该单元能够与另一分子(诸如目标分析物)形成共价键。通常，此类共价键由另一个分子中存在的化学基团形成。因此，在化学反应时，化合物的反应性单元与分析物分子中存在的适当的化学基团形成共价键。由于分析物分子中存在的该化学基团具有与化合物的反应性单元反应的功能，因此分析物分子中存在的该化学基团也称为分析物的“官能团”。共价键的形成在各种情况下均发生在化学反应中，其中在反应基团的原子与分析物的官能团之间形成新的共价键。本领域技术人员熟知，在反应基团与分析物的官能团之间形成共价键时，在该化学反应过程中失去原子。术语“带电单元”是指包含带电部分的化合物的单元。电荷可以是永久性的，也可以根据周围环境而改变。通常，电荷为正电荷或负电荷。如果带电单元包含至少一个永久带电部分，认为电荷不基于周围条件而改变，例如，ph值的变化并不引起永久带电单元发生变化。化合物的不同功能单元可通过连接基连接。术语“连接基”是指支化或非支化的化学结构，其通常包含取代或未取代的烷基单元，并且可可选地还包括一个或多个杂原子。连接基连接化合物内的不同功能单元。通常，非支化连接基连接一种化合物中的两个功能单元，即非支化连接基也可称为双功能连接基或线性连接基。支化连接基可连接三个、四个、五个或更多个功能单元，具体取决于所述连接基包含的分支数量。在本公开的上下文中，术语“加合物”是指化合物与分析物分子反应产生的产物。该反应导致化合物与分析物之间形成共价键。因此，术语“加合物”是指化合物与分析物分子反应形成的共价结合反应产物。“试剂盒”是包含至少一种试剂(例如，用于治疗疾病的药物或用于特异性检测本发明的生物标志物基因或蛋白质的探针)的任何制品(例如，包装或容器)。试剂盒优选以用于执行本发明方法的单元的形式进行推广、分发或出售。通常，试剂盒可进一步包括分开的承载装置以紧密地容纳一个或多个容器装置诸如小瓶、管等，特别地，每个容器装置均包含在第一方面的方法中使用的独立元件之一。试剂盒可进一步包括一个或多个其他容器，其中包含其他材料，包括但不限于缓冲液、稀释剂、过滤器、针头、注射器以及带有使用说明的包装说明书。容器上可存在标签，以指示组合物用于特定用途，并且还可以指示体内或体外使用的指南。计算机程序代码可提供于数据存储介质或设备诸如光存储介质(例如，光盘)中或直接提供于计算机或数据处理设备中。此外，试剂盒可包含如本文其他地方所述的用于校准目的的生物标志物的标准量。“包装说明书”用于指治疗产品或药物的商业包装中通常包括的说明书，其含有涉及此类治疗产品或药物的使用的有关适应症、用法、剂量、施用、禁忌症、与包装内的产品组合使用的其他治疗产品和/或警告的信息。实施例在第一方面，本发明涉及式a的化合物：其中x为反应性单元，l1为支化连接基，特别是三官能连接基，y为中性丢失单元，z为带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是包含一个永久带电部分，包括所述化合物的任何盐。在本发明的第一方面的实施例中，根据本发明所述的式a的化合物包含能够与分析物分子反应的反应性单元x。反应性单元x能够与分析物分子反应，使得在式a的化合物和分析物分子之间形成共价键。在本发明的第一方面的实施例中，反应性单元x与式a的化合物形成共价键。特别地，在式a的化合物的反应性单元x和分析物分子中存在的官能团之间形成共价键。根据待测分析物分子中存在的官能团不同，本领域的技术人员将选择适当的式a的化合物的反应性单元x。决定适合结合至目标分析物的官能团的反应性单元x处于常识范围内。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子包含选自由以下项组成的组中的官能团：羰基基团、二烯基基团、羟基基团、胺基基团、亚胺基、硫醇基、二醇基、酚基、环氧化物基团、二硫化物基团和叠氮化物基团，其中每个基团均能够与式a的化合物的反应性单元x形成共价键。此外，在本发明的范围内还设想，分析物分子中存在的官能团将首先转化为另一种基团，该基团更易于与式a的化合物的反应性单元x反应。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子选自由以下项组成的组：类固醇、酮类固醇、开环甾类化合物、氨基酸、肽、蛋白质、碳水化合物、脂肪酸、脂质、核苷、核苷酸、核酸及其他生物分子(包括小分子代谢物和辅因子以及治疗药物、滥用药物、毒素或其代谢物)。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的羰基基团，该羰基基团选自由以下项组成的组：羧酸基、醛基、酮基、掩蔽的醛基、掩蔽的酮基、酯基、酰胺基和酸酐基。在本发明的第一方面的实施例中，其中羰基基团为酰胺基，本领域的技术人员非常清楚酰胺基本身是一种稳定的基团，但其可以经水解以使酰胺基转化为羧酸基和氨基。酰胺基的水解可通过酸/碱催化的反应或通过酶促方法实现，这两种方法都是本领域的技术人员所熟知的。在本发明的第一方面的实施例中，其中羰基基团为掩蔽的醛基或掩蔽的酮基，相应的基团为半缩醛基或缩醛基，特别是环状半缩醛基或缩醛基。在本发明的第一方面的实施例中，缩醛基在与式a的化合物反应之前转化为醛基或酮基。在本发明的第一方面的实施例中，羰基基团为酮基。在本发明的第一方面的实施例中，酮基可在与式a的化合物的反应性单元反应之前转化为中间体亚胺基团。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个酮基的分析物分子为酮类固醇。在本发明的第一方面的特定实施例中，酮类固醇选自由以下项组成的组：睾酮、表睾酮、二氢睾酮(dht)、脱氧甲基睾酮(dmt)、四氢孕三烯酮(thg)、醛固酮、雌酮、4-羟基雌酮、2-甲氧基雌酮、2-羟基雌酮、16-酮雌二醇、16α-羟基雌酮、2-羟基雌酮-3-甲醚、强的松、泼尼松龙、孕烯醇酮、孕酮、dhea(脱氢表雄酮)、17-oh孕烯醇酮、17-oh孕酮、17-oh孕酮、雄酮、表雄酮和δ4雄烯二酮、11-脱氧皮质醇皮质甾酮、21-脱氧皮质醇、11-脱氧皮质酮、别孕烷醇酮和醛固酮。在本发明的第一方面的实施例中，羰基基团为羧基基团。在本发明的第一方面的实施例中，羧基基团直接与式a的化合物反应，或在与式a的化合物反应之前转化为活化的酯基。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个羧基基团的分析物分子选自由以下项组成的组：8-四氢大麻酚酸、苯甲酰芽子碱、水杨酸、2-羟基苯甲酸、加巴喷丁、普瑞巴林、丙戊酸、万古霉素、甲氨蝶呤、霉酚酸、孟鲁司特、瑞格列奈、呋喃苯胺酸、替米沙坦、吉非罗齐、双氯芬酸、布洛芬、吲哚美辛、佐美酸、伊索克酸和青霉素。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个羧基基团的分析物分子为选自由以下项组成的组中的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甘氨酸。在本发明的第一方面的实施例中，羰基基团为醛基。在本发明的第一方面的实施例中，醛基可在与式a的化合物的反应性单元反应之前转化为中间体亚胺基团。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个醛基的分析物分子选自由以下项组成的组：吡哆醛、n-乙酰基-d-葡萄糖胺、阿卡他定、链霉素、交沙霉素。在本发明的第一方面的实施例中，羰基基团为羰基酯基团。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个酯基的分析物分子选自由以下项组成的组：可卡因、海洛因、利他林、醋氯芬酸、乙酰胆碱、安西奈德、阿米洛酯、阿米洛卡因、氨苄哌替啶、阿雷地平、青蒿琥酯和哌替啶。在本发明的第一方面的实施例中，羰基基团为酸酐基。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个酸酐基的分析物分子选自由以下项组成的组：斑蝥素、琥珀酸酐、偏苯三酸酐和马来酸酐。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个二烯基团，特别是共轭二烯基团。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个二烯基团的分析物分子为开环甾类化合物。在实施例中，开环甾类化合物选自由以下项组成的组：胆钙化醇(维生素d3)、麦角钙化醇(维生素d2)、骨化二醇、骨化三醇、速固醇、光甾醇和他卡西醇。特别地，开环甾类化合物为维生素d，特别是维生素d2或d3或其衍生物。在特定实施例中，开环甾类化合物选自由以下项组成的组：维生素d2、维生素d3、25-羟基维生素d2、25-羟基维生素d3、3-表-25-羟基维生素d2、3-表-25-羟基维生素d3、1，25-二羟基维生素d2、1，25-二羟基维生素d3、24，25-二羟基维生素d2和24，25-二羟基维生素d3、维生素a、维甲酸、异维甲酸、阿利维甲酸、纳他霉素、西罗莫司、两性霉素b、制霉菌素、依维莫司、西罗莫司脂化物、非达霉素。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个羟基基团。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子包含单个羟基基团或两个羟基基团。在其中存在多于一个羟基基团的实施例中，两个羟基基团可定位为彼此相邻(1，2-二醇)，或者可相隔1、2或3个c原子(分别为1，3-二醇、1，4-二醇、1，5-二醇)。在第一方面的特定实施例中，分析物分子包含1，2-二醇基。在其中仅存在一个羟基基团的实施例中，所述分析物选自由以下项组成的组：伯醇、仲醇和叔醇。在本发明的第一方面的实施例中，其中分析物分子包含一个或多个羟基基团，该分析物选自由以下项组成的组：苄醇、薄荷醇、l-肉毒碱、吡哆醇、甲硝哒唑、单硝酸异山梨酯、愈创甘油醚、克拉维酸盐、米吉妥(migitol)、扎西他滨、异丙肾上腺素、阿昔洛韦、美索巴莫、曲马多、文拉法辛、阿托品、氯苯达诺、α-羟基阿普唑仑、α-羟基三唑仑、劳拉西泮、去甲羟基安定、替马西泮、乙基葡糖苷酸、乙基吗啡、吗啡、吗啡-3-葡糖苷酸、丁丙诺啡、可待因、二氢可待因、对羟基丙氧芬、o-去甲基曲马多、双氢奎尼丁、奎尼丁。在本发明的第一方面的实施例中，其中分析物分子包含多于一个羟基基团，该分析物选自由以下项组成的组：维生素c、葡萄糖胺、甘露醇、四氢生物喋呤、阿糖胞苷、阿扎胞苷、利巴韦林、氟尿苷、吉西他滨、链脲佐菌素、腺苷、阿糖腺苷、克拉屈滨、雌三醇、三氟胸苷、氯法拉滨、纳多洛尔、扎那米韦、乳果糖、单磷酸腺苷、碘苷、瑞加德松、林可霉素、克林霉素、卡格列净(canaglifozin)、妥布霉素、奈替米星、卡那霉素、替格瑞洛、表柔比星、多柔比星、阿贝卡星、链霉素、喹巴因(quabain)、阿米卡星、新霉素、弗氏菌丝素(framycetin)、巴龙霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、长春地辛、洋地黄毒苷、地高辛、甲泛葡胺、乙酰洋地黄毒苷、去乙酰毛花苷、氟达拉滨、氯法拉滨、吉西他滨、阿糖胞苷、卡培他滨、阿糖腺苷、三氟尿苷、碘苷和普卡霉素。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个硫醇基(包括但不限于烷基硫醇基和硫醇-芳基)。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个硫醇基的分析物分子选自由以下项组成的组：硫代扁桃酸、dl-甲巯丙脯酸、dl-塞奥芬、n-乙酰基半胱氨酸、d-青霉胺、谷胱甘肽、l-半胱氨酸、泽芬诺普利(zefenoprilat)、硫普罗宁、二巯基丙醇、琥巯酸。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个二硫化物基团。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个二硫化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：谷胱甘肽二硫化物、双硫氧吡啶、二硫化硒、双硫仑、硫辛酸、l-胱氨酸、呋喃硫胺、奥曲肽、去氨加压素、伐普肽、特利加压素、利那洛肽、培奈萨肽(peginesatide)。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个环氧化物基团。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个环氧化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：卡巴咪嗪10，11环氧化物、卡非佐米、呋喃苯胺酸环氧化物、磷霉素、司维拉姆、浅蓝菌素、东莨菪碱、噻托溴铵、甲溴东莨菪碱、依普利酮、莫匹罗星、纳他霉素、卡非佐米、醋竹桃霉素。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个酚基。在本发明的第一方面的特定实施例中，包含一个或多个酚基的分析物分子为类固醇或类固醇样化合物。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个酚基的分析物分子为类固醇或类固醇样化合物，其具有sp2杂化的a环以及在a环的3位的oh基团。在本发明的第一方面的特定实施例中，类固醇或类固醇样分析物分子选自由以下项组成的组：雌激素、雌激素样化合物、雌酮(e1)、雌二醇(e2)、17a-雌二醇、17p-雌二醇、雌三醇(e3)、16-表雌三醇、17-表雌三醇和16，17-表雌三醇和/或它们的代谢物。在实施例中，代谢物选自由以下项组成的组：雌三醇、16-表雌三醇(16-epie3)、17-表雌三醇(17-epie3)、16，17-表雌三醇(16，17-epie3)、16-酮雌二醇(16-ketoe2)、16a-羟基雌酮(16a-ohe1)、2-甲氧基雌酮(2-meoe1)、4-甲氧基雌酮(4-meoe1)、2-羟基雌酮-3-甲醚(3-meoe1)、2-甲氧基雌二醇(2-meoe2)、4-甲氧基雌二醇(4-meoe2)、2-羟基雌酮(20he1)、4-羟基雌酮(4-ohe1)、2-羟基雌二醇(2-ohe2)、雌酮(e1)、雌酮硫酸酯(e1s)、17a-雌二醇(e2a)、17p-雌二醇(e2b)、雌二醇硫酸酯(e2s)、马烯雌酮(eq)、17a-二氢马烯雌酮(eqa)、17p-二氢马烯雌酮(eqb)、马萘雌酮(eqilenin)(en)、17-二氢马萘雌酮(ena)、17β-二氢马萘雌酮(enb)、a8，9-脱氢雌酮(de1)、a8，9-脱氢雌酮硫酸酯(de1s)、δ9-四氢大麻醇、霉酚酸。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的胺基。在本发明的第一方面的实施例中，胺基为烷基胺基或芳基胺基。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个胺基的分析物选自由以下项组成的组：蛋白质和肽。在本发明的第一方面的实施例中，包含胺基的分析物分子选自由以下项组成的组：3，4-亚甲二氧安非他明、3，4-亚甲二氧基-n-乙基安非他明、3，4-亚甲二氧基甲基安非他明、安非他明、甲基安非他明、n-甲基-1，3-苯并二氧杂环戊烯基仲丁胺、7-氨基氯硝西泮、7-氨基氟硝西泮、3，4-二甲基甲卡西酮、3-氟甲卡西酮、4-甲氧基甲卡西酮、4-甲基乙卡西酮、4-甲基甲卡西酮、安非拉酮、2-甲基氨基-1-(3′，4′-亚甲二氧基苯基)丁-1-酮(butylone)、乙卡西酮(ethcathinone)、氟乙卡西酮(flephedrone)、甲卡西酮、亚甲基二氧基甲卡西酮(methylone)、亚甲基二氧吡咯戊酮、苯甲酰爱康宁、脱氢去甲氯胺酮、氯胺酮、去甲氯胺酮、美沙酮、去甲美沙酮、6-乙酰吗啡、二乙酰吗啡、吗啡、去甲氢可酮、氧可酮、羟吗啡酮、苯环己哌啶、去甲丙氧芬、阿米替林、氯米帕明、度琉平、多虑平、丙咪嗪、去甲替林、三甲丙咪嗪、芬太尼、甘氨酰二甲基苯胺(glycylxylidide)、利多卡因、去乙基利多卡因、n-乙酰基普鲁卡因酰胺、普鲁卡因酰胺、普瑞巴林、2-甲基氨基-1-(3，4-亚甲二氧基苯基)丁烷、2-氨基-1-(3，4-亚甲二氧基苯基)丁烷、去甲哌替啶、o-去甲基曲马多、曲马多、利多卡因、n-乙酰普鲁卡因胺、普鲁卡因胺、加巴喷丁、拉莫三嗪、茶碱、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、万古霉素、甲氨蝶呤、加巴喷丁、西索米星和5-甲基胞嘧啶。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子为碳水化合物或具有碳水化合物部分的物质(例如糖蛋白或核苷)。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子为单糖，特别是选自由以下项组成的组：核糖、脱氧核糖、阿拉伯糖、核酮糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖、果糖、n-乙酰基葡萄糖胺、n-乙酰基半乳糖胺、神经氨酸、n-乙酰神经氨酸等。在实施例中，分析物分子为寡糖，特别是选自由以下项组成的组：二糖、三糖、四糖、多糖。在本发明的第一方面的实施例中，二糖选自由以下项组成的组：蔗糖、麦芽糖和乳糖。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子为包含上述单糖、二糖、三糖、四糖、寡糖或多糖部分的物质。在本发明的第一方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的叠氮化物基团，该叠氮化物基团选自由以下项组成的组：烷基叠氮化物基团或芳基叠氮化物基团。在本发明的第一方面的实施例中，包含一个或多个叠氮化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：齐多夫定和叠氮西林。此类分析物分子可存在于生物或临床样品中，这些生物或临床样品为诸如体液(例如血液、血清、血浆、尿液、唾液、脊髓液等)、组织或细胞提取物等。在本发明的第一方面的实施例中，一种或多种分析物分子存在于生物或临床样品中，该生物或临床样品选自由以下项组成的组：血液、血清、血浆、尿液、唾液、脊髓液和干血斑。在本发明的第一方面的一些实施例中，分析物分子可存在于样品中，该样品为纯化或部分纯化的样品，例如纯化或部分纯化的蛋白质混合物或提取物。在本发明的第一方面的实施例中，反应性单元x选自由以下项组成的组：羰基反应性单元、二烯反应性单元、羟基反应性单元、氨基反应性单元、亚胺反应性单元、硫醇反应性单元、二醇反应性单元、酚反应性单元、环氧化物反应性单元、二硫化物反应性单元和叠氮基反应性单元。在本发明的第一方面的实施例中，反应性单元x为羰基反应性单元，其能够与具有羰基基团的任何类型的分子反应。在本发明的第一方面的实施例中，羰基反应性单元选自由以下项组成的组：羧基反应性单元、酮反应性单元、醛反应性单元、酸酐反应性单元、羰基酯反应性单元和酰亚胺反应性单元。在本发明的第一方面的实施例中，羰基反应性单元可以具有通过相邻o或n原子nh2-n/o的α-效应强化的超亲核性n原子或具有二硫醇分子。在本发明的第一方面的实施例中，羰基反应性单元选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1为芳基、含有1个或多个杂原子的芳基或者c1-4烷基(特别是c1或c2烷基)，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼单元，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2为芳基、含有1个或多个杂原子的芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(iii)羟氨基单元，例如h2n-o-单元，以及(iv)二硫醇单元，特别是1，2-二硫醇或1，3-二硫醇单元。在本发明的第一方面的实施例中，其中羰基反应性单元为羧基反应性单元，该羧基反应性单元与分析物分子中的羧基基团反应。在本发明的第一方面的实施例中，羧基反应性单元选自由以下项组成的组：重氮单元、烷基卤、胺和肼单元。在本发明的第一方面的实施例中，反应性单元x为二烯反应性单元，其能够与包含二烯基团的分析物反应。在本发明的第一方面的实施例中，二烯反应性单元选自由以下项组成的组：cookson型试剂，例如1，2，4-三唑-3，5-二酮，其能够用作亲二烯体。在本发明的第一方面的实施例中，反应性单元x为羟基反应性单元，其能够与包含羟基基团的分析物反应。在本发明的第一方面的实施例中，羟基反应性单元选自由以下项组成的组：磺酰氯、活化的羧酸酯(nhs或咪唑阴离子)和能够进行氟的亲核取代的含氟芳烃/杂芳烃(t.higashijsteroidbiochemmolbiol.2016sep；162：57-69)。