本发明涉及医用体外免疫诊断试剂领域，具体是一种用于血清或肝素血浆中维生素b12含量检测的释放剂的制备，应用于一种采用磁微粒化学发光技术和抗原-抗体结合技术检测人体维生素b12含量的磁微粒化学发光检测试剂。
背景技术：
：维生素b12，又名氰钴胺素，是一种一个钴原子周围的有四个吡咯环的类咕啉化合物，分子量为1355。钴胺素主要来源于动物产品，如肉、蛋、牛奶和其他乳制品。人体吸收维生素b12需要借助一种胃肠道分泌物(内因子)，维生素b12和这种蛋白质附着在回肠黏膜上的受体形成一种复合体，在回肠粘膜上一种被称为运钴胺素的蛋白质将维生素b12从黏膜细胞中转移到血液和组织中。除储存在骨髓以及其他组织外，大多数维生素b12被储存在肝脏。如果需要，它们就会由b12结合蛋白质(转钴胺)承载并释放到血浆中去。维生素b12在体内以辅酶的形式存在，可以增加叶酸的利用率，促进碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢；其和叶酸一样都是正常dna(脱氧核糖核酸)合成中所不可或缺的，具有活化氨基酸的作用和促进核酸的生物合成，可促进蛋白质的合成，它对婴幼儿的生长发育有重要作用；促进红细胞的发育和成熟，使肌体造血机能处于正常状态，预防恶性贫血，维护神经系统健康；参与新陈代谢，是神经系统功能健全不可缺少的维生素，并参与神经组织中一种脂蛋白的形成。vitaminb12和叶酸是通过蛋氨酸合成的反应路径连接的，所以两者中任何一样缺乏都会扰乱代谢途径，导致同样的症状和医学问题。在临床上维生素b12常与叶酸、同型半胱氨酸、铁蛋白等联合检测，用于对糖尿病、贫血症等进行临床分析。大量的研究表明维生素b12贫乏也是巨幼红细胞性贫血症的诱因，同时也与老年痴呆症、抑郁症以及冠心病等有关。维生素b12缺乏也是怀孕早期流产、反复性流产的危险因素之一。人体缺乏维生素b12时易造成神经系统不可逆损害，引起烦躁不安、记忆衰退等症状。过量的摄入可能会出现哮喘、荨麻疹、湿疹、面部浮肿、寒颤等过敏反应，也可能引发神经兴奋、心前区痛和心悸；也有报道认为过量可能会促进肿瘤发生。因此临床上建议对该类维生素做到先检测再补充，不缺乏不补充。目前，定量测定vb12的方法，有微生物学法，高效液相色谱法(hplc)，酶联免疫吸附法(elisa)、化学发光免疫分析法(clia)以及放射免疫法(ria)。维生素b12在体内是与蛋白结合而存在的，所以在检测血清或血浆等生物样本时，需要对样本进行前处理，使其将维生素b12由结合蛋白上释放出来，再进行检测。现有问题是对样本进行前处理时解离不彻底，导致检测结果不准确，且不能够检测到低浓度维生素b12水平，重复性较差，无法形成统一标准。技术实现要素：本发明旨在阐述一种高效、简单、快速的用于人血清或肝素血浆中维生素b12含量检测的释放剂，并应用于相应的免疫检测方法中，以解决现有产品释放不完全、重复性差的技术问题。基于上述目的，本发明提供一种用于人血清或肝素血浆中维生素b12含量检测的释放剂，包括变性剂r1和中和剂r3；变性剂r1为tris-hcl体系强碱溶液，中和剂r3为tris-hcl体系的无水乙醇、三(2-羧乙基)膦溶液。所述变性剂r1的ph值为12.0～13.0，包括：tris-hcl，浓度为7.5～8.2g/l；氢氧化钠，浓度为20.0-22.0g/l。所述变性剂r1的ph值为12.5，包括：tris-hcl，浓度为8.0g/l；氢氧化钠，浓度为21.0g/l；其余为去离子水。