本实用新型涉及混合仪器领域，具体涉及一种用于慢病毒制备的细胞培养容器连通器及混合器。
背景技术：
磷酸钙法(或pei法)制备慢病毒，现较普遍的方式为在一个容器内，将去离子水、氯化钙、质粒混合后，向内缓慢加入hbs溶液，同时通过磁力搅拌的方式使其混合均匀，形成含磷酸钙-dna复合物，然后将转染复合物加入细胞工厂中，通过晃动细胞工厂将内部培养基与转染复合物混匀。由于混合转染试剂形成磷酸钙-dna复合物的过程，是开放的环境(生物安全柜内，容器敞口)，添加质粒等原料的时候，容易引入微生物，存在污染风险。转染复合物需转移进细胞工厂内与培养基混匀，此步有两种方式，一种为将转染混合液直接加入细胞工厂中，通过缓慢晃动细胞工厂，达到转染复合物与培养基混合均匀的目的，因细胞工厂结构特殊，转染复合物与培养基可能存在混合不均匀的情况，造成细胞工厂内每一层转染复合物分布不均，同时，因慢病毒制备使用的生产细胞为hek293t细胞，贴壁性不强，摇晃混合转染复合物与培养基，可能会导致细胞脱落，影响质粒的转染效率。另一种方式为将转染复合物加入到一个简单的换液装置中，然后将细胞工厂与此装置连通，将细胞工厂内培养基通过蠕动泵泵入装置内与转染复合物混合均匀后再泵回至细胞工厂内。此方式的缺点为转染试剂转移至换液装置的过程也是开放的环境，存在一定的污染风险。
中国实用新型专利(cn201822035919.0)公开了一种便于批量包装慢病毒的混合器，混合器本体设有两个储液腔体，分别是a液贮液瓶和b液贮液瓶，a液贮液瓶和b液贮液瓶之间设有连通结构，所述的连通结构上设有控制装置，所述的连通结构为软管，a液贮液瓶一侧设有固定装置，b液贮液瓶底部设有振动结构，所述的b液贮液瓶内设有注射针，b液贮液瓶顶部设有进针口，注射针一端连接软管，注射针通过进针口进入b液贮液瓶，注射针另一端为出液口，出液口设置在b液贮液瓶底部，出液口倾斜设置。优点在于不但节约了包装慢病毒时a液与b液混合时操作的劳动强度与时间，而且还适用于批量慢病毒的包装；另有加工简单，可反复使用，成本低廉，便于推广等优点。
但上述实用新型专利公开的混合器，该混合器只能用于包装慢病毒的a液和b液的混合，并没有提供混合后导入培养容器中的过程；b液贮液瓶没有设置出液口，当a液和b液混合完成后，将混合液转入培养容器中时只能打开盖子，取出混合液，容易造成污染；该混合式设置有两个贮液瓶，人员需要对两个贮液瓶进行观察和处理，同样需要付出较多劳动力；a液贮液瓶上连接加压设备，b液贮液瓶上有排压口，容易造成液体充满b液贮液瓶将液体压出。
技术实现要素：
本实用新型实际要解决的问题是在简化病毒制备的流程，将转染试剂的合成步骤与转染试剂和培养基混合的步骤简化至在同一个装置内完成的同时降低了污染风险，且能使转染试剂与培养基能更充分的混合。
为了解决上述技术问题，本实用新型采用以下技术方案：
一种用于慢病毒制备的细胞培养容器连通器，所述细胞工厂连通器包括硅胶管(11)、cpc母接头及cpc公堵头(8)、三通转换头(9)、cpc母接头(12)、空气滤器(5)；所述硅胶管(11)一端连接一个cpc母接头(12)，所述cpc母接头(12)另一端连接一个所述空气滤器(5)，所述硅胶管(11)另一端连接一个三通转换头(9)或所述cpc母接头及cpc公堵头(8)，通过所述三通转换头(9)连接所述cpc母接头及cpc公堵头(8)和/或三通转换头(9)将所述细胞培养容器连通器实现多个细胞培养容器连接。
