本实用新型属于生物技术领域，尤其涉及鸡ythdc2基因表达荧光定量rt-pcr试剂盒，主要用于鸡ythdc2基因表达调控和生殖细胞发育及癌症治疗等相关的功能研究。
背景技术：
rnam6a甲基化是真核生物内丰度最高的一种重要表观转录修饰。通过在转录后水平上对rna的稳定性、剪切、运输、定位和翻译进行调控，它可以动态调节包括细胞干性、细胞分化、能量平衡等在内的生物学过程。其甲基化的平衡依赖于甲基转移酶复合物与去甲基化酶之间的共同作用，而其功能发挥则多依赖于m6a结合蛋白。ythdc2(ythdomaincontaining2，ythdc2)是m6a的结合蛋白，主要在核周区域富集，可与核糖体结合，作用于核糖体小亚基，提高翻译效率，参与体内多种生物学过程。ythdc2对m6a的识别对生育能力、胚胎的分化、癌症治疗等至关重要。
技术实现要素：
本实用新型的目的是提供一种鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒，本实用新型试剂盒准确性高、快速、价格低廉，通过实时荧光定量rt-pcr技术检测鸡ythdc2基因表达，为研究鸡ythdc2表达调控m6a转录本以及调节生殖细胞发育、胚胎的分化、癌症治疗等研究奠定基础。
本实用新型的目的是通过以下技术方案实现的，一种鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒，包括盒体和盖体，其特征是，盒体内设有sybrgreenmaster热启动荧光pcr混合物、鸡ythdc2基因表达的特异性正反向引物、rox染料、鸡内参基因gapdh表达的特异性正反向引物、灭菌depc水。
优选的，所述鸡ythdc2基因表达的特异性正反向引物序列为：
f:5，—atggccagccctggttatca—3，
r:5，—gctagctgcacagcatcacta—3。
优选的，所述鸡内参基因gapdh表达的特异性正反向引物序列为：
f:5，—cgatctgaactacatggtttac—3，
r:5,—tctgcccatttgatgttgc—3。
优选的，所述盒体和盖体之间插接连接，并通过弹力绳锁紧。
优选的，所述弹力绳两端分别设有限位块，所述盒体底板上设有限位槽、容纳腔，限位槽与限位块相配合，限位块可相对于限位槽进行横向运动；限位槽、容纳腔形成限位块运动空间。
优选的，所述限位块为倒t形结构，限位槽为倒t形槽。
优选的，所述限位块为燕尾结构，限位槽为燕尾槽。
优选的，所述盖体上设有第一弹力绳安装凹槽，盒体对应侧壁上设有第二弹力绳安装凹槽，第二弹力绳安装凹槽与第一弹力绳安装凹槽相对应，并形成环形。
优选的，所述容纳腔内设有弹力件，弹力件端部设置定位销安装板，定位销安装板上设有定位销，限位块上设有定位销安装孔，定位销安装孔与定位销相配合。
优选的，所述盒体内设有衬垫，衬垫上设有试剂容纳腔。
与现有技术相比，本实用新型具有以下有益效果：
第一，本实用新型ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒及其检测方法，准确性可靠、快速、特异性强、价格低廉，具有灵敏度高、自动化程度高，无污染、实时性好等优点。
第二，本实用新型将盒体和盖体的连接结构进行改进，两者插接连接并通过弹力绳进行锁紧。在弹力绳的两端设置两个限位块，使得限位件可拆卸地设置在盒体上，并通过限位块与限位槽的配合，防止限位块进行竖向运动，使得弹力绳在使用时，不会从盒体上脱落。
第三，本实用新型在容纳腔内增设弹力件，使得弹力件顶住限位件，进一步防止限位块从限位槽中脱落。如需将限位块拿出，按压弹力件即可。
第四，本实用新型在弹力件末端设置定位销安装板，通过定位销与限位块上的定位销安装槽相配合，进一步将限位块锁紧在限位槽中。
附图说明
图1是本实用新型鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒的结构示意图；
图2是本实用新型鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒的盒体结构示意图(锁扣弯折)；
图3是本实用新型鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒的外盒的结构示意图；
图4是本实用新型鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒的整体结构示意图；
