本发明属于毒品检测技术领域，涉及一种阿片类毒品人工半抗原、人工抗原、多克隆抗体及其应用。
背景技术：
阿片类毒品常见有吗啡、可待因、单乙酰吗啡，是海洛因的主要组成成分。吗啡(morphine，c17h19no3)、可待因(codeine，c18h21no3)为阿片类受体激动剂，是鸦片中最主要的生物碱。单乙酰吗啡(morphine6-acetate，c19h21no4)是鸦片中粗吗啡碱或吗啡盐类经过甲酰化得到，是次海洛因的主要成分。根据《2019年中国毒品形势报告》，毒品种类以冰毒、海洛因、k粉在吸毒人群中占比最高。海洛因是当今世界滥用最为广泛的毒品，成瘾率高、依赖型强，难以戒断。过量吸入阿片类毒品易引起心悸，吸入人体后对肝肾损害大，甚至死亡，因此国家将其列入麻醉药品管理并予以管制，明令禁止非法使用。吗啡、可待因、单乙酰吗啡进入人体后，可在血液、尿液、毛发等生物检测中形成蓄积，但体液中药物残留代谢较快，一般2～4天后无法检测。与体液检材相比，毛发检材具有易采样、文明、不易掺假、检材稳定、易于保存、携带方便、检测期限长等优点。一般认为贴近头皮的3cm发根即可反映6个月的吸毒史，故毛发检材已经成为司法鉴定中最常用的生物检材。因此，建立毛发中阿片类的快速高通量筛查方法，对于打击犯罪、缉毒禁毒具有重要意义，同时满足了特种高危职业涉毒安全体检的需求。
目前对阿片类毒品进行检测的方法主要是液相-色谱联用质谱法，该方法准确可靠，常作为确证方法，但存在设备昂贵、需要专业人员、样品通量低等不足。免疫检测技术是基于抗原抗体特异性反应的分析方法，具有灵敏、快速、高通量等特点，可与仪器确证技术搭配应对毒品快速筛查需求。研究毛发中阿片类毒品酶联免疫检测方法(elisa)，对于毒品规模化样品快筛和检测具有非常重要的经济和社会意义。
技术实现要素：
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种阿片类毒品人工半抗原、人工抗原、多克隆抗体及其应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
一方面，本发明提供一种阿片类毒品人工半抗原，所述阿片类毒品人工半抗原具有如下结构：
本发明所述的阿片类毒品人工半抗原是在吗啡分子苯酚环上的羟基衍生d-葡萄糖醛酸手臂，缩写为mop-1。
另一方面，本发明提供了如上所述的阿片类毒品人工半抗原的制备方法，所述制备方法为：吗啡与d-葡萄糖醛酸反应得到所述阿片类毒品人工半抗原。
优选地，所述吗啡与d-葡萄糖醛酸的摩尔比为1:1.5～3，例如1:1.5、1:1.8、1:2、1:2.2、1:2.5、1:2.8或1:3，优选1:2。
优选地，所述反应在弱酸性条件下进行。
优选地，所述反应在催化剂存在下进行，所述催化剂优选无水氯化锌。
优选地，所述催化剂与吗啡的摩尔比为3～6:1，例如3:1、3.5:1、3.8:1、4:1、4.5:1、4.8:1、5:1、5.5:1、5.8:1或6:1，优选为4:1。
优选地，所述反应的溶剂为无水四氢呋喃。
优选地，所述反应的温度为30～70℃(例如30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、60℃或70℃)，优选50℃；反应的时间为3～7小时，例如3小时、3.5小时、4小时、4.5小时、5小时、5.5小时、6小时、6.5小时或7小时。
在反应结束后，产物混合液用乙酸乙酯萃取3次，优选地，每次萃取混合液与乙酸乙酯的体积比为1:2；将萃取液旋干并经反相液相色谱纯化，蒸干后得到淡黄色粉末即为所述人工半抗原。
另一方面，本发明提供一种阿片类毒品人工抗原，所述阿片类毒品人工抗原为如上所述的阿片类毒品人工半抗原与载体蛋白的偶联物。
在本发明中，阿片类毒品人工抗原可以作为人工免疫原。
在本发明中，所述阿片类毒品人工抗原的结构可以表示为：