在本发明的第一方面的实施例中，反应性单元x为二醇反应性单元，其与分析物分子中的二醇基反应。在本发明的第一方面的实施例中，其中反应性单元为1，2-二醇反应性单元，该1，2-二醇反应性单元包含硼酸。在另一些实施例中，二醇可氧化为相应的酮或醛，然后与酮/醛反应性单元x反应。在本发明的第一方面的实施例中，氨基反应性单元与分析物分子中的氨基反应。在本发明的第一方面的实施例中，氨基反应性单元选自由以下项组成的组：活性酯基，诸如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、五氟苯基酯、羰基咪唑酯、方酸酯、羟基苯并三唑(hobt)酯、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯和磺酰氯单元。在本发明的第一方面的实施例中，硫醇反应性单元与分析物分子中的硫醇基反应。在本发明的第一方面的实施例中，硫醇反应性单元选自由以下项组成的组：卤代乙酰基，特别地选自由以下项组成的组：br/i-ch2-c(＝o)-单元、丙烯酰胺/丙烯酸酯单元、不饱和酰亚胺单元诸如马来酰亚胺、甲基磺酰基苯基噁二唑和磺酰氯单元。在本发明的第一方面的实施例中，酚反应性单元与分析物分子上的酚基反应。在本发明的第一方面的实施例中，酚反应性单元选自由以下项组成的组：活性酯单元，诸如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、五氟苯基酯、羰基咪唑酯、方酸酯、羟基苯并三唑(hobt)酯、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯和磺酰氯单元。分析物分子中存在的酚基可通过反应(h.ban等人，j.am.chem.soc.，2010年，132(5)，第1523-1525页)或通过重氮化或者替代地通过邻位硝化并且随后还原为胺(其然后可与胺反应剂反应)与三唑二酮反应。在本发明的第一方面的实施例中，反应性单元x为环氧化物反应性单元，其能够与包含环氧化物基团的分析物反应。在本发明的第一方面的实施例中，环氧化物反应性单元选自由以下项组成的组：氨基、硫醇、通过相邻o或n原子nh2-n/o分子的α-效应强化的超亲核性n原子。在本发明的第一方面的实施例中，环氧化物反应性单元选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1为芳基、含有1个或多个杂原子的芳基或者c1-4烷基(特别是c1或c2烷基)，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼单元，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2为芳基、含有1个或多个杂原子的芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，以及(iii)羟氨基单元，例如h2n-o-单元。在本发明的第一方面的实施例中，反应性单元x为二硫化物反应性单元，其能够与包含二硫化物基团的分析物反应。在本发明的第一方面的实施例中，二硫化物反应性单元选自由以下项组成的组：硫醇。在另一些实施例中，二硫化物基团可还原为相应的硫醇基，然后与硫醇反应性单元x反应。在本发明的第一方面的实施例中，反应性单元x为叠氮基反应性单元，其与分析物分子中的叠氮基反应。在本发明的第一方面的实施例中，叠氮基反应性单元通过叠氮化物-炔烃环加成反应与叠氮基团反应。在本发明的第一方面的实施例中，叠氮基反应性单元选自由以下项组成的组：炔基(烷基或芳基)、线性炔基或环状炔基。叠氮基与炔烃之间的反应可在使用或不使用催化剂的情况下进行。在本发明的第一方面的另一些实施例中，叠氮基可还原为相应的氨基，然后与氨基反应性单元x反应。式a的化合物包含中性丢失单元y。该中性丢失单元y能够释放不带电荷的部分(中性实体)。中性丢失单元y能够裂解，即，在ms的条件下裂解，例如在碰撞诱导解离(cid)时裂解，例如在三重四极杆ms中裂解，从而释放出中性实体。失去的中性实体为单个原子或多个原子。释放出中性实体后，其余中性丢失单元y仍保持中性。通常但并非必须，释放出一个中性实体。在本发明的第一方面的特定实施例中，释放出两个中性实体。在本发明的第一方面的实施例中，中性丢失单元y在电离时释放出至少一个中性实体。中性实体为低分子量中性实体，特别是分子量在10-100da、特别是20-80da、特别是25-65da的范围内。特别地，中性实体具有100da或更小、特别是80da或更小、特别是70da或更小、特别是50da或更小、特别是30或更小的分子量。在本发明的第一方面的实施例中，中性实体选自由以下项组成的组：n2、no、no2、s2、so、so2、co、co2。在特定实施例中，中性实体为n2。在本发明的第一方面的实施例中，中性实体的丢失导致质荷比(m/z)减小-28da(在失去n2或co的情况下)、-30da(在失去no的情况下)、-44da(在失去co2的情况下)、-46da(在失去no2的情况下)、-48da(在失去so的情况下)或-64da(在失去s2或so2的情况下)。在本发明的第一方面的实施例中，释放出一个中性实体。在本发明的第一方面的实施例中，释放出两个中性实体。特别地，释放出的第二中性实体不同于释放出的第一中性实体。第二中性实体的释放与第一中性实体的释放同时发生或相继发生。特别地，第二中性实体的释放与第一中性实体的释放同时发生，即两个中性实体在单个裂解事件中同时释放。在本发明的第一方面的实施例中，中性丢失单元y包含4元、5元或6元杂环部分或由其组成，特别是包含具有至少2个彼此相邻的杂原子、特别是两个彼此相邻的n原子的4元、5元或6元杂环部分或由其组成。在本发明的第一方面的实施例中，中性丢失单元y包含三唑、四唑、四嗪、噁二唑、噻二唑部分或其氢化衍生物或由其组成。在本发明的第一方面的实施例中，中性丢失单元y包含1，2，3-三唑、1，2，4-三唑部分、1，4，5-三唑、3，4，5-三唑部分、1，2，3，4-四唑、2，3，4，5-四唑或2，3，5，6四唑部分或1，2，4，5四嗪部分或由其组成。在本发明的第一方面的实施例中，中性丢失单元y包含1，2，3-三唑或1，2，4-三唑部分或1，2，3，4-四唑部分或1，2，4，5四嗪部分或由其组成。在本发明的第一方面的实施例中，带电单元z永久带电，特别是在中性条件下，特别是在ph值为6-8的条件下。在本发明的第一方面的实施例中，带电单元z带正电荷或带负电荷，优选带正电荷。在本发明的第一方面的实施例中，带电单元z包含以下部分或由其组成：(i)至少一个带正电荷的部分；或(ii)至少一个带负电荷的部分。在本发明的第一方面的实施例中，带电单元z为带正电荷的单元。在本发明的第一方面的实施例中，带正电荷的单元z选择为使得所得式a的化合物具有10或更高的pka，更特别地具有12或更高的pka。在本发明的第一方面的实施例中，带正电荷的单元z选自由以下项组成的组：伯铵、仲铵、叔铵、季铵、伯锍、仲锍、叔锍、季锍、伯咪唑鎓、仲咪唑鎓、叔咪唑鎓、季咪唑鎓、伯吡啶鎓、仲吡啶鎓、叔吡啶鎓、季吡啶鎓、或伯鏻、仲鏻、叔鏻、季鏻。在第一方面的特定实施例中，带正电荷的部分为三甲基铵、n，n-二甲基哌啶鎓或n-烷基-奎宁环鎓。在本发明的第一方面的实施例中，带电单元z为带负电荷的单元。在本发明的第一方面的实施例中，带负电荷的单元z选择为使得所得式a的化合物具有10或更高的pkb，更特别地具有12或更高的pkb。在本发明的第一方面的实施例中，带负电荷的单元z选自由以下项组成的组：磷酸盐、硫酸盐、磺酸盐或羧基盐。在本发明的第一方面的实施例中，支化连接基l1为三官能连接基。在本发明的第一方面的实施例中，连接基l1被取代或未被取代。在本发明的第一方面的实施例中，三官能连接基l1不可质子化。在第一方面的实施例中，三官能连接基l1包含3-30个c原子，特别是5-20个c原子，特别是8-16个c原子。在实施例中，三官能连接基l1包含一个或多个杂原子，这些杂原子特别地为n、o或s。在本发明的第一方面的实施例中，三官能连接基l1包含至少4个杂原子，特别是5、6或7个杂原子，这些杂原子特别地为n和/或o。在本发明的第一方面的实施例中，三官能连接基l1包含5个杂原子，特别是3个o原子和2个n原子。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有根据式b所示的结构：其中x、y和z的定义如上文关于式a的化合物所详述，l2、l3和l4为连接基支链，其各自独立地包含c1-c10、特别是c1-c5，可选地各自独立地包含一个或多个杂原子，其中连接基支链l2、l3和l4一起形成支化连接基，特别是如上文所定义的三官能连接基l1。在本发明的第一方面的实施例中，连接基支链l2、l3和l4各自独立地为线性连接基。在本发明的第一方面的实施例中，连接基支链l2、l3和l4具有相同或不同的长度。特别地，连接基支链l2分别长于连接基支链l3和l4。在本发明的第一方面的实施例中，连接基支链l2具有c3-c6的长度。在本发明的第一方面的实施例中，连接基支链l3和l4各自具有c1-c3的长度。在本发明的第一方面的实施例中，无论每条支链的长度如何，每条连接基支链l2、l3、l4可独立地包含一个或多个杂原子。在本发明的第一方面的特定实施例中，所有三条连接基支链包含至少一个杂原子。在本发明的第一方面的实施例中，杂原子为n、s、p或o，特别是n和/或o。在本发明的第一方面的实施例中，线性支链l4包含稳定单元。在本发明的第一方面的实施例中，稳定单元防止带电单元z在裂解事件中的丢失。在本发明的第一方面的实施例中，稳定单元通过使可能形成的碳阳离子不稳定来防止带电单元z的丢失。在本发明的第一方面的实施例中，稳定单元与带电单元z相隔至少一个c原子。在本发明的第一方面的实施例中，稳定单元包含至少一个杂原子。在本发明的第一方面的实施例中，稳定单元选自由以下项组成的组：co或其等电类似物诸如so或so2。在本发明的第一方面的实施例中，连接基支链l2包含2-6个c原子和1-3个杂原子。在本发明的第一方面的实施例中，其中连接基支链l2包含7个c原子，其包含3个杂原子，特别是o原子和n原子。在本发明的第一方面的实施例中，其中连接基支链l2包含3、4、5或6个c原子，其包含2个杂原子，特别是o原子和n原子，特别是1个n原子和1个o原子。在本发明的第一方面的实施例中，其中连接基支链l2包含2个c原子，其包含1个杂原子，特别是o原子。在本发明的第一方面的实施例中，连接基支链l3包含2-10个c原子和1-3个杂原子，特别是2个杂原子，特别是1个n原子和1个o原子。在本发明的第一方面的实施例中，连接基支链l4包含2-6个c原子和1-3个杂原子，特别是1个或2个杂原子，特别是1个n原子或1个n原子和1个o原子。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为羰基反应性单元，中性丢失单元y为5元杂环单元，并且带电单元z为永久带正电荷的单元。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为二烯反应性单元，中性丢失单元y为5元杂环单元，并且带电单元z为永久带正电荷的单元。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为肼单元，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z为叔铵基。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为酰肼单元，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为叔铵基。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为肼单元，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z为哌啶单元。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为酰肼单元，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为哌啶单元。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为肼单元，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z为吡啶单元。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为酰肼单元，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为吡啶单元。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为cookson型试剂，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为叔铵基。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为cookson型试剂，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为哌啶单元。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为cookson型试剂，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为吡啶单元。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为h2n-nh-，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为叔铵基单元。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为h2n-nh-，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为哌啶单元。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为h2n-nh-，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为吡啶单元。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为h2n-o-c-，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为二甲基哌啶或奎宁环单元。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为1，2，4-三唑-3，5-二酮，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为二甲基哌啶或奎宁环部分。在本发明的第一方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，反应性单元x为h2n-nh-，中性丢失单元y为叠氮苯或1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯或甲基乙基亚砜，并且带电单元z为螺[2h-异吲哚-2，1′-吡咯烷鎓]、1，3-二氢或5-氮鎓螺[4.4]壬烷。在本发明的第一方面的实施例中，式b的化合物选自由以下项组成的组：(i)标记物1(ii)标记物2知(iii)标记物3式a或式b的化合物的其他实例如下：(iv)标记物4(v)标记物5(vi)标记物6(vii)标记物7(viii)标记物8(ix)标记物9(x)标记物10(xi)标记物11(xii)标记物12(xiii)标记物13(xiv)标记物14(xv)标记物15(xvi)标记物16(xvii)标记物17(xviii)标记物18在第二方面，本发明涉及一种组合物，该组合物包含上文关于本发明的第一方面所详细公开的式a或式b的化合物。在第三方面，本发明涉及一种试剂盒，该试剂盒包含上文关于本发明的第一方面所详细公开的式a或式b的化合物或上文所详细公开的本发明的第二方面的组合物。在第四方面，本发明涉及一种加合物，该加合物包含分析物分子以及如上文所公开的本发明的第一方面的化合物，该分析物分子与化合物彼此共价连接。在实施例中，加合物具有式a′的结构：其中t为分析物分子x′为式a的化合物的反应性单元x与分析物分子t反应所得到的部分，l1为支化连接基，特别是三官能连接基，y为中性丢失单元，z为带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是一个永久带电部分，包括所述化合物的任何盐。在本发明的第四方面的实施例中，式a′的加合物包含x′，该x′由式a的化合物的反应性单元x与分析物分子t中存在的官能团之间形成共价键所得到。根据式a的化合物的反应性单元x以及分析物分子t的官能团，本领域的技术人员完全能够确定在两者之间形成的共价键。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子包含选自由以下项组成的组中的官能团：羰基基团、二烯基基团、羟基基团、胺基基团、亚胺基、硫醇基、二醇基、酚基、环氧化物基团、二硫化物基团和叠氮化物基团，其中每个基团均能够与式a的化合物的反应性单元x形成共价键。此外，在本发明的范围内还设想，分析物分子中存在的官能团将首先转化为另一种基团，该基团更易于与式a的化合物的反应性单元x反应。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子选自由以下项组成的组：类固醇、酮类固醇、开环甾类化合物、氨基酸、肽、蛋白质、碳水化合物、脂肪酸、脂质、核苷、核苷酸、核酸及其他生物分子(包括小分子代谢物和辅因子以及治疗药物、滥用药物、毒素或其代谢物)。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的羰基基团，该羰基基团选自由以下项组成的组：羧酸基、醛基、酮基、掩蔽的醛基、掩蔽的酮基、酯基、酰胺基和酸酐基。在本发明的第四方面的实施例中，其中羰基基团为酰胺基，本领域的技术人员非常清楚酰胺基本身是一种稳定的基团，但其可以经水解以使酰胺基转化为羧酸基和氨基。酰胺基的水解可通过酸/碱催化的反应或通过酶促方法实现，这两种方法都是本领域的技术人员所熟知的。在本发明的第四方面的实施例中，其中羰基基团为掩蔽的醛基或掩蔽的酮基，相应的基团为半缩醛基或缩醛基，特别是环状半缩醛基或缩醛基。在本发明的第四方面的实施例中，缩醛基在与式a的化合物反应之前转化为醛基或酮基。在本发明的第四方面的实施例中，羰基基团为酮基。在本发明的第四方面的实施例中，酮基可在与式a的化合物的反应性单元反应之前转化为中间体亚胺基团。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个酮基的分析物分子为酮类固醇。在本发明的第四方面的特定实施例中，酮类固醇选自由以下项组成的组：睾酮、表睾酮、二氢睾酮(dht)、脱氧甲基睾酮(dmt)、四氢孕三烯酮(thg)、醛固酮、雌酮、4-羟基雌酮、2-甲氧基雌酮、2-羟基雌酮、16-酮雌二醇、16α-羟基雌酮、2-羟基雌酮-3-甲醚、强的松、泼尼松龙、孕烯醇酮、孕酮、dhea(脱氢表雄酮)、17-oh孕烯醇酮、17-oh孕酮、17-oh孕酮、雄酮、表雄酮和δ4雄烯二酮、11-脱氧皮质醇皮质甾酮、21-脱氧皮质醇、11-脱氧皮质酮、别孕烷醇酮和醛固酮。在本发明的第四方面的实施例中，羰基基团为羧基基团。在本发明的第四方面的实施例中，羧基基团直接与式a的化合物反应，或在与式a的化合物反应之前转化为活化的酯基。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个羧基基团的分析物分子选自由以下项组成的组：8-四氢大麻酚酸、苯甲酰芽子碱、水杨酸、2-羟基苯甲酸、加巴喷丁、普瑞巴林、丙戊酸、万古霉素、甲氨蝶呤、霉酚酸、孟鲁司特、瑞格列奈、呋喃苯胺酸、替米沙坦、吉非罗齐、双氯芬酸、布洛芬、吲哚美辛、佐美酸、伊索克酸和青霉素。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个羧基基团的分析物分子为选自由以下项组成的组中的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甘氨酸。在本发明的第四方面的实施例中，羰基基团为醛基。在本发明的第四方面的实施例中，醛基可在与式a的化合物的反应性单元反应之前转化为中间体亚胺基团。