本发明涉及免疫检测
技术领域：
，特别是涉及一种新冠病毒抗体质控品及其制备方法。
背景技术：
：新型冠状病毒(2019-ncov)由rna核酸和蛋白等组成，rna很容易降解，蛋白衣壳将rna包裹在其中，加上一层由脂质和糖蛋白组成的包膜外衣，从而使其rna得到保护。新型冠状病毒(2019-ncov)具有传染性强，潜伏期长，致死率高，恢复后后遗症多等特点。目前检测该病毒的主要试剂盒有核酸检测和免疫诊断检测，核酸检测主要对已知基因片段进行测序，通过比对判断阴阳性，而免疫诊断试剂则主要通过抗原-抗体的特异性结合判断阴阳性。两种检测方法各有优缺点，核酸检测是对病毒的直接检测，需要的样本采集过程复杂，保存条件苛刻，因而极容易产生假阳，而抗体检测为间接检测，可通过采集人体血液进行检测，样本采集过程便捷安全，样本存放时间长，测试结果符合率更高。但是，目前制备的新型冠状病毒(2019-ncov)抗体质控品试剂质量良莠不齐，稳定性较差。技术实现要素：基于此，有必要提供一种保存周期长、稳定性较好的新冠病毒抗体质控品的制备方法。一种新冠病毒抗体质控品的制备方法，包括以下步骤：将新冠病毒抗体与冻干保护溶液混合，得到抗体溶液；将所述抗体溶液依次进行预冻处理、主干燥处理和终末干燥处理，得到所述新冠病毒抗体质控品；所述预冻处理的条件参数依次为：隔板温度-5℃～-15℃处理0.5小时～1小时，隔板温度-45℃～-55℃处理2.5小时～3.5小时，隔板温度-15℃～-25℃处理1.5小时～2.5小时，隔板温度-45℃～-55℃处理3.5小时～4.5小时；所述主干燥处理的条件参数依次为：隔板温度-45℃～-55℃、真空度0.35mbar～0.45mbar条件下处理25min～35min，隔板温度-45℃～-55℃、真空度0.15mbar～0.25mbar条件下处理5min～15min，隔板温度-45℃～-55℃、真空度0.05mbar～0.15mbar条件下处理2min～8min，隔板温度-25℃～-35℃、真空度0.05mbar～0.15mbar条件下处理90min～105min，隔板温度-5℃～-15℃、真空度0.05mbar～0.15mbar条件下处理9～11小时；所述终末干燥处理的条件参数依次为：隔板温度10℃～20℃、真空度0.05mbar～0.15mbar条件下处理2.5～3.5小时，隔板温度10℃～20℃、真空度0mbar～0.01mbar条件下处理7～9小时。在其中一个实施例中，所述冻干保护溶液含有水、trizma盐酸盐、trizma碱、牛血清白蛋白、氯化钠、甘露醇和海藻糖二水。在其中一个实施例中，所述冻干保护溶液中各组分的浓度为：trizma盐酸盐5g/l～8g/l、trizma碱0.5g/l～2g/l、牛血清白蛋白35g/l～45g/l、氯化钠7g/l～10g/l、甘露醇75g/l～85g/l、海藻糖二水15g/l～25g/l。在其中一个实施例中，所述冻干保护溶液还含有叔丁醇、proclin300防腐剂和bnd防腐剂。在其中一个实施例中，所述冻干保护溶液中叔丁醇、proclin300防腐剂和bnd防腐剂的浓度分别为25ml/l～35ml/l、0.1g/l～1g/l和0.1g/l～0.5g/l。本发明还提供了一种新冠病毒抗体质控品，根据上述制备方法制备得到。本发明还提供了一种新冠病毒抗体，包括轻链和重链，所述轻链包括轻链可变区和轻链恒定区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seqidno:1所示；所述重链包括重链可变区和重链恒定区，所述重链可变区的氨基酸序列如seqidno:2所示。在其中一个实施例中，所述轻链恒定区和所述重链恒定区分别为人igg抗体的轻链恒定区和人igg抗体的重链恒定区。本发明还提供了一种表达基因组合物，包括轻链可变区基因和重链可变区基因，所述轻链可变区基因编码所述轻链可变区，所述重链可变区基因编码所述重链可变区。在其中一个实施例中，所述轻链可变区基因的核苷酸序列如seqidno:3所示，所述重链可变区基因的核苷酸序列如seqidno:4所示。本发明质控品的制备方法采用了反复冻融(退火)工艺增加产品结晶的均匀性，使产品结构更均匀。