本发明涉及药物纯化领域，特别是一种高收率分离纯化前列腺素e2的方法。
背景技术：
前列腺素e2，也称地诺前列酮，英文名称简写为pge2，前列腺素e2(pge2)是一种重要的细胞生长和调节因子，是花生四烯酸环氧合酶代谢产物，为二十碳不饱和脂肪酸。pge2可引起强烈子宫收缩，影响胎盘血液供应和胎盘功能，而发生流产。收缩子宫平滑肌的机制，可能与前列腺素使子宫平滑肌细胞内游离钙释放增加有关。pge2不同于催产素，它对各期妊娠子宫均有兴奋作用，且比较温和，其缩宫作用较pge2α强10～40倍。pge2对子宫颈有转化及扩张作用，可用于人流手术前扩张宫颈。这可能是由于前列腺素刺激宫颈纤维细胞，是胶原纤维排列改变所致。pge2可使支气管平滑肌舒张，对下丘脑体温调节中枢有升温作用，用药后体温可升高1～2℃。
前列腺素e2英文名称：prostaglandine2；pge2；cerviprost；(z)-7-((1r，2r，3r)-3-hydroxy-2-((s，e)-3-hydroxyoct-l-en-l-yl)-5-oxocyclopentyl)hept-5-enoicacid；prostaglandine2；prostin；prostaglandine2；propess；prepidil；mch(human，mouse，rat)；cervidil；prostine2；l-pge2；prostenon；cervidil(r)
化学结构式如下：
目前国内外专利、科研文献等对前列腺素e2的报道多为生产方法及产品应用专利，分离纯化方法鲜有报道。cn111394289a主要是基因工程生产方法，其获得的样品纯度极低，仅2.547％，远远不能达到合格标准。因此有必要对前列腺素e2的分离、纯化和制备做更进一步的研究。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种高收率分离纯化前列腺素e2的方法，仅需一步层析纯化即可满足前列腺素e2纯度大于98.5％、收率大于99％的要求，纯化收率高而稳定，同时本发明分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。
为达到上述目的，本发明的技术方案如下：一种前列腺素e2的高收率分离纯化方法，包括以下步骤：1)将前列腺素e2粗提取物溶解并过滤；2)将上述过滤后的前列腺素e2溶液上样到装有反相硅胶微球的层析柱中进行层析；3)采用酸性水溶液和有机溶剂作为流动相对前列腺素e2溶液进行梯度洗脱；4)分段收集目的峰值的前列腺素e2溶液，对符合要求的组份液进行汇总；
所述前列腺素e2的高收率分离纯化方法，洗脱液中前列腺素e2的纯度大于98.5％，收率大于99％。
优选的，所述反相硅胶为单分散的、具有孔道结构的微球。
优选的，所述反相硅胶微球的型号是unisilc18或unisilc8。
优选的，所述1)中前列腺素e2粗提取物溶解于酸性溶液中。
优选的，所述3)中酸性水溶液为乙酸水溶液。
优选的，所述3)中有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、异丙醇。
优选的，上样前，对层析柱进行平衡，先用高浓度所述有机溶剂进行再生，后用浓度低于30％的所述有机溶剂进行平衡。所述高浓度指浓度在30％-70％之间。
优选的，所述洗脱过程为，以0.2％的乙酸水溶液为a相，以乙腈为b相，先用乙腈含量占a b总量10％～30％的流动相冲洗1-12个柱体积，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总分析测试，再用乙腈含量占a b总量30-70％的流动相对层析柱进行再生。
unisilc18或unisilc8是粒径均为10μm，孔径
本发明采用有机溶剂和含0.2％醋酸的水溶液作为流动相，仅用6-12个柱体积就可完成前列腺素e2主峰的洗脱，所用流动相安全、无污染且成本较低，并且使用的流动相量较少，纯化周期比较短。
本发明采用单分散的unisilc18或unisilc8作为固定相，仅需一步层析即可使前列腺素e2纯度高于98.5％，收率可达99％。
因此，本发明方法分离纯化前列腺素e2，不仅纯度高、收率高且稳定，而且操作简单方便，所用固定相可重复利用，所用流动相量少节约，大大降低成本。
附图说明
图1为实施例1使用的unisilc18或unisilc8微球的的扫描电镜照片。