变性剂r1的制备：称取纯化水700g，依次加入8gtris-hcl、21g氢氧化钠混合均匀，调整ph至12.5±0.05范围内，用纯化水定重至1l。所述中和剂r3的ph值为6.0～6.6，包括：tris-hcl，浓度为90.0～90.8g/l；无水乙醇，浓度为200.0-220.0g/l；8-氨基-1-磺酸萘铵盐(ans)，浓度为0.8-1.2g/l；三(2-羧乙基)膦，浓度为1.0-1.6g/l；edta，浓度为0.8-1.2g/l。所述中和剂r3的ph值为6.3，包括：tris-hcl，浓度为90.4g/l；无水乙醇，浓度为210.0g/l；8-氨基-1-磺酸萘铵盐，浓度为1.0g/l；三(2-羧乙基)膦，浓度为1.3g/l；edta，浓度为1.0g/l；其余为去离子水。中和剂r3的制备：称取纯化水700g，依次加入90.4gtris-hcl、210g无水乙醇、1g8-氨基-1-磺酸萘铵盐、1.3g三(2-羧乙基)膦、1gedta混合均匀，调整ph至6.3±0.05范围内，用纯化水定重至1l。一种测定人体维生素b12含量的磁微粒化学发光检测试剂，使用上述的释放剂，包括变性剂r1、中和剂r3，维生素b12试剂r2(简称试剂r2)、磁分离试剂、校准品、质控品、化学发光底物液。以下实施例中，所使用的维生素b12试剂r2、磁分离试剂、校准品、质控品、化学发光底物均来自于利德曼公司生产的试剂。一种测定人体维生素b12含量的磁微粒化学发光检测试剂的检测方法包括如下步骤：(1)将待测样本或校准品或质控品分别与变性剂r1一起加入反应管中，37℃混合温育5min；(2)依次将中和剂r3、试剂r2组分加入步骤(1)温育后的样品中，再于37℃继续温育15min；(3)将磁分离试剂加入步骤(2)温育后的样品中，于37℃继续温育5min；(4)洗涤，去除未结合的抗体和杂质；(5)加入化学发光底物液，alp催化底物发光后测定相对发光强度rlu；在一定范围内相对发光强度rlu与维生素b12抗原浓度呈反比，通过内插法就可以从标准曲线上读取待测样本的维生素b12含量。采用上述维生素b12检测试剂测定人体维生素b12含量时的方法学鉴定数据可达到如下指标：灵敏度：最低检出量为20.00pg/ml；重复性：质控品qc1精密度为5.24％(n＝10，为重复次数)，质控品qc2精密度为4.62％(n＝10，为重复次数)，精密度远低于行业要求，说明使用本发明稀释剂的检测试剂在实验过程中具有很好的可重复性；相关性：用实施例中的试剂同进口化学发光磁微粒免疫检测法试剂盒对77份样本进行同时检测，以本发明试剂测定维生素b12浓度为纵坐标，以进口化学发光法免疫检测试剂盒测定的结果为横坐标作回归分析，相关方程为y＝1.0473x 5.18，相关系数r2＝0.9799，经统计学处理结果表明，相关性良好。从上面所述可以看出，本发明的优点是：1.本发明中变性剂r1为tris-hcl体系的强碱溶液，可使结合蛋白变性后充分解离，中和剂r3为tris-hcl系统的无水乙醇、三(2-羧乙基)膦酸性溶液，还加入8-氨基-1-磺酸萘铵盐，既保障了特异性抗体在加入之前具有合适ph的缓冲体系，其中的无水乙醇为低毒有机溶剂，羟基的极性可溶解很多离子化合物；8-氨基-1-磺酸萘铵盐及三(2-羧乙基)膦与无水乙醇协同作用，起到进一步解离及稳定的作用，同时三(2-羧乙基)膦作为一种有效的二硫键定量还原剂，在很宽的ph值范围内能定量还原二硫化合物，并使其他官能团保持完整，该物质没有含巯基化合物如2-巯基乙醇固有的毒性，且没有难闻的气味，在应用中比二硫苏糖醇更稳定，不易被氧化。