进一步，所述细胞培养容器连通器连接1～8个细胞培养容器。
进一步，所述三通转换头(9)连接的硅胶管上设置有止流夹(10)。
一种包括上述用于慢病毒制备的细胞培养容器连通器的混合器，所述混合器包括上述用于慢病毒制备的细胞培养容器连通器和混合容器；所述混合容器由瓶体(1)和发酵罐补料瓶转接头(3)组成；所述发酵罐补料瓶转接头(3)通过硅胶管连接有cpc公接头及母堵头(4)、空气滤器(5)、鲁尔母接头及公堵头/针头滤器(6)；连接所述cpc公接头及母堵头(4)的所述发酵罐补料瓶转接头(3)的转接管通过硅胶管连接一沉头(2)且内置于所述瓶体(1)底部；连接所述鲁尔母接头及公堵头/针头滤器(6)的所述发酵罐补料瓶转接头(3)的转接管连接硅胶管且内置于所述瓶体(1)内，通过连接不同长度硅胶管来控制液体滴落位置；所述瓶体(1)内置一磁力搅拌子(7)；所述细胞培养容器连通器和所述混合容器通过所述cpc公接头及母堵头(4)、cpc母接头(12)的cpc接头进行连接。
进一步，所述瓶体(1)为1-20l的高硼硅玻璃试剂瓶。
进一步，所述空气滤器(5)为0.22μm空气滤器。
进一步，所述连接所述鲁尔母接头及公堵头/针头滤器(6)的所述发酵罐补料瓶转接头(3)的转接管连接的硅胶管连接一沉头。
具体的，所述沉头为四氟材质。
进一步，所述鲁尔母接头及公堵头/针头滤器(6)中针头滤器为0.22μm针头滤器。
进一步，所述细胞培养容器连通器和所述混合容器中间通过硅胶管(11)连接蠕动泵。
本实用新型的有益效果在于：
1.将转染试剂与质粒形成磷酸钙-dna复合物的过程由开放条件转为在封闭的系统内，装置上进料口设置为鲁尔接口，在使用时可连接0.22μm针头滤器，质粒、水、氯化钙、hbs等投料时可再次除菌，降低污染风险。
2.简化了病毒制备的流程，将试剂混合合成转染试剂的步骤与转染试剂与培养基混合的步骤简化至在同一个装置内完成，装置可视为封闭系统，降低了污染风险，且能使转染复合物与培养基能更充分的混合。
3.可同时操作1～8个细胞工厂，细胞培养容器与混合容器采用cpc快接，实际操作时可一人进行转染试剂的混合，另一人在生物安全柜内对多个细胞培养容器连接管路，细胞培养容器管路组装完成后，连接混合容器，使用蠕动泵将多个细胞培养容器内的培养基泵入装置内，在磁力搅拌器作用下，将转染试剂与培养基混合均匀，然后将混合后的培养基泵回细胞培养容器，方便快捷，节约了时间及人力。
附图说明
为了更清楚地说明本实用新型具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。在所有附图中，类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。
图1：细胞培养容器连接器结构示意图；
图2：混合容器主视图。
图中，1为瓶体；2为沉头；3为发酵罐补料瓶转接头；4为cpc公接头及母堵头；5为空气滤器；6为鲁尔母接头及公堵头/针头滤器；7为磁力搅拌子；8为cpc母接头及cpc公堵头；9为三通转换头；10为止流夹。
具体实施方式
现在结合说明书附图对本实用新型做进一步的说明。
如附图1、2中所示，一种用于慢病毒制备的细胞培养容器连通器，所述细胞工厂连通器包括硅胶管11、cpc母接头及cpc公堵头8、三通转换头9、cpc母接头12、空气滤器5；所述硅胶管11一端连接一个cpc母接头12，所述cpc母接头12另一端连接一个所述空气滤器5，所述硅胶管11另一端连接一个三通转换头9或所述cpc母接头及cpc公堵头8，通过所述三通转换头9连接所述cpc母接头及cpc公堵头8和/或三通转换头9将所述细胞培养容器连通器实现多个细胞培养容器连接。