具体为在冻干预冻阶段对产品降温冻成固体，然后升温至产品玻璃化转变温度以上2℃～5℃保持一定时间，促使已完全冻结的产品开始融化，在局部融化时产品内部结构及成分趋于均匀，此时再对产品进行降温，产生的冰晶及成分更加均匀。该方法消除了冻干过程中冰晶由下往上生长后造成液体表面浓度升高的情况(结晶后表面密度过高会在干燥后形成致密的固体层影响水分升华的效率，主要原因为水分逸出通道过小)，该方法同时也降低了产品冻干后均一性过高的风险(溶液冻结过程会造成产品上下层间ph的不均匀而影响产品的稳定性)。而且本发明采用特定的慢冻冻干工艺减少了冻干时间，在产品预冻阶段产品温度缓慢下降，在产品共晶点温度时保持较长时间，使液体结晶过程缓慢，产生大颗粒冰晶，冰晶升华后形成较大的空间便于固态水升华，增加了冻干效率。本发明采用自主开发设定的冻干程序，运用慢冻、反复冻融、分步精准控制参数等相结合的技术改进传统的慢速冻干程序，结合质控品制备工艺得到冻干粉形态的新型冠状病毒(2019-ncov)抗体质控品，该质控品具有保存周期长、易复溶、复溶后稳定性好、均匀性好等优点。而且，本发明的新冠病毒抗体活性高、稳定性好，非常适合质控品的制备。具体实施方式为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述，并给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的
技术领域：
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本发明一实施例的新冠病毒抗体质控品的制备方法，包括以下步骤：将新冠病毒抗体与冻干保护溶液混合，得到抗体溶液。将抗体溶液依次进行预冻处理、主干燥处理和终末干燥处理，得到新冠病毒抗体质控品。其中，预冻处理的条件参数依次为：隔板温度-5℃～-15℃处理0.5小时～1小时，隔板温度-45℃～-55℃处理2.5小时～3.5小时，隔板温度-15℃～-25℃处理1.5小时～2.5小时，隔板温度-45℃～-55℃处理3.5小时～4.5小时；主干燥处理的条件参数依次为：隔板温度-45℃～-55℃、真空度0.35mbar～0.45mbar条件下处理25min～35min，隔板温度-45℃～-55℃、真空度0.15mbar～0.25mbar条件下处理5min～15min，隔板温度-45℃～-55℃、真空度0.05mbar～0.15mbar条件下处理2min～8min，隔板温度-25℃～-35℃、真空度0.05mbar～0.15mbar条件下处理90min～105min，隔板温度-5℃～-15℃、真空度0.05mbar～0.15mbar条件下处理9～11小时；终末干燥处理的条件参数依次为：隔板温度10℃～20℃、真空度0.05mbar～0.15mbar条件下处理2.5～3.5小时，隔板温度10℃～20℃、真空度0mbar～0.01mbar条件下处理7～9小时。抗体质控品效期需长于检测试剂效期，故一般采用冻干技术制备，而抗体质控品通常包含大量的作为稳定保护剂的糖和蛋白等，因而抗体质控品具有配方成分复杂、粘度高、共晶点低、干燥温度低的特点，其在冻结过程中由液态转变成固态时的玻璃态不均匀会增加产品的不均匀性风险，且影响冻干速率。且抗体质控品在冻干生产过程中生产周期长，能耗高而导致成本高。本发明新冠病毒抗体质控品的制备方法采用了反复冻融(退火)工艺增加产品结晶的均匀性，使产品结构更均匀。具体为在冻干预冻阶段对产品降温冻成固体，然后升温至产品玻璃化转变温度以上2℃～5℃保持一定时间，促使已完全冻结的产品开始融化，在局部融化时产品内部结构及成分趋于均匀，此时再对产品进行降温，产生的冰晶及成分更加均匀。该方法消除了冻干过程中冰晶由下往上生长后造成液体表面浓度升高的情况(结晶后表面密度过高会在干燥后形成致密的固体层影响水分升华的效率，主要原因为水分逸出通道过小)，该方法同时也降低了产品冻干后均一性过高的风险(溶液冻结过程会造成产品上下层间ph的不均匀而影响产品的稳定性)。而且本发明采用特定的慢冻冻干工艺减少了冻干时间，在产品预冻阶段产品温度缓慢下降，在产品共晶点温度时保持较长时间，使液体结晶过程缓慢，产生大颗粒冰晶，冰晶升华后形成较大的空间便于固态水升华，增加了冻干效率。