本发明涉及一种化合物及其制备方法，具体为一种trpv3小分子变构抑制剂及其制备方法。
背景技术：
瞬时受体电位(trp)通道作为非选择性阳离子通道家族，1969年由cosen等人在果蝇感光细胞中首次发现。哺乳动物trp通道共有28个成员，根据氨基酸序列同源性分为7个亚群:trpc(canonical)、trpv(vanilloid)、trpm(melastatin)、trpp(polycystin)、trpa(ankyrin)、trpml(mucolipin)和trpn(nompc-like)。这些通道通过各种各样的机制被激活，并参与几乎所有的感官形态。
瞬时受体电位的香草类家族(trpv)由六个离子通道组成:trpv1-trpv6。其中trpv1/2/3/4为对ca2 渗透率适宜的温度敏感通道，trpv5/6为对ca2 高选择性的通道。与trpv家族中研究最多的成员trpv1相比，trpv3由于缺乏有效且选择性的激动剂或抑制剂而发展缓慢。随着trpv3低温电子显微镜结构的分析，为trpv3的研究提供了新的机会。
然而最初的大多数trpv3抑制剂是天然产物，有效剂量大，可能导致严重的副作用。随后，glenmark、hydrabiosciences和abbvie三家公司开始开发trpv3小分子抑制剂，但现有的trpv3抑制剂仍然存在结构种类少，发展缓慢等问题。
技术实现要素：
发明目的：本发明的目的是提供一种trpv3小分子变构抑制剂。本发明的另一个目的是提供该抑制剂的制备方法。
技术方案：本发明所述的trpv3小分子变构抑制剂，包含如通式(i)或通式(ⅱ)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，
x选自n或c；
y选自(ch2)或(co)；
r2选自氢、卤素；
r4取自c1-c8烷基、c3-c8环烷基、萘环、金刚烷基、吗啉、4-(甲基磺酰基)哌嗪、4-(三氟甲基)吡啶-2-胺；
r1、r3分别独立选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、c1-c8烷基、卤代c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c3-c8环烷基、c3-c8环烯基、c2-c8链烯基、c2-c8炔基、c6-c10芳基、c3-c10杂芳基、c4-c8杂环基。
优选的，所述的trpv3小分子变构抑制剂，其中：
r1选自氢、甲氧基(-och3)、三氟甲基(-cf3)；
r3选自三氟甲基(-cf3)、氰基(-cn)；
r4选自c1-c3烷基、环己烷、萘环、金刚烷基、吗啉、4-(甲基磺酰基)哌嗪、4-(三氟甲基)吡啶-2-胺。
所述的trpv3小分子变构抑制剂，所述化合物选自i-1至i-33：
所述的trpv3小分子变构抑制剂的制备方法，包括方案1、方案2或方案3的反应步骤：
方案1：由中间体ⅰa与中间体ⅰb在碱的存在下反应制备化合物(ⅰ)a系列化合物；
方案2：由原料md和中间体ⅰb在还原剂存在下合成(ⅰ)b系列化合物和(ⅱ)a系列化合物；
方案3：由化合物ⅰa与化合物ⅰb在碱的存在下反应制备化合物(ⅰ)a系列化合物；由化合物(ⅰ)a上氢原子被r2取代得到(ⅰ)c系列化合物；
药物组合物，包含所述的trpv3小分子变构抑制剂。
所述的药物组合物，由所述trpv3小分子变构抑制剂添加一种或多种药学上的辅料制成制剂。
所述的药物组合物，所述制剂为片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、糖浆剂、口服液或注射剂。
有益效果：与现有的技术相比，本发明具有如下显著的特点：本发明提供的trpv3小分子抑制剂结构与已有的trpv3小分子抑制剂截然不同，此次公开增加了trpv3抑制剂的结构种类，促进trpv3抑制剂的发展。
附图说明
图1为本发明代表性化合物i-19(pd1)、i-31(pc4)、i-32(pc5)、i-33(pc6)对rtrpv3介导1mm2-apb激发的电流抑制浓度依赖图；
图2为i-32(pc5)对rtrpv3介导1mm2-apb或者100μm2-apb诱发的电流抑制趋势图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本申请做出详细说明
一.中间体的合成
(1)4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-胺(ib1)的合成
2-溴-4'-(三氟甲基)苯乙酮(1mmol，1.0eq)和尿素(10mmol，10.0eq.)加入圆底烧瓶中,使用乙腈作为溶剂，将所得混合物加热至85℃并搅拌过夜。通过tlc监测反应,反应完成后将反应混合物冷却至室温，向其中缓慢加入适量的水，并用乙酸乙酯萃取3次。减压蒸发有机层,残余物通过硅胶色谱法纯化(pe∶ea＝5∶1)，得到(ib1)，白色固体，产率78％。1hnmr(300mhz,chloroform-d)δ7.74(d,j＝8.2hz,2h),7.62(d,j＝8.2hz,2h),7.54(s,1h),4.77(s,2h).