优选地，所述载体蛋白为钥孔血蓝蛋白(klh)、牛血清白蛋白(bsa)、乳铁蛋白(lf)、辣根过氧化物酶(hrp)或卵清蛋白(ova)中的任意一种。
另一方面，本发明提供了如上所述的阿片类毒品人工抗原的制备方法，所述制备方法为：将如上所述的阿片类毒品人工半抗原溶于有机溶剂中，加入活化剂，而后加入溶有载体蛋白的缓冲溶液，反应，得到所述阿片类毒品人工抗原。
优选地，所述有机溶剂为n,n-二甲基甲酰胺(dmf)。
优选地，所述活化剂为n,n-二环已基碳二亚胺(dcc)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)的混合物。
优选地，所述阿片类毒品人工半抗原与载体蛋白的摩尔比为(25～100)：1，例如25:1、30:1、35:1、40:1、45:1、50:1、55:1、60:1、70:1、80:1、90:1或100:1，优选80:1。
优选地，所述阿片类毒品人工半抗原与n,n-二环已基碳二亚胺(dcc)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)的摩尔比为1:(1～2):(1～2)，例如1:1:1、1:1.1:1、1:1.2:1、1:1.5:1、1:1.8:1、1:2:1、1:1:1.2、1:1:1.5、1:1:1.8、1:1:2、1:2:1、1:2:1.3、1:2:1.5、1:2:1.8、1:2:2等，优选1:1.5:1.5。
优选地，所述缓冲溶液为pbs溶液。
优选地，所述pbs溶液的浓度为0.005～0.015mol/l，例如0.005mol/l、0.008mol/l、0.01mol/l、0.012mol/l、0.014mol/l或0.015mol/l，优选0.01mol/l。
优选地，所述反应的温度为0-10℃(例如0℃、3℃、5℃、8℃、10℃)，优选为4℃；反应的时间为10-20小时(例如10小时、13小时、15小时、17小时、20小时)，优选为16小时。
在阿片类毒品人工抗原的制备过程中，所述反应结束后，于4℃下用pbs缓冲溶液进行透析，得到所述阿片类毒品人工抗原。
另一方面，本发明提供一种多克隆抗体，所述多克隆抗体是通过对实验动物注射如上所述阿片类毒品人工抗原，进行多次免疫后获得的抗体。
在本发明中，所述多克隆抗体可以作为阿片类毒品检测中的包被原。
另一方面，本发明提供一种阿片类毒品酶标抗原，所述阿片类毒品酶标抗原为如上所述的阿片类毒品人工半抗原与辣根过氧化物酶的偶联物。
另一方面，本发明提供了一种阿片类毒品的免疫学检测试剂盒，所述试剂盒包括如上所述的多克隆抗体以及如上所述的阿片类毒品酶标抗原。
本发明的免疫学检测试剂盒可以用于阿片类毒品的定性定量检测，具有耗时短，灵敏度高，特异性好等显著优势，可用于快速检测毛发中残留的阿片类毒品。
另一方面，本发明提供了如上所述的阿片类毒品人工抗原或如上所述的多克隆抗体或如上所述的阿片类毒品酶标抗原或如上所述的阿片类毒品的免疫学检测试剂盒在阿片类毒品的免疫检测中的应用。
优选地，所述阿片类毒品的免疫检测为毛发中残留的阿片类毒品的免疫检测。
另一方面，本发明提供了一种毛发中阿片类毒品的酶联免疫检测方法，所述检测方法为：将如上所述的多克隆抗体包被在微孔板上；将待测毛发样品溶液和如上所述的阿片类毒品酶标抗原加入至包被有多克隆抗体的微孔中，采用酶联免疫方法测定待测样品中阿片类毒品的含量。
在本发明中，所述待测毛发样品溶液的制备方法为：将20mg～25mg待测毛发，10～25颗2mm宽的锆珠，0.5～1.5mlpbs(ph6.0～9.0)或硼酸钠缓冲液(ph8.0～10.0)加入研磨管中，放入震荡研磨仪中研磨3-5min，上层溶液即为待测样品溶液。
在本发明中，具体地，所述毛发中阿片类毒品的酶联免疫检测方法包括以下步骤：