本发明采用自主开发设定的冻干程序，运用慢冻、反复冻融、分步精准控制参数等相结合的技术改进传统的慢速冻干程序，结合质控品制备工艺得到冻干粉形态的新型冠状病毒(2019-ncov)抗体质控品，该质控品具有保存周期长、易复溶、复溶后稳定性好、均匀性好等优点。在一个具体示例中，上述抗体溶液中新冠病毒抗体的浓度为5au/ml～23au/ml。在一个具体示例中，冻干保护溶液含有水、trizma盐酸盐、trizma碱、牛血清白蛋白、氯化钠、甘露醇和海藻糖二水。在一个具体示例中，上述冻干保护溶液中各组分的浓度为：trizma盐酸盐5g/l～8g/l、trizma碱0.5g/l～2g/l、牛血清白蛋白35g/l～45g/l、氯化钠7g/l～10g/l、甘露醇75g/l～85g/l、海藻糖二水15g/l～25g/l。在一个具体示例中，上述冻干保护溶液还含有叔丁醇。溶液配方中添加叔丁醇可作为冻干加速剂，叔丁醇的晶点为25.5℃，溶液中添加叔丁醇后可升高溶液的共晶点温度，从而加快升华速度。在产品升华阶段，叔丁醇的熔点高，更先升华出来，升华后的叔丁醇留出了针状的水分逸出通道，在产品成型、加快冻干速率上都有很明显的作用。优选地，冻干保护溶液中叔丁醇的浓度为25ml/l～35ml/l。在配方研究过程中发现，浓度30ml/l左右的叔丁醇可明显提高配方的共晶点，与不添加叔丁醇的溶液相比，含有30ml/l叔丁醇的冻干保护溶液温度上升了5℃，同时与不添加叔丁醇的产品相比，添加了30ml/l叔丁醇的产品一次升华干燥时间缩短了近10％，结合上述多种方法改进，冻干过程总用时缩短了近20％。在一个具体示例中，冻干保护溶液还含有proclin300防腐剂和bnd防腐剂。抗体质控品的成分中含有牛血清白蛋白等物质，富含营养，容易滋生微生物，单成分的防腐剂容易使微生物产生抗性，故在冻干保护溶液中添加两种不同杀菌原理的防腐剂proclin300和bnd，最大程度防止被污染。优选地，冻干保护溶液中proclin300防腐剂和bnd防腐剂的浓度分别为0.1g/l～1g/l和0.1g/l～0.5g/l。本发明一实施例的新冠病毒抗体，包括轻链和重链，轻链包括轻链可变区和轻链恒定区，轻链可变区的氨基酸序列如seqidno:1所示。重链包括重链可变区和重链恒定区，重链可变区的氨基酸序列如seqidno:2所示。可选地，轻链恒定区和重链恒定区分别为人igg抗体的轻链恒定区和人igg抗体的重链恒定区。可以理解，恒定区序列不限于此，可根据需要选择，例如人igm、人iga抗体的恒定区等。本发明一实施例的表达基因组合物，包括轻链可变区基因和重链可变区基因，轻链可变区基因编码上述轻链可变区，重链可变区基因编码上述重链可变区。在一个具体示例中，轻链可变区基因的核苷酸序列如seqidno:3所示，重链可变区基因的核苷酸序列如seqidno:4所示。可以理解，由于密码子的简并性，能够表达同一蛋白的核酸序列具有多种形式，以上为经过密码子优化的核酸序列，但不限于此。本发明一实施例的表达载体系统，包含一种或多种重组载体，该重组载体用于表达上述新冠病毒抗体。可以理解，轻链和重链可以通过一个重组载体表达，也可通过两个重组载体分别表达。可以理解，重组载体中还可包含基因工程中常用的调控元件，例如增强子、启动子等其他表达控制元件(例如转录终止信号、或者多腺苷酸化信号和多聚u序列等)。在一个具体示例中，初始载体可以选择pac载体。本发明一实施例的宿主细胞，其含有上述表达载体系统。在一个具体示例中，宿主细胞为hek293细胞。以下为具体实施例。实施例1抗体筛选制备将重组2019-ncov蛋白与弗氏佐剂等量混合充分乳化后各注射3只balb/c小鼠，每只小鼠25μg，共免疫3次，间隔时间15天。细胞融合、选择性培养、筛选：融合前3天，小鼠腹腔注射免疫蛋白25μg，取出免疫小鼠的脾脏细胞，将2.0×107个sp2/0骨髓瘤细胞与2.0×108个经免疫的balb/c小鼠的脾细胞混匀，离心，弃上清，轻微振荡混匀，于37℃水浴中，在90秒内滴加1ml体积浓度为50％的peg-1500水溶液，然后滴加20ml1640培养基，离心，弃上清，再洗一次，离心，弃上清，得到杂交瘤细胞。