(2)4-(2-氨基噁唑-4-基)苄腈(ib2)的合成
2-溴-4'-氰基苯乙酮(1mmol，1.0eq)和尿素(10mmol，10.0eq.)加入圆底烧瓶中,使用乙腈作为溶剂，将所得混合物加热至85℃并搅拌过夜。通过tlc监测反应,反应完成后将反应混合物冷却至室温，向其中缓慢加入适量的水，并用乙酸乙酯萃取3次。减压蒸发有机层，残余物通过硅胶色谱法纯化(pe∶ea＝5∶1)，得到(ib2)，黄色固体，产率82％。1hnmr(300mhz,chloroform-d)δ7.73(d,j＝8.2hz,2h),7.65(d,j＝8.3hz,2h),7.56(s,1h),4.72(s,2h).
(3)苄基(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)氨基甲酸酯(ic)的合成
将中间体ib1(1.75mmol，1.0eq.)溶解于thf中之后，加入nahco3(3.5mmol，2.0eq.)和少量的催化剂dmap，并在0℃下缓慢滴加氯甲酸苄酯(2.63mmol，1.5eq.),在室温下搅拌24-36小时。通过tlc监测反应,反应完成后，将反应混合物冷却至室温，向其中缓慢加入适量的水，并用乙酸乙酯萃取3次。减压蒸发有机层,残余物通过硅胶色谱法纯化(pe∶ea＝5∶1)，得到ic,产率53％，白色固体，1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.35(s,1h),8.55(s,1h),7.94(d,j＝8.1hz,2h),7.80(d,j＝8.3hz,2h),7.46–7.34(m,5h),5.21(s,2h).
二.化合物i-1-i-33的合成
实施例1
2,6-二甲氧基-n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)苯甲酰胺的合成：
步骤一：同时加入2,6-二甲氧基苯甲酸(1.76mmol,2.0eq.)和过量的二氯亚砜，在85℃回流1-2h，用薄层色谱法监测反应直至原料消失。减压蒸发多余二氯亚砜，得固体。
步骤二：
方法一：将ib1(0.88mmol,1.0eq.)溶于thf中，加入tea(2.64mmol,3.0eq.)。冰浴的条件下将步骤一中得到的固体(1.76mmol,2.0eq.)用thf溶解后滴加至混合物中，反应1h后，升温至75℃，回流过夜。通过tlc监测反应,反应完成后，将反应混合物冷却至室温，向其中缓慢加入适量的饱和nahco3溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取3次。减压蒸发有机层，残余物通过硅胶色谱法纯化(pe∶ea＝5∶1)，得到ic，产率46％。
方法二：将ib1(0.5mmol,1.0eq.)溶于thf中，加入naoh(1.5mmol,3.0eq.)。冰浴的条件下将步骤一中得到的固体(0.75mmol,1.5eq.)用thf溶解后滴加至混合物中，反应1h后升至室温，过夜反应。通过tlc监测反应，反应完成后，将反应混合物冷却至室温，向其中缓慢加入适量的饱和nahco3溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取3次。减压蒸发有机层,残余物通过硅胶色谱法纯化(pe∶ea＝5∶1)，得到ic，白色固体，产率70％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ11.69(s,1h),8.59(s,1h),8.00(d,j＝7.6hz,2h),7.84(d,j＝8.0hz,2h),7.41(t,j＝8.4hz,1h),6.77(d,j＝8.5hz,2h),3.81(s,6h).13cnmr(126mhz,dmso)δ162.88,157.25,154.06,138.32,135.38,133.08,131.55,128.47(q,j＝32.8hz),126.20(q,j＝3.8hz),126.04,124.7(q,j＝271.2hz),115.47,104.71,56.33.hrms(esi):calcd.forc19h15f3n2o4(m h) 393.1057；found393.1050.
