本发明涉及疾病模型
技术领域：
，特别是涉及一种鼻咽癌肿瘤模型的构建方法及应用。
背景技术：
：鼻咽癌好发于鼻咽顶前壁和咽隐窝，是我国的高发肿瘤之一，也是我国发病率和病死率最高的头颈部肿瘤。其中以广东、广西、福建、湖南等省更为常见。鼻咽癌大多属于低分化鳞癌，以其高侵袭性、易转移、易复发闻名，目前鼻咽癌的治疗方案已经取得了良好的临床疗效，但转移性鼻咽癌治疗难度大，预后极差。大多数患者发现时已有转移，对患者带来极大危害，迫切需要我们对其进一步的研究。目前国内外鼻咽癌的动物模型有：肿瘤细胞异位移植法、致癌物诱发法和转基因动物模型。致癌物诱导法需要长时间和特定致癌物，成功率较低，而且肿瘤的连续监测困难，无法一次性大批量产生，而转基因法成本高昂，两种动物模型都需要大量人力物力，但是成功与否有很大不确定性，无法推广。目前最常用的肿瘤细胞种植法采用的是通过皮下、鼠尾静脉、腹腔等途径注射悬浮肿瘤细胞，形成异位鼻咽癌模型，但这个模型有其最根本的缺点：不能完全模拟体内肿瘤生长微环境，其肿瘤生长与人体内生长方式有巨大差别，例如，研究最多的皮下移植瘤模型易形成包膜、不易转移、易中央坏死，需要我们对其加以改进，构建一个更好的原位模型，最大限度的贴合鼻咽癌在人体内的肿瘤生长微环境，模拟人体内肿瘤的生物学特性，对其进行更进一步研究。基于此，研究人员也发明了异种原位鼻咽癌模型，用胰岛素针穿过鼻咽管将合适浓度的细胞悬液注射至鼻咽，原位成瘤，通过成像技术检测荷瘤裸鼠活体成像肿瘤生物发光信号强度变化，并用软件量化捕捉荷瘤裸鼠活体成像肿瘤生物发光信号强度变化。而该原位成瘤的技术的缺点在于：①注射细胞悬液术中，裸鼠易将细胞悬液吸入气管并导致窒息死亡。②鼻咽是口腔与食管和气管之间的连续，在鼻咽注射细胞悬液，裸鼠容易通过呼吸或吞咽增加肿瘤的呼吸道和消化道转移，而这种转移并不是肿瘤本身的生物学特性引起的。技术实现要素：基于此，有必要针对传统的鼻咽癌肿瘤模型构建难度大的问题，提供一种新的鼻咽癌肿瘤模型的构建方法及应用。一种鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，包括以下步骤：将鼻咽癌细胞系悬液接种于非人动物的皮下后进行培养；待所述非人动物荷瘤后，取皮下培养的鼻咽癌肿瘤，切成肿瘤组织块；用接种针将所述肿瘤组织块接种在正常非人动物的鼻咽上；用所述接种针将组织粘合剂将接种口及所述肿瘤组织块粘合后进行培养。在其中一个实施例中，所述非人动物为啮齿动物。在其中一个实施例中，所述啮齿动物为小鼠或裸鼠。在其中一个实施例中，所述鼻咽癌细胞系为携带eb病毒的c666-1细胞系。在其中一个实施例中，所述鼻咽癌细胞系能够表达荧光素酶。在其中一个实施例中，能够表达荧光素酶的鼻咽癌细胞系的制备方法包括：用携带荧光素酶基因的慢病毒感染c666-1细胞。在其中一个实施例中，获得表达荧光素酶的鼻咽癌细胞系悬液的步骤包括：将细胞浓度为(0.8～1.2)×106/ml的所述表达荧光素酶的鼻咽癌细胞培养液与康宁基质胶混合。在其中一个实施例中，所述组织粘合剂选自3mvetbond。在其中一个实施例中，取皮下培养的鼻咽癌肿瘤，切成肿瘤组织块的步骤包括：将鼻咽癌肿瘤瘤体从皮下取出，分别切去所述鼻咽癌肿瘤瘤体的最外缘和中心缘，将剩余的鼻咽癌肿瘤瘤体切成所述肿瘤组织块。在其中一个实施例中，所述肿瘤组织块的长度、宽度和高度分别为1.8mm～2.2mm。在其中一个实施例中，所述非人动物为小鼠，取皮下培养的鼻咽癌肿瘤时，所述鼻咽癌肿瘤的直径最大值为1.5cm。在其中一个实施例中，所述非人动物为小鼠，所述接种针的穿刺点为软腭和硬腭的交界白线处下5mm。在其中一个实施例中，还包括：在鼻咽癌肿瘤模型的腹腔注射底物荧光素后，置于成像仪采集图像的步骤。