2.本发明提供的维生素b12释放剂通过变性剂r1强碱溶液从结合蛋白中解离维生素b12，然后在中和剂r3的作用下实现磁微粒化学发光检测，b12释放剂与对应的检测试剂及检测方法，可有效、完全的释放样本中的维生素b12，检测结果灵敏度高，能够检测到低浓度维生素b12，重复性好，性能能达到国际产品的水平。并且对样品的前处理要求低、可快速高通量检测大批量样本(批量为160测试/小时)，便于临床应用。3.本发明提供的释放剂应用在磁微粒化学发光平台中，可以与全自动化学发光仪器联用，操作步骤极大简化，加大了检测速度和检测通量，提高检测效率，也可避免人为操作导致的误差；采用磁微球作为固相载体，方便清洗，可有效去除非特异性结合。附图说明图1为对比例的释放剂用于检测维生素b12时的标准品的浓度－发光值曲线图；图2为本发明实施例2的释放剂用于检测维生素b12时的标准品的浓度－发光值曲线图。图3为使用对比例中的释放剂检测维生素b12时，维生素b12浓度与对比试剂相关性散点图。图4为本发明实施例4获得的检测试剂检测维生素b12浓度与对比试剂相关性散点图。具体实施方式下面结合实施例及附图进一步解释本发明，但并不以此作为对本申请保护范围的限定。实施例1本实施例一种用于人血清或肝素血浆中维生素b12含量检测的释放剂包括变性剂r1、中和剂r3。1)变性剂r1包括：tris-hcl，浓度为7.5～8.2g/l；氢氧化钠，浓度为20.0-22.0g/l；其余为去离子水。变性剂r1的ph值为12.0～13.0。2)中和剂r3包括：tris-hcl，浓度为90.0～90.8g/l；无水乙醇，浓度为200.0-220.0g/l；8-氨基-1-磺酸萘铵盐(ans)，浓度为0.8-1.2g/l，三(2-羧乙基)膦，浓度为1.0-1.6g/l；edta，浓度为0.8-1.2g/l；其余为去离子水。中和剂r3的ph值为6.0～6.6。实施例2本实施例一种用于人血清或肝素血浆中维生素b12含量检测的释放剂包括变性剂r1(又称试剂r1)、中和剂r3(又称试剂r3)。1)所述变性剂r1的ph值为12.5，包括：tris-hcl，浓度为8.0g/l；氢氧化钠，浓度为21.0g/l；其余为去离子水。变性剂r1的制备：称取纯化水700g，依次加入8gtris-hcl、21g氢氧化钠混合均匀，调整ph至12.5±0.05范围内，用纯化水定重至1l。2)所述中和剂r3的ph值为6.3，包括：tris-hcl，浓度为90.4g/l；无水乙醇，浓度为210.0g/l；8-氨基-1-磺酸萘铵盐，浓度为1.0g/l；三(2-羧乙基)膦，浓度为1.3g/l；edta，浓度为1.0g/l；其余为去离子水。中和剂r3的制备：称取纯化水700g，依次加入90.4gtris-hcl、210g无水乙醇、1g8-氨基-1-磺酸萘铵盐、1.3g三(2-羧乙基)膦、1gedta混合均匀，调整ph至6.3±0.05范围内，用纯化水定重至1l。对比例本对比例释放剂包括变性剂r1、中和剂r3，其中变性剂r1的组成同实施例2，中和剂的组成与实施例2不同，本对比例中中和剂r3的仅为tris-hcl，浓度为90.4g/l，使用hcl调节ph至6.0。