s1.包被：将阿片类毒品抗体用碳酸缓冲液稀释一定倍数，并做空白对照组，每孔100μl，37℃孵育过夜；
s2.洗涤：倾去孔内液体，去离子水洗涤2次，甩干；
s3.封闭：每孔加120μl封闭液，37℃封闭3h，甩干，倒置于37℃烘箱中1h；
s4.加样及孵育：将标准品吗啡溶于甲醇配制成1.0mg/ml的溶液。先用0.01mol/l的pbs缓冲液将其稀释成一定浓度的标准品溶液，共计7个浓度梯度；酶标板每孔加入20μl梯度稀释的标准品溶液或20μl待测样品溶液，和100μl特定浓度的酶标抗原震荡混匀，常温反应40min后，洗涤6次，甩干；
s5.显色：每孔加入100μltmb显色液，常温显色20min，然后每孔加入100μl的10％h2so4终止反应；
s6.读数测定：450nm波长下测吸光值；选择吸光度值在1.0～1.5区间内的抗血清稀释倍数为抗血清效价，抗血清的效果由其抑制率得出；
s7.计算：用origin8.6的四参数拟合模块建立吗啡的标准曲线，以各标准品吸光度与零浓度标准品吸光度的比值(b/b0)为纵坐标，标准品浓度的对数为横坐标，做出标准曲线，计算其ic50值；将待测样的吸光度值带入标准曲线，进行对待测样品中阿片类毒品的定性定量检测。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)针对阿片类毒品，本发明以吗啡为合成原料，引入与动物体内糖苷结构相似的化合物，从而使半抗原偶联蛋白端不易机体免疫应答；根据此半抗原设计思路，将吗啡与d-葡萄糖醛酸通过缩合反应合成半抗原mop-1；一方面，吗啡分子结构中具有阿片类药物的特征母体结构，以吗啡分子作为半抗原合成材料，更易引起机体产生针对阿片类药物的抗体；另一方面，糖苷结构的加入，加大了半抗原中吗啡小分子部分与载体蛋白的距离，使半抗原中吗啡小分子部分可以得到充分暴露。在实际免疫结果中，所得到的阿片类药物抗体灵敏度较高，可以识别多种阿片类药物；
(2)本发明的阿片类毒品人工半抗原与载体蛋白偶联得到的人工抗原可以作为免疫原，阿片类毒品人工半抗原与辣根过氧化物酶偶联作为酶标抗原。其可以用于阿片类毒品的定性定量检测，具有耗时短，灵敏度高，特异性好等显著优势，可用于快速检测毛发中残留的阿片类毒品。
(3)本发明针对阿片类毒品的多克隆抗体，对结构类似物罂粟碱、常见毒品甲基苯丙胺、氯胺酮无明显交叉反应，建立的酶联免疫检测方法可以实现对阿片类毒品的特异性检测，方便快捷，为检测毛发中阿片类毒品提供了快速高效的检测手段。
(4)本发明的抗体及酶联免疫检测方法可用于毛发中阿片类毒品残留的特异性检测，方法对于吗啡的ic50＝0.13ng/ml，线性检测范围(ic20-ic80)为0.04～0.48ng/ml，检测限(ic10)为0.03ng/ml，与可待因和单乙酰吗啡的交叉率分别为115.38％与92.9％。所述抗体具有灵敏度高，准确性好，样品前处理方法简单快速等显著优势，因此本发明提供的抗原和抗体，可用于建立阿片类毒品的酶联免疫检测方法。该法稳定可靠，且成本较低，对于阿片类毒品速检测试剂盒、胶体金试纸条的研发有重要意义。
附图说明
图1为实施例1制备得到的阿片类毒品人工半抗原的质谱图；
图2为bsa、mop-1、mop-1-bsa、hrp、mop-1-hrp的紫外吸收光谱图；
图3为实施例4的酶联免疫测定中得到的吗啡标准曲线。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1半抗原的制备
将吗啡580mg与d-葡萄糖醛酸780mg加入到15ml四氢呋喃中，再向上述混合液中加入无水氯化锌1090mg，接上分水器后50℃水浴加热反应4小时，反应结束后，产物混合液用乙酸乙酯萃取3次，每次萃取混合液与乙酸乙酯的体积比为1:2；将萃取液旋干并通过反相液相色谱纯化，蒸干后得到淡黄色粉末即为半抗原mop-1，图1为mop-1质谱鉴定图，所述半抗原合成成功。