所述的鼻咽癌肿瘤模型的构建方法在筛选预防或治疗鼻咽癌的药物中的应用。本发明提供了异种原位鼻咽癌动物模型的构建方法，该构建方法可以为临床研究人员改进动物模型，摆脱鼻咽癌肿瘤组织由于脱离了起源组织器官的微环境，移植瘤在实验中的某些行为常不同于原动物体内的肿瘤行为的困境，比如容易被包裹导致局限性生长，很少发生转移或远处器官转移，易发生肿瘤中心坏死。同时相对于传统鼻咽癌细胞悬液制备的鼻咽癌模型，本发明改良后的模型具有其独特的优越性，如原位种植组织块标本建模，减少模型小鼠因注射细胞误吸导致的死亡率；减少由于注射细胞悬液时人为操作或小鼠呼吸、吞咽等不可避免的原因造成的肿瘤转移假象；使用组织粘合剂将接种后的接种口及所述肿瘤组织块固定，能够明显提高成瘤率。附图说明图1a为本发明一实施例携带肿瘤组织块的接种针刺入小鼠鼻咽的示意图；图1b为本发明一实施例携带组织粘合剂的接种针刺入小鼠鼻咽将肿瘤组织块粘合的示意图；图1c为本发明一实施例携带组织粘合剂的接种针刺入小鼠鼻咽将接种口粘合的示意图；图2a为本发明一实施例正常裸鼠鼻咽部断面组织he染色图；图2b为本发明一实施例低倍镜下荷瘤裸鼠鼻咽部肿瘤断面组织he染色图；图2c为本发明一实施例高倍镜下荷瘤裸鼠鼻咽部肿瘤断面组织he染色图。具体实施方式为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的
技术领域：
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本发明实施例提供一种鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，包括以下步骤：将鼻咽癌细胞系悬液接种于非人动物的皮下后进行培养；待所述非人动物荷瘤后，取皮下培养的鼻咽癌肿瘤，切成肿瘤组织块；用接种针将所述肿瘤组织块接种在正常非人动物的鼻咽上；用所述接种针将组织粘合剂将接种口及所述肿瘤组织块粘合后进行培养。本发明的鼻咽癌肿瘤模型为鼻咽癌非人动物模型。本发明提供了异种原位鼻咽癌动物模型的构建方法，该构建方法可以为临床研究人员改进动物模型，摆脱鼻咽癌肿瘤组织由于脱离了起源组织器官的微环境，移植瘤在实验中的某些行为常不同于原动物体内的肿瘤行为的困境，比如容易被包裹导致局限性生长，很少发生转移或远处器官转移，易发生肿瘤中心坏死。同时相对于传统鼻咽癌细胞悬液制备的鼻咽癌模型，本发明改良后的模型具有其独特的优越性，如原位种植组织块标本建模，减少模型小鼠因注射细胞误吸导致的死亡率；减少由于注射细胞悬液时人为操作或小鼠呼吸、吞咽等不可避免的原因造成的肿瘤转移假象；使用组织粘合剂将接种后的接种口及所述肿瘤组织块固定，能够明显提高成瘤率。在一些实施方式中，所述非人动物为啮齿动物。在一些实施方式中，所述啮齿动物为小鼠或裸鼠。在一些实施方案中，本发明的小鼠选自129品系、balb/c品系、c57bl/6品系和混合129xc57bl/6品系中的任意一种。在一些实施方式中，所述鼻咽癌细胞系为携带eb病毒的c666-1细胞系。该更符合亚洲人的携带eb病毒的c666-1细胞系，还原肿瘤在人体的生长环境，减少因为人为操作的原因改变肿瘤的生物学行为。最大程度保留肿瘤的异质性。优选的，所述鼻咽癌细胞系能够表达荧光素酶。传统的荧光成像技术是建立稳定高表达绿色荧光蛋白的细胞株，然后成瘤，使用gfp全身成像系统(lightoolsresearch)，gfp全身成像，可视化肿瘤生长和血管生成。对图像进行对比度和亮度处理，并用imageproplus5.1软件(mediacontrobernetics)进行分析。