实施例3本实施例一种测定人体维生素b12含量的磁微粒化学发光检测试剂的制备方法，本实施例中释放剂组成采用实施例2中的配方，检测试剂包括变性剂r1、中和剂r3和试剂r2、磁分离试剂、校准品、质控品、化学发光底物液，检测试剂制备包括如下步骤：配制试剂r2：1)试剂r2的缓冲液采用商品化的apconjugatestabilizer，ph为7.0；2)制备碱性磷酸酶标记的抗维生素b12抗体；3)将碱性磷酸酶标记的抗维生素b12抗体用试剂r2的缓冲液进行稀释。配制磁分离试剂：1)磁微粒缓冲液为商品化的apconjugatestabilizer，ph为7.0；2)制备维生素b12-bsa(牛血清白蛋白)包被的磁微粒浓缩液；3)将磁微粒浓缩液用磁分离试剂的磁微粒缓冲液进行稀释，获得磁分离试剂。配制校准品/质控品：将维生素b12抗原溶解于dmso(二甲基亚砜)中，用校准品/质控品缓冲液中配置成不同的浓度，获得不同浓度的校准品和质控品qc1、qc2。配制化学发光底物液：1)配制0.2m、ph值为9.3的tris-hcl缓冲液，并添加0.3mg/ml的二氧杂环乙烷；2)将碱性磷酸酶催化发光的化学发光底物溶解于缓冲液中。其中抗维生素b12抗体偶联碱性磷酸酶为化学发光平台常用的偶联工艺。磁微粒试剂浓缩液的制备方法，包括如下步骤：(1)配制偶联缓冲液1：0.1m的硼酸钠缓冲液，ph为9.5，2-8℃保存；(2)配制偶联缓冲液2：3m硫酸铵缓冲液，ph9.5，2-8℃保存；(3)配制偶联封闭液：0.2m的磷酸盐缓冲液，ph7.5，含1％牛血清白蛋白、0.1％tween20、10％蔗糖；(4)配制洗涤、储存缓冲液：0.2m的磷酸盐缓冲液，ph7.5，含1％牛血清白蛋白、10％蔗糖(质量百分比)；(5)通过涡旋振荡重悬甲苯磺酰基修饰的磁珠微球；(6)将100ul磁珠微球转移至2ml的离心管中，加入1ml的偶联缓冲液1；(7)将离心管放置在磁分离器上直至磁珠微球向靠近磁铁的一侧迁移，约5分钟溶液变澄清；(8)小心去除上清，避免混悬磁珠微球；(9)将离心管从磁铁旁移开，通过涡旋振荡的方法将磁珠微球重悬于1ml的偶联缓冲液1中，混悬5分钟；(10)重复(7)-(9)步骤3次；(11)用偶联缓冲液1将磁珠定重至100ul，加入322ul的偶联缓冲液2以及400ug的维生素b12-bsa，再使用偶联缓冲液1定重至1ml；(12)充分震荡混匀后在37℃培养箱中孵育过夜；(13)在通风厨中向步骤(12)孵育过夜后的偶联反应体系中添加5ul的乙醇胺，涡旋震荡后在涡旋混匀器上混匀30分钟终止反应；(14)将离心管放置在磁分离器上直至微球向靠近磁铁的一侧迁移，约5分钟溶液变澄清；(15)小心去除上清，避免混悬磁珠微球；(16)将离心管从磁铁旁移开，通过涡旋振荡的方法将磁珠微球重悬于1ml的偶联缓冲液1中，混悬5分钟；(17)重复(14)-(16)步骤3次；(18)加入1ml偶联封闭液，在涡旋混匀器上振荡5分钟使磁珠重悬后在37℃培养箱中孵育过夜；(19)将离心管放置在磁分离器上直至微球向靠近磁铁的一侧迁移，约5分钟溶液变澄清；(20)小心去除上清，避免混悬磁珠微球；(21)将离心管从磁铁旁移开，通过涡旋振荡的方法将磁珠微球重悬于1ml的洗涤、储存缓冲液中，混悬5分钟；(22)重复(19)-(21)步骤3次，将偶联好的磁珠用洗涤、储存缓冲液定重至1ml，保存备用；上述制备的磁微粒浓缩液为10mg/ml，反应体系1ml的技术数据，按此偶联大样(相应参数及偶联缓冲液加样量均随反应体系呈比例增加)。