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个醛基的分析物分子选自由以下项组成的组：吡哆醛、n-乙酰基-d-葡萄糖胺、阿卡他定、链霉素、交沙霉素。在本发明的第四方面的实施例中，羰基基团为羰基酯基团。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个酯基的分析物分子选自由以下项组成的组：可卡因、海洛因、利他林、醋氯芬酸、乙酰胆碱、安西奈德、阿米洛酯、阿米洛卡因、氨苄哌替啶、阿雷地平、青蒿琥酯和哌替啶。在本发明的第四方面的实施例中，羰基基团为酸酐基。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个酸酐基的分析物分子选自由以下项组成的组：斑蝥素、琥珀酸酐、偏苯三酸酐和马来酸酐。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个二烯基团，特别是共轭二烯基团。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个二烯基团的分析物分子为开环甾类化合物。在实施例中，开环甾类化合物选自由以下项组成的组：胆钙化醇(维生素d3)、麦角钙化醇(维生素d2)、骨化二醇、骨化三醇、速固醇、光甾醇和他卡西醇。特别地，开环甾类化合物为维生素d，特别是维生素d2或d3或其衍生物。在特定实施例中，开环甾类化合物选自由以下项组成的组：维生素d2、维生素d3、25-羟基维生素d2、25-羟基维生素d3、3-表-25-羟基维生素d2、3-表-25-羟基维生素d3、1，25-二羟基维生素d2、1，25-二羟基维生素d3、24，25-二羟基维生素d2和24，25-二羟基维生素d3、维生素a、维甲酸、异维甲酸、阿利维甲酸、纳他霉素、西罗莫司、两性霉素b、制霉菌素、依维莫司、西罗莫司脂化物、非达霉素。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个羟基基团。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子包含单个羟基基团或两个羟基基团。在其中存在多于一个羟基基团的实施例中，两个羟基基团可定位为彼此相邻(1，2-二醇)，或者可相隔1、2或3个c原子(分别为1，3-二醇、1，4-二醇、1，5-二醇)。在第四方面的特定实施例中，分析物分子包含1，2-二醇基。在其中仅存在一个羟基基团的实施例中，所述分析物选自由以下项组成的组：伯醇、仲醇和叔醇。在本发明的第四方面的实施例中，其中分析物分子包含一个或多个羟基基团，该分析物选自由以下项组成的组：苄醇、薄荷醇、l-肉毒碱、吡哆醇、甲硝哒唑、单硝酸异山梨酯、愈创甘油醚、克拉维酸盐、米吉妥(migitol)、扎西他滨、异丙肾上腺素、阿昔洛韦、美索巴莫、曲马多、文拉法辛、阿托品、氯苯达诺、α-羟基阿普唑仑、α-羟基三唑仑、劳拉西泮、去甲羟基安定、替马西泮、乙基葡糖苷酸、乙基吗啡、吗啡、吗啡-3-葡糖苷酸、丁丙诺啡、可待因、二氢可待因、对-羟基丙氧芬、o-去甲基曲马多、双氢奎尼丁、奎尼丁。在本发明的第四方面的实施例中，其中分析物分子包含多于一个羟基基团，该分析物选自由以下项组成的组：维生素c、葡萄糖胺、甘露醇、四氢生物喋呤、阿糖胞苷、阿扎胞苷、利巴韦林、氟尿苷、吉西他滨、链脲佐菌素、腺苷、阿糖腺苷、克拉屈滨、雌三醇、三氟胸苷、氯法拉滨、纳多洛尔、扎那米韦、乳果糖、单磷酸腺苷、碘苷、瑞加德松、林可霉素、克林霉素、卡格列净(canaglifozin)、妥布霉素、奈替米星、卡那霉素、替格瑞洛、表柔比星、多柔比星、阿贝卡星、链霉素、喹巴因(quabain)、阿米卡星、新霉素、弗氏菌丝素(framycetin)、巴龙霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、长春地辛、洋地黄毒苷、地高辛、甲泛葡胺、乙酰洋地黄毒苷、去乙酰毛花苷、氟达拉滨、氯法拉滨、吉西他滨、阿糖胞苷、卡培他滨、阿糖腺苷、三氟尿苷、碘苷和普卡霉素。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个硫醇基(包括但不限于烷基硫醇基和硫醇-芳基)。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个硫醇基的分析物分子选自由以下项组成的组：硫代扁桃酸、dl-甲巯丙脯酸、dl-塞奥芬、n-乙酰基半胱氨酸、d-青霉胺、谷胱甘肽、l-半胱氨酸、泽芬诺普利(zefenoprilat)、硫普罗宁、二巯基丙醇、琥巯酸。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个二硫化物基团。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个二硫化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：谷胱甘肽二硫化物、双硫氧吡啶、二硫化硒、双硫仑、硫辛酸、l-胱氨酸、呋喃硫胺、奥曲肽、去氨加压素、伐普肽、特利加压素、利那洛肽、培奈萨肽(peginesatide)。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个环氧化物基团。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个环氧化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：卡巴咪嗪10，11环氧化物、卡非佐米、呋喃苯胺酸环氧化物、磷霉素、司维拉姆、浅蓝菌素、东莨菪碱、噻托溴铵、甲溴东莨菪碱、依普利酮、莫匹罗星、纳他霉素、卡非佐米、醋竹桃霉素。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个酚基。在本发明的第四方面的特定实施例中，包含一个或多个酚基的分析物分子为类固醇或类固醇样化合物。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个酚基的分析物分子为类固醇或类固醇样化合物，其具有sp2杂化的a环以及在a环的3位的oh基团。在本发明的第四方面的特定实施例中，类固醇或类固醇样分析物分子选自由以下项组成的组：雌激素、雌激素样化合物、雌酮(e1)、雌二醇(e2)、17a-雌二醇、17p-雌二醇、雌三醇(e3)、16-表雌三醇、17-表雌三醇和16，17-表雌三醇和/或它们的代谢物。在实施例中，代谢物选自由以下项组成的组：雌三醇、16-表雌三醇(16-epie3)、17-表雌三醇(17-epie3)、16，17-表雌三醇(16，17-epie3)、16-酮雌二醇(16-ketoe2)、16a-羟基雌酮(16a-ohe1)、2-甲氧基雌酮(2-meoe1)、4-甲氧基雌酮(4-meoe1)、2-羟基雌酮-3-甲醚(3-meoe1)、2-甲氧基雌二醇(2-meoe2)、4-甲氧基雌二醇(4-meoe2)、2-羟基雌酮(20he1)、4-羟基雌酮(4-ohe1)、2-羟基雌二醇(2-ohe2)、雌酮(e1)、雌酮硫酸酯(e1s)、17a-雌二醇(e2a)、17p-雌二醇(e2b)、雌二醇硫酸酯(e2s)、马烯雌酮(eq)、17a-二氢马烯雌酮(eqa)、17p-二氢马烯雌酮(eqb)、马萘雌酮(eqilenin)(en)、17-二氢马萘雌酮(ena)、17β-二氢马萘雌酮(enb)、a8，9-脱氢雌酮(de1)、a8，9-脱氢雌酮硫酸酯(de1s)、δ9-四氢大麻醇、霉酚酸。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的胺基。在本发明的第四方面的实施例中，胺基为烷基胺基或芳基胺基。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个胺基的分析物选自由以下项组成的组：蛋白质和肽。在本发明的第四方面的实施例中，包含胺基的分析物分子选自由以下项组成的组：3，4-亚甲二氧安非他明、3，4-亚甲二氧基-n-乙基安非他明、3，4-亚甲二氧基甲基安非他明、安非他明、甲基安非他明、n-甲基-1，3-苯并二氧杂环戊烯基仲丁胺、7-氨基氯硝西泮、7-氨基氟硝西泮、3，4-二甲基甲卡西酮、3-氟甲卡西酮、4-甲氧基甲卡西酮、4-甲基乙卡西酮、4-甲基甲卡西酮、安非拉酮、2-甲基氨基-1-(3′，4′-亚甲二氧基苯基)丁-1-酮(butylone)、乙卡西酮(ethcathinone)、氟乙卡西酮(flephedrone)、甲卡西酮、亚甲基二氧基甲卡西酮(methylone)、亚甲基二氧吡咯戊酮、苯甲酰爱康宁、脱氢去甲氯胺酮、氯胺酮、去甲氯胺酮、美沙酮、去甲美沙酮、6-乙酰吗啡、二乙酰吗啡、吗啡、去甲氢可酮、氧可酮、羟吗啡酮、苯环己哌啶、去甲丙氧芬、阿米替林、氯米帕明、度琉平、多虑平、丙咪嗪、去甲替林、三甲丙咪嗪、芬太尼、甘氨酰二甲基苯胺(glycylxylidide)、利多卡因、去乙基利多卡因、n-乙酰基普鲁卡因酰胺、普鲁卡因酰胺、普瑞巴林、2-甲基氨基-1-(3，4-亚甲二氧基苯基)丁烷、2-氨基-1-(3，4-亚甲二氧基苯基)丁烷、去甲哌替啶、o-去甲基曲马多、曲马多、利多卡因、n-乙酰普鲁卡因胺、普鲁卡因胺、加巴喷丁、拉莫三嗪、茶碱、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、万古霉素、甲氨蝶呤、加巴喷丁、西索米星和5-甲基胞嘧啶。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子为碳水化合物或具有碳水化合物部分的物质(例如糖蛋白或核苷)。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子为单糖，特别是选自由以下项组成的组：核糖、脱氧核糖、阿拉伯糖、核酮糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖、果糖、n-乙酰基葡萄糖胺、n-乙酰基半乳糖胺、神经氨酸、n-乙酰神经氨酸等。在实施例中，分析物分子为寡糖，特别是选自由以下项组成的组：二糖、三糖、四糖、多糖。在本发明的第四方面的实施例中，二糖选自由以下项组成的组：蔗糖、麦芽糖和乳糖。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子为包含上述单糖、二糖、三糖、四糖、寡糖或多糖部分的物质。在本发明的第四方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的叠氮化物基团，该叠氮化物基团选自由以下项组成的组：烷基叠氮化物基团或芳基叠氮化物基团。在本发明的第四方面的实施例中，包含一个或多个叠氮化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：齐多夫定和叠氮西林。此类分析物分子可存在于生物或临床样品中，这些生物或临床样品为诸如体液(例如血液、血清、血浆、尿液、唾液、脊髓液等)、组织或细胞提取物等。在本发明的第四方面的实施例中，一种或多种分析物分子存在于生物或临床样品中，该生物或临床样品选自由以下项组成的组：血液、血清、血浆、尿液、唾液、脊髓液和干血斑。在本发明的第四方面的一些实施例中，分析物分子可存在于样品中，该样品为纯化或部分纯化的样品，例如纯化或部分纯化的蛋白质混合物或提取物。在本发明的第四方面的实施例中，反应性单元x选自由以下项组成的组：羰基反应性单元、二烯反应性单元、羟基反应性单元、氨基反应性单元、亚胺反应性单元、硫醇反应性单元、二醇反应性单元、酚反应性单元、环氧化物反应性单元、二硫化物反应性单元和叠氮基反应性单元。在本发明的第四方面的实施例中，反应性单元x为羰基反应性单元，其能够与具有羰基基团的任何类型的分子反应。在本发明的第四方面的实施例中，羰基反应性单元选自由以下项组成的组：羧基反应性单元、酮反应性单元、醛反应性单元、酸酐反应性单元、羰基酯反应性单元和酰亚胺反应性单元。在本发明的第四方面的实施例中，羰基反应性单元可以具有通过相邻o或n原子nh2-n/o的α-效应强化的超亲核性n原子或具有二硫醇分子。在本发明的第四方面的实施例中，羰基反应性单元选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1为芳基、含有1个或多个杂原子的芳基或者c1-4烷基(特别是c1或c2烷基)，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼单元，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2为芳基、含有1个或多个杂原子的芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(iii)羟氨基单元，例如h2n-o-单元，以及(iv)二硫醇单元，特别是1，2-二硫醇或1，3-二硫醇单元。在本发明的第四方面的实施例中，其中羰基反应性单元为羧基反应性单元，该羧基反应性单元与分析物分子中的羧基基团反应。在本发明的第四方面的实施例中，羧基反应性单元选自由以下项组成的组：重氮单元、烷基卤、胺和肼单元。在本发明的第四方面的实施例中，反应性单元x为二烯反应性单元，其能够与包含二烯基团的分析物反应。在本发明的第四方面的实施例中，二烯反应性单元选自由以下项组成的组：cookson型试剂，例如1，2，4-三唑-3，5-二酮，其能够用作亲二烯体。在本发明的第四方面的实施例中，反应性单元x为羟基反应性单元，其能够与包含羟基基团的分析物反应。在本发明的第四方面的实施例中，羟基反应性单元选自由以下项组成的组：磺酰氯、活化的羧酸酯(nhs或咪唑阴离子)和能够进行氟的亲核取代的含氟芳烃/杂芳烃(t.higashijsteroidbiochemmolbiol.2016sep；162：57-69)。在本发明的第四方面的实施例中，反应性单元x为二醇反应性单元，其与分析物分子中的二醇基反应。在本发明的第四方面的实施例中，其中反应性单元为1，2-二醇反应性单元，该1，2-二醇反应性单元包含硼酸。在另一些实施例中，二醇可氧化为相应的酮或醛，然后与酮/醛反应性单元x反应。在本发明的第四方面的实施例中，氨基反应性单元与分析物分子中的氨基反应。在本发明的第四方面的实施例中，氨基反应性单元选自由以下项组成的组：活性酯基，诸如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、五氟苯基酯、羰基咪唑酯、方酸酯、羟基苯并三唑(hobt)酯、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯和磺酰氯单元。在本发明的第四方面的实施例中，硫醇反应性单元与分析物分子中的硫醇基反应。在本发明的第四方面的实施例中，硫醇反应性单元选自由以下项组成的组：卤代乙酰基，特别地选自由以下项组成的组：br/i-ch2-c(＝o)-单元、丙烯酰胺/丙烯酸酯单元、不饱和酰亚胺单元诸如马来酰亚胺、甲基磺酰基苯基噁二唑和磺酰氯单元。在本发明的第四方面的实施例中，酚反应性单元与分析物分子上的酚基反应。在本发明的第四方面的实施例中，酚反应性单元选自由以下项组成的组：活性酯单元，诸如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、五氟苯基酯、羰基咪唑酯、方酸酯、羟基苯并三唑(hobt)酯、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯和磺酰氯单元。分析物分子中存在的酚基可通过反应(h.ban等人，j.am.chem.soc.，2010年，132(5)，第1523-1525页)或通过重氮化或者替代地通过邻位硝化并且随后还原为胺(其然后可与胺反应剂反应)与三唑二酮反应。在本发明的第四方面的实施例中，反应性单元x为环氧化物反应性单元，其能够与包含环氧化物基团的分析物反应。在本发明的第四方面的实施例中，环氧化物反应性单元选自由以下项组成的组：氨基、硫醇、通过相邻o或n原子nh2-n/o分子的α-效应强化的超亲核性n原子。在本发明的第四方面的实施例中，环氧化物反应性单元选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1为芳基、含有1个或多个杂原子的芳基或者c1-4烷基(特别是c1或c2烷基)，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼单元，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2为芳基、含有1个或多个杂原子的芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，以及(iii)羟氨基单元，例如h2n-o-单元。在本发明的第四方面的实施例中，反应性单元x为二硫化物反应性单元，其能够与包含二硫化物基团的分析物反应。在本发明的第四方面的实施例中，二硫化物反应性单元选自由以下项组成的组：硫醇。在另一些实施例中，二硫化物基团可还原为相应的硫醇基，然后与硫醇反应性单元x反应。在本发明的第四方面的实施例中，反应性单元x为叠氮基反应性单元，其与分析物分子中的叠氮基反应。在本发明的第四方面的实施例中，叠氮基反应性单元通过叠氮化物-炔烃环加成反应与叠氮基团反应。在本发明的第四方面的实施例中，叠氮基反应性单元选自由以下项组成的组：炔基(烷基或芳基)、线性炔基或环状炔基。叠氮基与炔烃之间的反应可在使用或不使用催化剂的情况下进行。在本发明的第四方面的另一些实施例中，叠氮基可还原为相应的氨基，然后与氨基反应性单元x反应。式a的化合物包含中性丢失单元y。该中性丢失单元y能够释放不带电荷的部分(中性实体)。中性丢失单元y能够裂解，即，在ms的条件下裂解，例如在碰撞诱导解离(cid)时裂解，例如在三重四极杆ms中裂解，从而释放出中性实体。失去的中性实体为单个原子或多个原子。释放出中性实体后，其余中性丢失单元y仍保持中性。通常但并非必须，释放出一个中性实体。在本发明的第四方面的特定实施例中，释放出两个中性实体。在本发明的第四方面的实施例中，中性丢失单元y在电离时释放出至少一个中性实体。中性实体为低分子量中性实体，特别是分子量在10-100da、特别是20-80da、特别是25-65da的范围内。特别地，中性实体具有100da或更小、特别是80da或更小、特别是70da或更小、特别是50da或更小、特别是30或更小的分子量。在本发明的第四方面的实施例中，中性实体选自由以下项组成的组：n2、no、no2、s2、so、so2、co、co2。在特定实施例中，中性实体为n2。在本发明的第四方面的实施例中，中性实体的丢失导致质荷比(m/z)减小-28da(在失去n2或co的情况下)、-30da(在失去no的情况下)、-44da(在失去co2的情况下)、-46da(在失去no2的情况下)、-48da(在失去so的情况下)或-64da(在失去s2或so2的情况下)。在本发明的第四方面的实施例中，释放出一个中性实体。在本发明的第四方面的实施例中，释放出两个中性实体。特别地，释放出的第二中性实体不同于释放出的第一中性实体。第二中性实体的释放与第一中性实体的释放同时发生或相继发生。特别地，第二中性实体的释放与第一中性实体的释放同时发生，即两个中性实体在单个裂解事件中同时释放。在本发明的第四方面的实施例中，中性丢失单元y包含能够裂解的环状部分或由其组成。在本发明的第四方面的实施例中，中性丢失单元y包含4元、5元或6元杂环部分或由其组成，特别是包含具有至少2个彼此相邻的杂原子、特别是两个彼此相邻的n原子的4元、5元或6元杂环部分或由其组成。在本发明的第四方面的实施例中，中性丢失单元y包含三唑、四唑、四嗪、噁二唑、噻二唑部分或其氢化衍生物或由其组成。在本发明的第四方面的实施例中，中性丢失单元y包含1，2，3-三唑、1，2，4-三唑部分、1，4，5-三唑、3，4，5-三唑部分、1，2，3，4-四唑、2，3，4，5-四唑或2，3，5，6四唑部分或1，2，4，5四嗪部分或由其组成。在本发明的第四方面的实施例中，中性丢失单元y包含1，2，3-三唑或1，2，4-三唑部分或1，2，3，4-四唑部分或1，2，4，5四嗪部分或由其组成。在本发明的第四方面的实施例中，带电单元z永久带电，特别是在中性条件下，特别是在ph值为6-8的条件下。在本发明的第四方面的实施例中，带电单元z带正电荷或带负电荷，优选带正电荷。在本发明的第四方面的实施例中，带电单元z包含以下部分或由其组成：(i)至少一个带正电荷的部分；或(ii)至少一个带负电荷的部分。在本发明的第四方面的实施例中，带电单元z为带正电荷的单元。在本发明的第四方面的实施例中，带正电荷的单元z选择为使得所得式a的化合物具有10或更高的pka，更特别地具有12或更高的pka。