捕获1,392×1,040像素的高分辨率图像，并以数字方式存储分析。之后解剖小鼠，对其肿瘤部位进行组织切片he染色，明确肿瘤的形成，并将表达gfp的冰冻切片与he染色的切片进行比较。但是，采用绿色荧光蛋白进行成像标记具有以下缺点：①利用绿色荧光蛋白成像技术进行活体成像，荧光发光需要激发光，但生物体内很多物质在受到激发光激发后，也会发出荧光，产生的非特异性荧光会影响到检测灵敏度。特别是当发光细胞深藏于组织内部，则需要较高能量的激发光源，也就会产生很强的背景噪音。②激发光需要穿过组织到达靶点，发射光需要从体内出来，路径较长，而绿色荧光蛋白的绿光在体内的穿透性不够理想。③同时，绿色荧光蛋白成像技术的信号水平取决于激发光的强度、发光细胞的数量、靶点的深度、光线穿过的组织对其的吸收及散射等因素，使得荧光强度较难定量。④绿色荧光蛋白成像定量需要不同波长的激发光，需要仪器的激发光能够保证持续长时间稳定并均匀照射到动物体表。⑤稳定高表达绿色荧光蛋白转入小鼠体内后，在体内检测到明显荧光的最低细胞数约106细胞，灵敏度不够强，无法观测肿瘤早期生长的过程和肿瘤的功能变化。⑥现有的模型是注射鼻咽癌悬浮细胞成瘤，用肿瘤细胞构建的cdx模型无法保持肿瘤异质性。本发明实施例选择构建能够表达荧光素酶的鼻咽癌细胞系进行成瘤，通过在鼻咽癌肿瘤模型的腹腔注射底物荧光素后，置于成像仪采集图像，可以特异、灵敏、实时、活体显示深部肿瘤的生长，转移过程，不需要额外的激发光，并能应用对荧光定量量化肿瘤的生物学过程。并且，用以荧光素酶和荧光素的生物发光方法，是以酶和底物的特异作用而发光，不需要激发光，背景噪音极低，并且由于荧光酶基因是插入细胞染色体中稳定表达的，单位细胞的发光数量很稳定，灵敏度高，在体内可检测到102个细胞，可以显现出肿瘤发展的重要早期阶段，并精确定量。同时还具有对环境变化反应迅速，成像速度快，图像清楚的优点。在一些实施方式中，还可通过he染色观察鼻咽癌肿瘤模型的鼻咽癌肿瘤结构、转移、侵袭的步骤。具体可以为将鼻咽癌肿瘤模型处死取癌和癌旁组织，固定后石蜡包埋，切片观察。在一些实施方式中，能够表达荧光素酶的鼻咽癌细胞系的制备方法包括：用携带荧光素酶基因的慢病毒感染c666-1细胞。在一些实施方式中，获得表达荧光素酶的鼻咽癌细胞系悬液的步骤包括：将细胞浓度为(0.8～1.2)×106/ml的所述表达荧光素酶的鼻咽癌细胞培养液与康宁基质胶混合。实验证明使用康宁基质胶制备鼻咽癌细胞系悬液进行皮下成瘤，能够使皮下瘤成长速度加快，节省实验时间。在一些实施方式中，所述组织粘合剂可选自3mvetbond。在一些实施方式中，取皮下培养的鼻咽癌肿瘤，切成肿瘤组织块的步骤包括：将鼻咽癌肿瘤瘤体从皮下取出，分别切去所述鼻咽癌肿瘤瘤体的最外缘和中心缘，将剩余的鼻咽癌肿瘤瘤体切成所述肿瘤组织块。在一些实施方式中，所述肿瘤组织块的长度、宽度和高度分别为1.8mm～2.2mm。实验证明，该尺寸的肿瘤组织块更有利于在原位成瘤。对于不同的动物，鼻咽癌肿瘤适合接种的时机不同。在一些实施方式中，所述非人动物为小鼠，取皮下培养的鼻咽癌肿瘤时，所述鼻咽癌肿瘤的直径最大值为1.5cm。优选的，可以在该鼻咽癌肿瘤的直径可以为1.0cm～1.5cm时进行组织块接种。在一些实施方式中，所述非人动物为小鼠，所述接种针的穿刺点为软腭和硬腭的交界白线处下5mm。以下为具体实施例。材料和方法：c666-1细胞株、荧光素酶(luciferase/luc)基因慢病毒、matrigel(matrix康宁基质胶)、3mvetbond组织粘合剂、一次性使用套管针、dmem培养液，dmem(含10％胎牛血清、1％双抗溶液)、3μg/ml嘌呤霉素、荧光素酶底物荧光素、pbs缓冲液、细胞消化液(0.25％trypsin-edta)、细胞培养箱(调整至37℃、5％co2)、xenogenivis200成像仪、细胞计数板。