使用hat选择培养基在96孔细胞培养板上选择杂交瘤细胞，镜下检测总融合率＞95％。包被重组2019-ncov蛋白对单克隆细胞孔的上清进行检测，挑取od450＞0.8的孔内细胞进行亚克隆，最终获得对2019-ncov蛋白反应阳性率＞99％的细胞克隆，作为分泌抗人2019-ncov单克隆抗体的杂交瘤细胞株。细胞克隆：对获得的阳性细胞株进行克隆，使用有限稀释法，克隆3次，最后得到产生高效价的抗人2019-ncov单克隆抗体杂交瘤细胞系7株，扩大培养，冻存。腹水制备：6～8周龄雌性balb/c小鼠用石蜡处理10天后，取杂交瘤细胞以2×106个细胞/只小鼠进行腹腔注射。10天后从小鼠腹腔中获取富含抗体的腹水，测定腹水效价＞105。纯化：采用proteing亲和层析法。首先制备proteing亲和层析柱，用pbs平衡柱子后，取腹水过柱，然后用pbs清洗柱子，以50nmol/l的甘氨酸盐酸盐溶液洗脱，收集洗脱液，测定各收集管的od值，保留峰值区的洗脱液，洗脱液经透析后收集。经sds-page电泳鉴定为纯化的单克隆抗体，纯度为98％以上。抗体效价检测：抗体稀释浓度为3μg/ml、1μg/ml、0.33μg/ml、0.11μg/ml、0.036μg/ml、0.012μg/ml，使用间接法检测各抗体效价，elisa检测结果见表1。选择效价最高的细胞株进行基因抽提，重组表达。表1扩增抗体可变区基因：用trizolreagent试剂分别提取1×106杂交瘤细胞1#的总rna，将总rna逆转录成cdna。用引物1和引物2分别扩增杂交瘤细胞重链可变区基因，用引物3和引物4分别扩增杂交瘤细胞轻链可变区基因，引物序列如表2所示。表2引物15’-tggratgsagctgkgtmatsctctt-3’引物25’-tgtygtgctagctgnrgagacdgtga-3’引物35’-atggagacacactcctgctat-3’引物45’-gtcgacttacgtttkatttccarctt-3’pcr采用热启动，反应条件：94℃5min；94℃45s，54℃45s，72℃1min，30个循环；72℃7min。pcr产物委托上海生工进行测序。杂交瘤细胞1#抗体可变区基因测序结果如表3所示、氨基酸序列结果如表4所示。表3表4抗体可变区基因的克隆：委托上海生工将杂交瘤细胞1#抗体重链可变区基因、轻链可变区基因，分别克隆到改造质粒pac--ch3andpac--ch3(progen)，其中含有人igg抗体的轻链恒定区序列或重链恒定区序列。质粒转染哺乳动物细胞(293t)：使用处在对数生长期且活率高于90％的hek293细胞。转染当天，取样计数细胞密度和活率，细胞密度应该在(3～5)×106cells/ml，活率高于90％。调整细胞密度至3×106cells/ml，每瓶细胞液体积为20ml。用150mm的nacl稀释20μgdna至总体积为0.5ml，温和混匀；用150mm的nacl稀释100μlsinofection转染试剂至总体积为0.5ml，温和混匀；将稀释好的dna和转染试剂同时单独静置约5分钟后温和混匀，总体积1ml，之后室温静置10分钟。将转染液逐滴加入到细胞培养液中，滴加的同时轻轻摇动培养瓶，摇匀后放回摇床继续培养。转染48小时后收集细胞上清，检测是否分泌重组抗体。检测是否分泌重组抗体：采用间接法，检测细胞是否分泌重组抗体。包被重组2019-ncov蛋白(1μg/ml)，添加100μl细胞上清。二抗使用鼠抗人igg-hrp。如果elisa检测od值为阳性，说明此转染细胞株分泌抗体重组抗体，实验结果如表5所示。表5检测孔1检测孔2细胞上清2.52.6空白对照0.010.01抗体纯化：采用proteing亲和层析法。首先制备proteing亲和层析柱，用pbs平衡柱子后，取细胞上清过柱，然后用pbs清洗柱子，以50nmol/l的甘氨酸盐酸盐溶液洗脱，收集洗脱液，测定各收集管的od值，保留峰值区的洗脱液，洗脱液经透析后收集。经sds-page电泳鉴定为纯化的单克隆抗体，纯度为98％以上。