在本发明的第四方面的实施例中，带正电荷的单元z选自由以下项组成的组：伯铵、仲铵、叔铵、季铵、伯锍、仲锍、叔锍、季锍、伯咪唑鎓、仲咪唑鎓、叔咪唑鎓、季咪唑鎓、伯吡啶鎓、仲吡啶鎓、叔吡啶鎓、季吡啶鎓、或伯鏻、仲鏻、叔鏻、季鏻。在第四方面的特定实施例中，带正电荷的部分为三甲基铵、n，n-二甲基哌啶鎓或n-烷基-奎宁环鎓。在本发明的第四方面的实施例中，带电单元z为带负电荷的单元。在本发明的第四方面的实施例中，带负电荷的单元z选择为使得所得式a的化合物具有10或更高的pkb，更特别地具有12或更高的pkb。在本发明的第四方面的实施例中，带负电荷的单元z选自由以下项组成的组：磷酸盐、硫酸盐、磺酸盐或羧基盐。在本发明的第四方面的实施例中，支化连接基l1为三官能连接基。在本发明的第四方面的实施例中，连接基l1被取代或未被取代。在本发明的第四方面的实施例中，三官能连接基l1不可质子化。在第四方面的实施例中，三官能连接基l1包含3-30个c原子，特别是5-20个c原子，特别是8-16个c原子。在实施例中，三官能连接基l1包含1个或多个杂原子，这些杂原子特别地为n、o或s。在本发明的第四方面的实施例中，三官能连接基l1包含至少4个杂原子，特别是5、6或7个杂原子，这些杂原子特别地为n和/或o。在本发明的第四方面的实施例中，三官能连接基l1包含5个杂原子，特别是3个o原子和2个n原子。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有根据式b′所示的结构：其中t、x′、x、y和z的定义如上文关于式a′的加合物所详述，l2、l3和l4为连接基支链，其各自独立地包含c1-c10、特别是c1-c5，可选地各自独立地包含一个或多个杂原子，其可选地各自独立地被取代或未被取代，其中连接基支链l2、l3和l4一起形成支链连接基，特别是如上文所定义的三官能连接基l1。在本发明的第四方面的实施例中，连接基支链l2、l3和l4各自独立地为线性连接基。在本发明的第四方面的实施例中，连接基支链l2、l3和l4具有相同或不同的长度。特别地，连接基支链l2分别长于连接基支链l3和l4。在本发明的第四方面的实施例中，连接基支链l2具有c3-c6的长度。在本发明的第四方面的实施例中，连接基支链l3和l4各自具有c1-c3的长度。在本发明的第四方面的实施例中，无论每条支链的长度如何，每条连接基支链l2、l3、l4可独立地包含一个或多个杂原子。在本发明的第四方面的特定实施例中，所有三条连接基支链包含至少一个杂原子。在本发明的第四方面的实施例中，杂原子为n、s、p或o，特别是n和/或o。在本发明的第四方面的实施例中，线性支链l4包含稳定单元。在本发明的第四方面的实施例中，稳定单元防止带电单元z在裂解事件中的丢失。在本发明的第四方面的实施例中，稳定单元通过使可能形成的碳阳离子不稳定来防止带电单元z的丢失。在本发明的第四方面的实施例中，稳定单元与带电单元z相隔至少一个c原子。在本发明的第四方面的实施例中，稳定单元包含至少一个杂原子。在本发明的第四方面的实施例中，稳定单元选自由以下项组成的组：co或其等电类似物诸如so或so2。在本发明的第四方面的实施例中，连接基支链l2包含2-6个c原子和1-3个杂原子。在本发明的第四方面的实施例中，其中连接基支链l2包含7个c原子，其包含3个杂原子，特别是o原子和n原子。在本发明的第四方面的实施例中，其中连接基支链l2包含3、4、5或6个c原子，其包含2个杂原子，特别是o原子和n原子，特别是1个n原子和1个o原子。在本发明的第四方面的实施例中，其中连接基支链l2包含2个c原子，其包含1个杂原子，特别是o原子。在本发明的第四方面的实施例中，连接基支链l3包含2-10个c原子和1-3个杂原子，特别是2个杂原子，特别是1个n原子和1个o原子。在本发明的第四方面的实施例中，连接基支链l4包含2-6个c原子和1-3个杂原子，特别是1个或2个杂原子，特别是1个n原子或1个n原子和1个o原子。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由二烯反应性单元x与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为5元杂环单元，并且带电单元z为永久带正电荷的单元。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由肼单元x与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z为叔铵基。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由酰肼单元x与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为叔铵基。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由肼单元x与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z为哌啶单元。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由酰肼单元x与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为哌啶单元。在本发明的第四方面的实施例中，化合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由肼单元x与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z为吡啶单元。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由腙单元x与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为吡啶单元。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由cookson型试剂与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为叔铵基。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由cookson型试剂与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为哌啶单元。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由cookson型试剂与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为吡啶单元。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由h2n-nh-与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为叔铵基单元。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由h2n-nh-与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为哌啶单元。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由h2n-nh-与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为吡啶单元。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由h2n-o-c-与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为二甲基哌啶或奎宁环单元。在本发明的第四方面的实施例中，加合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由1，2，4-三唑-3，5-二酮与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为二甲基哌啶或奎宁环部分。在本发明的第四方面的实施例中，化合物具有式a′或式b′的结构，其中x′由h2n-nh与分析物分子t反应得到，中性丢失单元y为叠氮苯或1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯或甲基乙基亚砜，并且带电单元z为螺[2h-异吲哚-2，1′-吡咯烷鎓]、1，3-二氢或5-氮鎓螺[4.4]壬烷。在实施例中，式b′的加合物选自由以下项组成的组：(i)加合物1(ii)加合物2在第五方面，本发明涉及式a的化合物的用途：其中x为反应性单元，l1为支化连接基，特别是三官能连接基，y为中性丢失单元，z为带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是一个永久带电部分，包括所述化合物的任何盐，或包含至少一种式a的化合物的组合物或试剂盒用于分析物分子的质谱测定中的用途，其中所述质谱测定特别地包括串联质谱测定，更特别地在三重四极杆设备中。在本发明的第五方面的实施例中，式a的化合物的用途包括用作衍生剂。在本发明的第五方面的实施例中，式a的化合物用于提高ms测量的灵敏度。在实施例中，式a的化合物用于以更低的检测水平、特别是以更低的定量水平检测目标分析物。在本发明的第五方面的实施例中，根据本发明所述的式a的化合物包含能够与分析物分子反应的反应性单元x。反应性单元x能够与分析物分子反应，使得在式a的化合物和分析物分子之间形成共价键。在本发明的第五方面的实施例中，反应性单元x与式a的化合物形成共价键。特别地，在式a的化合物的反应性单元x和分析物分子中存在的官能团之间形成共价键。根据待测分析物分子中存在的官能团不同，本领域的技术人员将选择适当的式a的化合物的反应性单元x。决定适合结合至目标分析物的官能团的反应性单元x处于常识范围内。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子包含选自由以下项组成的组中的官能团：羰基基团、二烯基基团、羟基基团、胺基基团、亚胺基、硫醇基、二醇基、酚基、环氧化物基团、二硫化物基团和叠氮化物基团，其中每个基团均能够与式a的化合物的反应性单元x形成共价键。此外，在本发明的范围内还设想，分析物分子中存在的官能团将首先转化为另一种基团，该基团更易于与式a的化合物的反应性单元x反应。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子选自由以下项组成的组：类固醇、酮类固醇、开环甾类化合物、氨基酸、肽、蛋白质、碳水化合物、脂肪酸、脂质、核苷、核苷酸、核酸及其他生物分子(包括小分子代谢物和辅因子以及治疗药物、滥用药物、毒素或其代谢物)。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的羰基基团，该羰基基团选自由以下项组成的组：羧酸基、醛基、酮基、掩蔽的醛基、掩蔽的酮基、酯基、酰胺基和酸酐基。在本发明的第五方面的实施例中，其中羰基基团为酰胺基，本领域的技术人员非常清楚酰胺基本身是一种稳定的基团，但其可以经水解以使酰胺基转化为羧酸基和氨基。酰胺基的水解可通过酸/碱催化的反应或通过酶促方法实现，这两种方法都是本领域的技术人员所熟知的。在本发明的第五方面的实施例中，其中羰基基团为掩蔽的醛基或掩蔽的酮基，相应的基团为半缩醛基或缩醛基，特别是环状半缩醛基或缩醛基。在本发明的第五方面的实施例中，缩醛基在与式a的化合物反应之前转化为醛基或酮基。在本发明的第五方面的实施例中，羰基基团为酮基。在本发明的第五方面的实施例中，酮基可在与式a的化合物的反应性单元反应之前转化为中间体亚胺基团。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个酮基的分析物分子为酮类固醇。在本发明的第五方面的特定实施例中，酮类固醇选自由以下项组成的组：睾酮、表睾酮、二氢睾酮(dht)、脱氧甲基睾酮(dmt)、四氢孕三烯酮(thg)、醛固酮、雌酮、4-羟基雌酮、2-甲氧基雌酮、2-羟基雌酮、16-酮雌二醇、16α-羟基雌酮、2-羟基雌酮-3-甲醚、强的松、泼尼松龙、孕烯醇酮、孕酮、dhea(脱氢表雄酮)、17-oh孕烯醇酮、17-oh孕酮、17-oh孕酮、雄酮、表雄酮和δ4雄烯二酮、11-脱氧皮质醇皮质甾酮、21-脱氧皮质醇、11-脱氧皮质酮、别孕烷醇酮和醛固酮。在本发明的第五方面的实施例中，羰基基团为羧基基团。在本发明的第五方面的实施例中，羧基基团直接与式a的化合物反应，或在与式a的化合物反应之前转化为活化的酯基。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个羧基基团的分析物分子选自由以下项组成的组：8-四氢大麻酚酸、苯甲酰芽子碱、水杨酸、2-羟基苯甲酸、加巴喷丁、普瑞巴林、丙戊酸、万古霉素、甲氨蝶呤、霉酚酸、孟鲁司特、瑞格列奈、呋喃苯胺酸、替米沙坦、吉非罗齐、双氯芬酸、布洛芬、吲哚美辛、佐美酸、伊索克酸和青霉素。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个羧基基团的分析物分子为选自由以下项组成的组中的氨基酸：精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸和甘氨酸。在本发明的第五方面的实施例中，羰基基团为醛基。在本发明的第五方面的实施例中，醛基可在与式a的化合物的反应性单元反应之前转化为中间体亚胺基团。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个醛基的分析物分子选自由以下项组成的组：吡哆醛、n-乙酰基-d-葡萄糖胺、阿卡他定、链霉素、交沙霉素。在本发明的第五方面的实施例中，羰基基团为羰基酯基团。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个酯基的分析物分子选自由以下项组成的组：可卡因、海洛因、利他林、醋氯芬酸、乙酰胆碱、安西奈德、阿米洛酯、阿米洛卡因、氨苄哌替啶、阿雷地平、青蒿琥酯和哌替啶。在本发明的第五方面的实施例中，羰基基团为酸酐基。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个酸酐基的分析物分子选自由以下项组成的组：斑蝥素、琥珀酸酐、偏苯三酸酐和马来酸酐。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个二烯基团，特别是共轭二烯基团。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个二烯基团的分析物分子为开环甾类化合物。在实施例中，开环甾类化合物选自由以下项组成的组：胆钙化醇(维生素d3)、麦角钙化醇(维生素d2)、骨化二醇、骨化三醇、速固醇、光甾醇和他卡西醇。特别地，开环甾类化合物为维生素d，特别是维生素d2或d3或其衍生物。在特定实施例中，开环甾类化合物选自由以下项组成的组：维生素d2、维生素d3、25-羟基维生素d2、25-羟基维生素d3、3-表-25-羟基维生素d2、3-表-25-羟基维生素d3、1，25-二羟基维生素d2、1，25-二羟基维生素d3、24，25-二羟基维生素d2和24，25-二羟基维生素d3、维生素a、维甲酸、异维甲酸、阿利维甲酸、纳他霉素、西罗莫司、两性霉素b、制霉菌素、依维莫司、西罗莫司脂化物、非达霉素。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个羟基基团。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子包含单个羟基基团或两个羟基基团。在其中存在多于一个羟基基团的实施例中，两个羟基基团可定位为彼此相邻(1，2-二醇)，或者可相隔1、2或3个c原子(分别为1，3-二醇、1，4-二醇、1，5-二醇)。在第五方面的特定实施例中，分析物分子包含1，2-二醇基。在其中仅存在一个羟基基团的实施例中，所述分析物选自由以下项组成的组：伯醇、仲醇和叔醇。在本发明的第五方面的实施例中，其中分析物分子包含一个或多个羟基基团，该分析物选自由以下项组成的组：苄醇、薄荷醇、l-肉毒碱、吡哆醇、甲硝哒唑、单硝酸异山梨酯、愈创甘油醚、克拉维酸盐、米吉妥(migitol)、扎西他滨、异丙肾上腺素、阿昔洛韦、美索巴莫、曲马多、文拉法辛、阿托品、氯苯达诺、α-羟基阿普唑仑、α-羟基三唑仑、劳拉西泮、去甲羟基安定、替马西泮、乙基葡糖苷酸、乙基吗啡、吗啡、吗啡-3-葡糖苷酸、丁丙诺啡、可待因、二氢可待因、对羟基丙氧芬、o-去甲基曲马多、双氢奎尼丁、奎尼丁。在本发明的第五方面的实施例中，其中分析物分子包含多于一个羟基基团，该分析物选自由以下项组成的组：维生素c、葡萄糖胺、甘露醇、四氢生物喋呤、阿糖胞苷、阿扎胞苷、利巴韦林、氟尿苷、吉西他滨、链脲佐菌素、腺苷、阿糖腺苷、克拉屈滨、雌三醇、三氟胸苷、氯法拉滨、纳多洛尔、扎那米韦、乳果糖、单磷酸腺苷、碘苷、瑞加德松、林可霉素、克林霉素、卡格列净(canaglifozin)、妥布霉素、奈替米星、卡那霉素、替格瑞洛、表柔比星、多柔比星、阿贝卡星、链霉素、喹巴因(quabain)、阿米卡星、新霉素、弗氏菌丝素(framycetin)、巴龙霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、长春地辛、洋地黄毒苷、地高辛、甲泛葡胺、乙酰洋地黄毒苷、去乙酰毛花苷、氟达拉滨、氯法拉滨、吉西他滨、阿糖胞苷、卡培他滨、阿糖腺苷、三氟尿苷、碘苷和普卡霉素。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子包含一个或多个硫醇基(包括但不限于烷基硫醇基和硫醇-芳基)。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个硫醇基的分析物分子选自由以下项组成的组：硫代扁桃酸、dl-甲巯丙脯酸、dl-塞奥芬、n-乙酰基半胱氨酸、d-青霉胺、谷胱甘肽、l-半胱氨酸、泽芬诺普利(zefenoprilat)、硫普罗宁、二巯基丙醇、琥巯酸。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个二硫化物基团。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个二硫化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：谷胱甘肽二硫化物、双硫氧吡啶、二硫化硒、双硫仑、硫辛酸、l-胱氨酸、呋喃硫胺、奥曲肽、去氨加压素、伐普肽、特利加压素、利那洛肽、培奈萨肽(peginesatide)。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个环氧化物基团。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个环氧化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：卡巴咪嗪10，11环氧化物、卡非佐米、呋喃苯胺酸环氧化物、磷霉素、司维拉姆、浅蓝菌素、东莨菪碱、噻托溴铵、甲溴东莨菪碱、依普利酮、莫匹罗星、纳他霉素、卡非佐米、醋竹桃霉素。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的一个或多个酚基。在本发明的第五方面的特定实施例中，包含一个或多个酚基的分析物分子为类固醇或类固醇样化合物。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个酚基的分析物分子为类固醇或类固醇样化合物，其具有sp2杂化的a环以及在a环的3位的oh基团。在本发明的第五方面的特定实施例中，类固醇或类固醇样分析物分子选自由以下项组成的组：雌激素、雌激素样化合物、雌酮(e1)、雌二醇(e2)、17a-雌二醇、17p-雌二醇、雌三醇(e3)、16-表雌三醇、17-表雌三醇和16，17-表雌三醇和/或它们的代谢物。在实施例中，代谢物选自由以下项组成的组：雌三醇、16-表雌三醇(16-epie3)、17-表雌三醇(17-epie3)、16，17-表雌三醇(16，17-epie3)、16-酮雌二醇(16-ketoe2)、16a-羟基雌酮(16a-ohe1)、2-甲氧基雌酮(2-meoe1)、4-甲氧基雌酮(4-meoe1)、2-羟基雌酮-3-甲醚(3-meoe1)、2-甲氧基雌二醇(2-meoe2)、4-甲氧基雌二醇(4-meoe2)、2-羟基雌酮(20he1)、4-羟基雌酮(4-ohe1)、2-羟基雌二醇(2-ohe2)、雌酮(e1)、雌酮硫酸酯(e1s)、17a-雌二醇(e2a)、17p-雌二醇(e2b)、雌二醇硫酸酯(e2s)、马烯雌酮(eq)、17a-二氢马烯雌酮(eqa)、17p-二氢马烯雌酮(eqb)、马萘雌酮(eqilenin)(en)、17-二氢马萘雌酮(ena)、17β-二氢马萘雌酮(enb)、a8，9-脱氢雌酮(de1)、a8，9-脱氢雌酮硫酸酯(de1s)、δ9-四氢大麻醇、霉酚酸。