balb/c裸鼠18只，spf级，购自广西医科大学动物实验中心，鼠龄4-5周，重14-16g。随机分为皮下组3只，实施例组5只、对照例1组5只、对照例2组5只。实施例：所述模型制作的方法具体步骤如下：步骤s1：建立稳定高表达荧光素酶的鼻咽癌细胞系，具体为：步骤s1a：培养生长状态良好的c666-1细胞，病毒感染前一天将2×105个c666-1细胞种至6-well培养板培养，将处于对数生长期的c666-1用带荧光素酶(luciferase/luc)基因慢病毒感染细胞，加入不含血清的dmem培养液，置于5％co2、37℃培养箱内培养6小时，后更换成正常培养基，48小时后观察转染效果；步骤s1b：用含3μg/ml嘌呤霉素的培养液对感染后细胞进行单克隆筛选，筛选出稳定高表达荧光素酶的c666-1-luc细胞。步骤s1c：将纯化后的感染荧光素酶的人鼻咽癌细胞株c666-1-luc培养传代扩增后，用pbs吹打混匀，制备成单细胞悬液，调整细胞浓度至1.0×106/ml后与matrigelmatrix康宁基质胶吹打混匀。步骤s2：瘤源的制备，将c666-1-luc细胞接种在裸鼠皮下并进行培养，具体为:步骤s2a：选取3只spf条件下饲养的4-5周龄，14-16g的bala/c-nu裸鼠；步骤s2b：取浓度为1.0×106/ml与matrigelmatrix康宁基质胶混合的c666-1-luc细胞接种在裸鼠腋下皮下，每只1个接种点。步骤s2c：确定荷瘤裸鼠皮下有细胞悬液皮丘形成、无液体渗漏后，将裸鼠放置于清洁evc鼠笼，加入灭菌饲料，更换灭菌水；将evc鼠笼送至动物房。每3天更换一次灭菌垫料、饲料及灭菌水，观察裸鼠活力及生长状态；步骤s2d：每周观察1～2次皮下成瘤情况。待裸鼠皮下肿瘤最大直径达1.5cm时处死小鼠。步骤s3：建立原位异种鼠鼻咽癌模型，具体为：实验全程是在无菌手术台；步骤s3a：无菌切取处死的裸鼠皮下肿瘤组织，分别切去瘤体最外缘和中心缘，以切去外周正常组织较多部分和瘤体中心坏死部分，将剩余瘤体切成2×2×2mm大小组织块。步骤s3b：选择5只spf条件下饲养的4-5周龄，14-16g的bala/c-nu裸鼠；根据腹腔麻醉采用腹腔注射戊巴比妥钠麻醉裸鼠；检查确保裸鼠翻正反射消失，肌肉松弛、四肢无活动、胡须无触碰反应时，继续进行下一步操作；步骤s3c：麻醉后，将小鼠以仰卧位固定在实验板上。暴露小鼠上颚，穿刺点为软腭和硬腭的交界白线处下5mm；如图1a～1c，将2mm×2mm×2mm的肿瘤组织块塞进套管针内，通过套管针穿过软腭进入偏左或者偏右的位置，感受到落空感后稍微轻轻挑破裸鼠鼻咽部位置，用针芯将套管内的鼻咽癌组织块向前顶出。拔出针芯，然后取适量3mvetbond组织粘合剂通过套管将接种口和鼻咽癌肿瘤块粘合。拔出套管针，取适量3mvetbond组织粘合剂将裸鼠上颚出血口粘合止血，待胶水彻底干透由蓝色变为白色后方可松开裸鼠舌头。术后注意观测裸鼠生命体征；步骤s3d：待荷瘤裸鼠清醒后放置于清洁evc鼠笼，加入灭菌饲料及更换灭菌水；将evc鼠笼传送至动物房。每3天更换一次灭菌垫料、饲料及灭菌水，观察裸鼠活力及生长状态；步骤s3e：每周观察1～2次穿刺部位愈合和肿瘤发展情况。步骤s4：通过生物活体成像技术检测裸鼠体内肿瘤的生长情况。具体为：步骤s4a：裸鼠腹腔注射荧光素酶底物荧光素150mg/kg。步骤s4b：注射d-荧光素15min后，将裸鼠置于xenogenivis200成像仪上，进行图像采集，在图像采集过程中需要用成像系统自带的麻醉装置对裸鼠麻醉保持镇静。