实施例2质控品制备原材料筛选：首先对不同来源的阳性材料进行筛选，阳性材料来源有上述制备的嵌合抗体、常规单克隆抗体、常规多克隆抗体，3个抗体用相同的去免疫球蛋白血清25倍、50倍、100倍、200倍、400倍、800倍、1600倍梯度稀释，稀释后用试剂盒(化学发光法)测试其浓度，结果表明上述嵌合抗体＞常规单克隆抗体＞常规多克隆抗体，浓度数据见表6。确认原料活性后三个原料均使用去免疫球蛋白血清制备成阴阳性目标浓度样本，测试其均一性，结果表明3个原料均一性结果差异不大，变异系数均小于3％。同时将测试后的样本均分两份，一份置于37℃保存作为实验样本，一份置于-80℃保存作为对照样本，三天后同时取出测试其稳定性，结果表明3个原料稳定性嵌合抗体＞常规多克隆抗体＞常规单克隆抗体，故选用嵌合抗体作为质控品的阳性材料，数据见表7。表6表7冻干保护溶液配制：在生产车间进行溶液的配制，配制过程如下：取70％的超纯水于配制容器中，按表8所示配比先后加入相应量的trizma盐酸盐、trizma碱、氯化钠、proclin300、甘露醇、海藻糖二水组分，待物质充分溶解后将ph调整到7.4±0.5范围内，然后加牛血清白蛋白和叔丁醇，充分溶解后微调溶液ph至7.4±0.1范围内，加纯水补齐至目标体积。表8质控品配制、分装和冻干：往冻干保护溶液中投入嵌合抗体材料配制成浓度为(5.5±10％)au/ml和(22±5％)au/ml的双浓度质控品，确认浓度在范围内后用0.45μm的滤膜进行过滤然后分装，确认分装合格后在冻干机上调取与该项目相对应的冻干程序冻干，如表9所示，结束后在真空下压盖，保证真空条件下压盖合格后恢复大气压并收样。表9质控品赋值：取冻干后的样本复溶、分装后进行赋值。赋值步骤如下：每个机型取一台仪器，在每台仪器上使用经产品校准合格后的新冠抗体测定试剂盒分别重复测定质控品共测5天，每天测试4次。5天测试完成后，每台仪器每个质控品浓度得出20个测试数据。检测结果依据格拉布斯(grubbs)准则剔除异常值，剔除离群值的个数不得超过2.5％，当离群值超过2.5％时，应怀疑是否为方法不稳定或操作者不熟悉所致。此时，不可使用此次试验的数据，检查问题和解决问题后重新开始新的评估实验。将检测结果剔除异常值后计算剩下数据的均值x，标准差sd，确定每个机型及适配试剂的质控品靶值范围(x±3sd)，当所使用的不同机型所用测量方法及试剂一样时，该类机型可一起确认靶值范围。半成品检验和组装：赋值后进行半成品检验，检验质控品的准确度和重复性，若检验通过则进行产品组装和成品检验，若不通过则重新进行质控品赋值并进行半成品检验或者将其作不合格品处理。制备的质控品其稳定性在2～8℃保存可稳定6个月，在-20℃以下条件保存可稳定12个月。以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。序列表<110>深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司<120>新冠病毒抗体质控品及其制备方法<160>4<170>siposequencelisting1.0<210>1<211>131<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>1metglyilelysmetgluthrhisserglnvalphevaltyrmetleu151015leutrpleuserglyvalgluglyaspilevalmetthrglnserhis202530lysphemetserthrservalglyaspargvalserilethrcyslys354045alaserglnaspvalglythralavalalatrptyrglnglnlyspro505560glyglnserprolysleuleuiletyrtrpalaserthrarghisthr65707580glyvalproaspargphethrglyserglyserglythraspphethr859095leuthrileserasnvalglnsergluaspleualaasptyrphecys100105110glnglntyrsersertyrproleuthrpheglyalaglythrlysleu115120125gluleulys130<210