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的胺基。在本发明的第五方面的实施例中，胺基为烷基胺基或芳基胺基。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个胺基的分析物选自由以下项组成的组：蛋白质和肽。在本发明的第五方面的实施例中，包含胺基的分析物分子选自由以下项组成的组：3，4-亚甲二氧安非他明、3，4-亚甲二氧基-n-乙基安非他明、3，4-亚甲二氧基甲基安非他明、安非他明、甲基安非他明、n-甲基-1，3-苯并二氧杂环戊烯基仲丁胺、7-氨基氯硝西泮、7-氨基氟硝西泮、3，4-二甲基甲卡西酮、3-氟甲卡西酮、4-甲氧基甲卡西酮、4-甲基乙卡西酮、4-甲基甲卡西酮、安非拉酮、2-甲基氨基-1-(3′，4′-亚甲二氧基苯基)丁-1-酮(butylone)、乙卡西酮(ethcathinone)、氟乙卡西酮(flephedrone)、甲卡西酮、亚甲基二氧基甲卡西酮(methylone)、亚甲基二氧吡咯戊酮、苯甲酰爱康宁、脱氢去甲氯胺酮、氯胺酮、去甲氯胺酮、美沙酮、去甲美沙酮、6-乙酰吗啡、二乙酰吗啡、吗啡、去甲氢可酮、氧可酮、羟吗啡酮、苯环己哌啶、去甲丙氧芬、阿米替林、氯米帕明、度琉平、多虑平、丙咪嗪、去甲替林、三甲丙咪嗪、芬太尼、甘氨酰二甲基苯胺(glycylxylidide)、利多卡因、去乙基利多卡因、n-乙酰基普鲁卡因酰胺、普鲁卡因酰胺、普瑞巴林、2-甲基氨基-1-(3，4-亚甲二氧基苯基)丁烷、2-氨基-1-(3，4-亚甲二氧基苯基)丁烷、去甲哌替啶、o-去甲基曲马多、曲马多、利多卡因、n-乙酰普鲁卡因胺、普鲁卡因胺、加巴喷丁、拉莫三嗪、茶碱、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、万古霉素、甲氨蝶呤、加巴喷丁、西索米星和5-甲基胞嘧啶。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子为碳水化合物或具有碳水化合物部分的物质(例如糖蛋白或核苷)。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子为单糖，特别是选自由以下项组成的组：核糖、脱氧核糖、阿拉伯糖、核酮糖、葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖、果糖、n-乙酰基葡萄糖胺、n-乙酰基半乳糖胺、神经氨酸、n-乙酰神经氨酸等。在实施例中，分析物分子为寡糖，特别是选自由以下项组成的组：二糖、三糖、四糖、多糖。在本发明的第五方面的实施例中，二糖选自由以下项组成的组：蔗糖、麦芽糖和乳糖。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子为包含上述单糖、二糖、三糖、四糖、寡糖或多糖部分的物质。在本发明的第五方面的实施例中，分析物分子包含作为官能团的叠氮化物基团，该叠氮化物基团选自由以下项组成的组：烷基叠氮化物基团或芳基叠氮化物基团。在本发明的第五方面的实施例中，包含一个或多个叠氮化物基团的分析物分子选自由以下项组成的组：齐多夫定和叠氮西林。此类分析物分子可存在于生物或临床样品中，这些生物或临床样品为诸如体液(例如血液、血清、血浆、尿液、唾液、脊髓液等)、组织或细胞提取物等。在本发明的第五方面的实施例中，一种或多种分析物分子存在于生物或临床样品中，该生物或临床样品选自由以下项组成的组：血液、血清、血浆、尿液、唾液、脊髓液和干血斑。在本发明的第五方面的一些实施例中，分析物分子可存在于样品中，该样品为纯化或部分纯化的样品，例如纯化或部分纯化的蛋白质混合物或提取物。在本发明的第五方面的实施例中，反应性单元x选自由以下项组成的组：羰基反应性单元、二烯反应性单元、羟基反应性单元、氨基反应性单元、亚胺反应性单元、硫醇反应性单元、二醇反应性单元、酚反应性单元、环氧化物反应性单元、二硫化物反应性单元和叠氮基反应性单元。在本发明的第五方面的实施例中，反应性单元x为羰基反应性单元，其能够与具有羰基基团的任何类型的分子反应。在本发明的第五方面的实施例中，羰基反应性单元选自由以下项组成的组：羧基反应性单元、酮反应性单元、醛反应性单元、酸酐反应性单元、羰基酯反应性单元和酰亚胺反应性单元。在本发明的第五方面的实施例中，羰基反应性单元可以具有通过相邻o或n原子nh2-n/o的α-效应强化的超亲核性n原子或具有二硫醇分子。在本发明的第五方面的实施例中，羰基反应性单元选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1为芳基、含有1个或多个杂原子的芳基或者c1-4烷基(特别是c1或c2烷基)，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼单元，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2为芳基、含有1个或多个杂原子的芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(iii)羟氨基单元，例如h2n-o-单元，以及(iv)二硫醇单元，特别是1，2-二硫醇或1，3-二硫醇单元。在本发明的第五方面的实施例中，其中羰基反应性单元为羧基反应性单元，该羧基反应性单元与分析物分子中的羧基基团反应。在本发明的第五方面的实施例中，羧基反应性单元选自由以下项组成的组：重氮单元、烷基卤、胺和肼单元。在本发明的第五方面的实施例中，反应性单元x为二烯反应性单元，其能够与包含二烯基团的分析物反应。在本发明的第五方面的实施例中，二烯反应性单元选自由以下项组成的组：cookson型试剂，例如1，2，4-三唑-3，5-二酮，其能够用作亲二烯体。在本发明的第五方面的实施例中，反应性单元x为羟基反应性单元，其能够与包含羟基基团的分析物反应。在本发明的第五方面的实施例中，羟基反应性单元选自由以下项组成的组：磺酰氯、活化的羧酸酯(nhs或咪唑阴离子)和能够进行氟的亲核取代的含氟芳烃/杂芳烃(t.higashijsteroidbiochemmolbiol.2016sep；162：57-69)。在本发明的第五方面的实施例中，反应性单元x为二醇反应性单元，其与分析物分子中的二醇基反应。在本发明的第五方面的实施例中，其中反应性单元为1，2-二醇反应性单元，该1，2-二醇反应性单元包含硼酸。在另一些实施例中，二醇可氧化为相应的酮或醛，然后与酮/醛反应性单元x反应。在本发明的第五方面的实施例中，氨基反应性单元与分析物分子中的氨基反应。在本发明的第五方面的实施例中，氨基反应性单元选自由以下项组成的组：活性酯基，诸如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、五氟苯基酯、羰基咪唑酯、方酸酯、羟基苯并三唑(hobt)酯、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯和磺酰氯单元。在本发明的第五方面的实施例中，硫醇反应性单元与分析物分子中的硫醇基反应。在本发明的第五方面的实施例中，硫醇反应性单元选自由以下项组成的组：卤代乙酰基，特别地选自由以下项组成的组：br/i-ch2-c(＝o)-单元、丙烯酰胺/丙烯酸酯单元、不饱和酰亚胺单元诸如马来酰亚胺、甲基磺酰基苯基噁二唑和磺酰氯单元。在本发明的第五方面的实施例中，酚反应性单元与分析物分子上的酚基反应。在本发明的第五方面的实施例中，酚反应性单元选自由以下项组成的组：活性酯单元，诸如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、五氟苯基酯、羰基咪唑酯、方酸酯、羟基苯并三唑(hobt)酯、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯和磺酰氯单元。分析物分子中存在的酚基可通过反应(h.ban等人，j.am.chem.soc.，2010年，132(5)，第1523-1525页)或通过重氮化或者替代地通过邻位硝化并且随后还原为胺(其然后可与胺反应剂反应)与三唑二酮反应。在本发明的第五方面的实施例中，反应性单元x为环氧化物反应性单元，其能够与包含环氧化物基团的分析物反应。在本发明的第五方面的实施例中，环氧化物反应性单元选自由以下项组成的组：氨基、硫醇、通过相邻o或n原子nh2-n/o分子的α-效应强化的超亲核性n原子。在本发明的第五方面的实施例中，环氧化物反应性单元选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1为芳基、含有1个或多个杂原子的芳基或者c1-4烷基(特别是c1或c2烷基)，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼单元，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2为芳基、含有1个或多个杂原子的芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，其可选地被例如卤素、羟基和/或c1-3烷氧基取代，以及(iii)羟氨基单元，例如h2n-o-单元。在本发明的第五方面的实施例中，反应性单元x为二硫化物反应性单元，其能够与包含二硫化物基团的分析物反应。在本发明的第五方面的实施例中，二硫化物反应性单元选自由以下项组成的组：硫醇。在另一些实施例中，二硫化物基团可还原为相应的硫醇基，然后与硫醇反应性单元x反应。在本发明的第五方面的实施例中，反应性单元x为叠氮基反应性单元，其与分析物分子中的叠氮基反应。在本发明的第五方面的实施例中，叠氮基反应性单元通过叠氮化物-炔烃环加成反应与叠氮基团反应。在本发明的第五方面的实施例中，叠氮基反应性单元选自由以下项组成的组：炔基(烷基或芳基)、线性炔基或环状炔基。叠氮基与炔烃之间的反应可在使用或不使用催化剂的情况下进行。在本发明的第五方面的另一些实施例中，叠氮基可还原为相应的氨基，然后与氨基反应性单元x反应。式a的化合物包含中性丢失单元y。该中性丢失单元y能够释放不带电荷的部分(中性实体)。中性丢失单元y能够裂解，即，在ms的条件下裂解，例如在碰撞诱导解离(cid)时裂解，例如在三重四极杆ms中裂解，从而释放出中性实体。失去的中性实体为单个原子或多个原子。释放出中性实体后，其余中性丢失单元y仍保持中性。通常但并非必须，释放出一个中性实体。在本发明的第五方面的特定实施例中，释放出两个中性实体。在本发明的第五方面的实施例中，中性丢失单元y在电离时释放出至少一个中性实体。中性实体为低分子量中性实体，特别是分子量在10-100da、特别是20-80da、特别是25-65da的范围内。特别地，中性实体具有100da或更小、特别是80da或更小、特别是70da或更小、特别是50da或更小、特别是30或更小的分子量。在本发明的第五方面的实施例中，中性实体选自由以下项组成的组：n2、no、no2、s2、so、so2、co、co2。在特定实施例中，中性实体为n2。在本发明的第五方面的实施例中，中性实体的丢失导致质荷比(m/z)减小-28da(在失去n2或co的情况下)、-30da(在失去no的情况下)、-44da(在失去co2的情况下)、-46da(在失去no2的情况下)、-48da(在失去so的情况下)或-64da(在失去s2或so2的情况下)。在本发明的第五方面的实施例中，释放出一个中性实体。在本发明的第五方面的实施例中，释放出两个中性实体。特别地，释放出的第二中性实体不同于释放出的第一中性实体。第二中性实体的释放与第一中性实体的释放同时发生或相继发生。特别地，第二中性实体的释放与第一中性实体的释放同时发生，即两个中性实体在单个裂解事件中同时释放。在本发明的第五方面的实施例中，中性丢失单元y包含能够裂解的环状部分或由其组成。在本发明的第五方面的实施例中，中性丢失单元y包含4元、5元或6元杂环部分或由其组成，特别是包含具有至少2个彼此相邻的杂原子、特别是两个彼此相邻的n原子的4元、5元或6元杂环部分或由其组成。在本发明的第五方面的实施例中，中性丢失单元y包含三唑、四唑、四嗪、噁二唑、噻二唑部分或其氢化衍生物或由其组成。在本发明的第五方面的实施例中，中性丢失单元y包含1，2，3-三唑、1，2，4-三唑部分、1，4，5-三唑、3，4，5-三唑部分、1，2，3，4-四唑、2，3，4，5-四唑或2，3，5，6四唑部分或1，2，4，5四嗪部分或由其组成。在本发明的第五方面的实施例中，中性丢失单元y包含1，2，3-三唑或1，2，4-三唑部分或1，2，3，4-四唑部分或1，2，4，5四嗪部分或由其组成。在本发明的第五方面的实施例中，带电单元z永久带电，特别是在中性条件下，特别是在ph值为6-8的条件下。在本发明的第五方面的实施例中，带电单元z带正电荷或带负电荷，优选带正电荷。在本发明的第五方面的实施例中，带电单元z包含以下部分或由其组成：(i)至少一个带正电荷的部分；或(ii)至少一个带负电荷的部分。在本发明的第五方面的实施例中，带电单元z为带正电荷的单元。在本发明的第五方面的实施例中，带正电荷的单元z选择为使得所得式a的化合物具有10或更高的pka，更特别地具有12或更高的pka。在本发明的第五方面的实施例中，带正电荷的单元z选自由以下项组成的组：伯铵、仲铵、叔铵、季铵、伯锍、仲锍、叔锍、季锍、伯咪唑鎓、仲咪唑鎓、叔咪唑鎓、季咪唑鎓、伯吡啶鎓、仲吡啶鎓、叔吡啶鎓、季吡啶鎓、或伯鏻、仲鏻、叔鏻、季鏻。在第五方面的特定实施例中，带正电荷的部分为三甲基铵、n，n-二甲基哌啶鎓或n-烷基-奎宁环鎓。在本发明的第五方面的实施例中，带电单元z为带负电荷的单元。在本发明的第五方面的实施例中，带负电荷的单元z选择为使得所得式a的化合物具有10或更高的pkb，更特别地具有12或更高的pkb。在本发明的第五方面的实施例中，带负电荷的单元z选自由以下项组成的组：磷酸盐、硫酸盐、磺酸盐或羧基盐。在本发明的第五方面的实施例中，支化连接基l1为三官能连接基。在本发明的第五方面的实施例中，连接基l1被取代或未被取代。在本发明的第五方面的实施例中，三官能连接基l1不可质子化。在第五方面的实施例中，三官能连接基l1包含3-30个c原子，特别是5-20个c原子，特别是8-16个c原子。在实施例中，三官能连接基l1包含一个或多个杂原子，这些杂原子特别地为n、o或s。在本发明的第五方面的实施例中，三官能连接基l1包含至少4个杂原子，特别是5、6或7个杂原子，这些杂原子特别地为n和/或o。在本发明的第五方面的实施例中，三官能连接基l1包含5个杂原子，特别是3个o原子和2个n原子。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有根据式b所示的结构：其中x、y和z的定义如上文关于式a的化合物所详述，l2、l3和l4为连接基支链，其各自独立地包含c1-c10、特别是c1-c5，可选地各自独立地包含一个或多个杂原子，其中连接基支链l2、l3和l4一起形成支化连接基，特别是如上文所定义的三官能连接基l1。在本发明的第五方面的实施例中，连接基支链l2、l3和l4各自独立地为线性连接基。在本发明的第五方面的实施例中，连接基支链l2、l3和l4具有相同或不同的长度。特别地，连接基支链l2分别长于连接基支链l3和l4。在本发明的第五方面的实施例中，连接基支链l2具有c3-c6的长度。在本发明的第五方面的实施例中，连接基支链l3和l4各自具有c1-c3的长度。在本发明的第五方面的实施例中，无论每条支链的长度如何，每条连接基支链l2、l3、l4可独立地包含一个或多个杂原子。在本发明的第五方面的特定实施例中，所有三条连接基支链包含至少一个杂原子。在本发明的第五方面的实施例中，杂原子为n、s、p或o，特别是n和/或o。在本发明的第五方面的实施例中，线性支链l4包含稳定单元。在本发明的第五方面的实施例中，稳定单元防止带电单元z在裂解事件中的丢失。在本发明的第五方面的实施例中，稳定单元通过使可能形成的碳阳离子不稳定来防止带电单元z的丢失。在本发明的第五方面的实施例中，稳定单元与带电单元z相隔至少一个c原子。在本发明的第五方面的实施例中，稳定单元包含至少一个杂原子。在本发明的第五方面的实施例中，稳定单元选自由以下项组成的组：co或其等电类似物诸如so或so2。在本发明的第五方面的实施例中，连接基支链l2包含2-6个c原子和1-3个杂原子。在本发明的第五方面的实施例中，其中连接基支链l2包含7个c原子，其包含3个杂原子，特别是o原子和n原子。在本发明的第五方面的实施例中，其中连接基支链l2包含3、4、5或6个c原子，其包含2个杂原子，特别是o原子和n原子，特别是1个n原子和1个o原子。在本发明的第五方面的实施例中，其中连接基支链l2包含2个c原子，其包含1个杂原子，特别是o原子。在本发明的第五方面的实施例中，连接基支链l3包含2-10个c原子和1-3个杂原子，特别是2个杂原子，特别是1个n原子和1个o原子。在本发明的第五方面的实施例中，连接基支链l4包含2-6个c原子和1-3个杂原子，特别是1个或2个杂原子，特别是1个n原子或1个n原子和1个o原子。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为羰基反应性单元，中性丢失单元y为5元杂环单元，并且带电单元z为永久带正电荷的单元。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为二烯反应性单元，中性丢失单元y为5元杂环单元，并且带电单元z为永久带正电荷的单元。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为肼单元，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z为叔铵基。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为酰肼单元，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为叔铵基。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为肼单元，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z为哌啶单元。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为酰肼单元，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为哌啶单元。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为肼单元，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环部分，并且带电单元z为吡啶单元。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为酰肼单元，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为吡啶单元。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为cookson型试剂，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为叔铵基。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为cookson型试剂，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为哌啶单元。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为cookson型试剂，中性丢失单元y为包含至少3个杂原子的5元杂环单元，并且带电单元z为吡啶单元。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为h2n-nh-，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为叔铵基单元。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为h2n-nh-，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为哌啶单元。