实施例4用实施例3制备的维生素b12含量的磁微粒化学发光检测试剂检测人体维生素b12含量，检测方法如下：(1)首先，将实施例3的30μl的校准品系列(浓度分别为0，50，200，500，1000，2000pg/ml)与30μl实施例2的试剂r1加入反应管中，37℃条件下混合温育5min；(2)将上述试剂系列分别再与50μl实施例2的试剂r3、实施例3的50μl试剂r2依次加入反应管中，37℃条件下混合温育15min；(3)将步骤(2)获得的试剂系列分别再与25μl实施例3的磁分离试剂结合后于37℃继续温育5min；(4)用清洗液洗涤3次以去除未结合的抗体和杂质；(5)加入实施例3的发光底物液150μl，alp催化底物发光后采用利德曼的化学发光检测仪测定相对发光强度(rlu)，获得维生素b12浓度-发光值系列数值。(6)根据维生素b12浓度-发光值系列数值进行拟合，获得基于标准品的维生素b12的浓度-发光值标准曲线，如图2所示。(7)根据拟合的维生素b12的浓度-发光值标准曲线计算测定待测样本的浓度值。在一定范围内rlu与维生素b12抗原浓度呈反比，通过内插法就可以从标准曲线上读取待测样本的维生素b12含量。按照上述方式，采用对比例中的释放剂获得其对应的浓度-发光值曲线图，如图1所示。具体中和剂中有无添加无水乙醇、8-氨基-1-磺酸萘铵盐及三(2-羧乙基)膦获得的标准曲线的对比结果如下：表1标准曲线(添加前)校准品(pg/ml)05020050010002000rlu(100000)56.12336.14718.3748.7314.5322.295表2标准曲线(添加后)校准品(pg/ml)05020050010002000rlu(100000)62.21531.25415.2877.3183.9141.504将30μl的待测样品/质控品与实施例2的30μl试剂r1加入反应管中，37℃条件下混合温育5min；重复上述的步骤(2)-(5)测定待测样品的相对发光强度rlu；再根据维生素b12的浓度-发光值标准曲线计算待测样品rlu对应的维生素b12浓度值。采用上述检测方法，经方法学鉴定数据可达到如下指标：灵敏度：最小检出量为20.00pg/ml；重复性：质控品qc1精密度为5.24％(n＝10)，qc2精密度为4.62％(n＝10)，精密度远低于国家要求，说明本发明试剂盒在实验过程中具有很好的可重复性；相关性：用本实施例中的检测试剂及对比例的释放剂获得的检测试剂、同进口化学发光磁微粒免疫检测法试剂盒对77份样本进行同时检测，分别进行相关性分析：以本发明试剂测定维生素b12浓度为纵坐标，以进口化学发光法免疫检测试剂盒测定的结果为横坐标作回归分析，如图4所示，相关方程为y＝1.0473x 5.18，相关系数r2＝0.9799，经统计学处理结果表明，相关性良好。而使用对比例的释放剂获得的相关性分析结果，如图3所示，相关性较差。表3灵敏度(添加前)由表3可见，a点发光值均值x＝6870925、sd＝775464、x-2sd＝5319997；b点发光值均值为3138698。ab点连点拟合方程为y＝-74644x 6870925，r2＝1。根据a-b点浓度-发光值线性拟合方程，将m-2sd的发光值代入上述方程中，求得对应的浓度值，即为最低检测限，即试剂盒的最低检测限为20.778pg/ml：表4灵敏度(添加后)由表4可见，a点发光值均值x＝6159629、sd＝248462、x-2sd＝5662705；b点发光值均值为3180931。ab点连点拟合方程为y＝-59574x 6159629，r2＝1。