实施例2人工载体的制备
1、免疫原mop-1-bsa的制备
将20.0mgmop-1半抗原溶于0.30mln,n-二甲基甲酰胺中，再加入13.41mgn,n-二环已基碳二亚胺和7.48mgn-羟基琥珀酰亚胺，4℃下搅拌反应过夜，离心后取上清液记为a液。将35.97mgbsa溶于6ml0.01mol/lpbs中，记为b液，搅拌下将a液滴入b液中，4℃避光反应12h，反应完离心取上清，4℃下pbs溶液透析3天，得到吗啡人工免疫原，以1mg/ml的浓度分装于1ml离心管中，冻存于-20℃冰箱中备用。
2、酶标抗原mop-1-hrp的制备
将20.0mgmop-1半抗原溶于0.30mln,n-二甲基甲酰胺中，再加入13.41mgn,n-二环已基碳二亚胺和7.48mgn-羟基琥珀酰亚胺，4℃下搅拌反应过夜，离心后取上清液记为a液。将24.38mghrp溶于6ml0.01mol/lpbs中，记为b液，搅拌下将a液滴入b液中，4℃反应12h，反应完离心取上清，4℃下pbs溶液透析3天，得到吗啡酶标抗原，分装于1ml离心管中，冻存于-20℃冰箱中备用。
3、阿片类毒品免疫原和酶标抗原的表征
(1)免疫原与酶标抗原的鉴定采用紫外扫描的方法，在180～350nm波长范围内测定免疫原和包被原的紫外吸收光谱，比较不同物质的扫描曲线，鉴定半抗原与载体蛋白是否偶联成功。由于载体蛋白和半抗原在紫外光谱条件下都具有最大吸收峰，如果偶联成功，特征吸收峰会相互叠加，从而导致最大吸收峰的蓝移。
(2)如图2所示，在280nm左右有载体蛋白特征吸收峰，人工抗原的特征吸收峰都出现了明显的蓝移，所以从紫外光谱扫描结果可以证明免疫原与酶标抗原偶联成功。
实施例3阿片类毒品多克隆抗体制备
1、动物免疫
2～2.5kg新西兰大白兔首次免疫时，注射免疫原的量为1.0ml/只，取0.5ml浓度为1mg/ml的免疫原加等体积的弗氏完全佐剂，乳化充分后在大白兔背部皮下多点注射，每点约200μl；21天后进行第2次免疫，免疫剂量1.0ml/只，用弗氏不完全佐剂乳化；以后每隔14天加强免疫1次，一般共免疫5次。在第3次免疫和第5次免疫后，均采血进行抗血清效价测定。实验动物做好编号、管理和记录，注意大白兔的健康状况。
2、抗血清效果分析
(1)第3次和第5次免疫后的第7天，实验大白兔耳朵静脉采血40μl，离心取抗血清，用nanodrop检测其抗体浓度后，分装-20℃保存备用。
(2)采用酶联免疫法测定抗血清的效价和特异性，其步骤如下：
s1.包被：将1mg/ml的抗血清用碳酸缓冲液稀释1000倍，并做空白对照组，100μl/孔加入到酶标板中，置于37℃水浴箱中孵育过夜。
s2.洗涤：倾去孔内液体，设定洗板机参数每孔加去离子水300μl，洗板2次，然后甩干洗涤液。
s3.封闭：每孔加120μl封闭液，37℃封闭3h，甩干孔内液体，置于37℃烘箱1h至烘干。
s4.加酶标抗原及标准品：将酶标抗原梯度稀释；将吗啡标准品溶于适量甲醇配制成1.0mg/ml的标准品溶液，4℃保存备用。效价列：每孔加100μl的空白稀释液和100μl梯度稀释的酶标抗原，最后两孔加pbs作空白对照；抑制列：每孔加20μl的标准品溶液和100μl梯度稀释的酶标抗原，最后两孔加标准品稀释液作空白对照；振荡后室温孵育40min，洗板6次。
s5.显色：每孔加入100μltmb显色液，室温显色20min，然后每孔加入100μl的终止液(10％h2so4)。
s6.读数测定：在波长450nm条件下用酶标仪读取吸光值(od)。
(3)选择吸光度值在1.0～1.5区间内的抗血清稀释倍数为抗血清效价，抗血清的效果由其抑制率得出，相同的药物浓度下，抑制率越高，则抗体对此药物的灵敏度越高。
3、抗血清的纯化
(1)选择抑制率及效价最佳的实验大白兔，麻醉昏迷后心脏采全血，再通过脊柱脱臼对实验动物进行安乐死处理；