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为h2n-nh-，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为吡啶单元。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为h2n-o-c-，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为二甲基哌啶或奎宁环单元。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，其中反应性单元x为1，2，4-三唑-3，5-二酮，中性丢失单元y为1，2，3-三唑、1，2，4-三唑、1，2，3，4-四唑或1，2，4，5-四嗪，并且带电单元z为二甲基哌啶或奎宁环部分。在本发明的第五方面的实施例中，化合物具有式a或式b的结构，反应性单元x为h2n-nh-，中性丢失单元y为叠氮苯或1，2，5-三氮杂螺[2.4]庚-1-烯或甲基乙基亚砜，并且带电单元z为螺[2h-异吲哚-2，1′-吡咯烷鎓]、1，3-二氢或5-氮鎓螺[4.4]壬烷。在本发明的第五方面的实施例中，式b的化合物选自由以下项组成的组：(i)标记物1(ii)标记物2知(iii)标记物3式a或式b的化合物的其他实例如下：(iv)标记物4(v)标记物5(vi)标记物6(vii)标记物7(viii)标记物8(ix)标记物9(x)标记物10(xi)标记物11(xii)标记物12(xiii)标记物13(xiv)标记物14(xv)标记物15(xvi)标记物16(xvii)标记物17(xviii)标记物18在第六方面，本发明涉及一种用于质谱测定分析物分子的方法，该方法包括以下步骤：(a)使分析物分子与上文关于本发明的第一方面所公开的式a的化合物反应，从而形成分析物分子和式a的化合物的共价加合物；以及(b)对步骤(a)中的加合物进行质谱分析，步骤(a)可以在质谱测定之前的样品制备工作流程的不同阶段进行。包含分析物分子的样品可通过各种方法进行预处理和/或富集。预处理方法取决于样品的类型，诸如血液(新鲜血液或干血)、血浆、血清、尿液或唾液，而富集方法则取决于目标分析物。本领域的技术人员熟知预处理方法所适用的样品类型。本领域的技术人员也熟知富集方法所适用的目标分析物。在本发明的第六方面的实施例中，用于分析物分子的质谱测定的本发明的方法的步骤(a)发生在i)样品预处理步骤之后、ii)样品首次富集之后或iii)样品二次富集之后。在本发明的第六方面的实施例中，其中样品为全血样品，将其分配至两种预定义的样品预处理(pt)工作流程之一，这两种工作流程均包括添加内标(istd)和溶血试剂(hr)以及随后预定义的孵育期(inc)，其中这两种工作流程之间的区别在于内标(istd)和溶血试剂(hr)的添加顺序不同。在实施例中，加入水作为溶血试剂，特别是以0.5∶1至20∶1ml水/ml样品的量加入，特别是以1∶1至10∶1ml水/ml样品的量加入，特别是以2∶1至5∶1ml水/ml样品的量加入。在本发明的第六方面的实施例中，其中样品为尿样，将其分配至另外两种预定义的样品pt工作流程之一，这两种工作流程均包括添加内标和酶试剂以及随后预定义的孵育期，其中这两种工作流程之间的区别在于内标和酶试剂的添加顺序不同。酶试剂通常是用于葡糖苷酸裂解或蛋白质裂解或对分析物或基质进行任何预处理的试剂。在另一个步骤中，加入衍生化试剂，诸如上文或下文所公开的本发明的化合物，随后经过一个孵育期。在本发明的第六方面的实施例中，酶试剂选自由以下项组成的组：葡萄糖醛酸酶、(部分)外切或内切去糖基化酶或者外切或内切蛋白酶。在实施例中，葡萄糖醛酸酶以0.5-10mg/ml、特别是1-8mg/ml、特别是2-5mg/ml的量加入。在本发明的第六方面的实施例中，其中样品为血浆或血清，将其分配到另一种预定义的pt工作流程，该工作流程仅包括添加内标(istd)以及随后预定义的孵育时间。本领域的技术人员熟知选择用于上文或下文所考虑和指定的样品处理、化学反应或方法步骤的孵育时间和温度。特别地，本领域的技术人员知道孵育时间和温度相互依赖，因为例如高温通常导致孵育时间较短，反之亦然。在本发明的第六方面的实施例中，孵育温度在4-45℃的范围内，特别是在10-40℃的范围内，特别是在20-37℃的范围内。在实施例中，时间在30s至120min的范围内，特别是在30s至1min、30s至5min、30s至10min、1min至10min或1min至20min、10min至30min、30min至60min或60min至120min的范围内。在特定实施例中，孵育时间为36s的倍数。因此，在本发明的方法的实施例中，步骤a)在上文所公开的样品的任何预处理过程之后进行。在本发明的第六方面的实施例中，其中步骤a)中的式(a)的化合物与分析物分子的反应发生在任何富集过程之前，将式(a)的化合物加入预处理后的目标样品中。因此，在预处理之后以及第一富集过程之前，形成分析物分子与式a的化合物的加合物。因此，对该加合物进行第一富集过程和第二富集过程，然后进行步骤b)的质谱分析。预处理后的样品可进一步经过分析物富集工作流程。分析物富集工作流程可包括一种或多种富集方法。富集方法在本领域中众所周知，包括但不限于化学富集方法(包括但不限于化学沉淀)和使用固相的富集方法(包括但不限于固相萃取方法、珠粒工作流程和色谱法(例如气相色谱法或液相色谱法))。在本发明的第六方面的实施例中，第一富集工作流程包括向预处理后的样品中加入固相，特别是携带分析物选择性基团的固相珠粒。在本发明的第六方面的实施例中，第一富集工作流程包括向预处理后的样品中加入携带分析物选择性基团的磁性或顺磁性珠粒。在本发明的第六方面的实施例中，磁珠的添加包括搅拌或混合。然后经过预定义的孵育期，将一种或多种目标分析物捕获到珠粒上。在本发明的第六方面的实施例中，工作流程包括用磁珠孵育之后的洗涤步骤(w1)。根据一种或多种分析物的不同，执行一个或多个额外的洗涤步骤(w2)。一个洗涤步骤(w1，w2)包括一系列步骤，其中包括利用包含磁铁或电磁体的磁珠处理单元进行磁珠分离、吸取液体、加入洗涤缓冲液、使磁珠重悬、另一个磁珠分离步骤和另一个液体吸取步骤。此外，除洗涤循环的体积和次数或组合之外，洗涤步骤可能因溶剂类型(水/有机物/盐/ph)的不同而有所不同。本领域的技术人员熟知如何选择相应的参数。在最后一个洗涤步骤(w1，w2)之后，加入洗脱试剂，然后使磁珠重悬并且经过预定义的孵育期以使一种或多种目标分析物从磁珠中释放出来。然后分离未结合的磁珠，并且捕获包含衍生后的一种或多种目标分析物的上清液。在本发明的第六方面的实施例中，第一富集工作流程包括向预处理后的样品中加入携带基质选择性基团的磁珠。在本发明的第六方面的实施例中，磁珠的添加包括搅拌或混合。然后经过预定义的孵育期，将基质捕获到珠粒上。此时目标分析物不结合至磁珠，而是保留在上清液中。然后将磁珠分离，并且收集包含富集的一种或多种目标分析物的上清液。在本发明的第六方面的实施例中，对上清液进行第二富集工作流程处理。此时将上清液转移至lc站，或者在添加稀释液的稀释步骤之后将其转移至lc站。还可通过改变例如溶剂的类型(水/有机物/盐/ph)和体积，使用不同的洗脱程序/试剂。本领域的技术人员熟知并且易于选择各种参数。在本发明的第六方面的实施例中，其中本发明的方法的步骤a)并非直接发生在预处理方法之后，步骤a)可在如上所述的使用磁珠的第一富集工作流程之后发生。在本发明的第六方面的实施例中，其中使用分析物特异性磁珠，在洗涤步骤(w1，w2)完成之后，在洗脱试剂之前、同时或之后，将上文或下文所公开的式(a)的化合物加入目标样品中，然后经过孵育期(确定的时间和温度)处理。在本发明的第六方面的实施例中，然后分离未结合的磁珠，并且收集包含步骤a)的加合物的上清液。在本发明的第六方面的实施例中，将包含步骤a)的加合物的上清液转移至第二富集工作流程，特别是直接转移至lc站，或在加入稀释液的稀释步骤之后转移。在本发明的第六方面的实施例中，其中使用基质特异性磁珠，在分离磁珠之前或之后，将上文或下文所公开的式(a)的化合物加入目标样品中。在本发明的第六方面的实施例中，将包含步骤a)的加合物的上清液转移至第二富集工作流程，特别是直接转移至lc站，或在加入稀释液的稀释步骤之后转移。因此，在本发明的第六方面的实施例中，其中步骤a)中式(a)的化合物与分析物分子的反应发生在第一富集过程之后的，在第一富集过程(特别是使用磁珠的第一富集过程)完成之后，将式(a)的化合物加入目标样品中。因此，首先如上所述对样品进行预处理，然后对其进行第一富集过程，特别是使用携带如上所述的分析物选择性基团的磁珠进行富集，并且在从磁珠中洗脱之前、同时或之后加入式(a)的化合物。因此，在第一富集过程之后和第二富集过程之前，形成分析物分子与式(a)的化合物的加合物。因此，对该加合物进行第二富集过程，然后进行步骤b)的质谱分析。在本发明的第六方面的另一个实施例中，本发明的方法的步骤(a)在第二分析物富集工作流程之后进行。在第二富集工作流程中，使用色谱分离进一步富集样品中的目标分析物。在本发明的第六方面的实施例中，色谱分离为气相色谱分离或液相色谱分离。这两种方法是本领域的技术人员所熟知的。在本发明的第六方面的实施例中，液相色谱法选自由以下项组成的组：hplc、快速lc、微流-lc、流动注射以及捕集和洗脱。在本发明的第六方面的实施例中，本发明的方法的步骤a)在色谱分离的同时或之后进行。在本发明第六方面的实施例中，将式(a)的化合物与洗脱缓冲液一起加入柱中。在替代实施例中，式(a)的化合物在柱后添加。在本发明的第六方面的实施例中，第一富集过程包括使用分析物特异性磁珠。在本发明的第六方面的实施例中，第二富集过程包括使用色谱分离，特别是使用液相色谱。在实施例中，质谱分析步骤(b)包括：(i)使加合物的离子进入质谱分析的第一级，从而根据其质荷(m/z)比对加合物的母离子进行表征，(ii)使加合物母离子裂解，从而释放出第一中性实体，并且生成加合物的子离子，其中加合物的子离子的m/z比不同于加合物母离子，以及(iii)使加合物的子离子进入质谱分析的第二级，从而根据所述加合物的子离子的m/z比对加合物的子离子进行表征，并且/或者其中(ii)可进一步包括加合物离子的另一种裂解，从而释放出不同于第一中性实体的第二中性实体，并且生成加合物的第二子离子，并且其中(iii)可进一步包括使加合物的第一子离子和第二子离子进入质谱分析的第二级，从而根据所述加合物的第一子离子和第二子离子的m/z比对加合物的第一子离子和第二子离子进行表征。因此，在本发明的第六方面的实施例中，其中步骤a)中式(a)的化合物与分析物分子的反应发生在第二富集过程之后的，在使用色谱(特别是液相色谱)的第二富集过程完成之后，将式(a)的化合物加入目标样品中。因此，在这种情况下，首先对样品进行如上文所述的预处理，然后对其进行第一富集过程，特别是如上所述使用磁珠进行富集，然后进行色谱分离(特别是使用液相色谱)，随后在色谱分离之后加入式(a)的化合物。因此，在第二富集过程之后，形成分析物分子与式(a)的化合物的加合物。因此，加合物在步骤b)的质谱分析之前不经富集过程。在另一些实施例中，本发明涉及以下方面：1)一种式a的化合物：其中x为反应性单元，其特别是能够与分析物分子形成共价键，l1为支化连接基，特别是三官能连接基y为中性丢失单元，z为带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是包含一个永久带电部分，包括所述化合物的任何盐。2)根据第1方面所述的化合物，其中反应性单元x选自由以下项组成的组：羰基反应性单元、二烯反应性单元、羟基反应性单元、氨基反应性单元、亚胺反应性单元、硫醇反应性单元、二醇反应性单元、酚反应性单元、环氧化物反应性单元、二硫化物反应性单元和叠氮化物反应性单元。3)根据前述方面中任一项所述的化合物，其中反应性单元x为羰基反应性基团，特别地，其中x选自由以下项组成的组：(i)肼单元，例如h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1为芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，其可选地被取代，(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2为芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，其可选地被取代，(iii)羟氨基单元，例如h2n-o-单元，以及(iv)二硫醇单元，特别是1，2-二硫醇或1，3-二硫醇单元。4)根据第1方面或第2方面所述的化合物，其中反应性单元x为硫醇反应性基团或氨基反应性基团，诸如活性酯基，例如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、羟基苯并三唑(hobt)酯或1-羟基-7-氨基苯并三唑(hoat)酯基团。5)根据前述方面中任一项所述的化合物，其中中性丢失单元y在电离时释放出中性实体。6)根据前述方面中任一项所述的化合物，其中带电单元z永久带电。7)根据前述方面中任一项所述的化合物，其中支化连接基，特别是三官能连接基l1，包含1至30个c原子，可选地包含1个或更多个杂原子。8)根据前述方面中任一项所述的化合物，其中化合物具有根据式b所示的式：式b其中x、y和z如前述方面中任一项所定义，l2、l3和l4为线性支链，其各自独立地包含c1-c10，可选地各自独立地包含一个或多个杂原子，其中线性支链l2、l3和l4一起形成支化连接基，特别是如前述方面中任一项所定义的三官能连接基l1。9)根据前述方面中任一项所述的化合物，其中反应性单元x为羰基反应性基团，中性丢失单元y为5元杂环部分，带电单元z包含一个永久带正电荷的部分。10)根据前述方面中任一项所述的化合物，其中反应性单元x为h2n-nh-，中性丢失单元y为三唑或四唑，并且带电单元z为叔铵基。11)一种组合物，其包含根据第1-10方面中任一项所述的化合物。12)一种试剂盒，其包含根据第1-10方面中任一项所述的化合物或根据第11方面所述的组合物。13)一种共价加合物，其包含彼此共价连接的分析物分子和根据第1-10方面中任一项所述的化合物，特别地，其中所述共价加合物通过所述分析物分子与根据第1-10方面中任一项所述的化合物的化学反应形成。14)式a的化合物：其中x为反应性单元，其特别是能够与分析物分子形成共价键l1为支化连接基，特别是三官能连接基，y为中性丢失单元，z为带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是包含一个永久带电部分包括所述化合物的任何盐，或包含至少一种式a的化合物的组合物或试剂盒用于分析物分子的质谱测定中的用途，其中所述质谱测定特别地包括串联质谱测定，更特别地在三重四极杆设备中。15)一种用于质谱测定分析物分子的方法，所述方法包括以下步骤：(a)使所述分析物分子与根据第1-10方面中任一项所定义的式a的化合物反应，从而形成分析物分子与式a的化合物的共价加合物，以及(b)对来自步骤(a)的加合物进行质谱分析，优选地，其中质谱分析步骤(b)包括：(i)使加合物的离子进入质谱分析的第一级，从而根据其质荷(m/z)比对加合物的离子进行表征，(ii)使加合物离子裂解，从而释放出第一中性实体，特别是低分子量中性实体，并且生成加合物的子离子，其中加合物的子离子在其m/z比上不同于加合物离子，以及(iii)使所述加合物的子离子进入质谱分析的第二级，从而根据所述加合物的子离子的m/z比对所述加合物的子离子进行表征，并且/或者其中(ii)可进一步包括所述加合物离子的另一种裂解，从而释放出不同于所述第一中性实体的第二中性实体，并且生成所述加合物的第二子离子，并且其中(iii)可进一步包括使所述加合物的第一子离子和第二子离子进入质谱分析的第二级，从而根据所述加合物的第一子离子和第二子离子的m/z比对所述加合物的第一子离子和第二子离子进行表征。实例提供以下实施例以说明本发明，但不限制受权利要求书保护的本发明。实例1：标记物1的合成1.步骤：rac-(2s)-2-(9h-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-6-[[2-(5-苯基四唑-2-基)乙酰]氨基]己酸的合成：在50ml烧瓶中，将(5-苯基-四唑-2-基)-乙酸(200mg，0.98mmol)溶于ch3cn/dcm(20/10ml)中，然后加入nhs(136mg，1.18mmol)和2-吗啉基乙基异腈(150mg，1.08mmol)。在r.t.下反应过夜。然后，通过真空除去溶剂，并且将无色油状粗产物溶于无水dmf(5ml)中，然后加入dipea(253mg，1.96mmol)和fmoc-lys-oh盐酸盐(435mg，1.08mmol)。在r.t.下反应6h。然后除去溶剂，并且通过制备型hplc纯化产物，以得到414mg所需产物(产率76％)，其为白色固体。hplc方法c-18柱：0min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；0-10min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；10-60min：50％h2o0.1％tfa；30％ch3cn0.1％tfa；60-90min：20％h2o0.1％tfa；80％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.30-1.53(m，4h)1.54-1.80(m，2h)3.10(m，2h)3.87-4.06(m，1h)4.17-4.33(m，3h)5.47(s，3h)7.28-7.35(m，2h)7.35-7.42(m，2h)7.49-7.58(m，3h)7.61(m，1h，nh)7.70(d，j＝7.53hz，2h)7.86(d，j＝7.53hz，2h)8.02-8.08(m，2h)8.46(m，1h，nh)。13cnmr(101mhz，dmso-d6)δppm23.50(1c)28.83(1c)30.83(1c)39.18(1c)47.10(1c)54.18(1c)55.22(1c)66.03(1c)120.54(2c)125.72(2c)126.77(2c)127.29(2c)127.50(2c)128.07(2c)129.71(2c)131.01(1c)141.16(1c)144.24(2c)144.28(2c)156.62(1c)164.37(1c)164.55(1c)174.40(1c)。hplc-ms(m/z)[m h] 计算值555.2356实测值555.292.步骤：rac-(2s)-2-氨基-6-[[2-(5-苯基四唑-2-基)乙酰]氨基]己酸甲酯的合成：在50ml烧瓶中，将羧酸(200mg，0.36mmol)溶于4mldmf(澄清溶液)中，然后加入1ml哌啶(立即开始形成白色沉淀)。在r.t.下搅拌30min后，反应结束。然后，通过真空蒸发除去溶剂，并且通过用acoet(20ml)进行沉淀以纯化产物。通过过滤回收固体，并且用冷acoet(2×10ml)进行洗涤。将白色固体p1(吸湿性)在真空下干燥，以得到94mg产物。将产物溶于meoh(20ml)中，并且在r.t.下加入h2so4(0.1ml，1n)，使溶液在r.t.下反应4天。蒸发溶剂，并且通过制备型hplc纯化油状物，以得到62mg所需产物(产率48％)，其为白色固体(tfa盐)。hplc方法c-18柱：0min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；0-10min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；10-60min：50％h2o0.1％tfa；50％ch3cn0.1％tfa；60-70min：20％h2o0.1％tfa；80％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.18-1.33(m，2h)1.34-1.52(m，2h)1.56-1.90(m，2h)2.95-3.14(m，2h)3.64(s，3h)3.83(dd，j＝8.85，5.08hz，1h)5.46(s，2h)7.46-7.62(m，3h)7.84-8.10(m，2h)8.44(m，1h，nh)。13cnmr(101mhz，dmso-d6)δppm22.26(1c)28.72(1c)30.40(1c)38.97(1c)52.69(1c)55.20(1c)57.34(1c)126.77(2c)127.29(1c)129.73(2c)131.02(1c)164.41(1c)164.54(1c)171.50(1c)。hplc-ms(m/z)[m h] 计算值347.18317实测值347.333.