图2为实施例1提纯前的前列腺素e2粗品的高效液相色谱分析。
图3为实施例1纯化后前列腺素e2的高效液相色谱分析。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。
实施例1
取样品，粗品前列腺素e2溶于酸性溶液中，含量为2mg/ml。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。采用4.6×250mm的色谱柱，unisilc18或c8微球(苏州纳微科技有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为4.2ml。对层析柱进行柱前预处理，采用0.2％的醋酸水溶液(a相)和乙腈(b相)作为流动相进行梯度洗脱，流速控制在0.7ml/min。等度洗脱过程为，用含量30％的b相冲洗72分钟，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中前列腺素e2的纯度大于98.5％，收率大于99％。
图2是提纯前的前列腺素e2粗品的高效液相色谱分析，可见有一定的杂质。图3是提纯后的前列腺素e2高效液相色谱分析，可见杂质非常少。
实施例2
取样品，粗品前列腺素e2溶于酸性水溶液中，含量为2mg/ml。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。采用dac50×250mm的色谱柱，unisilc18或c8微球(苏州纳微科技有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为490.6ml。对层析柱进行柱前预处理，采用0.2％的醋酸水溶液(a相)和乙腈(b相)作为流动相进行梯度洗脱，流速控制在50ml/min。等度洗脱过程为，用含量30％的b相冲洗80分钟，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中前列腺素e2的纯度大于98.5％，收率大于99％。
实施例2已经达到中试规模，分离纯化前列腺素e2的纯度和收率依然稳定，表明本发明方法稳定性高，可适用于规模化生产。
本发明采用有机溶剂和含0.2％醋酸的水溶液作为流动相，仅用6-12个柱体积就可完成前列腺素e2主峰的洗脱，所用流动相安全、无污染且成本较低，并且使用的流动相量较少，纯化周期比较短。
以上所述的仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
1.一种前列腺素e2的高收率分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括以下步骤：1)将前列腺素e2粗提取物溶解并过滤；2)将上述过滤后的前列腺素e2溶液上样到装有反相硅胶微球的层析柱中进行层析；3)采用酸性水溶液和有机溶剂作为流动相对前列腺素e2溶液进行洗脱；4)分段收集目的峰值的前列腺素e2溶液，对符合要求的组份液进行汇总；
所述前列腺素e2的高收率分离纯化方法，洗脱液中前列腺素e2的纯度大于98.5％，收率大于99％。
2.如权利要求1所述的前列腺素e2的高收率分离纯化方法，其特征在于，所述1)中前列腺素e2粗提取物溶解于酸性溶液中。
3.如权利要求1所述的前列腺素e2的高收率分离纯化方法，其特征在于，所述反相硅胶微球的型号是unisilc18或unisilc8。
4.如权利要求1所述的前列腺素e2的高收率分离纯化方法，其特征在于，所述3)中酸性水溶液是乙酸水溶液。
5.如权利要求1所述的前列腺素e2的高收率分离纯化方法，其特征在于，所述3)中有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、异丙醇。
6.如权利要求1所述的前列腺素e2的高收率分离纯化方法，其特征在于，所述洗脱过程为，以0.2％的乙酸水溶液为a相，以乙腈为b相，先用乙腈含量占a b总量10％～30％的流动相冲洗1～12个柱体积，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总分析测试，再用乙腈含量占a b总量30％～70％的流动相对层析柱进行再生。
7.如权利要求1所述的前列腺素e2的高收率分离纯化方法，其特征在于，上样前，对层析柱进行平衡，先用高浓度所述有机溶剂进行除杂，后用浓度低于30％的所述有机溶剂进行平衡。
技术总结