实施例2
2,3-二甲氧基-n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)苯甲酰胺的合成：
参考化合物(i-1)的合成方法，白色固体，产率为80％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.07(s,1h),7.90(s,2h),7.78(dd,j＝49.2,8.2hz,2h),7.53–7.39(m,1h),7.29(t,j＝8.1hz,1h),6.84(s,1h),3.87(d,j＝21.6hz,6h).hrms(esi):calcd.forc19h15f3n2o4(m h) 393.1057；found393.1046.
实施例3
2,4-二甲氧基-n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)苯甲酰胺的合成：
参考化合物(i-1)的合成方法，采用步骤二中的方法一，淡黄色固体，产率为26％。可用步骤二中的方法二，产率会有所提高。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.83(s,1h),8.64(s,1h),7.98(d,j＝8.1hz,2h),7.81(d,j＝8.2hz,2h),7.76(d,j＝8.6hz,1h),6.72–6.67(m,2h),3.90(d,j＝30.6hz,6h).hrms(esi):calcd.forc19h15f3n2o4(m h) 393.1057；found393.1048.
实施例4
2,5-二甲氧基-n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)苯甲酰胺的合成：
参考化合物(i-1)的合成方法，采用步骤二中的方法一，白色固体，产率为38％。可用步骤二中的方法二，产率会有所提高。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ11.26(s,1h),8.63(s,1h),7.97(d,j＝8.1hz,2h),7.82(d,j＝8.3hz,2h),7.22(t,j＝1.7hz,1h),7.13(d,j＝1.8hz,2h),3.80(d,j＝24.9hz,6h).hrms(esi):calcd.forc19h15f3n2o4(m h) 393.1057；found393.1050.
实施例5
n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)吡啶啉酰胺的合成：
参考化合物(i-1)的合成方法，采用步骤二中的方法一，白色固体，产率为29％。可用步骤二中的方法二，产率会有所提高。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ10.80(s,1h),8.66(d,j＝4.7hz,1h),8.34(d,j＝7.8hz,1h),7.99-7.86(m,1h),7.87(t,j＝4.1hz,3h),7.67(d,j＝8.2hz,2h),7.57(dd,j＝7.6,4.7hz,1h)；hrms(esi):calcd.forc16h10f3n3o2(m h) 334.0798；found334.079.
实施例6
5-(三氟甲基)-n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)吡啶啉酰胺的合成：
参考化合物(i-1)的合成方法，采用步骤二中的方法一，黄色固体，产率为72％。可用步骤二中的方法二，产率会有所提高。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ11.98(s,1h),9.16(s,1h),8.72(s,1h),8.53(d,j＝6.0hz,1h),8.34(d,j＝8.2hz,1h),8.01(d,j＝8.1hz,2h),7.84(d,j＝8.2hz,2h).hrms(esi):calcd.forc17h9f6n3o2(m h) 402.0672；found402.0671.
实施例7
n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)-1-萘酰胺的合成：
将ib1(0.44mmol,1.0eq.)溶于thf中，加入tea(1.32mmol,3.0eq.)。冰浴的条件下将1-萘甲酰氯(0.66mmol,1.5eq.)用thf稀释后滴加至混合物中，反应1h后，升温至75℃，回流过夜。通过tlc监测反应,反应完成后，将反应混合物冷却至室温，向其中缓慢加入适量的饱和nahco3溶液淬灭反应，并用乙酸乙酯萃取3次。减压蒸发有机层,残余物通过硅胶色谱法纯化(pe∶ea＝50∶1)，得到白色固体,产率46％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.04(s,1h),8.70(s,1h),8.32–8.28(m,1h),8.18-8.14(m,1h),8.09-8.02(m,3h),7.91–7.85(m,3h),7.71–7.60(m,4h).hrms(esi):calcd.forc21h13f3n2o2(m h) 383.1002；found383.0996.