>2<211>136<212>prt<213>人工序列(artificialsequence)<400>2metglytrpsercysileilephepheleuvalalathralathrgly151015valhisserglnvalglnleuglnglnserglyprogluleuvalarg202530proglyvalservallysilesercyslysglyserglytyrthrphe354045thrasptyralamethistrpvallysglnserhisalalysserleu505560glutrpileglyvalileserthrtyrserglyasnthrasntyrasn65707580glnlysphelysglylysalathrmetthrvalasplysserserser859095thralatyrmetgluleualaargleuthrsergluaspseralaile100105110tyrtyrcysalaglyglyglyasntyrglyphealatyrtrpglygln115120125glythrleuvalthrvalserala130135<210>3<211>393<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>3atgggcatcaagatggagacacattctcaggtctttgtatacatgttgctgtggttgtct60ggtgttgaaggagacattgtgatgacccagtctcacaaattcatgtccacatcagtagga120gacagggtcagcatcacctgcaaggccagtcaggatgtgggtactgctgtagcctggtat180caacagaaaccagggcaatctcctaaactactgatttactgggcatccacccggcacact240ggagtccctgatcgcttcacaggcagtggatctgggacagatttcactctcaccattagc300aatgtgcagtctgaagacttggcagattatttctgtcagcaatatagcagctatccgctc360acgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaa393<210>4<211>408<212>dna<213>人工序列(artificialsequence)<400>4atgggttggagctgtatcatcttctttctggtagcaacagctacaggtgtgcactcccag60gtccagctgcagcagtctgggcctgagctggtgaggcctggggtctcagtgaagatttcc120tgcaagggttccggctacacattcactgattatgctatgcactgggtgaagcagagtcat180gcaaagagtctagagtggattggagttattagtacttactctggtaatacaaactacaac240cagaagtttaagggcaaggccacaatgactgtagacaaatcctccagcacagcctatatg300gaacttgccagattgacatctgaggattctgccatctattactgtgcaggagggggtaac360tacgggtttgcttactggggccaagggactctggtcactgtctctgca408当前第1页1 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技术特征：1.一种新冠病毒抗体质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将新冠病毒抗体与冻干保护溶液混合，得到抗体溶液；
将所述抗体溶液依次进行预冻处理、主干燥处理和终末干燥处理，得到所述新冠病毒抗体质控品；