(2)血液经37℃温浴20min后，5000rpm离心20min，取上层血清，分装后置于-20摄氏度保存；
(3)5ml兔抗血清用10ml醋酸盐缓冲液进行稀释，并用1mol/lnaoh溶液将ph调制4.5；
(4)搅拌条件下，往血清中缓慢逐滴加入375μl正辛酸，继续搅拌30min后，4℃条件下静置1h，使杂蛋白充分沉淀析出；
(5)静置结束后经4℃12000rpm条件下离心15min，用125μm滤膜进行过滤，取得上清液；
(6)上清液加入0.1mol/lpbs缓冲液1.5ml，再用浓度为1mol/l的naoh溶液调节ph，使得ph＝7.4；
(7)冰浴条件下，30min中内缓慢加入4.432g的硫酸铵，使得其能够成45％饱和度；4℃的条件下静置2h，再在4℃12000rpm条件下离心15min，将上清液除去，取得沉淀；
(8)沉淀用5ml0.1mol/lpbs(ph＝7.4)复溶，再进行超滤3次；
(9)超滤后的多抗用0.1mol/lpbs(ph＝7.4)稀释10倍，分装后-20℃保存。
实施例4酶联免疫测定毛发中阿片类毒品方法的建立
1、酶联免疫(elisa)反应具体包括以下步骤：
s1.包被：用碳酸缓冲液将阿片类毒品抗体稀释至合适浓度，加入酶标板孔中，100μl/孔，37℃水浴箱中过夜。
s2.洗涤：倾去孔内液体，洗板2次，每孔加洗涤液300μl，甩干。
s3.封闭：每孔加入120μl封闭液，37℃封闭3h，甩干，倒置于37℃烘箱中1h备用。
s4.毛发前处理：称取25mg毛发置于研磨管内，加入1mlpbs(ph＝8.0)和20颗直径为2mm的锆珠，置于研磨仪中，以2800rpm振荡25秒，共4个循环，每个循环之间停10秒。振荡结束后静置30秒，上清即为待测样品溶液。
s5.加样及孵育：每孔依次加入20μl药物稀释液或待测样品溶液，100μl稀释一定倍数的酶标抗原；震荡混匀，室温中孵育40min后，每孔加入洗涤液300μl，洗板机洗板6次，甩干。
s6.显色：每孔加入tmb显色液100μl，置于室温中显色20min后，每孔加入100μl终止液(10％h2so4)。
s7.测定：用酶联免疫检测仪测定各孔a450nm的吸光值。
s8.计算：用origin8.6的四参数拟合模块计算抑制曲线的ic50值。
2、配制4ng/ml、1ng/ml、0.5ng/ml、0.25ng/ml、0.125ng/ml、0.063ng/ml、0.031ng/ml的吗啡标准品溶液，建立酶联免疫检测方法的标准曲线。以各标准品吸光度与零浓度标准品吸光度的比值(b/b0)为纵坐标，标准品浓度的对数为横坐标，做出标准曲线，图3为得到的吗啡抑制曲线。该方法针对吗啡ic50＝0.13ng/ml，线性检测范围为0.04-0.48ng/ml，检测限为0.03ng/ml，与可待因和单乙酰吗啡的交叉率分别为115.4％和92.9％。
实施例5抗体交叉反应率的测定
1、按实施例4中所得最佳包被抗体浓度和最佳酶标稀释倍数，以单乙酰吗啡、罂粟碱及氯胺酮、甲基苯丙胺结构类似物或功能类似物为竞争标准品，进elisa实验，检测阿片类毒品多克隆抗体的特异性，其半数抑制浓度(ic50)和交叉反应率(cr)数值在表1中列出。
表1
实验结果表明，本阿片类药物抗体与结构或功能类似物罂粟碱、氯胺酮、甲基苯丙胺无交叉，说明本发明的阿片类药物抗体特异性好，建立的酶联免疫检测方法特异性高。
本发明的阿片类药物半抗原(mop-1)是将d-葡萄糖醛酸与吗啡合成得到，d-葡萄糖醛酸与动物体内内源性糖苷结构相似，从而造成与载体蛋白连接端不易引起动物体内的免疫反应；另一方面，糖苷结构的加入，加大了半抗原中吗啡小分子部分与载体蛋白的距离，使半抗原中吗啡小分子部分可以得到充分暴露。在实际免疫结果中，所得到的阿片类药物抗体ic50为0.13ng/ml。通过查阅文献，检索得到已发表的关于阿片类药物检测的半抗原结果如下(表2)。通过对比发现，本发明的半抗原所得到的抗体灵敏度更高，半抗原设计更为合理。