实施例8
n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)环己烷甲酰胺的合成：
参考化合物(i-7)的合成方法，得到白色固体,产率49％。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝7.4hz,3h),7.66(d,j＝8.2hz,2h),2.66-2.39(m,1h),2.00-1.52(m,10h).hrms(esi):calcd.forc17h17f3n2o2(m h) 339.1315；found339.1306.
实施例9
(3r，5r，7r)-n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)金刚烷-1-羧酰胺的合成：
参考化合物(i-7)的合成方法，得到白色固体,产率26％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ10.75(s,1h),8.59(s,1h),7.96(d,j＝8.1hz,2h),7.80(d,j＝8.2hz,2h),1.93–1.91(m,4h),1.79-1.78(m,3h),1.70–1.64(m,8h).hrms(esi):calcd.forc21h21f3n2o2(m h) 391.1628；found391.1622.
实施例10
n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)异丁酰胺的合成：
参考化合物(i-7)的合成方法，得到白色固体，产率51％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.79(d,j＝4.0hz,2h),7.78(s,1h),7.65(d,j＝7.8hz,2h),2.81(s,1h),1.28(d,j＝6.9hz,6h).hrms(esi):calcd.forc14h13f3n2o2(m h) 299.1002；found299.0993.
实施例11
n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)丁酰胺的合成：
参考化合物(i-7)的合成方法，得到白色固体，产率51％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.36(s,1h),8.55(s,1h),7.87(dd,j＝57.4,8.2hz,4h),2.39(t,j＝7.4hz,2h),1.61(h,j＝7.3hz,2h),0.92(t,j＝7.4hz,3h).hrms(esi):calcd.forc14h13f3n2o2(m h) 299.1002；found299.0990.
实施例12
n-(4-(4-氰基苯基)恶唑-2-基)吡啶啉酰胺的合成：
参考化合物(i-1)的合成方法，得到白色固体,产率22％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.69(s,1h),8.77(d,j＝4.4hz,1h),8.72(s,1h),8.17-8.08(m,2h),7.98-7.92(m,4h),7.76-7.73(m,1h)；hrms(esi):calcd.forc16h10n4o2(m h) 291.0877；found291.0868.
实施例13
n-(4-(4-氰基苯基)恶唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶啉酰胺的合成：
参考化合物(i-1)的合成方法，得到淡黄色固体，产率51％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ11.97(s,1h),9.15(s,1h),8.74(s,1h),8.53(d,j＝8.4hz,1h),8.33(d,j＝8.3hz,1h),7.99-7.92(m,4h)；hrms(esi):calcd.forc17h9f3n4o2(m h) 359.0750；found359.0742.
实施例14
参考化合物(i-7)的合成方法，得到白色固体,产率26％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.04(s,1h),8.71(s,1h),8.26(d,j＝7.3hz,1h),8.14(d,j＝8.3hz,1h),8.05(dd,j＝6.9,2.4hz,1h),7.95(q,j＝8.4hz,4h),7.86(d,j＝7.0hz,1h),7.70-7.57(m,3h).hrms(esi):calcd.forc21h13n3o2(m h) 340.1081；found340.1072.
实施例15
n-(4-(4-氰基苯基)噁唑-2-基)环己烷甲酰胺的合成：
参考化合物(i-7)的合成方法，得到白色固体,产率55％。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.39(s,1h),7.81(s,1h),7.78(d,j＝8.1hz,2h),7.69(d,j＝8.1hz,2h),2.60-2.41(m,1h),2.00–1.37(m,10h).hrms(esi):calcd.forc17h17n3o2(m h) 296.1394；found296.1384.
实施例16
(3r，5r，7r)-n-(4-(4-氰基苯基)噁唑-2-基)金刚烷-1-羧酰胺的合成：
参考化合物(i-7)的合成方法，得到白色固体，产率38％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.25(s,1h),7.83(s,1h),7.79(d,j＝8.2hz,2h),7.69(d,j＝8.4hz,2h),2.13(s,3h),1.99(d,j＝2.9hz,5h),1.82-1.73(m,7h).hrms(esi):calcd.forc21h21n3o2(m h) 348.1707；found348.1690.