图5是本实用新型鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒的整体结构示意图；
图6是本实用新型鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒的整体结构示意图；
图7是本实用新型实施例不同发育时期不同部位肌肉组织中ythdc2基因的相对表达量图。
具体实施方式
结合具体实施例和附图对本实用新型作进一步说明。应理解，这些实施例仅用于说明目的，而不用于限制本实用新型范围。
如图1-6所示，鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒，包括盒体1和盖体2，盒体1内设有衬垫4，衬垫上设有若干个试剂容纳腔5，试剂容纳腔5内对应设有sybrgreenmaster热启动荧光pcr混合物6、鸡ythdc2基因表达的特异性正反向引物7、rox染料8、鸡内参基因gapdh表达的特异性正反向引物9、灭菌depc水10。
其中，鸡ythdc2基因表达的特异性正反向引物7序列为：
f:5，—atggccagccctggttatca—3，
r:5，—gctagctgcacagcatcacta—3；
鸡内参基因gapdh表达的特异性正反向引物9序列为：
f:5，—cgatctgaactacatggtttac—3，
r:5,—tctgcccatttgatgttgc—3。
盒体1和盖体2之间插接连接，并通过弹力绳3锁紧。
弹力绳两端分别设有限位块16，所述盒体底板上设有限位槽15、容纳腔11，限位槽15与限位块16相配合，限位块16可相对于限位槽15进行横向运动；限位槽15、容纳腔11形成限位块16运动空间。
本实用新型将盒体和盖体的连接结构进行改进，两者插接连接并通过弹力绳进行锁紧。在弹力绳的两端设置两个限位块，使得限位件可拆卸地设置在盒体上，并通过限位块与限位槽的配合，防止限位块进行竖向运动，使得弹力绳在使用时，不会从盒体上脱落。
限位块16可以为倒t形结构，限位槽15可以为倒t形槽。
限位块16也可以为燕尾结构，限位槽15也可以为燕尾槽。
盖体2上设有第一弹力绳安装凹槽18，盒体1对应侧壁上设有第二弹力绳安装凹槽19，第二弹力绳安装凹槽19与第一弹力绳安装凹槽18相对应，并形成环形。
容纳腔11内设有弹力件12，弹力件12端部设置定位销安装板13，定位销安装板13上设有定位销14，限位块16上设有定位销安装孔17，定位销安装孔17与定位销14相配合。
本实用新型在容纳腔内增设弹力件，使得弹力件顶住限位件，进一步防止限位块从限位槽中脱落。如需将限位块拿出，按压弹力件即可。
本实用新型在弹力件末端设置定位销安装板，通过定位销与限位块上的定位销安装槽相配合，进一步将限位块锁紧在限位槽中。
实施例1
ythdc2基因在鸡不同部位肌肉中的发育性表达变化
以文昌鸡为素材，运用本实用新型对不同发育阶段的鸡不同部位肌肉组织的ythdc2基因进行定量检测。
采集150日龄文昌鸡胸大肌、胸小肌、缝匠肌、耻坐骨肌内侧头、耻坐骨肌外侧头、髂胫外侧肌、腓肠肌内侧头肌、背阔肌组织样品置于液氮速冻后转入-80℃冰箱保存；采用trizol裂解法，从采集到的肌肉样本中提取总rna，以提取的总rna为模板，按照rt-pcr试剂盒(takara,dalian,china)说明书反转录合成cdna第一链。
荧光定量realtimepcr扩增反应：采用sybrgreeni染料法，以上述合成的cdna第一链为模板，设计的鸡ythdc2基因表达的特异性正反向引物和鸡内参基因gapdh表达的特异性正反向引物，在max3000p荧光定量pcr仪(爱普拜斯上进行。即鸡各组织样本总rna反转录成cdna第一链后，分别配置ythdc2和gapdh基因各自进行real-timepcr扩增所需的反应体系，每个样品均做3个平行管，每次反应均设无模板对照(ntc。
荧光定量pcr扩增体系配制见表1。
表1荧光定量pcr扩增体系
将每个样本的2个基因的扩增体系同时放入荧光定量pcr仪，进行pcr反应，realtimepcr扩增的反应条件设置如下：
95℃预变性15min；然后40个循环的95℃变性30s,退火60℃30s,72℃30s；最后95℃30s,60℃30s,95℃30s。