步骤：2，2，2-三氟乙酸盐；三甲基-[2-氧代-2-[[rac-(1s)-1-甲氧基羰基-5-[[2-(5-苯基四唑-2-基)乙酰]氨基]戊基]氨基]乙基]铵的合成：向r1(62mg，0.14mmol)的无水dmf(10ml)和ar的溶液中，加入甜菜碱(47mg，0.41mmol)、edc·hcl(78，0.41mmol)、dipea(174mg，1.35mmol)和nhs(47mg，0.41mmol)。使溶液/悬浮液(r2溶解不完全)在r.t下反应过夜。蒸发溶剂，并且通过制备型hplc纯化无色粗制油状物，以得到24mg所需产物(产率30％)，其为无色油状物(tfa盐)。hplc方法c-18柱：0min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；0-10min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；10-60min：70％h2o0.1％tfa；30％ch3cn0.1％tfa；60-90min：20％h2o0.1％tfa；80％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.26-1.37(m，2h)1.37-1.55(m，2h)1.57-1.79(m，2h)3.08-3.11(m，2h)3.18(s，9h)3.62(s，3h)4.13(s，2h)4.18-4.46(m，1h)5.47(s，2h)7.46-7.62(m，3h)7.99-8.24(m，2h)8.53(m，1h，nh)8.76-9.02(m，1h，nh)。13cnmr(101mhz，dmso-d6)δppm22.96(1c)28.96(1c)30.65(1c)39.07(1c)52.55(1c)53.07(1c)53.81(3c)55.50(1c)64.34(1c)126.80(2c)127.4(1c)130.11(2c)131.02(1c)132.27(1c)164.06(1c)164.54(1c)172.52(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值431.24068实测值431.344.步骤：2，2，2-三氟乙酸盐；2，2，2-三氟乙酸；三甲基-[2-氧代-2-[[rac-(1s)-1-(肼羰基)-5-[[2-(5-苯基四唑-2-基)乙酰]氨基]戊基]氨基]乙基]铵的合成：在25ml烧瓶中，将酯(17mg，0.030mmol)溶于meoh(5ml)中，然后加入肼(15mg，0.30mmol)。在50℃下反应2h。此后，通过真空除去溶剂(使用高真空泵除去过量的肼)，并且利用制备型hplc纯化无色粗制油状物，以得到20mg所需产物(产率65％)，其为白色固体(tfa盐)。hplc方法c-18柱：0-10min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；10-60min：70％h2o0.1％tfa；30％ch3cn0.1％tfa；60-90min：20％h2o0.1％tfa；80％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.20-1.38(m，2h)1.40-1.53(m，2h)1.54-1.76(m，2h)3.03-3.14(m，2h)3.21(s，9h)4.06-4.17(m，2h)4.24-4.34(m，1h)5.49(s，2h)7.50-7.74(m，3h)8.02-8.13(m，2h)8.43-8.53(m，1h，nh)8.79-8.90(m，1h，nh)。13cnmr(126mhz，dmso-d6)δppm23.06(1c)28.95(1c)31.85(1c)39.23(1c)51.65(1c)53.86(1c)55.30(1c)64.31(1c)126.86(2c)127.4(1c)129.86(2c)131.19(1c)132.85(1c)163.3(1c)，164.8(1c)169.48(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值446.2628实测值446.39实例2：标记物2的合成1.步骤：n-[rac-(1s)-5-(叔丁氧基羰基氨基)-1-[(2-甲基四唑-5-基)甲基氨基甲酰基]戊基]氨基甲酸-9h-芴-9-基甲基酯的合成：将fmoc-lys(boc)-oh(505mg，1.079mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(163mg，1.417mmol)、edc·hcl(268mg，1.400mmol)和碳酸氢钠(296mg，3.521mmol)的混合物溶于10mldmf中，并且在室温下进行搅拌。2h后，加入四唑(184mg，1.221mmol)，并且在室温下继续搅拌2h。在减压条件下除去溶剂，并且将残余物用etoac萃取三次。将合并的有机相用硫酸钠干燥，随后进行在硅胶上的快速柱色谱(正己烷∶etoac；1∶2至1∶3)，以得到454mg所需产物(产率75％)，其为灰白色固体。1hnmr(400mhz，chloroform-d)δppm1.18-1.58(m，13h)1.59-1.96(m，2h)3.00-3.20(m，2h)4.15-4.30(m，5h)4.32-4.53(m，2h)4.53-4.81(m，2h)5.43-5.63(m，1h，nh)6.79-7.04(m，1h，nh)7.25-7.32(m，2h)7.38(m，2h)7.49-7.65(m，2h)7.74(m，2h)。13cnmr(101mhz，chloroform-d)δppm22.41(1c)28.40(3c)29.56(1c)31.86(1c)32.12(1c)34.90(1c)39.40(1c)39.80(1c)47.13(1c)54.75(1c)67.07(1c)77.20(1c)119.96(2c)125.04(2c)127.07(2c)127.72(2c)141.27(1c)143.69(1c)143.75(1c)156.22(1c)163.40(1c)171.90(1c)。hplc-ms(m/z)[m h] 计算值564.29344实测值564.422.步骤：n-[rac-(5s)-5-氨基-6-[(2-甲基四唑-5-基)甲基氨基]-6-氧代-己基]氨基甲酸叔丁酯的合成：向fmoc-赖氨酸-四唑(37mg，0.066mmol)的2mldmf溶液中，加入哌啶(47mg，0.552mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1.5h后，在减压条件下除去残留溶剂。利用在硅胶上的快速柱色谱(chcl3∶meoh；8∶1)进行纯化，以得到22mg所需产物(产率98％)，其为无色油状物。1hnmr(400mhz，chloroform-d)δppm1.36-1.62(m，14h)1.75-2.03(m，1h)3.00-3.20(m，2h)3.44(m，1h)4.32(s，3h)4.44-4.64(m，1h，nh)4.71(m，2h)7.86-8.13(m，1h，nh)。13cnmr(101mhz，chloroform-d)δppm22.78(1c)28.40(3c)29.86(1c)34.39(1c)34.52(1c)39.45(1c)40.14(1c)54.91(1c)77.19(1c)156.05(1c)163.84(1c)175.03(1c)。hplc-ms(m/z)[m h] 计算值342.22536实测值342.483.步骤：2，2，2-三氟乙酸盐；2，2，2-三氟乙酸；三甲基-[2-氧代-2-[[rac-(1s)-5-氨基-1-[(2-甲基四唑-5-基)甲基氨基甲酰基]戊基]氨基]乙基]铵的合成：将赖氨酸-四唑(78mg，0.229mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(45mg，0.392mmol)、edc·hcl(84mg，0.441mmol)、碳酸氢钠(117mg，1.392mmol)和甜菜碱(46mg，0.391mmol)的混合物溶于2mldmf中，并且在室温下搅拌42h。在减压条件下除去溶剂，并且将残余物用制备型hplc进行纯化，以得到36mg所需产物(产率28％)，其为无色油状物(tfa盐)。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa。0-1min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；1-10min：98％h2o0.1％tfa；2％ch3cn0.1％tfa；10-60min：50％h2o0.1％tfa；50％ch3cn0.1％tfa；60-70min：0％h2o0.1％tfa；100％ch3cn0.1％tfa。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.21-1.38(m，2h)1.24-1.38(m，3h)1.42-1.60(m，1h)1.60-1.79(m，1h)2.64-2.78(m，2h)3.18(s，9h)3.99-4.18(m，2h)4.23-4.36(m，4h)4.41-4.57(m，2h)7.69-7.85(m，1h，nh)8.69-8.90(m，1h，nh)。13cnmr(101mhz，dmso-d6)δppm22.56(1c)27.01(1c)31.72(1c)34.23(1c)39.06(1c)39.83(1c)52.80(1c)53.79(3c)64.47(1c)163.60(1c)164.16(1c)171.27(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值341.24080实测值341.474.步骤：2，2，2-三氟乙酸盐；三甲基-[2-氧代-2-[[rac-(1s)-5-[[2-(叔丁氧基羰基氨基)氧乙酰]氨基]-1-[(2-甲基四唑-5-基)甲基氨基甲酰基]戊基]氨基]乙基]铵的合成：将赖氨酸-甜菜碱-四唑(13.2mg，0.029mmol)、n-羟基琥珀酰亚胺(5mg，0.045mmol)、edc·hcl(9.7mg，0.051mmol)、碳酸氢钠(8.8mg，0.105mmol)和羧酸(6.1mg，0.032mmol)的混合物溶于0.5mldmf中，并且在室温下搅拌4h。除去溶剂，随后通过制备型hplc进行纯化，以得到9.4mg所需产物(产率52％)，其为无色油状物(tfa盐)。hplc方法c-18柱：0min：100％h2o0.1％tfa，0％ch3cn0.1％tfa。0-1min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；1-10min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；10-60min：50％h2o0.1％tfa；50％ch3cn0.1％tfa；60-70min：0％h2o0.1％tfa；100％ch3cn0.1％tfa。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.17-1.32(m，3h)1.33-1.46(m，10h)1.47-1.59(m，1h)1.59-1.71(m，1h)3.01-3.11(m，2h)3.12-3.23(m，9h)4.05-4.18(m，2h)4.23(s，1h)4.33(s，3h)4.33-4.48(m，2h)7.93-8.06(m，1h，nh)8.61-8.83(m，1h，nh)10.08(s，1h，nh)10.29(brs，1h，nh)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值514.30961实测值514.575.步骤：2，2，2-三氟乙酸盐；2，2，2-三氟乙酸；三甲基-[2-氧代-2-[[rac-(1s)-5-[(2-氨基氧乙酰)氨基]-1-[(2-甲基四唑-5-基)甲基氨基甲酰基]戊基]氨基]乙基]铵的合成：向boc-赖氨酸-甜菜碱-四唑(9.4mg，0.015mmol)的0.7mldcm溶液中加入一滴三氟乙酸。将溶液在室温下搅拌24h后，在减压条件下除去溶剂，以得到7.6mg所需产物(产率80％)，其为无色油状物(tfa盐)。1hnmr(500mhz，deuteriumoxide)δppm1.20-1.32(m，2h)1.35-1.48(m，2h)1.57-1.75(m，2h)3.13(m，2h)3.19(s，9h)4.04(s，2h)4.22-4.26(m，4h)4.49-4.61(m，4h)。13cnmr(126mhz，deuteriumoxide)δppm22.32(1c)27.82(1c)30.47(1c)34.37(1c)38.88(1c)39.61(1c)54.15(1c)54.34(3c)64.73(1c)71.83(1c)163.20(1c)164.26(1c)168.56(1c)173.82(1c)。hplc-ms(m/z)[m-nh2] 计算值399.24628实测值399.54实例3：标记物3的合成1.步骤：(2s)-2-(9h-芴-9-基甲氧基羰基氨基)-6-[(1-苯基三唑-4-羰基)氨基]己酸的合成：将n-羟基琥珀酰亚胺酯粗产物(815mg，按2.18mmol计)和882mgfmoclysoh盐酸盐(882mg，2.18mmol)溶于8mldmf中。加入n-甲基吗啉(480μl，441mg，4.36mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌18h。然后将反应混合物在真空下浓缩至1ml，随后依次加入1mlacoh和100ml饱和nh4cl。将获得的水相用15mletoac萃取三次。将收集的有机相用na2so4干燥，然后浓缩，以得到1.5g粗产物。利用在硅胶上的色谱(chcl3∶meoh＝9∶1)进行纯化，得到1.17g所需产物，其为白色固体。1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.26-1.40(m，2h)1.49-1.68(m，3h)1.69-1.82(m，1h)3.27(brd，j＝6.65hz，1h)3.82(brd，j＝4.77hz，1h)4.16-4.41(m，2h)7.20-7.70(m，9h)7.86(d，j＝7.4hz，2h)7.94-7.96(m，3h)8.46-8.81(m，1h)9.25(s，1h)。13cnmr(101mhz，dmso-d6)δppm21.54(1c)29.09(1c)30.75(1c)35.77(1c)46.73(1c)54.90(1c)65.30(1c)120.04(2c)120.37(2c)124.48(2c)125.22(1c)127.02(2c)127.54(1c)129.05(1c)129.87(2c)136.31(1c)140.69(2c)143.88(2c)143.94(2c)155.67(1c)159.25(1c)162.29(1c)。hplc-ms(m/z)[m h] 计算值540.22469实测值540.32.步骤：rac-(2s)-2-氨基-6-[(1-苯基三唑-4-羰基)氨基]己酸的合成：将羧酸(1.17g，2.18mmol)溶于12mldmf中。加入2.4ml哌啶，并且将反应混合物在室温下搅拌1h。将溶剂在真空下完全除去，然后将3mletoac和15ml正己烷加入获得的干残余物中。将悬浮液搅拌15min，然后过滤。将滤液用100ml正己烷/etoac(10：1)进行洗涤。从过滤器上除去获得的白色固体，再次在真空下干燥，以得到556mg粗制氨基酸(产率80％)。hplc-ms(m/z)[m h] 计算值318.15661实测值318.23.步骤：2，2，2-三氟乙酸盐；三甲基-[2-氧代-2-[[rac-(1s)-1-甲氧基羰基-5-[(1-苯基三唑-4-羰基)氨基]戊基]氨基]乙基]铵的合成：r.t下向氨基酸(400mg，0.90mmol)的meoh(20ml)溶液中加入h2so4(0.1ml，1n)，然后使溶液在r.t.下反应24h。将溶液温热至50℃，并且反应24h。蒸发溶剂，并且通过制备型hplc纯化油状物，以得到424mg所需产物，其为白色固体(tfa盐)。向p1(400mg，0.90mmol)的无水dmf和ar的溶液中，加入甜菜碱(316mg，2.70mmol)、edc·hcl(518，2.70mmol)、dipea(696mg，5.39mmol)和nhs(310mg，2.70mmol)。使溶液/悬浮液(甜菜碱溶解不完全)在r.t.下反应过夜。蒸发溶剂，并且通过制备型hplc纯化无色粗制油状物，以得到223.8mg所需产物(产率33％)，其为无色油状物(tfa盐)。hplc方法c-]8柱：0mm：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；0-10min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；10-60min：70％h2o0.1％tfa，30％ch3cn0.1％tfa；60-90min：20％h2o0.1％tfa；80％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.35(m，2h)1.45-1.59(m，2h)1.59-1.96(m，2h)3.19(s，9h)3.26(m，2h)3.63(s，3h)4.16(s，2h)4.28(m，1h)7.47-7.66(m，3h)8.65(m，1h，nh)9.04(m，1h，nh)9.23(s，1h)。13cnmr(101mhz，dmso-d6)δppm23.07(1c)29.08(1c)30.68(1c)38.60(1c)52.50(1c)52.56(1c)53.74(3c)64.10(1c)120.84(2c)124.95(1c)129.55(1c)130.34(2c)136.75(1c)144.28(1c)159.78(1c)164.04(1c)172.27(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值431.24068实测值431.344.步骤：2，2，2-三氟乙酸盐；2，2，2-三氟乙酸；三甲基-[2-氧代-2-[[rac-(1s)-1-(肼羰基)-5-[(1-苯基三唑-4-羰基)氨基]戊基]氨基]乙基]铵的合成：在25ml烧瓶中，将酯(200mg，0.37mmol)溶于meoh(5ml)中，然后加入一水合肼(184mg，3.68mmol)。在50℃下反应2h。此后，通过真空除去溶剂(使用高真空泵除去过量的肼)，并且利用制备型hplc纯化无色粗制油状物，以得到178.0mg所需产物(产率73％)，其为白色固体(tfa盐)。hplc方法c-18柱：0min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；0-10min：98％h2o0.1％tfa，2％ch3cn0.1％tfa；10-60min：70％h2o0.1％tfa；30％ch3cn0.1％tfa；60-90min：20％h2o0.1％tfa；80％ch3cn0.1％tfa；1hnmr(400mhz，dmso-d6)δppm1.19-1.44(m，2h)1.47-1.75(m，4h)3.16-3.28(m，11h)4.03-4.22(m，2h)4.23-4.37(m，1h)7.47-7.63(m，3h)7.93(s，2h)8.65(m，1h，nh)8.98(m，1h，nh)9.23(s，1h)11.04(brs，1h，nh)。13cnmr(101mhz，dmso-d6)δppm23.04(1c)29.18(1c)31.56(1c)38.70(1c)51.70(1c)53.76(3c)64.51(1c)120.86(2c)124.96(1c)129.59(1c)130.36(2c)136.73(1c)144.27(1c)159.77(1c)164.01(1c)170.77(1c)。hplc-ms(m/z)[m] 计算值431.2519实测值431.37实例4：标记物1-睾酮衍生物的制备及其ms分析将睾酮溶于ms级甲醇中，使其最终浓度为1mg/ml。将标记物1(三甲基-[2-氧代-2-[[rac-(1s)-1-(肼羰基)-5-[[2-(5-苯基四唑-2-基)乙酰]氨基]戊基]氨基]乙基]铵；2，2，2-三氟乙酸盐；2，2，2-三氟乙酸)溶于ms级甲醇中，使其最终浓度为30mg/ml。用70μlms级甲醇和10μl冰乙酸中的10μl标记物1对10μl睾酮进行衍生化。