表2部分已发表的阿片类药物半抗原结构
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的阿片类毒品人工半抗原、人工抗原、多克隆抗体及其应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
1.一种阿片类毒品人工半抗原，其特征在于，所述阿片类毒品人工半抗原具有如下结构：
2.根据权利要求1所述的阿片类毒品人工半抗原的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：吗啡与d-葡萄糖醛酸反应得到所述阿片类毒品人工半抗原。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述吗啡与d-葡萄糖醛酸的摩尔比为1:1.5～3，优选1:2；
优选地，所述反应在弱酸性条件下进行；
优选地，所述反应在催化剂存在下进行，所述催化剂优选无水氯化锌；
优选地，所述催化剂与吗啡的摩尔比为3～6:1，优选为4:1；
优选地，所述反应的溶剂为无水四氢呋喃；
优选地，所述反应的温度为30～70℃，优选50℃；反应的时间为3～7小时。
4.一种阿片类毒品人工抗原，其特征在于，所述阿片类毒品人工抗原为如权利要求1所述的阿片类毒品人工半抗原与载体蛋白的偶联物；
优选地，所述载体蛋白为钥孔血蓝蛋白、牛血清白蛋白、乳铁蛋白、辣根过氧化物酶或卵清蛋白中的任意一种。
5.根据权利要求4所述的阿片类毒品人工抗原的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：将如上所述的阿片类毒品人工半抗原溶于有机溶剂中，加入活化剂，而后加入溶有载体蛋白的缓冲溶液，反应，得到所述阿片类毒品人工抗原；
优选地，所述有机溶剂为n,n-二甲基甲酰胺；
优选地，所述活化剂为n,n-二环已基碳二亚胺和n-羟基琥珀酰亚胺的混合物。
优选地，所述阿片类毒品人工半抗原与载体蛋白的摩尔比为(25～100)：1，优选80:1；
优选地，所述阿片类毒品人工半抗原与n,n-二环已基碳二亚胺和n-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:(1～2):(1～2)，优选1:1.5:1.5；
优选地，所述缓冲溶液为pbs溶液；
优选地，所述pbs溶液的浓度为0.005～0.015mol/l，优选为0.01mol/l；
优选地，所述反应的温度为0-10℃，优选为4℃；反应的时间为10-20小时，优选为16小时。
6.一种多克隆抗体，其特征在于，所述多克隆抗体是通过对实验动物注射如权利要求4所述阿片类毒品人工抗原，进行多次免疫后获得的抗体。
7.一种阿片类毒品酶标抗原，其特征在于，所述阿片类毒品酶标抗原为如权利要求1所述的阿片类毒品人工半抗原与辣根过氧化物酶的偶联物。
8.一种阿片类毒品的免疫学检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求6所述的多克隆抗体和如权利要求7所述的阿片类毒品酶标抗原。
9.根据权利要求4所述的阿片类毒品人工抗原或如权利要求6所述的多克隆抗体或如权利要求7所述的阿片类毒品酶标抗原或如权利要求8所述的阿片类毒品的免疫学检测试剂盒在阿片类毒品的免疫检测中的应用；
优选地，所述阿片类毒品的免疫检测为毛发中残留的阿片类毒品的免疫检测。
10.一种毛发中阿片类毒品的酶联免疫检测方法，其特征在于，所述检测方法为：将如权利要求6所述的多克隆抗体包被在微孔板上；将待测毛发样品溶液和如权利要求7所述的阿片类毒品酶标抗原加入至包被有多克隆抗体的微孔中，采用酶联免疫方法测定待测样品中阿片类毒品的含量。
技术总结