每个样品均做3个平行管，每次反应均设无模板对照(ntc。以gapdh基因为内参照，对ythdc2基因mrna表达水平进行校正，并采用2-δδct法对数据进行处理，其中δct＝(ct目的基因-ct内参基因，以一种组织，比如胸大肌δct作为其他组织的参照，计算相对表达量δδct，δδct＝(δct(肌肉组织–δct(胸大肌，以此来比较ythdc2基因相对表达量，结果见图7。
由图7可以看出，ythdc2基因表达在不同组织表达量有一定的差异。ythdc2基因在腓肠肌内侧头肌、背阔肌中表达量显著高于耻坐骨肌内侧头、耻坐骨肌外侧头、髂胫外侧肌、缝匠肌、胸大肌、胸小肌，在耻坐骨肌内侧头中表达量显著高于胸大肌、胸小肌，在其他组织中表达量差异不显著。
本实用新型用实时荧光定量rt-pcr技术检测鸡ythdc2基因表达的方法，为研究鸡ythdc2表达调控以及对生育能力、胚胎的分化、癌症治疗等至关重要。
以上所述实施方式仅表达了本实用新型的一种或多种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本实用新型专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本实用新型的保护范围。
1.鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒，包括盒体(1)和盖体(2)，其特征是，所述盒体(1)内设有sybrgreenmaster热启动荧光pcr混合物(6)、鸡ythdc2基因表达的特异性正反向引物(7)、rox染料(8)、鸡内参基因gapdh表达的特异性正反向引物(9)、灭菌depc水(10)；所述盒体(1)和盖体(2)之间插接连接，并通过弹力绳(3)锁紧。
2.根据权利要求1所述的鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒，其特征是，所述鸡ythdc2基因表达的特异性正反向引物(7)序列为：
f:5，—atggccagccctggttatca—3，
r:5，—gctagctgcacagcatcacta—3。
3.根据权利要求1所述的鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒，其特征是，所述鸡内参基因gapdh表达的特异性正反向引物(9)序列为：
f:5，—cgatctgaactacatggtttac—3，
r:5,—tctgcccatttgatgttgc—3。
4.根据权利要求1所述的鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒，其特征是，所述弹力绳两端分别设有限位块(16)，所述盒体底板上设有限位槽(15)、容纳腔(11)，限位槽(15)与限位块(16)相配合，限位块(16)可相对于限位槽(15)进行横向运动；限位槽(15)、容纳腔(11)形成限位块(16)运动空间。
5.根据权利要求4所述的鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒，其特征是，所述限位块(16)为倒t形结构，限位槽(15)为倒t形槽。
6.根据权利要求4所述的鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒，其特征是，所述限位块(16)为燕尾结构，限位槽(15)为燕尾槽。
7.根据权利要求4所述的鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒，其特征是，所述盖体(2)上设有第一弹力绳安装凹槽(18)，盒体(1)对应侧壁上设有第二弹力绳安装凹槽(19)，第二弹力绳安装凹槽(19)与第一弹力绳安装凹槽(18)相对应，并形成环形。
8.根据权利要求4所述的鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒，其特征是，所述容纳腔(11)内设有弹力件(12)，弹力件(12)端部设置定位销安装板(13)，定位销安装板(13)上设有定位销(14)，限位块(16)上设有定位销安装孔(17)，定位销安装孔(17)与定位销(14)相配合。
9.根据权利要求4所述的鸡ythdc2基因荧光定量rt-pcr试剂盒，其特征是，所述盒体(1)内设有衬垫(4)，衬垫上设有试剂容纳腔(5)。
技术总结