实施例17
n-(4-(4-氰基苯基)噁唑-2-基)异丁酰胺的合成：
参考化合物(i-7)的合成方法，得到黄色固体,产率35％。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.52(s,1h),7.81(s,1h),7.78(d,j＝8.5hz,2h),7.69(d,j＝8.3hz,2h),2.83(s,1h),1.29(d,j＝6.9hz,6h).hrms(esi):calcd.forc14h13n3o2(m h) 256.1081；found256.107.
实施例18
n-(4-(4-氰基苯基)噁唑-2-基)丁酰胺的合成：
参考化合物(i-7)的合成方法，得到淡黄色固体,产率39％。1hnmr(300mhz,cdcl3)δ8.47(s,1h),7.79(d,j＝8.3hz,3h),7.69(d,j＝8.0hz,2h),2.61(s,2h),1.79(q,j＝7.4hz,2h),1.03(t,j＝7.4hz,3h).hrms(esi):calcd.forc14h13n3o2(m h) 256.1081；found256.1076.
实施例19
n-(2,6-二甲氧基苄基)-4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-胺的合成：
将2,6-二甲氧基苯甲醛(1.32mmol,1.0eq.)和ib1一起加入圆底烧瓶，用1,2-二氯乙烷作为溶剂，常温搅拌1-2h后，加入三乙酰基硼氢化钠(2.64mmol,2.0eq.)，混合物一起常温继续搅拌，通过tlc监测反应，反应完成后，向其中缓慢加入适量的nh4cl水溶液搅拌后并用二氯甲烷萃取3次。减压蒸发有机层,残余物通过硅胶色谱法纯化(pe∶ea＝10∶1)，得到淡黄色固体,产率32％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.12(s,1h),7.90(d,j＝8.1hz,2h),7.74(d,j＝8.2hz,2h),7.27(t,j＝8.4hz,1h),7.16(t,j＝5.0hz,1h),6.67(d,j＝8.3hz,2h),4.42(d,j＝5.0hz,2h),3.79(s,6h).13cnmr(126mhz,dmso-d6)δ162.10,158.96,138.38,136.57,129.71,129.69,127.69(q,j＝31.8hz),125.90(q,j＝3.9hz),125.69,113.86,104.48,56.26,35.75.hrms(esi):calcd.forc19h17f3n2o3(m h) 379.1264；found379.1257.
实施例20
n-(2,3-二甲氧基苄基)-4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-胺的合成：
参考化合物(i-19)的合成方法，得到白色固体,产率42％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.15(s,1h),7.87–7.84(m,3h),7.72(d,j＝8.3hz,2h),7.04-7.01(m,1h),6.97–6.95(m,2h),4.46(d,j＝6.1hz,2h),3.80(d,j＝3.9hz,6h).hrms(esi):calcd.forc19h17f3n2o3(m h) 379.1264；found379.1252.
实施例21
n-(2,4-二甲氧基苄基)-4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-胺的合成：
参考化合物(i-19)的合成方法，得到淡黄色固体,产率37％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.12(s,1h),7.79(dd,j＝57.9,8.0hz,4h),7.65(s,1h),7.20(d,j＝8.3hz,1h),6.63–6.37(m,2h),4.34(s,2h),3.77(d,j＝27.2hz,6h).hrms(esi):calcd.forc19h17f3n2o3(m h) 379.1264；found379.1255.
实施例22
n-(2,5-二甲氧基苄基)-4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-胺的合成：
参考化合物(i-19)的合成方法，得到淡黄色固体,产率38％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.15(s,1h),7.86(d,j＝8.0hz,2h),7.79–7.76(m,1h),7.72(d,j＝8.1hz,2h),6.92(d,j＝9.7hz,2h),6.80(d,j＝8.7hz,1h),4.41(s,2h),3.72(d,j＝43.5hz,6h).hrms(esi):calcd.forc19h17f3n2o3(m h) 379.1264；found379.1248.
实施例23
n-(4-溴-2,6-二甲氧基苄基)-4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-胺的合成：
参考化合物(i-19)的合成方法，得到淡粉色固体,产率36％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ8.12(s,1h),7.89(d,j＝8.0hz,2h),7.73(d,j＝8.0hz,2h),7.22(s,1h),6.88(s,2h),4.36(s,2h),3.81(s,6h).hrms(esi):calcd.forc19h16brf3n2o3(m h) 457.0369；found457.0354.