所述预冻处理的条件参数依次为：隔板温度-5℃～-15℃处理0.5小时～1小时，隔板温度-45℃～-55℃处理2.5小时～3.5小时，隔板温度-15℃～-25℃处理1.5小时～2.5小时，隔板温度-45℃～-55℃处理3.5小时～4.5小时；所述主干燥处理的条件参数依次为：隔板温度-45℃～-55℃、真空度0.35mbar～0.45mbar条件下处理25min～35min，隔板温度-45℃～-55℃、真空度0.15mbar～0.25mbar条件下处理5min～15min，隔板温度-45℃～-55℃、真空度0.05mbar～0.15mbar条件下处理2min～8min，隔板温度-25℃～-35℃、真空度0.05mbar～0.15mbar条件下处理90min～105min，隔板温度-5℃～-15℃、真空度0.05mbar～0.15mbar条件下处理9～11小时；所述终末干燥处理的条件参数依次为：隔板温度10℃～20℃、真空度0.05mbar～0.15mbar条件下处理2.5～3.5小时，隔板温度10℃～20℃、真空度0mbar～0.01mbar条件下处理7～9小时。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述冻干保护溶液含有水、trizma盐酸盐、trizma碱、牛血清白蛋白、氯化钠、甘露醇和海藻糖二水。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述冻干保护溶液中各组分的浓度为：trizma盐酸盐5g/l～8g/l、trizma碱0.5g/l～2g/l、牛血清白蛋白35g/l～45g/l、氯化钠7g/l～10g/l、甘露醇75g/l～85g/l、海藻糖二水15g/l～25g/l。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述冻干保护溶液还含有叔丁醇、proclin300防腐剂和bnd防腐剂。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述冻干保护溶液中叔丁醇、proclin300防腐剂和bnd防腐剂的浓度分别为25ml/l～35ml/l、0.1g/l～1g/l和0.1g/l～0.5g/l。
6.一种新冠病毒抗体质控品，其特征在于，根据权利要求1～5任一项所述的制备方法制备得到。
7.一种新冠病毒抗体，其特征在于，包括轻链和重链，所述轻链包括轻链可变区和轻链恒定区，所述轻链可变区的氨基酸序列如seqidno:1所示；所述重链包括重链可变区和重链恒定区，所述重链可变区的氨基酸序列如seqidno:2所示。
8.根据权利要求7所述的新冠病毒抗体，其特征在于，所述轻链恒定区和所述重链恒定区分别为人igg抗体的轻链恒定区和人igg抗体的重链恒定区。
9.一种表达基因组合物，其特征在于，包括轻链可变区基因和重链可变区基因，所述轻链可变区基因编码权利要求7中的所述轻链可变区，所述重链可变区基因编码权利要求7中的所述重链可变区。
10.根据权利要求9所述的表达基因组合物，其特征在于，所述轻链可变区基因的核苷酸序列如seqidno:3所示，所述重链可变区基因的核苷酸序列如seqidno:4所示。
技术总结本发明涉及一种新冠病毒抗体及其质控品和制备方法，包括轻链和重链，所述轻链包括轻链可变区和轻链恒定区，所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述重链包括重链可变区和重链恒定区，所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明的新冠病毒抗体活性高、稳定性好，非常适合质控品的制备，而且采用自主开发设定的冻干程序，运用慢冻、反复冻融、分步精准控制参数等相结合的技术改进传统的慢速冻干程序，结合质控品制备工艺得到冻干粉形态的新型冠状病毒抗体质控品，该质控品具有保存周期长、易复溶、复溶后稳定性好、均匀性好等优点。
技术研发人员：卢奎;何雨禧;魏道舜;林晓涛;邢智浩;钱纯亘;王刚;林军;李一荣;潘运宝;胡鹍辉
受保护的技术使用者：深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司
技术研发日：2020.12.09
技术公布日：2021.03.12