步骤s4c：成像完成后，裸鼠从xenogenivis200成像系统中移出，放在原来笼子里，待裸鼠从麻醉中完全恢复后，放置于清洁evc鼠笼，加入灭菌饲料及更换灭菌水；将evc鼠笼传送至动物房。步骤s4d：使用livingimage软件对采集的图像进行分析和生物发光定量。步骤s4e：以上步骤每周一次，持续5周。步骤s4f：将所得的所有图像进行总结绘制图表。步骤s5：通过he染色观察肿瘤的组织结构和转移、侵袭情况。具体为：步骤s5a：完成图像采集后的裸鼠处死，切出肿瘤及其周围组织，将肿瘤组织固定在10％福尔马林中。步骤s5b：经过福尔马林固定的肿瘤包埋于石蜡中，4个μm切片切取，苏木精-伊红(he)染色，如图2a～2c。对照例1：为采用细胞悬液进行裸鼠鼻咽癌原位移植具体细胞注射的实施步骤如下：使用1ml胰岛素细针吸取c666-1-luc细胞悬液20μl，浓度为1×106/ml,选择软腭和硬腭的交界白线处下5mm，将细针穿过软腭进入偏左或者偏右咽隐窝的位置后。余步骤同模型组。对照例2：与实施例基本相同，区别在于步骤s3e不注射组织粘合剂，即步骤s3e为：将2×2×2mm的肿瘤组织块塞进套管针内，通过套管针穿过软腭进入偏左或者偏右的位置，感受到落空感后稍微轻轻挑破裸鼠鼻咽部位置，用针芯将套管内的鼻咽癌组织块向前顶出。术后注意观测裸鼠生命体征。如表1所示，实施例组动物术中及术后小时的死亡率明显低于对照例1和对照例2组，成瘤率明显高于对照组。表1组别术中死亡术后死亡成瘤个数实施例(n＝5)005对照例1(n＝5)021对照例2(n＝5)001与现有技术相比，本实施例提供的技术具有以下优点：人类体内肿瘤的生长转移必须具备原位器官的肿瘤微环境，经历局部生长、游走、远处器官内再生长等程序，包括浸入淋巴管、血管附着增殖等一系列步骤，动物模型想要更加完美得呈现出人类肿瘤的发生发展，以上过程必不可少，然而目前仅有少数肿瘤可具备以上特性，人类肿瘤的侵袭性和转移性也没有在动物模型中得到重现。本发明异种原位鼻咽癌动物模型可以为目前的临床研究人员改进动物模型，摆脱肿瘤组织由于脱离了起源组织器官的微环境，移植瘤在实验中的某些行为常不同于原动物体内的肿瘤行为的困境，比如容易被包裹导致局限性生长，很少发生转移或远处器官转移，易发生肿瘤中心坏死。同时改良后的模型具有其独特的优越性，如1.原位种植组织块标本建模，减少模型小鼠因注射细胞误吸导致的死亡率；2.减少由于注射细胞悬液时人为操作或小鼠呼吸、吞咽等不可避免的原因造成的肿瘤转移假象；3.使用3mvetbond组织粘合剂将组织块固定，操作简单，固定牢靠。4.使用套管针将组织块构建原位鼻咽癌模型，这一方法可用于构建鼻咽原位癌pdx模型中。5.使用matrigelmatrix使用康宁基质胶制备鼻咽癌细胞系悬液进行皮下成瘤，能够使皮下瘤成长速度加快，节省实验时间。6.采用以荧光素酶和荧光素的生物发光方法，是以酶和底物的特异作用而发光，不需要激发光，背景噪音极低，并且由于荧光酶基因是插入细胞染色体中稳定表达的，单位细胞的发光数量很稳定，灵敏度高，在体内可检测到102个细胞，可以显现出肿瘤发展的重要早期阶段，并精确定量。同时还具有对环境变化反应迅速，成像速度快，图像清楚的优点，对于研究肿瘤研究具有极其重要的意义；这一模型的建立，可以广泛应用于基础和临床研究，如①有利于监测早期鼻咽癌的生物学行为；②有利于监测鼻咽癌的放化疗及生物靶向治疗敏感性，提供最佳治疗方案的选择；③有利于研究治疗鼻咽癌的疗效机制；④有利于影像诊断和介入放射治疗学中关于药物的靶向性分布研究；⑤将该鼻咽癌肿瘤模型用于筛选预防或治疗鼻咽癌的药物的研究。因此，这一研究平台的建立，有其他模型不可替代的必要性，也必将受到越来越多的科技工作者的重视，并具有广阔的研究前景。以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。当前第1页1 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技术特征：1.一种鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