根据a-b点浓度-发光值线性拟合方程，将m-2sd的发光值代入上述方程中，求得对应的浓度值，即为最低检测限，即试剂盒的最低检测限为8.341pg/ml。结论：中和剂中添加无水乙醇、8-氨基-1-磺酸萘铵盐及三(2-羧乙基)膦后灵敏度明显提高。表5重复性(添加前)：由表5可见，靶值浓度范围为200±20％(pg/ml)的质控品qc1测试10个重复的cv为13.41％，靶值浓度范围为1000±20％(pg/ml)的质控品qc2测试10个重复的cv为11.63％。表6重复性(添加后)：由表6可见，靶值浓度范围为200±20％(pg/ml)的质控品qc1测试10个重复的cv为5.24％，靶值浓度范围为1000±20％(pg/ml)的质控品qc2测试10个重复的cv为4.62％。结论：中和剂中添加无水乙醇、8-氨基-1-磺酸萘铵盐及三(2-羧乙基)膦后重复性明显提高。表7临床样本比对相关性(无水乙醇、8-氨基-1-磺酸萘铵盐及三(2-羧乙基)膦添加前)：由表7可见，未添加实施例中的中和剂组分(无水乙醇、8-氨基-1-磺酸萘铵盐及三(2-羧乙基)膦)同进口化学发光磁微粒免疫检测法试剂盒对77份样本进行同时检测，以本发明试剂测定维生素b12浓度为纵坐标，以进口化学发光法免疫检测试剂盒测定的结果为横坐标作回归分析，相关方程为y＝1.0877x 51.358，相关系数r2＝0.8539，经统计学处理结果表明，相关性稍差。表8临床样本比对相关性(添加后)：由表8可见，添加了实施例中的中和剂组分(无水乙醇、8-氨基-1-磺酸萘铵盐及三(2-羧乙基)膦)同进口化学发光磁微粒免疫检测法试剂盒对77份样本进行同时检测，以本发明试剂测定维生素b12浓度为纵坐标，以进口化学发光法免疫检测试剂盒测定的结果为横坐标作回归分析，相关方程为y＝1.0473x 5.18，相关系数r2＝0.9799，经统计学处理结果表明，相关性良好。结论：中和剂中添加无水乙醇、8-氨基-1-磺酸萘铵盐及三(2-羧乙基)膦后相关性明显提高。上述步骤表明，使用本发明变性剂r1及中和剂r3，采用的竞争法的反应模式，利用化学发光检测技术与磁微粒免疫分离技术相结合的原理，定量检测人血清或肝素血浆样品中的维生素b12含量，确保了检测的灵敏度，并且对样品的前处理要求低、可快速高通量检测大批量样本，便于临床应用。本发明为人血清或肝素血浆中的结合态的维生素b12解离为游离的维生素b12提供了一种更准确、精确、方便、快捷和简单的方法。本发明提供的人体维生素b12释放剂的制备及含量测定的磁微粒化学发光检测试剂可以与全自动化学发光分析仪联用，操作步骤极大简化，加大了检测速度和检测通量，提高了检测效率，同时避免了人为操作导致的误差。所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本发明的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。本发明未述及之处适用于现有技术。当前第1页1 2 3
技术特征：1.一种用于人体维生素b12含量检测的释放剂及其应用，其特征在于，包括变性剂r1和中和剂r3；变性剂r1为tris-hcl体系强碱溶液，中和剂r3为tris-hcl体系的无水乙醇、三(2-羧乙基)膦溶液。
2.根据权利要求1所述的释放剂，其特征在于，所述变性剂r1的ph值为12.0～13.0，包括：tris-hcl，浓度为7.5～8.2g/l；氢氧化钠，浓度为20.0-22.0g/l。