所述细胞培养容器连通器连接1～8个细胞培养容器。
所述三通转换头9连接的硅胶管上设置有止流夹10。
一种包括上述用于慢病毒制备的细胞培养容器连通器的混合器，所述混合器包括上述细胞培养容器连通器和混合容器；所述混合容器由瓶体1和发酵罐补料瓶转接头3组成；所述发酵罐补料瓶转接头3通过硅胶管连接cpc公接头及母堵头4、空气滤器5、鲁尔母接头及公堵头/针头滤器6；连接所述cpc公接头及母堵头4的所述发酵罐补料瓶转接头3的转接管通过硅胶管连接一沉头2且内置于所述瓶体1底部；连接所述鲁尔母接头及公堵头/针头滤器6的所述发酵罐补料瓶转接头3的转接管连接硅胶管内置于所述瓶体1内，通过连接不同长度硅胶管来控制液体滴落位置；所述瓶体1内置一磁力搅拌子7；所述细胞培养容器连通器和所述混合容器通过所述cpc公接头及母堵头4、cpc母接头12的cpc接头进行连接。
所述瓶体1为1-20l的高硼硅玻璃试剂瓶。
所述空气滤器5为0.22μm空气滤器。
所述连接所述鲁尔母接头及公堵头/针头滤器6的所述发酵罐补料瓶转接头3的转接管连接的硅胶管连接一沉头。
所述沉头为四氟材质。
所述鲁尔母接头及公堵头/针头滤器6中针头滤器为0.22μm针头滤器。
所述细胞培养容器连通器和所述混合容器中间通过硅胶管11连接蠕动泵。
以操作2个10层细胞工厂为例
(1)将2l转染反应瓶与细胞工厂连通器进行灭菌后使用，根据所需处理的细胞工厂量调整细胞工厂连通器末端cpc母接头及cpc公堵头8数量及转染混合容器的大小。
(2)慢病毒包装前2天，在细胞工厂内按适当密度接种，在转染前对细胞工厂进行换液，每个10层细胞工厂加入对应的培养基1～2l。细胞工厂需向厂家定制有cpc接头，或自行购买带cpc接头的转换盖装于细胞工厂上。
(3)开始转染时，将转染混合容器置于磁力搅拌器上，拧开鲁尔母接头及公堵头/针头滤器6接口，装上0.22μm针头滤器，根据培养容器总面积，加入适量的包装质粒、骨架质粒、2.5mcacl2溶液、h2o。打开磁力搅拌器，搅拌均匀后，关闭磁力搅拌器，静置5～10min。
(4)打开磁力搅拌器，转速调至瓶内形成涡旋。通过鲁尔母接头及公堵头/针头滤器6，匀速加入hbs溶液。hbs投料完毕后，关闭磁力搅拌器，静置孵育5～8min，充分形成转染复合物。
(5)将转染混合容器上cpc公接头及母堵头4处的cpc接头打开，公头与细胞培养容器连通器12处的母头连接。将细胞工厂移至生物安全柜内，将细胞培养容器连通器cpc母接头及cpc公堵头8处的母头与细胞工厂预装的cpc公头连接，并关闭止流夹10。将细胞工厂缓慢翻转90°，侧放后，用记号笔标记液面位置。全部细胞工厂连接完毕后，将11处硅胶管连接至蠕动泵。
(6)打开止流夹10，打开磁力搅拌器转速调整至形成涡旋，打开蠕动泵，将细胞工厂内培养基抽至混合容器内，与转染试剂充分混匀。观察细胞工厂内液体减少情况，若出现某细胞工厂液面较其他细胞工厂低很多，关闭其止流夹10。待反应瓶内液体至80％～90％，关闭蠕动泵。打开止流夹10，待多个细胞工厂内液面流至相同高度，打开调整蠕动泵泵液方向，将混合容器内的混合液泵至细胞工厂内。观察每个细胞工厂内液面，若有细胞工厂内液面较其他细胞工厂较高，则当其液面升至标记线时关闭止流夹10。待反应瓶内液体全部泵入细胞工厂，则关闭蠕动泵。打开所有细胞工厂止流夹10，待细胞工厂内液面至同一水平线后关闭止流夹10，缓慢将细胞工厂翻转至正面朝上放置。断开细胞工厂与细胞培养容器连通器的连接，使用预装母头的空气滤头或直接使用cpc母头封闭细胞工厂。