将鼻咽癌细胞系悬液接种于非人动物的皮下进行培养；
待所述非人动物荷瘤后，取皮下培养的鼻咽癌肿瘤，切成肿瘤组织块；
用接种针将所述肿瘤组织块接种在正常非人动物的鼻咽上；
用所述接种针将组织粘合剂将接种口及所述肿瘤组织块粘合后进行培养。
2.根据权利要求1所述的鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，其特征在于，所述非人动物为啮齿动物。
3.根据权利要求2所述的鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，其特征在于，所述啮齿动物为小鼠或者裸鼠。
4.根据权利要求1所述的鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，其特征在于，所述鼻咽癌细胞系为携带eb病毒的c666-1细胞系；和/或，所述鼻咽癌细胞系能够表达荧光素酶。
5.根据权利要求4所述的鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，其特征在于，获得表达荧光素酶的鼻咽癌细胞系悬液的步骤包括：将细胞浓度为(0.8～1.2)×106/ml的所述表达荧光素酶的鼻咽癌细胞培养液与康宁基质胶混合。
6.根据权利要求1～5任一项所述的鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，其特征在于，所述组织粘合剂选自3mvetbond。
7.根据权利要求1～5任一项所述的鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，其特征在于，取皮下培养的鼻咽癌肿瘤，切成肿瘤组织块的步骤包括：将鼻咽癌肿瘤瘤体从皮下取出，分别切去所述鼻咽癌肿瘤瘤体的最外缘和中心缘，将剩余的鼻咽癌肿瘤瘤体切成所述肿瘤组织块。
8.根据权利要求1～5任一项所述的鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，其特征在于，所述肿瘤组织块的长度、宽度和高度分别为1.8mm～2.2mm。
9.根据权利要求1～5任一项所述的鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，其特征在于，所述非人动物为小鼠，所述接种针的穿刺点为软腭和硬腭的交界白线处下5mm。
10.如权利要求1～9任一项所述的鼻咽癌肿瘤模型的构建方法在筛选预防或治疗鼻咽癌的药物中的应用。
技术总结本发明实施例提供一种鼻咽癌肿瘤模型的构建方法，包括以下步骤：将鼻咽癌细胞系悬液接种于非人动物的皮下后进行培养；待所述非人动物荷瘤后，取皮下培养的鼻咽癌肿瘤，切成肿瘤组织块；用接种针将所述肿瘤组织块接种在正常非人动物的鼻咽上；用所述接种针将组织粘合剂将接种口及所述肿瘤组织块粘合后进行培养。
技术研发人员：康敏;陈玮;王仁生;陈思霞;周子燕;银苑秀;申明君;覃雅婷
受保护的技术使用者：广西医科大学第一附属医院
技术研发日：2020.12.22
技术公布日：2021.03.12