实施例24
4-(2-((2,6-二甲氧基苄基)氨基)噁唑-4-基)苄腈的合成：
参考化合物(i-19)的合成方法，得到黄色固体,产率26％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ8.16(s,1h),7.88–7.82(m,4h),7.29-7.18(m,2h),6.67(d,j＝8.4hz,2h),4.41(d,j＝5.0hz,2h),3.78(s,6h).hrms(esi):calcd.forc19h17n3o3(m h) 336.1343；found336.1338.
实施例25
n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)吗啉-4-羧酰胺的合成：
将中间体ic(0.276mmol,1.0eq.)溶于甲苯中，滴加吗啉(0.414,1.5eq.),加入cai2(0.04mmol,0.15eq.)，将混合物加入至80℃回流5-6h.通过tlc监测反应,反应完成后，向其中缓慢加入适量的水溶液，后用乙酸乙酯萃取3次。减压蒸发有机层,残余物通过硅胶色谱法纯化(dcm：ea＝5:3)，得到白固体,产率52％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.21(s,1h),8.53(s,1h),7.94(d,j＝8.2hz,2h),7.80(d,j＝8.2hz,2h),3.60(dd,j＝5.8,3.8hz,4h),3.44(dd,j＝5.5,3.9hz,4h).hrms(esi):calcd.forc15h14f3n3o3(m h) 342.1060；found342.1051.
实施例26
4-(甲基磺酰基)-n-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)哌嗪-1-甲酰胺的合成：
参考化合物(i-25)的合成方法，得到白色固体,产率82％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ10.35(s,1h),8.54(s,1h),7.94(d,j＝8.1hz,2h),7.80(d,j＝8.2hz,2h),3.57(t,j＝5.0hz,4h),3.15(t,j＝5.1hz,4h),2.92(s,3h).hrms(esi):calcd.forc16h17f3n4o4s(m h) 419.0995；found419.0990.
实施例27
1-(4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)-3-(4-(三氟甲基)吡啶-2-基)脲的合成：
参考化合物(i-25)的合成方法，得到白色固体,产率60％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ11.46(s,1h),11.01(s,1h),8.64(d,j＝5.2hz,1h),8.58(s,1h),8.29(s,1h),7.97(d,j＝8.1hz,2h),7.85(d,j＝8.3hz,2h),7.50(dd,j＝5.3,1.7hz,1h).hrms(esi):calcd.forc17h10f6n4o2(m h) 417.0781；found417.0773.
实施例28
n-(5-溴-4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶啉酰胺的合成：
将实施例6所得化合物(0.25mmol,1.0eq.)用冰醋酸溶解，缓慢加入nbs(0.3mmol,1.2eq.)后室温搅拌，观察到溶液颜色改变。通过tlc监测反应,反应完成后，向其中缓慢加入适量的饱和nahco3溶液,后用乙酸乙酯萃取3次。减压蒸发有机层,残余物通过硅胶色谱法纯化(pe:ea＝5:1)，得到淡黄色固体,产率46％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ12.16(s,1h),9.15(s,1h),8.53(dd,j＝8.2,2.3hz,1h),8.33(d,j＝8.2hz,1h),8.13(d,j＝8.1hz,2h),7.91(d,j＝8.3hz,2h).hrms(esi):calcd.forc17h8brf6n3o2(m h) 479.9777；found479.9780.
实施例29
n-(5-氯-4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶啉酰胺的合成：
参考化合物(i-28)的合成方法,得到黄色固体，产率35％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.19(s,1h),9.15(s,1h),8.54(d,j＝8.3hz,1h),8.34(d,j＝8.2hz,1h),8.00(dd,j＝74.6,8.1hz,4h).hrms(esi):calcd.forc17h8clf6n3o2(m h) 436.0282；found436.0274.
实施例30
n-(5-碘-4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)-5-(三氟甲基)吡啶啉酰胺的合成：
参考化合物(i-28)的合成方法，得到白色固体,产率75％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ12.08(s,1h),9.15(s,1h),8.53(dd,j＝8.3,2.3hz,1h),8.33(d,j＝8.2hz,1h),8.17(d,j＝8.1hz,2h),7.90(d,j＝8.3hz,2h).hrms(esi):calcd.forc17h8f6in3o2(m h) 527.9638；found527.9628.
