本发明涉及生物技术领域，具体为一种诱导锦鸡儿试管苗生根的方法。
背景技术：
锦鸡儿属植物是广泛分布于我国北方的重要豆科树种，具有极强的生命力和抗逆性，是西北地区植树造林，恢复植被的先锋树种，又具有饲用、绿肥等资源价值。不仅具有较高的生态价值，还具有较高的药用价值，应用前景广泛。
锦鸡儿属植物与其它豆科树种相似，繁殖困难，种子硬化率高，萌发率低；无性扦插与组织培养生根率很低，不同激素和浓度处理生根率有很大差异。以上因素极大限制了锦鸡儿植物在生态建设中的应用。目前，锦鸡儿的组织培养与再生都采用添加外源激素和糖的培养方式。培养容器中湿度大，co2不足，导致试管苗叶片结构发育不良，光合能力差，移栽成活率低；高浓度外源激素的添加，导致畸形苗较多；而且由于糖添加使得污染率高，成本相应也高。
技术实现要素：
本发明针对现有技术的不足提出了一种诱导锦鸡儿试管苗生根的新方法。
本发明提供了一种诱导锦鸡儿试管苗生根的方法，具体包括如下步骤：
1.选取生长良好，带有2-3茎节的锦鸡儿无根试管苗；
2.将选取的锦鸡儿无根试管苗在添加蔗糖30g.l-1的ms培养基上继代培养30d；
3.将继代培养后的锦鸡儿无根试管苗置于含6g.l-1琼脂的1/2ms培养基，用带透气孔的封口膜封口，温度25℃/20℃(day/night)；rh80%，3300-10000lx，8-14h.d-1，co2浓度为800-3000μmol.mol-1，培养28d。
作为优选，步骤3的培养条件为温度25℃/20℃(day/night)；rh80%，10000lx，14h.d-1，co2浓度为800μmol.mol-1。
光是组培育苗不可或缺的环境因子之一，可以调控植物的生长、形态建成、物质代谢及基因表达。光照条件的影响主要体现在光强度和光周期两方面。光强是植物进行光合作用的重要制约因素之一。光周期对植物生长的影响也十分显著。在光照强度充分的情况下，光周期对组培苗的生长发育有很重要的影响。co2是植物进行光合作用的重要物质基础，可直接影响植物的光合作用和下游的发育过程。co2浓度的升高不仅会促进植物地上部分的生长，而且可影响植物根系形态特征、生理特性、根际微生态以及根系分泌物。
采用本发明提供的方法，可使锦鸡儿试管苗的生根率达到90%，根数达3.22根/株，根长为0.98cm，可以有效促进锦鸡儿试管苗生根。本发明提供的方法通过调节控制环境因子，利用容器里小植株的光合自养能力，用co2气体作为碳源，在适宜的光照和co2浓度条件下，促进植物自身的光合作用和生根，达到植株健康生长的目的。该方法无需添加糖和激素，大大降低了成本；培养的幼苗无需驯化，减少了培养时间；幼苗发育健壮，光合能力强，移栽成活率高。该方法易操作，可为环境保护和修复提供优质锦鸡儿种苗。
具体实施方式
下面结合具体实施实例对本发明进行详细说明。以下实施实例有助于此领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。
下述实施例中使用锦鸡儿枝条均采自3～4年龄的锦鸡儿半木质化新生枝条。
下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
锦鸡儿试管苗培育
以锦鸡儿新生茎段为外植体。芽诱导培养基采用ms 15μmol.l-16-ba 1μmol.l-1naa，培养30d；增殖培养的培养基为ms 5μmol.l-16-ba 0.1μmol.l-1naa 2μmol.l-1ga3，培养30d。
实施例2
选取生长良好，带有2-3茎节的锦鸡儿无根试管苗；将选取的锦鸡儿无根试管苗在添加蔗糖30g/l的ms培养基上继代培养30d；将继代培养后的锦鸡儿无根试管苗置于含6g/l琼脂的1/2ms培养基，用带透气孔的封口膜封口，在表1和表2设定的条件为实验组，以添加糖20g.l-1和naa3μmol.l-1，光周期14h.d-1，光照强度3300lx控制处理为对照，培养28d后统计生根情况和根系状态。
实验设计如表1和表2所示。环境因子控制采用nksystem*biotronnc多功能人工气候箱。培养条件为：温度25℃/20℃(day/night)，rh80%。每个处理20株，3次重复。
表1正交试验因素水平
表2l9(33)正交试验表
无根试管苗在9种不同条件下培养28d后，按以下公式计算生根率、平均根数及平均根长。
生根率=生根的苗数/用于生根培养的总苗数
平均根数=所有根数之和/生根苗总数
平均根长=根长之和/根数
实验结果如下：
表3不同处理下锦鸡儿试管苗的生根情况
环境因子对锦鸡儿试管苗生根的影响数据统计结果如表3所示。实验结果表明：ck组为采用现有技术的方案向培养基中添加糖和外源激素处理锦鸡儿试管苗，生根率仅为8%，根数2.03根/株，平均根长0.51cm；而实验组在环境因子控制下，9组处理中3号处理的生根率最高达到0.90，根数达3.22根/株，根长为0.98cm，生根状况最好，相对于ck组有显著差异，优势明显。促进锦鸡儿试管苗生根的最佳环境条件为10000lx，14h.d-1，co2浓度为800μmol.mol-1。
1.一种诱导锦鸡儿试管苗生根的方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：
（1）选取生长良好，带有2-3茎节的锦鸡儿无根试管苗；
（2）将选取的锦鸡儿无根试管苗在添加白糖30g.l-1的ms培养基上继代培养30d；
（3）将继代培养后的锦鸡儿无根试管苗置于含6g.l-1琼脂的1/2ms培养基，用带透气孔的封口膜封口，温度25℃/20℃，rh80%，3300-10000lx，8-14h/d，co2浓度为800-3000μmol.mol-1，培养28d。
2.根据权利要求1所述的诱导锦鸡儿试管苗生根的方法，其特征在于所述方法步骤（3）的培养条件为温度25℃/20℃，rh80%，10000lx，14h.d-1，co2浓度为800μmol.mol-1。
技术总结