在eppendorf恒温混匀仪中在45℃和1200rpm下孵育，衍生化反应2小时。利用lc-ms分析，基于无标记的睾酮的峰面积计算出产率＝85％。利用lc-ms全扫描在正离子模式下以分别为5、10、15、20、30、35、40、50和60v的碰撞能量分析10μl稀释的(在80％甲醇中按1：1000)衍生化反应产物。在lc/ms分析中，在与watersacquityhclasshplc连接的xevog2-xs-qtoflc-ms系统(waters)上对样品进行分析。在45℃下使用c18柱(acquityuplchsst31.8μm，2.1×50mm柱，waters)进行色谱分离，以2mmnh4ac、0.1％甲酸的水溶液(a)或甲醇溶液(b)作为流动相，所用流速为450μl/min。使用以下不连续梯度：0至2min，25％b；2至6min，25％至99.9％b；6至8min，99.9％b；以及8至10min，25％b。优化的esi源条件如下：脱溶剂温度650℃，源温度150℃，锥体气体流150l/hr，脱溶剂气流800l/hr，碰撞气流0.18ml/min，源补偿80v，毛细管3.5v。tof-ms质量范围为50至1200da，数据格式质心，扫描时间0.2s，分析器模式为灵敏度，动态范围为正常，低质量分辨率15，高质量分辨率10。利用masslynx软件(版本4.1，scn949)采集数据，并且使用targetlynx(版本4.1，scn909)进行评估。在气相中，标记物1-睾酮衍生物发生四唑基团的n2(δ28da)中性丢失，正电荷在产物离子的带正电荷的三甲基氨基上保持完整，如图1a所示。表1示出了标记物1-睾酮衍生物的前体离子和产物离子的m/z的计算值和测量值。表1：标记物1-睾酮衍生物的前体离子和产物离子的m/z的计算值和测量值计算值实测值前体离子[m/z]716.46716.43产物离子[m/z]688.45688.43中性丢失[da]28.0128.00在不同碰撞能量下，通过全扫描在正离子模式下分析标记物1-睾酮衍生物。前体离子和产物离子的相应峰面积在图1b中示出。在30v的碰撞能量下获得了最高强度的产物离子。相应的ms质谱图如图1c所示，其中产物离子m/z688.4276具有最强的峰。比较衍生物1的产物离子的最大峰面积与具有相同分析物浓度(0.1μg/ml)的未标记的13c3-睾酮和用试剂a(引自：rahimoff等人(2017)，j.am.chem.soc.，139(30)，第10359-10364页)标记的睾酮，观察到产物离子强度分别提高了15倍和5倍(图2a)。此外，在相同的分析物浓度(0.1μg/ml，图2b)下，标记物1比rahimoff等人(2017年)的试剂a、amplifexketo试剂和girardp试剂生成了强度更高的睾酮前体离子。与未标记的睾酮和rahimoff等人(2017年)的试剂a相比，前体离子强度均提高了4倍；与amplifexketo试剂标记的睾酮相比，强度则提高了2倍。实例5：标记物2-睾酮衍生物的制备及其ms分析将睾酮溶于ms级甲醇中，使其最终浓度为1mg/ml。将标记物2(三甲基-[2-氧代-2-[[rac-(1s)-1-(肼羰基)-5-[[2-(5-甲基四唑-2-基)乙酰]氨基]戊基]氨基]乙基]铵；2，2，2-三氟乙酸盐；2，2，2-三氟乙酸)溶于ms级甲醇中，使其最终浓度为100mg/ml。用70μlms级甲醇和10μl冰乙酸中的10μl标记物2对10μl睾酮进行衍生化。在eppendorf恒温混匀仪中在45℃和1200rpm下孵育，衍生化反应2小时。利用lc-ms分析，基于无标记的睾酮的峰面积计算出产率＝100％。利用lc-ms全扫描在正离子模式下以分别为5、10、15、20、30、35、40、50和60v的碰撞能量分析10μl稀释的(在80％甲醇中按1：1000)衍生化反应产物。如上文关于实例4所述，执行lc/ms分析。在气相中，衍生物标记物2-睾酮发生四唑基团的n2(δ28da)中性丢失，正电荷在产物碎片的带正电荷的三甲基氨基上保持完整，如图3a所示。表2示出了标记物2-睾酮衍生物的前体离子和产物离子的m/z的计算值和测量值。表2：标记物2-睾酮衍生物的前体离子和产物离子的m/z的计算值和测量值。计算值实测值前体离子[m/z]684.46684.46产物离子[m/z]656.45656.44中性丢失[da]28.0128.02在不同碰撞能量下，通过全扫描在正离子模式下分析衍生物。前体离子和产物离子的相应峰面积在图3b中示出。在35v的碰撞能量下获得了最高强度的产物离子。相应的ms质谱图如图3c所示，其中前体离子m/z为684.4455，产物离子m/z为656.4455。实例6：标记物16、17和18的合成固相合成方案将树脂(250μmol)在dmf中溶胀(10min)，然后用30mldmf中的水合肼(10eq)和dipea(20eq)的混合物进行处理。1h后，除去溶液，并且将树脂用10体积％dipea的甲醇溶液进行孵育。30min后，洗涤树脂(3x甲醇，3xdcm，3xdmf)。接下来，在存在pybop(6eq)和dipea(9eq)的情况下，使相应的fmoc保护的氨基酸结构单元(3eq，0.2m的dmf溶液)偶联。90min后，洗涤树脂(3xdmf，3xdcm，3xdmf)，并且将剩余的酰肼基团用dmf/ac2o/二甲基吡啶(89/5/6，10min)进行乙酰化。洗涤树脂(5xdmf)，并且通过加入20％哌啶的dmf溶液(2x10min)，除去n末端fmoc-基团。洗涤树脂(5xdmf)，并且在存在pybop(6eq)和dipea(9eq)的情况下使fmoc-pro-oh(3eq，0.2m的dmf溶液)偶联。90min后，洗涤树脂(3xdmf，3xdcm，3xdmf)，并且将剩余的氨基用dmf/ac2o/二甲基吡啶(89/5/6，10min)进行乙酰化。洗涤树脂(5xdmf)，并且通过加入20％哌啶的dmf溶液(2x10min)，除去n末端fmoc-基团。洗涤树脂(5xdmf)，并且在存在dipea(5eq)的情况下将树脂用α，α′-二溴邻二甲苯(3eq，c＝0.4m，溶于dmf中)处理16h，对n末端进行季铵化。然后洗涤树脂(5xdmf，3xdcm)，并且在真空下干燥。通过用tfa/tis/水(5ml，95/2.5/2.5)处理树脂2h，使二肽从树脂上裂解。收集tfa溶液，在真空下浓缩，然后加入8倍体积的乙醚以使肽沉淀。移除上清液，并且将粗产物用制备型rp-hplc(柱：triartc1820×250mm)进行纯化，其中使用a(0.1％tfa水溶液)和b(0.1％tfa的20％乙腈水溶液)的二元混合物，并且流速为20ml/min。n-[1-[(4-叠氮苯基)甲基]-2-肼基-2-氧代-乙基]螺[1，3-二氢异吲哚-2-鎓-2，1′-偶氮立定-1-鎓]-2′-甲酰胺；2，2，2-三氟乙酸盐的合成10.9mg/20.5μmol；hplc-ms(m/z)[m] 计算值420.2，实测值420.2。n-[1-(肼羰基)-3-甲基亚磺酰基-丙基]螺[1，3-二氢异吲哚-2-鎓-2，1′-偶氮立定-1-鎓]-2′-甲酰胺；2，2，2-三氟乙酸盐的合成18.6mg/37.7μmolhplc-ms(m/z)[m] 计算值379.5，实测值379.2。5.14mg/11.0μmolhplc-ms(m/z)[m] 计算值355.5，实测值355.2。实例7：使用标记物16、17和18对睾酮进行衍生化在甲醇中制备500ng/ml的睾酮溶液(s1)。加入与溶液(s1)相比，包含稀释在甲醇中的过量衍生化试剂(标记物16、标记物17或标记物18)中任一种(摩尔比＞1000)的溶液(s2)，并且用冰乙酸(20％v/v)使其酸化。将溶液s1和s2混合，得到溶液s3，然后在65℃下保持2h并且在室温下保持12h。12h后，用甲醇稀释溶液s3，根据睾酮的分子质量给出五个独立的浓缩水平，分别为1eq睾酮、1/20eq睾酮、1/40eq睾酮、1/100eq睾酮和1/200eq睾酮。选择1eq是因为它仍在检测器的线性范围内，1/200eq睾酮则低于所用仪器的检测限。例如，watersquattromicro系统采用了以下浓度：100ng/ml；5ng/ml；2.5ng/ml；1ng/ml；500pg/ml。用溶液s2制备0ng/ml的空白溶液。在分析物分子衍生化后，可能得到衍生物异构体，其往往产生多个峰。需要对各种异构体的特性进行相对定量，以说明其色谱行为。示例性图5示出在5％的绝对峰高下应用某种色谱方法得到的信号随时间的分布。参数“分裂”描述了色谱系统分离衍生化反应所得到的分析物分子异构体的能力。如果使用反相色谱材料进行分离，则在异构体峰重心中测定的保留时间可描述所得衍生物的极性。峰面积a1和a2以信号计数*min为单位来衡量，并且对于所得的衍生异构体，分别按其相应的比率来报告。如果峰a1和峰a2的比率为50/50，则所得异构体以相同的量产生。如果标记物影响该比率，使其不等于50/50，则主要产生一种异构体。因此，信号强度分布不均，并由此相对于不受影响的背景噪音提高信号高度。对于每种标记物质，经液相色谱分离后，利用电喷雾电离质谱法测量相应的睾酮衍生物，使用15v、20v、25v、30v、35v和40v的碰撞能量进行不同的裂解扫描。利用分子离子峰和丰度最高的碎片离子峰(中性丢失)的质量信号进行裂解优化。如果涉及包含中性丢失单元的带电分子的信号增益，则裂解能量是最重要的调谐参数之一。裂解能量至关重要，因为在源和其他离子路径条件下，分子需要不发生裂解。中性丢失碎片的裂解只应发生在碰撞池(和/或相关设备)中，以形成特定的目标碎片。如果用于中性丢失碎片的裂解碰撞能量非常高，则可能发生其他不需要的裂解途径，导致中性丢失裂解途径的信号强度损失。因此，为获得最佳的裂解行为，碰撞能量不应过小，也不应过大。将根据相应的碰撞能量获得的最大峰面积用于其他检测限定量方法中。对于每种标记物质，将相应的睾酮衍生物通过液相色谱注射至质谱仪上，已将相应的睾酮衍生物在三重四极杆质谱仪上进行了调谐。调谐参数为碰撞能量，其导致在五次独立的碰撞能量实验中获得最高的相应色谱峰信号。色谱和ms参数·极性es ·校准静态2·毛细管(kv)3.003.00·锥体(v)50.0053.36·提取器(v)3.003.54·rf透镜(v)0.20.2·源温度(℃)140138·脱溶剂温度(℃)350348·锥体气流(l/hr)5049·脱溶剂气流(l/hr)650646·lm1分辨率5.0·hm1分辨率15.0·离子能量11.0·入口50-65·碰撞2-15·出口50-65·lm2分辨率5.0·hm2分辨率15.0·离子能量21.0·倍增器(v)650-647·注射泵流速(μl/min)40.0·气室皮拉尼压力(mbar)1.87e-4·仪器参数-功能2：·极性es ·校准静态2·毛细管(kv)3.003.00·锥体(v)50.0053.36·提取器(v)3.003.54·rf透镜(v)0.20.2·源温度(℃)140138·脱溶剂温度(℃)350348·锥体气流(l/hr)5049·脱溶剂气流(l/hr)650646·lm1分辨率5.0·hm1分辨率15.0·离子能量11.0·入口50-65·碰撞2-15·出口50-65·lm2分辨率5.0·hm2分辨率15.0·离子能量21.0·倍增器(v)650-647·注射泵流速(μl/min)40.0·气室皮拉尼压力(mbar)1.87e-4·仪器参数-功能3：·极性es ·校准静态2·毛细管(kv)3.003.00·锥体(v)50.0053.36·提取器(v)3.003.54·rf透镜(v)0.20.2·源温度(℃)140138·脱溶剂温度(℃)350348·锥体气流(l/hr)5049·脱溶剂气流(l/hr)650646·lm1分辨率5.0·hm1分辨率15.0·离子能量11.0·入口50-65·碰撞2-15·出口50-65·lm2分辨率5.0·hm2分辨率15.0·离子能量21.0·倍增器(v)650-647·注射泵流速(μl/min)40.0·气室皮拉尼压力(mbar)1.87e-4·ace实验记录·---------------------运行方法参数----------------·watersacquitysds·运行时间：10.00min·注释：·溶剂选择a：a1·溶剂选择b：b1·低压范围：0.000bar·高压范围：1034.200bar·溶剂名称a：水·溶剂名称b：乙腈·开关1：无变化·开关2：开·开关3：无变化·密封垫清洗：5.0min·出图1：系统压力·出图2：％b·系统压力数据通道：是·流速数据通道：否·％a数据通道：否·％b数据通道：否·初级a压力数据通道：否·蓄能器a压力数据通道：否·初级b压力数据通道：否·蓄能器b压力数据通道：否·脱气器压力数据通道：否·[梯度表]·时间(min)流速％a％b曲线·1.初始0.40098.02.0·2.7.000.40020.080.06·3.7.100.4000.0100.06·4.8.000.4000.0100.06·5.8.100.40098.02.06·6.10.000.40098.02.06·运行事件：是·[事件表]·运行时间(min)事件动作参数·1.0.10开关2开0.00·2.3.50开关2关0.00·3.9.00开关2开0.00··waters996pda·开始波长(nm)210.00·结束波长(nm)400.00·分辨率(nm)1.2·采样速率(张谱图/秒)2.000·滤波器响应1·曝光时间(ms)自动·interpolate656是·采集停止时间(min)10.00·保存至磁盘：是·waters996pda模拟通道1·输出模式关·waters996pda模拟通道2·输出模式关··watersacquityautosampler·运行时间：10.00min·注释：·加载之前：禁用·定量环选项：部分定量环，针溢出·loopoffline：禁用·弱清洗溶剂名称：甲醇·弱清洗溶剂体积：600μl·强清洗溶剂名称：甲醇·强清洗溶剂体积：200μl·目标柱温：40.0c·柱温报警信号：20.0c·目标样品温度：10.0c·样品温度报警信号：10c·满环进样溢流系数：自动·注射器抽出率：自动·针置管：自动·吸气前气隙：自动·吸气后气隙：自动·柱温数据通道：是·环境温度数据通道：是·样品温度数据通道：否·样品组织导体温度数据通道：否·样品压力数据通道：否·开关1：无变化·开关2：开·开关3：无变化·开关4：无变化·出图：样品压力·样品温度报警：启用·柱温报警：启用·运行事件：是·[事件表]·运行时间(min)事件动作·1.0.10开关2开·2.3.00开关2关·3.3.10开关2切换·4.8.00开关2脉冲·5.8.10开关2关·6.10.00开关2开·针溢出冲刷：自动·样品运行进样参数进样体积(μl)-10.00使用dineniso32645中描述的程序，根据线性校准曲线中获得相应的检测限。增强因子的计算基于标记的睾酮检测限(lod)与未衍生化睾酮的lod的比较。结果如下表3所示。表3：特定标记物的结果当前第1页1 2 3
技术特征：1.一种式a的化合物：
其中
x为反应性单元，其特别是能够与分析物分子形成共价键，
l1为支化连接基，特别是三官能连接基
y为中性丢失单元，
z为带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是包含一个永久带电部分，
包括所述化合物的任何盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中所述反应性单元x选自由以下项组成的组：羰基反应性单元、二烯反应性单元、羟基反应性单元、氨基反应性单元、亚胺反应性单元、硫醇反应性单元、二醇反应性单元、酚反应性单元、环氧化物反应性单元、二硫化物反应性单元和叠氮化物反应性单元。
3.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述反应性单元x为羰基反应性基团，特别地，其中x选自由以下项组成的组：
(i)肼单元，例如h2n-nh-或h2n-nr1-单元，其中r1为芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，任选地被取代，
(ii)酰肼单元，特别是碳酰肼或磺酰肼，特别是h2n-nh-c(o)-或h2n-nr2-c(o)-单元，其中r2为芳基或c1-4烷基，特别是c1或c2烷基，任选地被取代，
(iii)羟氨基单元，例如h2n-o-单元，以及
(iv)二硫醇单元，特别是1，2-二硫醇或1，3-二硫醇单元。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中所述反应性单元x为硫醇反应性基团或氨基反应性基团，诸如活性酯基团，例如n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)酯或磺基-nhs酯、羟基苯并三唑(hobt)酯或1-羟基-7-氮杂苯并三唑(hoat)酯基团。
5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述中性丢失单元y在电离时释放出中性实体。
6.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述带电单元z永久带电。
7.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述支化连接基，特别是三官能连接基l1，包含1个至30个c原子，任选地包含1个或多个杂原子。
8.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有根据式b所示的式：
式b
其中
x、y和z如前述权利要求中任一项所定义，
l2、l3和l4为线性支链，其各自独立地包含c1-c10，任选地各自独立地包含一个或多个杂原子，
其中所述线性支链l2、l3和l4一起形成如前述权利要求中任一项所定义的支化连接基，特别是三官能连接基l1。
9.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述反应性单元x为羰基反应性基团，所述中性丢失单元y为5元杂环部分，所述带电单元z包含一个永久带正电的部分。
10.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述反应性单元x为h2n-nh-，所述中性丢失单元y为三唑或四唑，并且所述带电单元z包括叔铵基团。
11.一种组合物，其包含根据权利要求1-10中任一项所述的化合物。
12.一种试剂盒，其包含根据权利要求1-10中任一项所述的化合物或根据权利要求11所述的组合物。
13.一种共价加合物，其包含彼此共价连接的分析物分子与根据权利要求1-10中任一项所述的化合物，特别地，其中所述共价加合物通过所述分析物分子与根据权利要求1-10中任一项所述的化合物的化学反应而形成。
14.式a的化合物：
其中
x为反应性单元，其特别是能够与分析物分子形成共价键
l1为支化连接基，特别是三官能连接基，
y为中性丢失单元，
z为带电单元，其包含至少一个永久带电部分，特别是包含一个永久带电部分
包括所述化合物的任何盐，
或包含至少一种式a的化合物的组合物或试剂盒
用于分析物分子的质谱测定中的用途，其中所述质谱测定特别地包括串联质谱测定，更特别地在三重四极杆设备中。
15.一种用于质谱测定分析物分子的方法，所述方法包括以下步骤：
(a)使所述分析物分子与根据权利要求1-10中任一项所定义的式a的化合物反应，从而形成所述分析物分子与所述式a的化合物的共价加合物，以及
(b)对来自步骤(a)的所述加合物进行质谱分析，
优选地，其中所述质谱分析步骤(b)包括：
(i)使所述加合物的离子进入质谱分析的第一级，从而根据其质荷(m/z)比对所述加合物的离子进行表征，
(ii)使所述加合物离子裂解，从而释放出第一中性实体，特别是低分子量中性实体，并且生成所述加合物的子离子，其中所述加合物的子离子在其m/z比上不同于所述加合物离子，以及
(iii)使所述加合物的子离子进入质谱分析的第二级，从而根据所述加合物的子离子的m/z比对所述加合物的子离子进行表征，并且/或者
其中(ii)可进一步包括所述加合物离子的另一种裂解，从而释放出不同于所述第一中性实体的第二中性实体，并且生成所述加合物的第二子离子，并且
其中(iii)可进一步包括使所述加合物的第一子离子和第二子离子进入质谱分析的第二级，从而根据所述加合物的第一子离子和第二子离子的m/z比对所述加合物的第一子离子和第二子离子进行表征。
技术总结本发明涉及适用于质谱分析的试剂以及使用所述试剂对分析物分子进行质谱测定的方法。
技术研发人员：S·贝赫尔;A-S·盖尔曼;R·哈恩;D·海因德尔;H-P·约塞尔;U·科博尔德;A·莱南巴赫;S·F·洛伊布尔;J·米利克;N·皮尔克尔;G·普伦西佩;M·雷姆普特;C·赛德尔
受保护的技术使用者：豪夫迈·罗氏有限公司
技术研发日：2019.07.23
技术公布日：2021.03.12