实施例31
n-(5-溴-4-(4-(三氟甲基)苯基)噁唑-2-基)-2,6-二甲氧基苯甲酰胺的合成：
参考化合物(i-28)的合成方法，得到白色固体,产率40％。1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ11.89(s,1h),8.10(d,j＝7.3hz,2h),7.89(d,j＝8.0hz,2h),7.39(t,j＝8.4hz,1h),6.75(d,j＝8.4hz,2h),3.78(s,6h).13cnmr(126mhz,dmso-d6)δ163.00,157.25,154.17,134.93,134.10,131.73,128.93(q,j＝31.9hz),126.91,126.22(q,j＝4.0hz),124.59(q,j＝273.4hz),115.13,114.08,104.71,56.36.hrms(esi):calcd.forc19h14brf3n2o4(m h) 471.0162；found471.0150.
实施例32
参考化合物(i-28)的合成方法，得到白色固体,产率69％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ11.90(s,1h),8.05(d,j＝8.0hz,2h),7.88(d,j＝8.0hz,2h),7.39(t,j＝8.4hz,1h),6.75(d,j＝8.5hz,2h),3.78(s,6h).13cnmr(126mhz,dmso-d6)δ163.06,157.25,151.97,133.69,131.75,131.05,128.9(q,j＝31.5hz),127.10,126.82,126.27(q,j＝3.78hz),124.57(q,j＝272.2hz),115.08,104.71,56.36.hrms(esi):calcd.forc19h14clf3n2o4(m h) 427.0667；found427.0657.
实施例33
参考化合物(i-28)的合成方法，得到白色固体,产率72％。1hnmr(300mhz,dmso-d6)δ11.82(s,1h),8.13(d,j＝8.0hz,2h),7.88(d,j＝8.0hz,2h),7.38(t,j＝8.4hz,1h),6.74(d,j＝8.4hz,2h),3.78(s,6h).13cnmr(126mhz,dmso)δ162.91,157.24,141.38,134.94,131.66,128.83(q,j＝31.5hz),127.08,126.07(q,j＝3.78hz),126.09,126.06,124.64(q,j＝272.2hz),115.23,104.69,85.05,56.35.hrms(esi):calcd.forc19h14f3in2o4(m h) 519.0023；found519.0006.
三、生物学评价实验
本发明中化合物活性及选择性评价主要采用全细胞膜片钳技术对表达野生型mtrpv3、rtrpv1、rtrpc6、rtrpm8的hek-293细胞进行电生理实验，使用的mtrpv3、rtrpv1、rtrpc6、rtrpm8质粒由武汉大学姚镜教授赠送。
hek-293细胞使用添加10％胎牛血清(pan)、1％谷氨酰胺(gibco)和1％青霉素/链霉素(gibco)的杜氏改良的eagle’s培养基(康宁)，置于37℃、95％空气和5％co2的培养箱中培养。
1.磷酸钙转染法
将100μl的氯化钙和hbs分别装于1.5ml的ep管中。向氯化钙中加入3-4μg质粒，用移液枪吹打均匀，并将质粒和氯化钙的混合溶液加入至hbs中，边加边搅拌，混匀后静置3min加入到细胞培养皿中。细胞转染8h后换液，用pbs洗涤细胞后再加新的培养基。培养12-24h后可以进行电生理实验。
2.全细胞膜片钳技术：
试剂配制：细胞内液：140mmcscl,5mmegta,10mmhepes,用tris-base调节ph至7.4。细胞外液：150mmnacl,5mmkcl,10mm葡萄糖,2mmcacl2,1mmmgcl2,and10mmhepes，用tris-base调节ph至7.4。药物溶解和灌流均使用无ca2 细胞外液，将普通细胞外液中cacl2和mgcl2用5mmegta代替。