3.根据权利要求2所述的释放剂，其特征在于，所述变性剂r1的ph值为12.5，包括：tris-hcl，浓度为8.0g/l；氢氧化钠，浓度为21.0g/l；其余为去离子水；变性剂r1的制备：称取纯化水700g，依次加入8gtris-hcl、21g氢氧化钠混合均匀，调整ph至12.5±0.05范围内，用纯化水定重至1l。
4.根据权利要求1所述的释放剂，其特征在于，所述中和剂r3的ph值为6.0～6.6，包括：tris-hcl，浓度为90.0～90.8g/l；无水乙醇，浓度为200.0-220.0g/l；8-氨基-1-磺酸萘铵盐(ans)，浓度为0.8-1.2g/l；三(2-羧乙基)膦，浓度为1.0-1.6g/l；edta，浓度为0.8-1.2g/l。
5.根据权利要求4所述的释放剂，其特征在于，所述中和剂r3的ph值为6.3，包括：tris-hcl，浓度为90.4g/l；无水乙醇，浓度为210.0g/l；8-氨基-1-磺酸萘铵盐，浓度为1.0g/l；三(2-羧乙基)膦，浓度为1.3g/l；edta，浓度为1.0g/l；其余为去离子水；中和剂r3的制备：称取纯化水700g，依次加入90.4gtris-hcl、210g无水乙醇、1g8-氨基-1-磺酸萘铵盐、1.3g三(2-羧乙基)膦、1gedta混合均匀，调整ph至6.3±0.05范围内，用纯化水定重至1l。
6.一种测定人体维生素b12含量的磁微粒化学发光检测试剂，其特征在于，使用权利要求1-5任一所述的释放剂，包括变性剂r1、中和剂r3和维生素b12试剂r2、磁分离试剂、校准品、质控品、化学发光底物液；
检测试剂的灵敏度为：最低检出量为20.00pg/ml；重复性：靶值浓度范围为200±20％(pg/ml)的质控品qc1的精密度为5.24％，靶值浓度范围为1000±20％(pg/ml)的质控品qc2精密度为4.62％。
7.一种权利要求6所述的测定人体维生素b12含量的磁微粒化学发光检测试剂的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将待测样本或校准品或质控品分别与变性剂r1一起加入反应管中，37℃混合温育5min；
(2)依次将中和剂r3、试剂r2组分加入步骤(1)温育后的样品中，再于37℃继续温育15min；
(3)将磁分离试剂加入步骤(2)温育后的样品中，于37℃继续温育5min；
(4)洗涤，去除未结合的抗体和杂质；
(5)加入化学发光底物液，alp催化底物发光后测定相对发光强度rlu；
在一定范围内相对发光强度rlu与维生素b12抗原浓度呈反比，通过内插法从标准曲线上读取待测样本的维生素b12含量。
技术总结本发明为一种用于人体维生素B12含量检测的释放剂及其应用，包括变性剂R1和中和剂R3；变性剂R1为Tris‑Hcl体系强碱溶液，中和剂R3为Tris‑Hcl体系的无水乙醇、三(2‑羧乙基)膦溶液。本发明提供的维生素B12释放剂通过变性剂R1强碱溶液从结合蛋白中解离维生素B12，然后在中和剂R3的作用下实现磁微粒化学发光检测，B12释放剂与对应的检测试剂及检测方法，可有效、完全的释放样本中的维生素B12，检测结果灵敏度高，能够检测到低浓度维生素B12，重复性好，性能能达到国际产品的水平。并且对样品的前处理要求低、可快速高通量检测大批量样本，便于临床应用。
技术研发人员：仝艳艳;王鹏
受保护的技术使用者：北京利德曼生化股份有限公司
技术研发日：2020.10.26
技术公布日：2021.03.12