(7)将细胞工厂放入37℃、5％co2条件的培养箱中培养，收取病毒上清。
pei转染法制备慢病毒的混合方法同上。
以上各实施例仅用以说明本实用新型的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本实用新型进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本实用新型各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本实用新型的权利要求和说明书的范围当中。
1.一种用于慢病毒制备的细胞培养容器连通器，其特征在于，所述细胞工厂连通器包括硅胶管(11)、cpc母接头及cpc公堵头(8)、三通转换头(9)、cpc母接头(12)、空气滤器(5)；所述硅胶管(11)一端连接一个cpc母接头(12)，所述cpc母接头(12)另一端连接一个所述空气滤器(5)，所述硅胶管(11)另一端连接一个三通转换头(9)或所述cpc母接头及cpc公堵头(8)，通过所述三通转换头(9)连接所述cpc母接头及cpc公堵头(8)和/或三通转换头(9)将所述细胞培养容器连通器实现多个细胞培养容器连接。
2.根据权利要求1所述的细胞培养容器连通器，其特征在于，所述细胞培养容器连通器连接1～8个细胞培养容器。
3.根据权利要求1所述的细胞培养容器连通器，其特征在于，所述三通转换头(9)连接的硅胶管上设置有止流夹(10)。
4.一种包括权利要求1所述用于慢病毒制备的细胞培养容器连通器的混合器，其特征在于，所述混合器包括所述细胞培养容器连通器和混合容器；所述混合容器由瓶体(1)和发酵罐补料瓶转接头(3)组成；所述发酵罐补料瓶转接头(3)通过硅胶管连接有cpc公接头及母堵头(4)、空气滤器(5)、鲁尔母接头及公堵头/针头滤器(6)；连接所述cpc公接头及母堵头(4)的所述发酵罐补料瓶转接头(3)的转接管通过硅胶管连接一沉头(2)且内置于所述瓶体(1)底部；连接所述鲁尔母接头及公堵头/针头滤器(6)的所述发酵罐补料瓶转接头(3)的转接管连接硅胶管且内置于所述瓶体(1)内，通过连接不同长度硅胶管来控制液体滴落位置；所述瓶体(1)内置一磁力搅拌子(7)；所述细胞培养容器连通器和所述混合容器通过所述cpc公接头及母堵头(4)、cpc母接头(12)的cpc接头进行连接。
5.根据权利要求4所述的混合器，其特征在于，所述瓶体(1)为1-20l的高硼硅玻璃试剂瓶。
6.根据权利要求4所述的混合器，其特征在于，所述空气滤器(5)为0.22μm空气滤器。
7.根据权利要求4所述的混合器，其特征在于，所述连接所述鲁尔母接头及公堵头/针头滤器(6)的所述发酵罐补料瓶转接头(3)的转接管连接的硅胶管连接一沉头。
8.根据权利要求4或7所述的混合器，其特征在于，所述沉头为四氟材质。
9.根据权利要求4所述的混合器，其特征在于，所述鲁尔母接头及公堵头/针头滤器(6)中针头滤器为0.22μm针头滤器。
10.根据权利要求4所述的混合器，其特征在于，所述细胞培养容器连通器和所述混合容器中间通过硅胶管(11)连接蠕动泵。
技术总结