试验方法：采用全细胞膜片钳技术，记录模式为电压钳模式。在质粒转染12-24h后进行实验，所有试验均在23±0.5℃下进行。硼硅酸盐玻璃电极通过pc-100电极拉制仪拉制，电极电阻控制为3-5mω，注入细胞内液并固定在微电极夹持器上。在显微镜的载物台上放置盛有贴壁细胞的培养皿，将微电极尖端贴合待检测细胞，施加负压，使得细胞与电极之间形成高阻封接之后进行细胞破膜。灌流无ca2 细胞外液,开始记录，给予2-apb(1mm)激活trpv3通道，初筛化合物对通道的抑制作用时，预10μm不同化合物30s后，共给化合物及2-apb。ic50曲线的绘制由给予不同浓度(0.1μm,0.3μm,1μm,3μm,10μm,30μm)的化合物所得。另外，在表达rtrpv1、rtrpc6、rtrpm8的细胞上测定这些化合物的通道选择性。采样频率为10khz，滤波为2khz.采集数据时钳制电压为-60mv。本发明中代表性化合物i-19(pd1)、i-31(pc4)、i-32(pc5)、i-33(pc6)对rtrpv3介导1mm2-apb激发的电流抑制浓度依赖见图1。图1绘制由给予代表化合物不同浓度(0.1μm、0.3μm、1μm、3μm、10μm、30μm)所得。由图1可看出化合物i-19(pd1)和i-33(pc6)为部分抑制剂，而i-31(pc4)和i-32(pc5)为完全抑制剂，且i-32(pc5)活性更好。进一步，选取化合物i-32(pc5)，对rtrpv3介导1mm2-apb或者100μm2-apb诱发的电流抑制绘制趋势图，见图2。恒定的ic50显示代表化合物i-32是trpv3的变构抑制剂。
表1本发明小分子抑制剂在10μm时对1mm2-apb激活的mtrpv3电流的抑制作用
表2本发明部分小分子抑制剂对trpv3的ic50及选择性
以上实验结果显示，本发明的化合物有良好的抑制trpv3介导的电流作用，且化合物pc5可作为新型trpv3小分子变构抑制剂。本发明中的结构母核与现有trpv3抑制剂完全不同，可为未来开发trpv3抑制剂提供新的策略。
1.一种trpv3小分子变构抑制剂，其特征在于，包含如通式(i)或通式(ⅱ)所示的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，
x选自n或c；
y选自(ch2)或(co)；
r2选自氢、卤素；
r4取自c1-c8烷基、c3-c8环烷基、萘环、金刚烷基、吗啉、4-(甲基磺酰基)哌嗪、4-(三氟甲基)吡啶-2-胺；
r1、r3分别独立选自氢、氘、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、c1-c8烷基、卤代c1-c8烷基、c1-c8烷氧基、c3-c8环烷基、c3-c8环烯基、c2-c8链烯基、c2-c8炔基、c6-c10芳基、c3-c10杂芳基、c4-c8杂环基。
2.根据权利要求1所述的trpv3小分子变构抑制剂，其特征在于：
r1选自氢、甲氧基(-och3)、三氟甲基(-cf3)；
r3选自三氟甲基(-cf3)、氰基(-cn)；
r4选自c1-c3烷基、环己烷、萘环、金刚烷基、吗啉、4-(甲基磺酰基)哌嗪、4-(三氟甲基)吡啶-2-胺。
3.根据权利要求1所述的trpv3小分子变构抑制剂，其特征在于，所述化合物选自i-1至i-33：
4.一种如权利要求1所述的trpv3小分子变构抑制剂的制备方法，其特征在于，包括如方案1所示的反应步骤：
由中间体ⅰa与中间体ⅰb在碱的存在下反应制备化合物(ⅰ)a系列化合物；
5.一种如权利要求1所述的trpv3小分子变构抑制剂的制备方法，其特征在于，包括如方案2所示的反应步骤：
由原料md和中间体ⅰb在还原剂存在下合成(ⅰ)b系列化合物和(ⅱ)a系列化合物；
6.一种如权利要求1所述的trpv3小分子变构抑制剂的制备方法，其特征在于，包括如方案3所示的反应步骤：
由化合物ⅰa与化合物ⅰb在碱的存在下反应制备化合物(ⅰ)a系列化合物；由化合物(ⅰ)a上氢原子被r2取代得到(ⅰ)c系列化合物；
7.一种药物组合物，其特征在于，包含如权利要求1所述的trpv3小分子变构抑制剂。
8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于，由所述trpv3小分子变构抑制剂添加一种或多种药学上的辅料制成制剂。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述制剂为片剂、胶囊、颗粒剂、散剂、糖浆剂、口服液或注射剂。
技术总结